腺苷受体激动剂及治疗膀胱泌尿功能障碍的药物的制作方法

本发明涉及腺苷受体激动剂在制备治疗膀胱泌尿功能障碍的药物中的应用,及评价腺苷受体激动剂调节哺乳动物膀胱泌尿功能障碍的方法。

背景技术：

膀胱泌尿功能障碍如尿频，尿急，夜尿，尿痛，膀胱过度活跃综合症，尿失禁，间质性膀胱炎，药物性膀胱炎(氯氨酮膀胱炎)等影响至少50％以上的>40岁人群。目前治疗手段有限，包括：控制液体摄人，药物控制，使用成人尿不湿，以及手术治疗。就药物而言，目前主要有：1.一线抗胆碱药，但目前口服剂型疗效有限且副作用大(大多最后放弃使用)；2.近来有β3受体激动剂用于治疗，有一定疗效但副作用大；3.fda最近批准了botox用于膀胱局部注射治疗，通过局部麻痹膀胱神经末梢以治疗膀胱过度活跃。

腺苷受体可以分为a1，a2a，a2b，和a3四个亚单位。关于腺苷受体信号以及它的激动剂如何调节在体膀胱排尿功能，以及以此作为可能临床用药治疗泌尿功能障碍尚未见报道。

另外，目前在泌尿领域的研究也存在很大的误区：机械的把降低膀胱的活跃程度和降低膀胱平滑肌的收缩力等同起来。其实膀胱平滑肌收缩力的降低有可能降低膀胱活跃程度，但也可能直接导致尿潴留或排尿不尽，从而引起膀胱排尿频次增多容量减小，反而表现为膀胱过度活跃。因此药物在体外对膀胱平滑肌的收缩力的调节不能直接用来推测其在在体对膀胱泌尿功能的调节作用。另外，在储尿期膀胱平滑肌需要在保持一定收缩力的条件下缓慢地舒张，因此药物在体外对膀胱平滑肌的收缩力的抑制作用也不一定表明在体内储尿期的膀胱的舒张。因此，药物对膀胱排尿功能的调节作用必须最后以在体的实验才能验证。基于这些错误的认识，目前对泌尿功能机理研究及药物的评价多侧重于细胞和组织水平，而缺少全面的评价体系。从而严重阻碍了对于相应药物调节泌尿功能的研究。

技术实现要素：

针对上述现有的技术问题，本发明的目的就是提供一种可以应用在制备治疗膀胱泌尿功能障碍的药物中的腺苷受体激动剂。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

腺苷受体激动剂，所述腺苷受体激动剂应用在制备治疗膀胱泌尿功能障碍的药物中,其中所述腺苷受体激动剂是式(i)的化合物：

优选的，所述膀胱为哺乳动物膀胱。

优选的，所述哺乳动物为人、鼠、猪、猫或狗。

优选的，所述腺苷受体为其亚单位a2b。

优选的，所述膀胱泌尿功能障碍包括尿频，尿急，夜尿，尿痛，膀胱过度活跃综合症，尿失禁，间质性膀胱炎，药物性膀胱炎。

一种评价腺苷受体激动剂调节哺乳动物膀胱泌尿功能障碍的方法，该方法包括：

利用体外离体的平滑肌确定腺苷受体激动剂对哺乳动物膀胱平滑肌收缩力的调节作用；

敲除哺乳动物腺苷受体基因，以观察由此引起的哺乳动物膀胱功能改变；

给正常哺乳动物直接皮下注射腺苷受体激动剂以观察它在在体条件下对膀胱功能的调节作用，

所述腺苷受体激动剂是式(ii)的化合物：

优选的，所述腺苷受体为其亚单位a2b基因。

优选的，所述哺乳动物为人、鼠、猪、猫或狗。

优选的，所述膀胱泌尿功能障碍包括尿频，尿急，夜尿，尿痛，膀胱过度活跃综合症，尿失禁，间质性膀胱炎，药物性膀胱炎。

治疗膀胱泌尿功能障碍的药物，所述药物包括如上所述的腺苷受体激动剂。

本发明的有益效果：

本发明采用上述技术方案以后，可以有效的增加膀胱容量和减少排尿频率，因此可作为一有效的用于治疗泌尿功能障碍的药物。

附图说明

图1是uroa002选择性地抑制嘌呤介导的膀胱平滑肌收缩的实验数据。

图2是uroa002注射给药减少排尿次数增加尿容量的实验数据。

图3是uroa002灌胃给药减少排尿次数增加尿容量的实验数据。

具体实施方式

本发明包括调节膀胱平滑肌的收缩力的方法，该方法包括为需要的哺乳动物注射有效剂量的腺苷受体激动剂，所述激动剂为新型a2b腺苷受体激动剂uroa002。

本发明还涉及一种评价a2b腺苷受体激动剂调节哺乳动物膀胱泌尿功能障碍的方法：

(1)利用体外离体的平滑肌确定a2b腺苷受体激动剂如uroa002对哺乳动物膀胱平滑肌收缩力的调节作用；

(2)给哺乳动物如小鼠直接皮下注射新型a2b腺苷受体激动剂uroa002以观察它在在体条件下对膀胱功能的调节作用。

(3)给哺乳动物小鼠灌胃新型a2b腺苷受体激动剂uroa002以观察它在在体条件下对膀胱功能的调节作用。

以小鼠为实验对象，具体实验过程如下：

1、新型a2b腺苷受体激动剂uroa002能选择性地抑制小鼠膀胱平滑肌的嘌呤性收缩力。

实验目的：为测试新型a2b腺苷受体激动剂uroa002对膀胱平滑肌收缩力的影响，我们用肌电图测量离体肌条对它的反应。

实验方法：12-16周龄雄性c57bl/6j小鼠的膀胱用于实验。去除内表皮以后的膀胱平滑肌被分成4条5-7毫米长和2-3毫米宽的肌条。肌条的一端通过6-0号丝线固定于架子上，另一端以6-0号丝线连至力传感器。肌条位于架子上的两个铂金电极之间并置于si－mb4水浴系统中(worldprecisioninstruments,fl,usa)。肌条的力信号通过tbm4m信号转换器转换成数字信号并被powerlab放大通过chart软件实时观察记录。在实验开始前，肌条在水浴中平衡至少一小时。水浴为37度的生理盐液(physiologicalsalinesolution,pss)并持续通以95％的氧和5％的二氧化碳。我们以不同频率的电场刺激(1，2，5，10，20，50hz，3s，50v)(grasss48fieldstimulator,grasstechnologies,ri,usa)用来促使肌条内的神经纤维释放神经递质(模拟体内神经递质的释放)，从而引起肌条的收缩。

实验结果：在不同频率电场的刺激下，膀胱神经纤维主要释放乙酰胆碱和atp，从而激活膀胱平滑肌的胆碱受体和嘌呤受体引起收缩。如图1所示，膀胱平滑肌在不同频率的电场刺激下引起了显著的收缩力。阿托品可以阻断胆碱力从而留下嘌呤引起的收缩力。如图1所示，新型a2b腺苷受体激动剂uroa002在nm水平就显著抑制膀胱平滑肌的收缩力(ec50＝3.2nm，并能在～10nm水平几乎完全抑制膀胱平滑肌的收缩力，说明该a2b腺苷受体激动剂具有优异的抑制膀胱平滑肌收缩力的作用。

图1中，a，膀胱平滑肌肌条在1，2，5，10，20，50hz电场刺激下引起收缩，atropine可以抑制胆碱力，而剩余的嘌呤力可以被浓度依赖地被新型a2b腺苷受体激动剂uroa002抑制。b，uroa002抑制浓度和收缩力的曲线拟合。

2.小鼠皮下注射新型a2b腺苷受体激动剂uroa002可显著减少排尿次数并增加每次排尿尿容量。

实验目的：为验证此新型a2b腺苷受体激动剂对在体膀胱功能的调节作用，我们直接在皮下注射uroa002以观察由此引起的膀胱功能改变以及它可能的治疗作用。

实验方法：把单个12-16周大的小鼠轻轻的放于标准的an75聚碳酸酯鼠笼内。鼠笼内底表面上放有一张28.5厘米长x17.5厘米宽的滤纸(blickscosmosblottingpaper,cat#:10422-1005)用以吸收小鼠排出的尿液。在实验的4小时内，小鼠无饮用水但能自由进食。4小时后收集滤纸。滤纸上小鼠尿液的印迹含有自发荧光的物质，在紫外线(365nm)的照射下(uvpchromato-vuec-75system,uvp,upland,ca)能够用于摄影成像(相机：eosrebelt3)。成像图片用imagej软件分析定量，并进行统计分析。通过分析已知容量的尿液印迹斑点，我们得到1mm²的尿液等于0.283μl的尿液。在实验组中，小鼠在实验前被皮下注射0.1-1mg/kg的uroa002，在对照组中，小鼠被皮下注射同等容量的溶剂。

实验结果：如图2所示，小鼠尿液印迹可以在紫外线下清楚的成像用于分析。随着注射uroa002浓度的增加，小鼠排尿频次显著下降，每次排尿容量显著增加，证实了我们的对腺苷a2b受体对膀胱功能的调节作用的研究，证明uroa002为一有效的用于治疗泌尿功能障碍的药物。

图2中，a和b是对照组和给药组的代表性尿液印迹图；c和d是定量分析的数据总结。

3.小鼠灌胃新型a2b腺苷受体激动剂uroa002可显著减少排尿次数并增加每次排尿尿容量。

实验目的：为验证此新型a2b腺苷受体激动剂uroa002在通过灌胃途径对在体膀胱功能同样具有调节作用，我们把uroa002经灌胃给药以观察由此引起的膀胱功能改变以及它可能的治疗作用。

实验方法：把单个12-16周大的小鼠轻轻的放于标准的an75聚碳酸酯鼠笼内。鼠笼内底表面上放有一张28.5厘米长x17.5厘米宽的滤纸(blickscosmosblottingpaper,cat#:10422-1005)用以吸收小鼠排出的尿液。在实验的4小时内，小鼠无饮用水但能自由进食。4小时后收集滤纸。滤纸上小鼠尿液的印迹含有自发荧光的物质，在紫外线(365nm)的照射下(uvpchromato-vuec-75system,uvp,upland,ca)能够用于摄影成像(相机：eosrebelt3)。成像图片用imagej软件分析定量，并进行统计分析。通过分析已知容量的尿液印迹斑点，我们得到1mm²的尿液等于0.283μl的尿液。在实验组中，小鼠在实验前经灌胃给药予以0.2-2mg/kg的uroa002，在对照组中，小鼠经灌胃给以同等容量的溶剂。

实验结果：如图3所示，小鼠尿液印迹可以在紫外线下清楚的成像用于分析。随着灌胃药物uroa002浓度的增加，小鼠排尿频次显著下降，每次排尿容量显著增加，证实了我们的对腺苷a2b受体对膀胱功能的调节作用的研究，证明uroa002为一有效的可以通过口服途径用于治疗泌尿功能障碍的药物。

图3中，a和b是对照组和给药组的代表性尿液印迹图；c和d是定量分析的数据总结。

以上数据表明，采用系统的研究腺苷a2b受体在调节膀胱功能的作用，以定量的方法学研究腺苷a2b受体新型激动剂uroa002可以有效的增加膀胱容量和减少排尿频率，因此可作为一有效的用于治疗泌尿功能障碍的药物。