一类氯磺隆苯环5位取代衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用

1.本发明涉及一类氯磺隆苯环5位取代衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用


背景技术：

2.癌症，又名恶性肿瘤，是目前危及人类健康的重要病症。2010年卫生部公布的数据显示，癌症已经成为了中国人死亡的重要因素。因此，针对癌症的治疗尤为重要。癌症一般涉及到多个基因的变异：当调控细胞生长的基因发生突变或者损坏时，细胞本身的程序性死亡受到了抑制，使细胞失控，不断生长和分裂，继而转变为肿瘤，同时，这些肿瘤细胞的浸润和转移过程中可以加快肿瘤新生毛细血管的形成。抗肿瘤药物的数量虽多，但理想的药物却很少，所以寻找疗效好、毒副作用小的抗肿瘤药物有着深远的意义。
3.磺酰脲类化合物作为除草剂和降糖药已经广泛应用于农药和医药领域，在对磺酰脲类降糖药的作用机制的研究过程中，人们发现第二代降糖药如格列本脲等药物具有潜在的抑制肿瘤作用。
4.最早被报道的二芳基磺酰脲类抗肿瘤药物是磺氯苯脲，在临床上主要用于肺癌、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、胃癌以及横纹肌肉瘤等的治疗。国内对于磺酰脲类抗肿瘤化合物的研究甚少，鲜有报道。近年来，逐渐有学者开始关注该类化合物及其抗肿瘤活性，并进行了一系列结构改造，以求获得新的潜在抗肿瘤药物。
5.前期，我们设计并合成了一些磺酰脲的新结构，其展现了良好的除草活性，基于磺酰脲结构的更多的生物可能性，我们对这些磺酰脲新结构的抗肿瘤活性进行了进一步的研究。近年来，我国恶性肿瘤的发生率和死亡率明显上升，肿瘤已列居各类死因之首。寻找新颖的、高效的抗肿瘤药物势在必行。磺酰脲类化合物对各种人体实体瘤均有体外抑制作用，积极探索和设计合成新的磺酰脲类化合物，研究其抗癌效果，具有重要的临床意义和应用前景。


技术实现要素：

6.本发明目的在于提供一类氯磺隆苯环5位取代衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
7.本发明采用的技术方案是：氯磺隆苯环5位取代衍生物，其化学结构通式如下：
[0008][0009]
式中：
[0010]
r选自卤素、硝基、氰基、三氟甲基、卤代c1
‑
c6烷基、c1
‑
c6烷氧基、卤代c1
‑
c6烷氧基、c1
‑
c6烷硫基、卤代c1
‑
c6烷硫基、c1
‑
c6烷氧基羰基、卤代c3
‑
c6环烷基或n，n
‑
(c1
‑
c6烷
基)氨基甲酰基、n，n
‑
(c1
‑
c6烷基)氨基磺酰基、含n，o，s三元
‑
五元杂环，c1
‑
c6烷基取代的含n，o，s三元
‑
五元杂环。
[0012]
优选的技术方案中，r为乙基、三氟甲基、甲氧基、氟、二乙氨基、氨基甲酰基、氨基磺酰基、含n五元杂环、烷基取代的含n五元杂环，其化学结构(编号为1
‑
9)依次为：
[0013][0014]
本发明对上述氯磺隆苯环5位取代衍生物进一步进行了乳腺癌细胞生长抑制活性测定，发现它们对乳腺癌细胞具有一定的抑制活性。
附图说明
[0015]
图1为磺酰脲类新型化合物乳腺癌细胞生长抑制率。
具体实施方式
[0016]
实验方法：
[0017]
化合物配置
[0018]
(1)称取适量的新型化合物放入1.5ml的无酶无菌ep管中，并且将化合物的名称在ep管侧壁标记好，根据化合物的相对分子质量，计算加入dmso的体积，使其终浓度为10mm。
[0019]
(2)在细胞房超净台中用移液枪加入对应体积的dmso，并且吹打混合均匀，使化合物能够完全溶解。
[0020]
(3)将1.5ml ep管放入95度金属浴中加热10分钟，之后将化合物溶液分装到小管中备用。
[0021]
(4)将化合物溶液放到冰箱
‑
20中保存。
[0022]
mtt溶液的配制
[0023]
(1)在超净台中取出一个50ml的离心管，向其中加入已经灭菌的20ml pbs。
[0024]
(2)将100mg包装的mtt打开，从50ml离心管中吸1mlpbs加入装有mtt固体的ep管中，吹打均匀，将所有液体转移到50ml离心管中，震荡混匀。此过程需要重复数次，使得ep管中不再残留mtt固体。
[0025]
(3)此时50ml离心管中的mtt溶液浓度为5mg/ml，将其分装至新的1.5ml ep管中，
标记好mtt溶液的浓度，配制时间和配制人。
[0026]
(4)将分装好的mtt溶液
‑
20冰箱中避光保存。
[0027]
注意：由于mtt在光下是不稳定的，所以上述配置过程应该全程避光进行，使用的时候也是如此，如果发现mtt溶液由黄色变为灰绿色，此时不可使用，应该及时更换。
[0028]
mtt法测定细胞生存活力实验
[0029]
(1)观察12孔板里细胞的生长情况，当生长到适当密度时将其中一孔进行消化，终止消化后将细胞悬液转移到1.5ml ep管中。
[0030]
(2)细胞计数，确定细胞悬液的密度，将其转移到15ml的离心管中，用培养基进行稀释，稀释至浓度为50000个/ml。
[0031]
(3)取出96孔板放置于超净台进行细胞种植，种植细胞的操作为：将15ml离心管中的细胞吹打均匀，然后96孔板中每孔加入100μl体积的细胞悬液(每孔约5000个细胞)，放置于37度培养箱中，过夜。
[0032]
(4)第二天细胞贴壁后，换液，方法为将每孔的培养基吸去，加入新的对照培养基或者相应化合物浓度的培养基，放入37度培养箱中进行培养。
[0033]
(5)在进行化合物处理过程中，需要每天进行换液，即每天都要进行更换含有相应浓度化合物的培养基，确保化合物的处理持续发挥作用。
[0034]
(6)在化合物处理相应时间后，每孔加入15μl的5mg/ml的mtt溶液，在37度细胞培养箱中避光孵育4小时。
[0035]
(7)将96孔板取出至超净台，在避光条件下，将每孔中的培养液吸出，然后每孔加入150μl的dmso进行溶解甲瓒，在摇床上中速摇晃10分钟。
[0036]
(8)预约酶标仪，在490nm波长处检测96孔板每孔的吸光值。
[0037]
氯磺隆苯环5位取代衍生物对乳腺癌细胞的抑制率结果
[0037]
表1化合物编号抑制率标准差10.240.0120.120.0330.170.0240.240.1050.170.0260.130.0370.110.0480.060.0190.120.04
[0037]
实验结果：氯磺隆苯环5位取代衍生物对乳腺癌细胞具有一定的抑制活性(图1)，可以作为抗肿瘤药物制备的候选药物结构，有待进一步优化。