专利名称：缓激肽拮抗剂的制作方法
技术领域：
本发明是关于具有药效作用的由缓激肽拮抗剂(BKAn)组分与另一种不同药效基团组分共价连结组成的异质二聚物(het-erodimers)。
在1992年10月15日公开的在先申请WO92/17201中描述了下列类型的缓激肽拮抗剂二聚物
其中BKAn代表一种缓激肽拮抗剂肽，X为连结两种BKAn组分末端的中介基团。BKAn组分可相同或不同。但也描述了一些通过连结基团X连结BKAn肽与另一种不同受体活性肽的异质二聚物，例如NK1或NK2拮抗剂肽或μ-阿片受体激动剂肽。当相关活性之间的关系密切时，这些异质二聚物特别有用。已知在多种重要的病理生理过程中，存在炎性和神经介质之间的相互作用。例如在组织创伤(偶发及手术后)继发性疼痛及哮喘中都存在这种情况。在这两种情况下都存在组织及血浆产生的介质(如作用于BK2受体的激肽)和神经元产生的因子如P物质(NK1受体)及神经激肽(Neurokinin)A(NK2受体)之间的复杂的相互作用。也存在局部作用的μ-阿片类神经元受体，当受刺激后能够抑制无论何种类型的神经肽(P物质、神经激肽A、神经激肽B、缩胆囊素、CGRP等)的释放。
没有一种药物普遍有效地改善上述介质或其它炎性和神经介质间的相互作用诱发的病理生理学症状。上述专利申请描述的异质二聚物是试图用具有双向选择性的单一药物来解决这些问题。这样的异质二聚物的其它优点同样被本领域技术人员所认识。
广泛意义上讲，本发明是关于连结一种BKAn肽和另一种非缓激肽拮抗剂的药效基团而形成的异质二聚物，例如这种药效基团可以是如WO92/17201中描述的肽，或非肽物质，并对如疼痛和/或炎症或其它与激肽活性有关的问题的非缓激肽作用成分有不同效应。形成的化合物为具有“双重作用”的化合物，它可以作用于两类受体或作用于一种受本和一种酶。这并不是说单个分子可以同时与两种受体或一种受体及一种酶作用;只是说此分子能够与两种受体中的一种受体或与一类受体和/或一种酶中任一种相作用。使用适当剂量的这种化合物，其总体药理作用至少相当于两种活性的加和。这种化合物可以设计成保持完整化合物，或设计为分解成两个分离的分子后，各自保持自己独立的活性。
本发明的异质二聚物可用下式结构表示。
其中BKAn为缓激肽拮抗剂肽;X为连结基团及Y为肽或非肽药效基团，它为非缓激肽拮抗剂并且具有作用于与BKAn组分不同的受体或酶的活性，优选作用于与疼痛或炎症有关的过程。
本发明的异质二聚物提供了广谱地治疗疼痛及炎症的可能性。一般认为在炎症状态，无论其严重程度如何，用单一药物或介质治疗或解释该综合症的所有临床症状的可能性是极微小的。依此推论，由于上述缓激肽在炎症病理生理学上的作用，治疗炎症疾病的任何综合治疗都应该包括缓激肽拮抗剂作为整体治疗作用的一部分。广谱及有效的非特异性治疗方法(例如在哮喘中用甾类化合物)虽然可能是有效的，但它们会引起较严重的毒负作用。
在许多情况下，已知两种独立的介质协同作用并可解释绝大部分所治疗疾病的重要临床症状。例如说哮喘及创伤后或手术后疼痛与P物质作用于NK1受体及缓激肽作用于BK2受体的关系。同样，嗜中性弹性蛋白酶为一很重要的炎症下游作用因子及缓激肽为一重要的引发和持续的炎症介质，两者的作用可被看作是协同的。
将药理活性物质做成同质二聚物(homodimers)以改善代谢稳定性、选择性及受体结合等特性的概念已在前边其它系统中描述过。这方面的已有技术包括为了增加作用效力和/或作用时间而将肽激动剂和拮抗剂二聚化。见Caporale等Proc.10th American Pep-tide Symp.，Pierce化学公司，Rockford，IL 449-451(1988)及Rosenblatt等的欧洲专利申请No.EP 293130A2。这样的肽激动剂二聚化物已经公开了的有脑啡肽/内啡肽(Shimohigashi，Y.等，BBRC，146，1109-1115，1987);P物质(Higuchi，Y.等E.J.P.，160，413-416，1989);缓激肽(Vavrek，R.及Stewart.，J.J.Proc.8th Amer.Pept.Symp.，381-384，1983);神经激肽A和B(Ko-dama，H.等E.J.P.，151，317-320，1988);胰岛素(Roth，R.A.等FEBS，170，360-364，1984)及前房钠尿肽(Chino，N.等BBRC，141，665-672，1986)。拮抗剂二聚化已公开的如甲状旁腺激素(Caproale，L.H.等Proc.10th Amer.Pept.Symp.，449-451，1987)。但文献并没有公开本文所指由缓激肽拮抗剂和不同的药效基团组成的异质二聚物。
在本领域中有许多已知缓激肽拮抗剂，其中任何一种都可用作本发明二聚物中BKAn组分。一种在体外很有效的缓激肽拮抗剂为下式的肽D-ARG0-Arg1-Pro2-Hyp3-Gly4-Phe5-Ser6-D-Phe7-Leu8-Arg9见Regoli等，Trends in Pharmacological Science，11156-161(1990)。为方便起见此肽在本文中称为CP-0088。
CP-0088为一种使用方便的BKAn，当然本领域技术人员会看出其它已有或已知缓激肽拮抗剂肽也可用于本发明的目的。各种这样的缓冲激肽拮抗剂肽已被最近的专利文献所公开，其中任何一种均可用于本发明的目的。见如EP-A-0334244(Procter和Gamble)公开了九肽或更大的缓激肽拮抗剂肽，其中某些氨基酸残基是经修饰的。EP-A-0370453(Hoechst)和WO.89/01780及WO 89/01781(Stewart等)也描述了缓激肽拮抗剂肽。这些专利出版物中没有出现本文所指二聚物。但注意到这些出版物的肽可用于施行本发明。
任何连结基团X均可用于本发明以使BKAn和Y组分以化学或共价方式连结在一起，只要这不影响BKAn和Y组分的活性即可。连结基团可以是无机的(如-S-)或有机的，并可选择连结基团以使在体内水解或以其它方式分解并释放出两种活性组分BKAn和Y。或者，连结基团可使这种异质二聚物在使用时保持完整化合物。
方便的连结基团X可包括-S-原子，它由BKAn肽链上的巯基与另外的药效基团组分反应生成。这可以通过涉及肽链中如肽P末端的半胖氨酸(Cys)的巯基的反应来完成。这可能需要在开始阶段修饰起始BKAn肽，使它在肽链的适当位置含有Cys基团。例如CP-0088可用Cys在6-位取代Ser来进行修饰(这样修饰过的CP-0088在下文中称为CP-0126)以通过Cys的巯基与其它药效基团方便地连结。
CP-0126可由下式结构表示
上式可用缩写表示如下
用Cys作为连结位点，那么连结基团X包括半脱氨酸巯基的-S-。它可以是整个连结基团X(如在二硫基二聚物中)或仅为X的一部分。这样，例如连结基团可包括一个二琥珀酰亚胺基烷如二琥珀酰亚胺基己烷，它以末端连结在BKAn和Y组分上。申请人的相关申请还公开了其它连结基团，它们都可用于此目的。其它连结基团X(其中某些不要求或不含-S-原子)可来源于下列六族化合物，它们一般被分类为氨基酸类似物连结剂或基于马来酰亚胺的连结剂。这些连结剂仅为例子，这里并不想穷举所有潜在的连结基团
第一类(氨基酸类似物)
氨基酸类似物连结剂(第一类)可直接掺入到BKAn肽链中，然后用于与成对药效基团(Y组分)形成对酯酶稳定或不稳定的异质二聚物。另外，基于马来酰亚胺的连结剂可与所希望的药效基团反应，然后与含巯基的肽连结。最后，这几类化合物中任何含R3基团为-CO2H的连结剂可与这几类化合物中的另一种连结剂反应以形成对酯酶不稳定(含R3＝-OH的连结剂)或对酯酶稳定(含R3＝-NH2的连结剂)的连结剂，然后用于形成希望的肽/非肽异质二聚物。R1和R2可以变化，以使对连结基团的酯羰基碳的接近完全不阻碍或明显阻碍，从而希望控制所说的酯在体内的水解速度。
某些用来制备本发明二聚物的为连结剂所修饰的BKAn或药效基团本身是提新的，并进一步构成本发明的一个方面。
此异质二聚物的Y组分可以是任何非缓激肽拮抗剂的肽或非肽的药效基团，它具有对抗有关疼痛和/或炎症过程的不同方面的活性(非缓激肽)从而形成双重作用化合物，它可以独立地作用于两类不同受体或一种受体及一种酶。例如Y组分为非肽μ-阿片受体激动剂，如吗啡或它的一种衍生物如14-羟基二氢可待因酮或14-羟基双氢吗啡酮。
当希望环氧酶抑制剂(COI)时，消炎痛可作为Y组分的一个有用的选择。但其它任何传统的非甾醇类抗炎药物如阿斯匹林、布洛芬、甲氧萘丙酸(naproxyn)等都可使用。在这种情况下，异质二聚物BKAn/COI可能需要被水解以便在体内得到COI活性，因为环氧酶一般被认为是一种胞内酶。嗜中性弹性蛋白酶抑制剂可能是一种活性酯，如2-苯基烷酸酯。它也可以用作杂芳基烷酸酯酯酶抑制剂。可作为Y组分的一种较好的嗜中性弹性蛋白酶抑制剂为如下描述的CE-1218。据信这是一种新化合物，并进一步组成本发明的一个特征。
其它类型的弹性蛋白酶抑制剂也可以用作Y组分，包括氟甲基酮、磷酸盐、苯并恶唑、β-内酰胺等。
如前边所提到的，Y组分可由肽或非肽类具有适当的不同于缓激肽拮抗剂活性的抑制剂所组成。但Y组分优选对与缓激肽活性有一般或密切关系的受体或酶有活性的物质。如关于治疗疼痛或炎症。为了说明问题下面讨论BKAn与μ-阿片受体激动剂、嗜中性弹性蛋白酶抑制剂、环氧酶抑制剂或NK1或NK2受体拮抗剂在各种条件下结合应用的理论基础。
BKAn/μ-阿片受体激动剂C-纤维传入神经已知介导痛觉和炎症的神经性部分。这些传入神经元在中枢神经系统(CNS)和周围神经支配的组织中受到特异性和非特异性刺激后释放出各种神经肽。一些神经肽包括P-物质、神经激肽A、神经激肽B、降钙素基团相关肽(CGRP)、缩胆囊素(CCK)、血管活性肠多肽(VIP)、神经肽Y及其它神经递质。对于这些复杂物质，依据神经支配组织，不同的C-纤维含有不同量和/或比例的这些神经肽。已表明所有这些肽在各种影响许多疾病和临床综合症的神经性过程中起作用。实际上许多药物公司和独立研究实验室正在将这些肽的特异性拮抗剂开发为可能的治疗药物。
这些不同种类的神经元的一个明显的共同特征是它们都有调节上述神经肽释放的μ-阿片受体。无论内源性脑啡肽还是其它外源注入的小分子化合物如吗啡、14-羟基双氢吗啡酮、芬太尼及它们的衍生物都可以作为局部的(外周神经末梢μ-阿片受体)和CNS中的μ-阿片受体激动剂，从而抑制从外周C-纤维中释放出神经肽。这种抑制作用与C-纤维所含的那些肽和导致它们释放的刺激都无关。
结果，BKAn/μ-阿片受体激动剂异质二聚物被认为是重要的一类化合物，它们特别对治疗激素与神经性过程中产生的综合状况有好的整体活性。希望这些化合物不但减低或阻断以激肽为代表的炎症过程的激素部分，而且阻断神经肽释放引起的炎症的神经性部分。另外，用已有μ-阿片受体激动剂的一个局限的方面是它们倾向于产生镇静、精神错乱及抑制呼吸运动，更不用说在用这些药治疗的病人身上还有发展为成瘾和/或耐受的危险。μ-阿片受体激动剂的这些不良方面是由于它们易于透过CNS的能力。但由于BKAn的高阳离子特性，BKAn/μ-阿片受体激动剂异质二聚物应不会穿透CNS。结果，μ-阿片受体激动剂的活性被限制在外周组织中，这样就大大减低了这些类型化合物的毒付作用。
BKAn/嗜中性弹性蛋白酶抑制剂(NEI)如前边提及的要同时控制全身和局部炎症反应，需要阻断多种炎症途径。特别是具有阻断引发和维持炎症过程的初级介质(如缓激肽)和税性组织挫伤和损伤有关的初级末端途径活性因子(如嗜中性弹性蛋白酶)的能力对治疗败血症或其它要求非肠道治疗的严重炎症或治疗皮肤或牙/牙周的炎症是“单一药物治疗”的关键。
含有BKAn/NEI结合活性的异质二聚物可设计为保持完整化合物或可分解为作用在存在于细胞内的两种靶点(缓激肽受体及嗜中性弹性蛋白酶)上的两种物质。但当希望两种活性药效基团可解离时，异质二聚物中连结两个活性组分的连结部分可设计为被如血浆水解酶水解。这里讨论这些种类的可解离或可水解的异质二聚物。BKAn/环氧酶抑制剂(COI)大部分缓激肽的生物活性与前列腺素的产生密切相关。例如大部分与炎症疼痛有关的痛觉过敏似乎依赖于损伤组织及C-纤维自身产生某些前列腺素。对后一种情形，缓激肽及P-物质可能是这些“第二信使”(second messengers)的初级刺激。受损伤组织局部产生前列腺素是非缓激肽依赖性的。这种前炎症介质肽和前列腺素的相互作用也可以在其它环境中发生，并也可以看作双重作用化合物的一个靶点。具有BKAn/COI结合活性的异质二聚物需要在体内解离两种药效基团，因为环氧酶为胞内酶而机能缓激肽受体限于浆膜外。BKAn/NK1受体拮抗剂(NK1An)
缓激肽和P-物质已知协同作用于引发和维持炎症以及哮喘和多种疼痛状况的神经性作用部分。这两种情形下，缓激肽是一种很强的(如果不是最强)能够刺激介导外周疼痛和/或哮喘中的咳嗽感和呼吸困难的C-纤维感觉传入的物质。无论对于何种初级刺激，这些神经元将释放P-物质，它能扩大和增强缓激肽或其它刺激物在刺激所作用的感觉神经末梢上的活性。这种紧接着被局部放大的“单/双冲动”(one/two punch)的起始刺激已被充分验证并对任何单一干预(imtervention)的成功或失败有明显的影响。通过单一化合物以这些过程的两个方面为靶点，提供一种双重特异性的药物是可能的，它优于单特异性药物单独作用，而且比综合治疗容易且便宜。
BKAn/NK2拮抗剂(NK2An)缓激肽引起支气管平滑肌急性收缩的能力至少部分地依赖于释放P-物质的同一C-纤维释放神经激肽A。神经激肽A通过支气管平滑肌上NK2受体起作用。但不只缓激肽能从这些神经元中释放神经激肽A，所以结合BKA2/NK2拮抗剂活性的双重特异性拮抗剂应比单一药物更好地整体改善哮喘病人的支气管平滑肌收缩。
一般地，本发明的异质二聚物可用WO 92/17201中描述的相同方法来制备。这一般涉及在肽链适当位置向BKAn组分加入连结基团X，然后通过连结基团将非肽药效基团连结到BKAn上。也可以将连结基团加在非肽药效基团上，接着BKAn连结在连结基团修饰的药效基团上。尽管会认识到需要不同的修饰，下面将描述具有代表性的步骤。
下列实施例用来说明本发明，但不受此限制。
实施例1-4(BKAn/μ-阿片受体激动剂)为了说明本发明，制备了四个不同的肽/鸦片制剂异质二聚物(指CP-0477、CP-0488、CP-0494和CP-0499)。其中三个化合物是用CP0126(DR-R-P-J-G-F-C-DF-L-R)制得，第四个化合物是用CP-02347(DR-R-P-J-G-Thi-C-DTic-Oic-R)制备。相似地，用二种不同的鸦片制剂(14-羟基二氢可待因酮和14-羟基双氢吗啡酮)和两种不同的化学连结剂分别制成下列异质二聚物化合物化合物#肽鸦片制剂1 CP-0477 CP-0126 14-羟基二氢可待因酮2 CP-0488 CP-0126 14-羟基二氢可待因酮3 CP-0494 CP-0126 14-羟基双氢吗啡酮4 CP-0499 CP-0347 14-羟基双氢吗啡酮异质二聚物CP-0477、CP-0488、CP-0494和CP-0499的制备详见下述，参照附
图1化合物Ⅰ的制备混合14-羟基二氢可待因酮盐酸盐(0.182g，0.52mmol)、醋酸(0.475ml，8.3mmol)、S-苄基半胱胺(0.174g、1.04mmol)及甲醇(5ml)并在室温下搅拌一小时。加入氰基硼氢化钠(95%，0.033g、0.52mmol)，并在室温下搅拌反应24小时。真空浓缩混和物。生成的油溶解在乙酸乙酯中，乙酸乙酯部分用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥，真空蒸发。粗产品在硅胶柱上层析，用EtOAc、EtOAc-MeOH(9∶1，V/V)及EtOAc-MeOH-Et3N(9∶1∶0.2，V/V/V)连结洗脱，分得化合物Ⅰ为油状，产率25.0%(59.0mg)。
化合物Ⅱ(CP-0477)的制备化合物Ⅰ(0.059g，0.127mmol)溶解于2ml无水四氢呋喃中，然后转入到烘干的100ml三颈烧瓶中。将烧瓶与一杜瓦(dewar)冷凝器、氮源及氨入口管连好。大约10ml的氨冷凝到保持-78℃的烧瓶中。加入小片的钠直到保持亮兰色，40秒钟后用固体氯化铵中止反应。反应混合物升至室温，氨冒泡沸腾溢出，加入甲醇(25ml×3)并真空蒸发。分得的硫醇溶解在小量的DMF(N，N-二甲基甲酰胺，2ml)中。化合物X(大约0.3当量)溶解在三羟甲基氨基甲烷缓冲液(0.5M，4.0ml)中，并加入到DMF溶液中，然后搅拌17小时。粗品混合物用反向Vydac C-18HPLC柱纯化，用含0.1%TFA(不变)的水中15-40%CH3CN梯度洗脱20分钟。保留时间为16.0分钟。冷冻干燥后得到26.4mg化合物Ⅱ白色粉末。
分析质谱用Finnigan Lasermat质谱分析仪测定。
理论分子量-1916实测分子量-1918氨基酸分析Gly1.02(1)、Arg3.14(3)、Pro1.01(1)、Leu0.97(1)、Phe1.92(2)及Hyp0.94(1)。
化合物Ⅲ的制备向溶于甲醇(10.0ml)的14-羟基二氢可待因酮盐酸盐(1.0g，2.84mol)和醋酸铵(2.2g，28.4mmol)的混合物中加入NaC-NBH3(0.18g，2.84mmol)的甲醇(4.0ml)溶液。形成的溶液用浓盐酸盐调到pH7.0，搅拌17小时，再用浓盐酸酸化至pH1.0。真空除去溶剂，残余物溶解在水中。水层用氯仿提取，用10%碳酸钠溶液调pH9.0，用NaCl饱和再用氯仿提取。氯仿层用硫酸镁干燥、真空蒸发。粗品油用硅胶柱层析纯化，用EtOAc、EtOAc-MeOH(9∶1V/V)、EtOAc-MeOH-Et3N(9∶1∶0.3V/V/V)连续洗脱。分得化合物Ⅲ，油状，产率为47.0%(0.42g)。
化合物Ⅳ的制备将BOC-甘氨酸(0.16g，0.91mmol)、HOBt(0.125g，0.91mmol)及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDC)(98.0%，0.18g 0.91mmol)溶解在DMF(2.0ml)中，0℃下搅拌一小时。将溶解于DMF(3.0ml)的胺Ⅲ(0.24g，0.76mmol)加入到反应混合物中，将反应混合物升至室温，搅拌17小时。真空除去DMF，生成物溶解于乙酸乙酯中。乙酸乙酯层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤、用硫酸镁干燥。真空蒸发有机层，粗品混合物在硅胶柱上进行闪式层析(flash chromatographed)，用EtOAc-MeOH-Et3N(9.5∶0.5∶0.3V/V/V)洗脱。分得油状化合物Ⅳ，产率82.0%(0.29g)。
化合物Ⅴ的制备在二氯甲烷中用TFA(5.0ml)除去化合物Ⅳ的保护基BOC。真空除去二氯甲烷，残余物用二氯甲烷(20ml×3)洗涤，再用三乙胺(3ml×3)洗涤。将3-S-苄基巯基丙酸(0.15g，0.75mmol)，EDC(0.15g，0.75mmol)、HOBt(0.103g，0.75mmol)及Et3N(0.35ml，2.48mmol)溶解在DMF(5.0ml)中，0℃下搅拌一小时。将溶解在DMF(3.0ml)的胺(0.23g，0.62mmol)加入到反应混合液中。将反应混合液升温至室温，再搅拌17小时。真空除去DMF，残余物溶解在EtOAc中、EtOAc层用10%Na2CO3、盐水洗涤，干燥(用MgSO4)，再真空蒸发。粗品在闪式硅胶柱上纯化，用EtOAc-MeOH-Et3N(9∶1∶0.3V/V/V)洗脱。分得油状化合物V，产率60.0%(0.205g)。
化合物Ⅵ(CP-0488)的制备用制备化合物Ⅱ的步骤将32.0mg(0.057mmol)的化合物Ⅴ脱保护。分离得到的硫醇与化合物Ⅹ(0.073g，0.048mmol)在三羟甲基基氨基甲烷缓冲液中进行反应。粗品混合物用化合物Ⅱ的方法进行纯化。产品的保留时间为16.82分。冷冻干燥得到9.5mg(10%)白色粉末Ⅵ。
质谱数据理论分子量2002实测分子量2004氨基酸分析Gly1.76(2)、Arg3.19(3)、Pro1.06(1)、Leu0.99(1)、Phe2.06(2)、Hyp0.95(1)。
化合物Ⅶ的制备用14-羟基双氢吗啡酮盐酸盐(0.56g，1.06mmol)、S-苄基半胱胺(0.69，4.15mmol)、醋酸(1.52ml，26.5mmol)及氰基硼氢化钠(0.11g，1.66mmol)按化合物Ⅰ的步骤进行。粗品纯化的第三种洗脱剂的组成为EtOAc-MeOH-Et3N(9∶1∶0.3V/V/V)。经纯化得到0.213g油状化合物Ⅶ。
化合物Ⅷ(CP-0494)的制备按照化合物Ⅱ的步骤将Ⅶ(0.063g，0.14mmol)去保护。得到的硫醇用Ⅹ(0.335g，0.152mmol)在三羟甲基氨基甲烷缓冲液中处理。粗品用含0.1%TFA(不变)的水中15-70%乙腈梯度洗脱条件下35分钟内在反相Vydac C-18HPLC柱上进行纯化。Ⅷ的保留时间为15.0分。冷干得119.0mg(45.0%)的白色粉末化合物Ⅵ-Ⅱ。
质谱数据理论分子量1902实测分子量1904氨基酸分析Gly0.81(1)、Arg3.12(3)、Pro1.07(1)、Leu0.99(1)、Phe2.04(2)、Hyp0.98(1)。
化合物Ⅸ(CP-0499)的制备将Ⅶ(0.009g，0.02mmol)按化合物Ⅱ的方法去保护，然后硫醇与Ⅺ(0.026g，0.016mmol)在三羟甲基氨基甲烷缓冲液中反应。粗品在反相Vydac C-18 HPLC上纯化，用含0.1%TFA(不变)的水中15-70%CH3CN梯度洗脱，流速8.0ml/min，时间40分。Ⅸ的保留时间为14.22分。冷干得到白色粉末状Ⅸ(6.4mg，20.0%)。
质谱分析数据理论分子量1957实测分子量1958体外实验用大鼠子宫(BK2受体活性)和电刺激豚鼠回肠(μ-阿片受体活性)实验评BKAn/μ-阿片受体激动剂异质二聚物。这些实验要在本领域是熟知的。所得结果示于表Ⅰ表Ⅰ化合物 pA2-大鼠子宫 IC50豚鼠回肠(nmol)CP-0126 7.1 无活性CP-0347 9.5 无活性14-羟基二氢可待因酮 无活性 无活性14-羟基双氢吗啡酮 无活性 21.7CP-0477 7.9 无活性CP-0488 8.2 无活性CP-0494 8.4 24.0CP-0499 8.9 17.0应注意到14-羟基二氢可待因酮和14-羟基二氢可待因酮形成的异质二聚物(CP-0477和CP-0488)都没有在μ-阿片受体激动剂活性的体外豚鼠回肠实验中表现出任何活性。这可能是由于14-羟基二氢可待因酮显然需要在体内去甲基化才具有活性。结果，在这种缺少适当的去甲基化酶的实验中不可能表现活性。
但更重要地是关于这些异质二聚物的BKAn组分活性的数据以及关于含14-羟基双氢吗啡酮化合物活性的数据。从表Ⅰ的数据可以看出，所用异质二聚体都保持了全部BKAn活性，那些利用14-羟基双氢吗啡酮作为鸦片制剂的化合物同时保持了全部μ-阿片受体激动剂活性。从这些数据可明显看出BKAn/μ-阿片受体激动剂异质二聚物可以在体外体系中与它们的每类受体起作用。
体内实验为了测试这些化合物在体内的活性，使用了一种炎症和神经性痛疼模型。此模型测试在小鼠后肢脚垫上注射50μl富尔马林后所表现的行为反应。这些研究的数据综合在图2，3和4中。对照小鼠(空心环)在注射富尔马林后表现两阶段特征反应，其中有一个短时间的起始反应，然后是一个安静阶段，再接着是持续的舔后肢的阶段。舔后肢的行为意味着后肢不舒服有疼感。舔的时间越长，则刺激越疼痛。
14-羟基双氢吗啡酮(图2A和B)减少两个阶段的舔肢的行为，但在最大剂量(0.9和3.0μmol/kg)时行为明显迟钝并引起强直性昏厥和明显的呼吸抑制。缓激肽拮抗剂CP-0127(有效的选择性BK2拮抗剂-图3A和B)可减少富尔马林实验中两个阶段舔肢的时间，但剂量要明显高于实际临床所用剂量。但CP-0494(图4A和B)不仅阻断疼痛反应的两个阶段，而且所用剂量(0.1μmol/kg)明显低于14-羟基双氢吗啡酮(0.9μmol/kg)或CP-0127(12.6μmol/kg)单独使用时的剂量，同样重要或更为重要的是数小时内没有可观察到的麻醉作用。这些数据表明正象前述理论考虑所希望地那样，BKAn/μ-阿片受体激动剂异质二聚物在药理学性质上优于原药效基团。
本领域技术人员可认识到上述化合物代表了广泛的一组化合物，其中异质二聚物的每个组分(BKAn、连结剂和/或μ-阿片受体拮抗剂)都可变化，以产生所希望的任意效果。
实施例5(BKAn/NEI)合成了一个具有合成路线3所示结构的BKAn/NEI型化合物(CP-0502)，用来证明此类化合物可用作有效的局部和/或全身抗炎药物。此化合物来自CP-0126和原型弹性蛋白酶抑制剂CE-1218(见下述合成路线1中化合物(6))。
合成路线1
选择用于此异质二聚物中的连结基团以便使连结酯键被血浆酯酶无阻碍地水解。本领域技术人员会认识到可以通过改变酯羰基碳的空间阻碍或使化学基团改为酰胺连结基团来修饰连结基团以使水解速度可以从快速到几乎为零之间变化。也可以用完全稳定的连结残基，使不受潜在的水解破坏的影响。
BKAn/NEI异质二聚物的合成和分析这些化合物的合成参照合成路线2和3来说明，下列详细的合成说明包括按照合成路线1的弹性蛋白酶抑制CE-1218的制备合成路线14-叔丁基乙酰苯(1)的合成向干燥有1-L烧瓶中加入CS2(250ml)和AlCl3(133.34g，0.56mol)，并搅拌。将此悬浮液用冰浴冷却，2小时内滴加叔丁基苯(50.00g，0.37mol)和乙酰氯(78.50g，0.41mol)的溶液(使温度不超过25℃)。室温搅拌反应过夜，然后倾入到装满冰的2L烧杯中。用200ml6NHCl终止反应后，将溶液用NaCl饱和并分离。水层用乙醚洗涤(2×100ml)并与前边的有机层合并。这种新的有机溶液用水洗(100ml)、干燥(MgSO4)并蒸发，得到的油进行蒸馏，生成52.1g(79.3%)的澄清无色油4-叔丁基乙酰苯(bp0.05mm70-76℃)。
1H NMR(CDCl3)δ1.35(s，9H)，2.58(s，3H)，7.48(d，J＝8.5Hz，2H)，7.91(d，J＝8.5Hz，2H).13C NMR(CDCl3)δ26.42，30.96，34.95，125.36，128.16，134.49，156.64，197.61.
4-叔丁基苯基乙酸甲酯(2)的合成装有机械搅拌装置的1L烧瓶中含有Pb(oAc)4(132.06g，0.298mol)和250ml苯，用氮气吹扫、冰浴冷却。1小时内向此冷浆中滴加BF3OEt2(137.8ml，1.12mol)、4-叔丁基乙酰苯(50.00g，0.284mol)在70ml甲醇中的溶液。搅拌此混合液过夜、用水(500ml)终止反应、再用250ml乙醚稀释并分层。有机层用水、稀NaHCO3(小心)洗涤，并用MgSO4干燥。混合物经过滤、蒸发及蒸馏得到31.2g(53.4%)澄清无色油4-叔丁基苯基乙酸甲酯(pb0.04mm75-80℃)。
1H NMR(CDCl3)1.32(s，9H)，3.62(s，2H)，3.71(s，3H)，7.23(d，J＝8.4Hz，2H)，7.37(d，J＝8.4Hz，2H).13C(CDCl3)31.33，34.46，40.67，52.04，125.53，128.88，130.91，149.94，172.26.
4-叔丁基苯基异丁酸(3)的合成将4-叔丁基苯基乙酸甲酯(30.00g，0.145mol)和碘甲烷(45.41g，0.320mol)在125ml无水THF中的溶液30分钟内滴加到NaH(8.72g，0.363mol)在200mlTHF中的浆液中。加完后，将反应混合物加热回流1.5小时。反应物冷却至室温，用硅藻土过滤、浓缩。残余物用乙醚稀释、水洗涤并用MgSO4干燥。蒸去溶剂后生成想要的油状产品。4-叔丁基苯基异丁酸甲酯和含KOH(10.07g，0.179mol)的4∶1EtOH/H2O的混和液加热回流4小时。真空蒸去E-tOH、残液用2N HCl酸化至pH2，滤出固体沉淀。将白色固体干燥(60℃，1mmHg，24小时)得到目标产品(23.45g，从4-叔丁基苯基乙酸甲酯计算，产率为73.2%)。
1H NMR(CDCl3)1.34(s，9H)，1.62(s，6H)，7.37(s，4H)，11.4-12.4(brs，1H).13C NMR(CDCl3)26.16，31.30，34.35，45.81，125.31，125.48，140.64，149.66，183.57.
4-叔丁基苯基异丁酸4-(3′-羰-叔丁基氧基-丙基巯基)苯基酯(4)的合成将4-叔丁基苯基异丁酸(2.00，0.0091mol)和亚硫酰二氯(1.62g，0.0136mol)在16mlCH2Cl2中的混合液在氩气中搅拌过夜。真空除去挥发性物质，形成的固体用THF(15ml)溶解，然后10分钟内滴加4-(4′-羟苯基)巯基丁酸叔丁基酯(2.44g，0.0091mol)、TEA(2.5ml)在THF(15ml)中的溶液。混合物搅拌3天后用Et2O稀释并用5%NaHCO3提取。有机层用水、盐水洗涤，干燥(MgSO4)。蒸发后，有色油经分离(HPLC，硅胶柱，70∶30CH2Cl2/己烷对CH2Cl2线性梯度)得到目标油状产品(2.20g，51.5%)。
1H NMR(CDCl3)δ1.33(s，9H)，1.43(s，9H)，1.70(s，6H)，1.88(tt，J＝7.2Hz，2H)，2.35(t，J＝7.2Hz，2H)，2.90(t，J＝7.2Hz，2H)，6.92(d，J＝8.6Hz，2H)，7.32(d，J＝8.6Hz，2H)，7.34-7.40(m，4H).13C NMR(CDCl3)δ24.50，26.42，28.08，31.31，33.70，34.11，34.39，46.40，80.40，121.92，125.23，125.46，130.82，133.03，140.86，149.58，149.69，172.21，175.34.
4-叔丁基苯基异丁酸4-(3′-羧基-丙基巯基)苯基酯(5)的合成搅拌下，15分钟内将三氟乙酸(25ml)加入到4-叔丁基苯基异丁酸4-(3′-羰-叔丁氧基-丙基巯基)苯基酯(2.40g，0.00510mol)在20mlCH2Cl2中的溶液中。加完后15分钟，除去挥发性物质，油状物结晶(己烷)生成1.94g(91.8%)白色固体目标产品。
m.p.86.0-87.0℃，1H(CDCl3)1.33(s，9H)，1.70(s，6H)，1.92(tt，J＝7.0Hz，2H)，2.50(t，J＝7.0Hz，2H)，2.93(t，J＝7.0Hz，2H)，6.93(d，J＝8.7Hz，2H)，7.33(d，J＝8.7Hz，2H)，7.35-7.39(m，4H).13C NMR(CDCl3)23.89，26.45，31.32，32.34，33.63，34.42，46.42，122.03，125.24，125.48，131.12，132.63，140.85，149.74，175.40，178.65.
4-叔丁基苯基异丁酸4-(3′-羧基-丙基磺酰基)苯基酯(6)的合成向-50ml烧瓶中加入4-叔丁基苯基异丁酸4-(3′-羧基-丙基巯基)苯基酯(1.64g，0.00396mol)、HOAc(25ml)和25ml 30%H2O2。搅拌反应过夜，用水(50ml)稀释，滤出生成的固体。干燥(12小时，1mmHg)后，固体重结晶(CH2Cl2/己烷)得到1.54g(87.1%)的白色粉末目标化合物。
mp 107-108.5℃.1H(CDCl3)1.33(s，9H)，172.(s，6H)，2.02(p，J＝7.0Hz，2H)，2.52(t，J＝7.0Hz，2H)，3.17(t，J＝7.0Hz，2H)，7.20(d，J＝8.7Hz，2H)，7.36(d，J＝8.7Hz，2H)，7.41(d，J＝8.6Hz，2H)，7.90(d，J＝8.6Hz，2H).13C NMR(CDCl3)17.88，26.29，31.28，31.79，34.42，46.53，55.04，122.56，125.16，125.61，129.70，135.81，140.22，150.02，155.29，174.73，177.71.
6-马来酰亚胺基己醇(7)的合成用作连结剂的6-马来酰亚胺基己醇(7)的合成用下述合成路线2来说明合成路线2
向-100ml烧瓶中加入6-氨基己醇(0.76g，0.0064mol)和25ml饱和NaHCO3。室温搅拌此均一溶液，并加入固体N-甲氧基羰基马来酰亚胺(1.00g，0.0064mol)。加入后不久混合物变清，搅拌1小时，混合物用EtOAc提取，干燥(MgSO4)并蒸发。生成的混和物在硅胶柱上分离(CH2Cl2对EtOAc)。得到白色固体产品0.32g(25.2%)，无需进一步纯化。
1H(CDCl3)δ1.25-1.45(m，4H)，1.45-1.70(m，4H)，3.53(t，J＝7.3Hz，2H)，3.63(t，J＝6.0Hz)，6.71(s，2H).
CP-0502的合成化合物(6)(CE-1218)用化合物(7)酯化形成化合物(8)，然后再与CP-0126连结以生成二聚物CP-0502。这些反应在合成路线3中说明
合成路线3
更具体地参照合成路线3，化合物(6)(200mg，0.448mol)、三乙胺(0.124ml，2当量)、6-马来酰亚胺基己醇(7)(97mg，1.1i当量)溶解于2ml二氯甲烷中。搅拌下向此溶液中加入双(2-氧代-3-噁性烷基)次膦酸氯化物(122mg，1.0当量)。形成的悬浮液室温搅拌4小时。反应混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO3洗涤。此有机溶液用无水MgSO4干燥，真空除去溶剂。硅胶层析(2×18cm柱);35/65的丙酮/己酮(Rf＝0.4)作为洗脱剂，得到无色油状化合物(8)。
将经合物(8)(50mg，0.08mmol)溶解在10ml含有100μl二异丙基乙胺的DMF中。加入100mg(0.08mmol)的CP-0126，不时搅拌下反应30分钟。反应混合物注入Vydacl″C-18反相柱，用水中15%-90%乙腈(含0.1%TFA)梯度10ml/分洗脱30分钟。将适当流份冷冻干燥，得到52mg(35%)白色粉末(CP-0502)。激光解吸质谱M/Z＝1890(M+H)，理论值1890。自动氨基酸序列分析结果证实了肽的氨基酸(无变化)序列正确。
BKAn/NEI异质二聚物的体外活性体外评价下列化合物的BKAn和NEI活性用本领域熟知的标准实验方法(Protocols)进行。BKAn活性(pA2)用大鼠子宫制备物测定，NEI(Kiss)活性用纯化的人嗜中性弹性蛋白酶(HNE)和合成可溶性产色底物甲氧基琥珀酰-丙氨酰-丙氨酰-脯氨酰-缬氨酰-邻硝基苯胺(MOS-AAPV-pNA)进行评价。抑制剂在含0.05M磷酸钠、0.1M的NaCl、0.005%的Triton X-100、5%DMSO、pH7.5的溶液中与MOS-AAPV-pNA(0.5mM)混和。然后加入HNE(10-20nM)。硝基苯胺的生成用分光光度计在波长400-410nm处、温度为25℃下检测。然后用ENZFITTER程序自动计算标准酶动力学参数，包括Kiss。
得到下列结果表Ⅱ化合物 pA2--大鼠子宫 Kiss(HNE)nMCP-0126 7.1 无活性CE-1218 无活性 10.5CP-0487 8.4 无活性CP-0502 7.5 6.6注意它们各自的Ki值，表Ⅱ中的数据提示完整的异质二聚物(CP-0502)与游离子NEI片段单体(CE-1218)的NEI活性几乎没有区别。但对于完整异质二聚物的BKAn和它的水解产物CP-0487(CP-0126的琥珀酰亚胺基己醇衍生物)的BKAn方面活性则不同，其中完整化合物效力几乎比单体BKAn低一个数量级(afullLog)有趣的是完整化合物表现为不可逆型的缓激肽拮抗剂，并且在温育时间较长时，明显增强对缓激肽诱导的子宫收缩的拮抗活性。这种类型的受体作用不能用标准pA2分析很好地测量，所以观察到的CP-0487和CP-0502之间BKAn活性差异可能比实际上的更明显。无论这些数背后的分子药理学机制如何，很明显可以将BKAn和NEI活性整合在单一分子中。
上述数据提示考虑完整化合物的体内水解可改变两者的作用行为以增强原化合物体内活性。遗憾地是没有已建立的动物模型可以用来测定体内BKAn和NEI的结合活性。因此，为了测定完整异质二聚物在体内的水解潜力，使用了一种体外“代用”系统，其中异质二聚物(CP-0502)与人血浆一起温育，然后用反相HPLC分析产生的代谢物。
将CP-0502加入新取的人血浆中，并在37℃温育不同时间。在这些设定的时间下用酸化(0.1NHCl)乙腈处理样品以沉淀血浆蛋白。上清液的等份试样(75μl)在Vydac C-18反相HPLC柱上用0.1%TFA中24%到80%乙腈梯度洗脱条件下进行分析。洗脱液在214nm下检测。
图5a和b代表说明这种分析的反相HPLC色谱图。从这些色谱图中可以看出，母化合物看来很快就水解为琥珀酰亚胺基己醇修饰的单体CP-0487及它的脱Arg9衍生物(血浆羧肽酶将从完整异质二聚物CP-0502及CP-0487中裂解末端精氨酸残基)。此水解反应的表观T1/2大约为113分钟。异质二聚物的NEI组分为一活性酯，并同时进行水解。但完整NEI组分及它的水解产物被图中部来自血浆的峰掩盖，而且用此系统无法使其可见化。由于NEI作为异质二聚物组分和作为单体具有同样的活性，所以异质二聚物分解为二个部分对它的活性的影响要小于BKAn组分。
本领域技术人员将认识到“连结”酯片断的立体和电子环境会影响异质二聚物的水解速度，这里所用化学基团仅为可用来调节异质二聚物解离速度(或不解离)的化学基团的一个例子。
实施例6(BKAn/COI)BKAn/COI异质二聚物的合成和分析按照下列合成路线4和5合成了代表性BKAn/COI异质二聚物(CP-0460)。
合成路线4
1-(4-氯苯甲酰基)-5-甲氧基-2-甲基-3-吲哚乙酸6-马来酰亚胺基己基酯(9)的合成向-100ml烧瓶中加入消炎痛(1.90g，0.00532mol)、25mlCH2Cl2及DCC(0.55g，0.00266mol)。2小时后，将混和物过滤，用15mlCH2Cl2洗涤二环己脲(DCU)，向此新溶液中加入固体6-马来酰亚胺基己醇(0.50g，0.00253mol)，再加入无水Na2CO3(0.32g，0.00304mol)。4天后，将混和物过滤，用Et2O稀释，用5%NaH-CO3、H2O洗涤并干燥(MgSO4)。生成的黄色油用HPLC(硅胶;CH2Cl2对80∶20CH2Cl2/EtOAc线性梯度，60分钟)纯化，得到0.79g(58.0%)的黄色油状目标产品。1HNMR(CDCl3)1.20-1.35(m，4H)，2.38(s，3H)，3.47(t，J＝7.3Hz，2H)，3.66(s，2H)，3.83(s，3H)，4.08(t，J＝6.6Hz，2H)，6.66(J＝9.0Hz，J＝2.5Hz，1H)，6.68(s，1H)，6.87(d，J＝9.0Hz，1H)，6.96(d，J＝2.5Hz，1H)，7.47(d，J＝8.5Hz，2H)，7.66(d，J＝8.5Hz，2H).
化合物(9)与CP-0126连结生成CP-0460在合成路线5中说明并描述如下
合成路线5
CP-0126(100mg，0.08mmol)与化合物(9)(0.12mmol，1.5当量)在2ml95%DMF/5%含50μl二异丙基乙胺的碳酸氢铵中不时搅拌下反应30分钟。将反应混合物注入Vydac 1″C-18反相柱在流速10ml/分，20分钟内从15%乙腈/0.1%TFA到40%乙腈/0.1%TFA梯度洗脱条件下纯化。适当流份冷冻干燥后生成64mg(45%)无色粉末(CP-0460)。激光解离质谱M/Z＝1802(M+H)，理论值1802。
如前文提到的，COI起作用需与BKAn解离以使其穿透到细胞内。因此，为了评价BKAn/COI异质二聚物的机能活性，将CP-0460作用于大鼠肺实质条上，然后用花生四烯酸激动。此组织已知既具有非专一性酯酶活性又可将四烯酸转变为血栓素(通过环氧酶依赖性途径)，后者最终引起本实验中观察到的平滑肌收缩。
用此系统，发现血栓素和CP-0460的对数剂量比位移分别为0.988+/-0.425和1.029-/-0.042，说明单独用消炎痛和CP-0460抑制外源性花生四烯酸引起的收缩效力相同。BKAn本身的对数剂量比位移值对此系统没有影响。这些数据显示BKAn/COI异质二聚物的COI组分在同时具有酯水解和环氧酶活性的组织中有机能活性。
用标准大鼠子宫实验也测试了完整CP-0460的BKAn活性，发现CP-0460的pA2大约为7.8。另外，CP-0460(与CP-0502相似)不表现为典型的缓激肽诱发的子宫收缩的竟争性拮抗剂，而为一种“假非竟争性”拮抗剂(特别是浓度较高时)。这种非典型行为不涉及COI活性本身，因为消炎痛无论浓度高低对此实验都没有影响。
无论如何解释所观察到的数据，象本文说明的其它两类化合物一样，本领域的技术人员会认识可以用各种各样适当连结片断来制备药理学上重要的BKAn/COI异质二聚物，以使自由羟基和COI组分的羧基基团(许多COI的一般特性)形成具有可水解酯的异质二聚物。这些化合物可以用来治疗各种炎症或疼痛状况以及治疗子宫平滑肌功能失常。
本发明已例举了上述应用非肽Y组分的例子，此组分也可由整个或部分如在前述WO 92/172001中例举的一种肽组成，包括此文描述的异质二聚物。
本发明的二聚物可以以由活性组份和药用载体组成的传统药物组合物形式使用。这些组合物可适用于局部、口服、气雾、肌内、皮下或静脉给药。这些组合物中活性组份的含量可根据用途和给药途径在例如0.001和90.0%之间变化，尽管可用更多或更少的活性组分。常用的剂量将在很大程度上根据具体用途和给药方式变化。但一般有效剂量在每公斤体重0.1至1000mg数量级之间。
本发明的范围如下述权利要求所定义。
权利要求
1.下式的异质二聚物其中BKAn为缓激肽拮抗剂肽；Y为一不同于BKAn的药效基团；X是化学连结BKAn和Y组份的连结片段。
2.根据权利要求1的异质二聚物，其中Y为具有对抗炎症过程的非激肽部分的活性的非肽药效基团。
3.根据权利要求1的异质二聚物，其中Y为具有对抗炎症过程的非激肽部分的活性的肽类药效基团。
4.根据权利要求1的异质二聚物，其中Y为μ-阿片受体激动剂。
5.根据权利要求1的异质二聚物，其中Y为嗜中性弹性蛋白酶抑制剂。
6.根据权利要求1的异质二聚物，其中Y为环氧酶抑制剂。
7.根据权利要求1的异质二聚物，其中Y为NK1受体拮抗剂或NK2受体拮抗剂。
8.根据权利要求1的异质二聚物，其中X是可水解的。
9.根据权利要求1的异质二聚物，其中X是不可水解的。
10.根据权利要求1的异质二聚物，其中X由掺在BKAn中的氨基酸或氨基酸类似物组成。
11.根据权利要求1的异质二聚物，其中X由基于马来酰亚胺/琥珀酰亚胺的连结基团组成。
12.根据权利要求1的异质二聚物，其中X由双琥珀酰亚胺基烷组成。
13.根据权利要求1的异质二聚物，其中X由BKAn肽巯基的S原子组成。
14.根据权利要求1的异质二聚物，其中Y选自14-羟基二氢可待因酮或14-羟基双氢吗啡酮。
15.根据权利要求1的异质二聚物，其中Y为消炎痛。
16.根据权利要求1的异质二聚物，其中Y为嗜中性弹性蛋白酶抑制剂而X包括通过BKAn链上巯基的硫原子连结在BKAn上的琥珀酰亚胺基团。
17.根据权利要求16的异质二聚物，其中嗜中性弹性蛋白酶抑制剂为4-叔丁基苯基异丁酸4-(3′-羧基-丙基磺酰基)苯基酯。
18.包含为了连结到BKAn肽上而加入的连结基团的药效基团。
19.根据权利要求18的药效基团，其中连结基团由胺、羧酸、羟基、巯基或马来酰亚胺基团或能够整合到肽中的氨基酸组成。
20.包含为连结非肽药效基团而加入的连结基团的BKAn肽。
21.根据权利要求20的BKAn肽，其中连结基团由巯基、马来酰亚胺基团或以羟基为末端的烷烃链、胺或羧酸基团组成。
22.根据权利要求18的药效基团，它为μ-阿片受体激动剂。
23.根据权利要求18的药效基团，它为嗜中性弹性蛋白酶抑制剂。
24.根据权利要求18的药效基团，它为环氧酶抑制剂。
25.根据权利要求18的药效基团，它为NK1受体拮抗剂或NK2受体拮抗剂。
26.根据权利要求1的异质二聚物，其中BKAn为DR-R-P-J-G-F-C-DF-L-R或DR-R-P-J-G-Thi-G-DTic-Oic-R。
27.根据权利要求26的异质二聚物，其中另一药效基团为μ-阿片受体激动剂。
28.根据权利要求26的异质二聚物，其中另一药效基团为嗜中性弹性蛋白酶抑制剂。
29.根据权利要求26的异质二聚物，其中另一药效基团为环氧酶抑制剂。
30.根据权利要求26的异质二聚物，其中另一药效基团为NK1拮抗剂或NK2拮抗剂。
31.根据权利要求28的异质二聚物，其中药效基团为4-叔丁基苯基异丁酸4-(3′-羧基-丙基-磺酰基)苯基酯。
32.根据权利要求31的异质二聚物，其中X由用-S-原子连结到BKAn组分上的双琥珀亚胺基烷基团组成。
33.化合物4-叔丁基苯基异丁酸4-(3′-羧基-丙基磺酰基)苯基酯。
34.由权利要求1的异质二聚物和药用载体组成的药物组合物。
35.在用缓激肽拮抗剂治疗疼痛或炎症的方法中，使用权利要求1的异质二聚物所构成的改进。
全文摘要
下式的缓激肽拮抗剂 (BKA其中BKA
文档编号A61P25/04GK1094058SQ9311448
公开日1994年10月26日 申请日期1993年11月10日 优先权日1992年11月10日
发明者J·C·彻奥尼斯, J·K·博劳德格特, V·S·古德佛楼, M·V·马拉瑟, L·W·思普鲁斯, E·T·瓦雷 申请人:科泰彻公司