专利名称：：用于伤口愈合的基质蛋白组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白作为治疗或预防制剂的应用。这些物质具有伤口愈合，抗细菌和/或抗炎制剂的活性。本发明的背景釉基质蛋白例如存在于釉基质中的基质蛋白众所周知是作为釉质的前体。釉质蛋白和釉基质衍生物以前曾在用于硬组织形成的专利(即釉质形成，美国专利4，672，032(Slavkin))，或硬组织间的连接(EP-B-O337967和EP-B-O263，086)的专利中叙述。因此现有技术主要侧重于硬组织的再生，而本申请却涉及对软组织伤口愈合的有益效应和抗细菌和抗炎作用这些先前未曾预见到的发现。本发明的描述本发明是基于如下发现，即釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白(术语“活性釉质物质”在下文中也被用于指代釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白)在提高和改善软组织(即非矿化组织)的伤口愈合中是有利的制剂，所述组织例如含胶原或表皮的组织，包括皮肤和粘膜，肌肉、血液和淋巴管，神经组织，腺体，腱，眼和软骨。正如在本文中实验部分所证实的那样，这种釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白在软组织伤口的愈合或预防上显示出特殊的功效。因此，本发明涉及一种活性釉质物质的制剂在制备一种药物组合物或化妆品组合物中的应用，所述组合物ⅰ)用于伤口的愈合，ⅱ)改善伤口的愈合，和/或ⅲ)用于软组织再生和/或修复。另一方面，本发明涉及一种改善伤口愈合或促进软组织再生和/或修复的方法，该方法包括给予有此需要的个体治疗或预防有效量的活性釉质物质。另外，釉基质，釉基质衍生物和釉基质蛋白已经被发现具有抗细菌和/或抗炎的性质，可以用于治疗软和硬(即矿化)组织病症。本发明的另一方面涉及活性釉质物质制剂在制备预防和/或治疗感染或炎症的药物组合物中的应用。伤口愈合伤口和/或溃疡经常突出于皮肤或发生在粘膜表面或由于器官的梗死所致(“中风”)。伤口可以源于软组织的缺陷或损伤或潜在的病症。实验条件下所产生的牙周伤口的再生先前已被本发明人阐述过，它们不属于本发明的范畴。在本文中，术语“皮肤”是指包括人在内的动物身体最外层表面，它包含完整的或几乎完整的皮肤以及受伤的皮肤。术语“粘膜”指动物例如人的未损害的或损害的粘膜，它可以是口腔，颊，耳腔，鼻腔，肺，眼，胃肠，阴道，或直肠粘膜。在本发明中，术语“伤口”指造成组织结构正常完整性破坏的机体损伤。该术语也包括术语“疮”，“损害”，“坏死”和“溃疡”。一般来说，术语“疮”是涵盖包括皮肤或粘膜表面几乎所有损害的广义术语，术语“溃疡”则指器官或组织表面由于坏死组织脱落而导致的局部缺损或出现孔洞。损害一般与组织的缺损相关。坏死则是由于感染，受伤，炎症或梗死而导致的组织死亡。本文中的术语“伤口”指任何伤口(见下文对伤口的分类)，并且指愈合过程中的任何一个特殊阶段，包括愈合开始以前的阶段甚或一个例如手术切口出现以前的阶段(预防治疗)。根据本发明可以被预防和/或治疗的伤口的例子是，例如无菌伤口，挫伤伤口，切割伤口，撕裂伤口，非穿透伤口(即对皮肤没有破坏但对下层结构有伤害的伤口)，开放伤口，穿透伤口，穿孔伤口，脓毒伤口，皮下伤口等。疮的例子是褥疮，溃疡，铬溃疡，感冒疮，褥疮等。溃疡的例子是，例如消化器官溃疡，十二指肠溃疡，胃溃疡，痛风溃疡，糖尿病溃疡，高血压性局部缺血性溃疡，郁积溃疡，下腿部溃疡(静脉溃疡)，舌下溃疡，粘膜下溃疡，症状性溃疡，营养性溃疡，热带溃疡，软下疳等，例如由淋病所致(包括尿道炎，子宫颈内膜炎和直肠炎)。可以根据本发明成功治疗的与伤口或疮有关的症状是灼伤，炭疽，破伤风，气性坏疽，猩红热，丹毒，芒须疮，毛囊炎，接触性脓疱病，大疱性脓疱病等。在术语“伤口”和“溃疡”以及“伤口”和“疮”之间的使用上经常有一定程度的重叠，而且这些术语经常随机使用。因此如上所述，在本文中术语“伤口”包含术语“溃疡”，“损害”，“疮”和“梗死”，这些术语的使用是无区别的，除非特殊指出。根据本发明可以治疗的伤口的种类还包括ⅰ)普通伤口，例如，手术，外伤，感染，缺血、热、化学和大疱的伤口；ⅱ)特别针对口腔的伤口，例如拔牙后的伤口，特别是针对囊肿和脓肿治疗的牙周伤口，细菌性溃疡和损害，病毒或自身免疫原性的，机械的，化学的，热，感染性的和青苔状的伤口；疱疹溃疡，口腔溃疡，急性坏死溃疡性齿龈炎和灼伤性口腔综合症则是一些特例；ⅲ)皮肤的伤口例如赘生物，灼伤(例如化学灼伤，热灼伤)，损害(细菌性，病毒性，自身免疫性)，叮咬和手术切口。对伤口分类的另一种方法是例如，ⅰ)由于手术切口而造成的小的组织丧失，轻微磨损和轻微叮咬，或例如ⅱ)严重的组织缺损。后者包括缺血性溃疡，褥疮，瘘，撕裂，严重叮咬，热灼伤，和供体部位损伤(软和硬组织)和梗死。活性釉质物质的愈合效应是通过它对口腔伤口的作用发现的。这种伤口可以是身体损伤和与口腔手术有关的外伤，包括牙周手术，拔牙，牙髓处理，植牙，牙具的应用，诸如此类。在本文的实验部分，一种活性釉质物质对此类伤口的有益效应得到了证实。而且观察到了软组织的愈合效应。在口腔中口疮，外伤或疱疹相关伤口的愈合在使用了这种活性釉质物质后也得到改善。当然外伤和疱疹相关伤口在口腔以外的身体其它部分也会出现。在本发明的其他方面，可以被预防和/或治疗的伤口选自无菌伤口，梗死，挫伤，切割伤口，撕裂伤口，非穿透性伤口，开放伤口，穿透性伤口，穿孔伤口，刺破伤口，脓毒伤口和皮下伤口。与本发明有重要联系的其它伤口包括缺血性溃疡，褥疮，瘘，严重叮咬，热灼伤和供体部位处的伤口。缺血性溃疡和褥疮是通常状况下愈合非常缓慢的伤口，在这种特殊情况下，一种改善的和更快速的愈合当然对病人至关重要。而且涉及此类病人伤口愈合治疗的成本也会由于愈合的改善和发生的快速而大大降低。供体部位处的伤口是指例如，将身体一个部分的硬组织转移到身体的另一部分，例如与移植有关。由于此手术造成的伤口非常疼痛，因此改进的愈合也非常有价值。术语“皮肤”在一个很广泛的意义上使用，包括皮肤的表皮层，在皮肤的表层或多或少被损坏的情形下，也包括皮肤的真皮层。除了角膜层，皮肤的表皮层是指外皮(上皮)层，皮肤深层的结缔组织层称作真皮。由于皮肤是身体最暴露的部分，它特别易于受到各种损伤，例如破裂，切割，摩擦，灼伤，冻伤或由各种疾病造成的损伤。而且，大部分皮肤也很容易被偶然性损伤。然而，由于皮肤重要的屏障和生理作用，皮肤的完整对每个人的正常生存至关重要，任何裂口和撕裂都需要机体做出反应以保护其继续生存。除了皮肤的损害外，各种组织也会出现损伤(例如软组织和硬组织)。包括粘膜和/或皮肤的软组织的损伤与本发明极其相关。皮肤或粘膜伤口的愈合需要经过一系列的阶段才能导致皮肤或粘膜的修复或再生。近年来，再生和修复被区分成两种形式的愈合。再生被认为是一种失去的组织的结构和功能得到完全更新的生物学过程。另一方面，修复则指受损伤的组织的连续性被新组织恢复，而不是对失去组织的结构和功能的复制的生物学过程。伤口愈合的主要部分是通过修复，它意味着所形成的新组织在结构和化学性质上与原组织不同(疤痕组织)。在组织修复的最初阶段，几乎都要涉及的一个过程是在伤口处形成一个暂时的结缔组织。这一过程是通过成纤维细胞形成的一种新的细胞外胶原基质启动的。此后这种新的胶原基质在愈合的最后阶段作为连接组织的支持。对很多组织来说愈合的最后阶段是指包含连接组织的伤疤的形成。对于有再生性质的组织例如皮肤和骨骼，最终的愈合包括原组织的再生。再生的组织也经常有一些疤痕的性质，例如，愈合的骨骼的增厚。在正常情况下机体会提供一种使受伤的皮肤或粘膜愈合的机制以恢复皮肤屏障和粘膜的完整性。这种对甚至很微小的割裂或伤口的修复可能要用从几小时到几天至几周的时间。然而，对于溃疡来说，愈合将非常缓慢，可能持续一段很长的时间，即数月或数年。伤口愈合的阶段一般包括发炎(一般1-3天)，迁移(一般1-6天)，增殖(一般3-24天)和成熟(一般1-12个月)。愈合过程是一个复杂的和精确的物理过程，它涉及迁移，增殖，各种细胞类型的分化以及基质组分的合成。愈合过程可以分成以下三个阶段ⅰ)止血和炎症当血小板出现在循环系统以外并暴露于凝血酶和胶原时，它们将被激活并聚集。因此血小板通过聚集并形成确保凝血和防止细菌侵入组织的暂时性血栓来启动修复的过程。被激活的血小板启动凝结系统并释放生长因子，例如血小板衍生生长因子(PDGF)，表皮生长因子(EGFs)和转化生长因子(TGFs)等。最先进入伤口区的是中性白细胞，紧接着是被巨噬细胞激活的单核细胞。中性白细胞的作用体现在清洁伤口或阻止伤口被感染性细菌感染和通过除去死细胞和血小板来改善伤口的愈合。如果伤口不出现细菌感染，中性白细胞的浸润将在大约最初48小时终止。多余的中性白细胞被循环系统中血液携带的单核细胞所募集的组织巨噬细胞所吞噬。巨噬细胞被确信对有效的伤口愈合是必要的，这表现在它们也负责对致病性生物体进行吞噬和清除组织碎片。而且它们还释放涉及愈合过程的后续阶段的多种因子。巨噬细胞吸引成纤维细胞启动胶原的生成。ⅱ)肉芽组织形成和上皮重新合成受伤后48小时，成纤维细胞开始增殖并从伤口边缘的连接组织迁移到伤口处。成纤维细胞生成胶原和粘多糖，伤口处存在的低氧张力等刺激内皮细胞的增殖。这些内皮细胞产生一个新的毛细网络。胶原酶和纤溶酶原激活物是由角质化细胞分泌的。如果伤口没有被干扰并有充足的氧气和营养物质供应，角质化细胞将迁移到伤口上。角质化细胞被认为仅仅迁移到活组织上，因此，角质化细胞将迁移到伤口的死组织和之下的区域。伤口的面积由于收缩的原因进一步缩小。ⅲ)真皮的重构一旦上皮的重新合成完成紧接着就开始真皮的重构。这一阶段往往延续若干年以恢复伤口组织的强度。所有如上所述的愈合过程都要经过相当长的时间。愈合的速度受以下因素影响，伤口不被感染，个体的大致健康情况，外源物质的出现等。一些致病性因素例如感染，浸泡，脱水，不良的健康状况和营养不良可以导致慢性溃疡，例如缺血性溃疡。在至少是表面的愈合出现以前，伤口仍有持续或重新感染的危险。因此，伤口愈合愈快，这种危险也会愈快清除。因此，任何可以影响伤口愈合速度或对伤口愈合有益的步骤都具有很高的价值。而且由于在几乎所有的组织修复以前都包含一个早期连接组织形成的阶段，因此对这一阶段和其后过程的刺激也被认为可以改善组织愈合。在本文中术语“临床愈合”被用来指肉眼观察不到的组织中断并且仅有离散的炎症迹象例如轻微红肿或不连续的肿胀组织存在的情况。而且当器官放松或不被接触时无疼痛感觉。如上所述，本发明涉及釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白作为伤口愈合制剂的应用，即可以加速，刺激或促进皮肤或粘膜伤口愈合的制剂。相应的，其作为组织再生和/或修复制剂的应用也非常重要。而且，由于其伤口愈合的效应，釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白也具有止痛的作用。传统上，干燥的或湿到干燥的敷料被广泛应用于伤口的保护。渐渐的它们被在潮湿环境下使用封闭的绷带所代替。为了成功的修复或取代受伤的机体部分，伤口愈合，纤维化和微生物的侵入之间必须得到平衡。许多防止感染的手段有损伤口愈合。延迟的伤口愈合或炎症能加速纤维化。而且，尽管以前曾经认为生长因子例如表皮生长因子(EGF)，转化生长因子-α(TGF-α)，血小板衍生生长因子(PDGF)，包含酸性成纤维生长因子(α-FGF)和碱性成纤维生长因子(β-FGF)在内的成纤维细胞生长因子(FGFs)，转化生长因子-β(TGF-β)和胰岛素样生长因子(IGF-1和IGF-2)是伤口愈合过程中的传导因素，经常被认为是伤口愈合促进剂；但是它们实际上是促进纤维化，后者反过来则损害成功的愈合。尽管加速的愈合对减轻感染的危险提供了最大保证，但加速正常的伤口愈合的过程的治疗性尝试却仅获得了相对很少的成功。这可能是由于修复进程涉及一系列如上所述的相关因子的介入。为此，本发明人观察到在各种成成纤维细胞培养物中(牙周膜，鱼或鸟衍生的胚胎成纤维细胞，皮肤成纤维细胞)，通过例如ELISA方法对取自培养物培养基中的样品进行检测发现EMDOGAIN刺激过的细胞所产生的TGFβ1的量比未经刺激细胞增加2倍(参阅下面的实施例1)。这种增加在培养24小时后出现，而大量的增加出现在随后几天(第2和3天)。第2天以后使用EMDOGAIN刺激的细胞的增殖也明显增加。在人上皮细胞中也观察到同样的但不是很显著的TGFβ1量的增加。由于TGFβ1似乎在表皮损伤的上皮形成中起重要作用，这些发现支持了本发明的观点。在口腔中使用敷料是很普通的。这些敷料是传统的形式，例如在开放伤口中用于止血的外科手术垫料和Coe-Pack牙周塞制剂(CoeLaboratory，GC集团，Chicago，USA)，拔牙时插入牙槽并在几天后愈合开始时需要去除的在抗生素溶液中浸湿的棉球。用例如洗必太的抗菌剂进行冲洗是在口腔手术后经常使用的。有时也使用全身用或局部用抗生素。一般来说在伤口治疗的过程中需要考虑一些特殊的注意事项，例如无菌条件，污染问题，正确使用绷带/敷料等，这些治疗/应用过程一般来说需要受过专门训练的护士及相关人员进行。因此在用于伤口愈合的制剂需要在一天里反复更换时，伤口的处理经常变为一种非常昂贵的操作。因此一种理想的在伤口愈合治疗中降低成本的方法应该是旨在减少(制剂)的使用频率或改进愈合的程序以缩短伤口愈合所需要的时间。本发明人发现釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白具有伤口愈合的性质。而且有显示应用釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白可以改善伤口的愈合。特别是本发明人观察到在使用了釉基质和/或釉基质衍生物后，炎症的阶段得以缩短，热，红肿，水肿和疼痛等典型症状不大容易观察到，新的组织形成的非常快。所观察到的伤口愈合的时间与未使用釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白相比(例如手术后)显著的缩短。釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白的治疗和/或预防活性可以通过实验动物和人在体内得到证实(参见本文中的实验部分)。然而，通过进行一些相对比较简单的体外实验例如涉及细胞培养物的实验也可以显示出釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白的治疗和/或预防活性。而且，有很多可以用于评价伤口愈合效果的参数。它们包括计算机辅助测面法(评价开放伤口愈合的速度)激光多普勒成象(评价伤口的灌注)张力测量术(测定伤口强度)组织学/细胞学方法(伤口组织和液体的微观评价)生化方法(HPLC/RIA)(评价组织愈合的各种药物和生化成分)电子诊断(评价伤口组织和神经支配的关系)闪烁扫描法(伤口组织的放射性核成象)与伤口/溃疡治疗相关的清创和伤口的清洁也特别重要。已确信伤口/溃疡的清创和伤口的清洁是愈合过程的前提条件，而且当使用伤口愈合制剂时，这些制剂必须作用于新鲜的或活组织而不是死组织或污染的组织。对坏死组织的清创可以至少采用四种不同的方法ⅰ)切割除创，ⅱ)机械除创，ⅲ)酶法除创，和ⅳ)自裂解除创。因此本发明也涉及除创方法与应用釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白进行伤口愈合和预防的联合应用。这种联合治疗涉及以下2个步骤，即ⅰ)除创方法，ⅱ)釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白的应用，这两个步骤可以根据需要按照适当的顺序多次进行。伤口已经除创后，釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白即可以直接应用在伤口上或伤口内，也可以以某种合适的药物组合物例如一种包含釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白的干或湿的清洁敷剂的形式使用。釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白当然也可以与伤口的清洁联系起来使用。正如后面要讨论的，釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白可以直接使用或者它们也可以以一种合适的制备物或药物组合物的形式使用。降低感染作用本发明另一个方面是釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白被用作具有抗微生物效应的治疗和预防制剂。釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白显示出降低感染的效应。在本文中术语降低感染效应是指当使用釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白处理某个组织或个体时，它们对个体中受感染的组织所产生的治疗和预防效应。术语感染指微生物对机体组织的侵入和在其中繁殖或在组织上的聚集，其可以不表现出临床症状，或者由于竞争代谢，酶，毒素，胞内复制或抗原-抗体应答而导致局部细胞损伤。根据本发明，需预防和/或治疗的感染可由微生物引起。与本发明有关的微生物包括细菌，病毒，酵母，霉菌，原生动物和里克次氏体。在本发明中术语“抗细菌效应”是指细菌的生长被抑制或细菌被破坏。该术语不仅限定在某一种细菌而是包含几乎任何细菌。然而，本发明侧重于ⅰ)对包括人在内的哺乳动物引起疾病的致病细菌和/或ⅱ)一般情况下在哺乳动物体内正常存在但在特定条件下可以对机体产生有害作用的细菌。相应的本发明涉及使用一种有活性的釉基质物质用以治疗和预防机体表面例如皮肤，粘膜表面或指甲或牙齿表面上的细菌生长。对将要遇到的细菌情况的一般和特殊说明釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白可以在存在抗菌剂或不存在抗菌剂时用来治疗细菌引起的感染。可以用活性釉质物质处理的革兰氏阴性菌可以是球菌例如奈瑟氏球菌属(例如脑膜炎奈瑟氏球菌，淋病奈瑟氏球菌)，和杆菌，例如拟杆菌属(例如脆壁拟杆菌)，博德特氏菌属(例如百日咳博德特氏菌和副百日咳博德特氏菌)，布鲁氏菌(例如马尔他布鲁氏菌，流产布鲁氏菌，猪布鲁氏菌)，弯曲杆菌属(例如空肠弯曲杆菌，大肠弯曲杆菌，胎儿弯曲杆菌)，柠檬酸杆菌，肠杆菌，埃希氏杆菌属(例如大肠杆菌)，嗜血杆菌(例如流感嗜血杆菌，副流感嗜血杆菌)，克氏杆菌属(例如肺炎克氏杆菌)，军团菌属(例如肺炎军团菌)，巴斯德氏菌(例如耶尔森氏鼠疫杆菌，多杀巴斯德氏菌)，变形杆菌属(例如奇异变形杆菌，寻常变形杆菌)，假单胞菌属(例如铜绿假单胞菌，伪鼻疽假单胞菌，鼻疽假单胞菌)，沙门氏菌属(例如肠沙门氏菌，婴儿沙门氏菌，都柏林沙门氏菌，伤寒沙门氏菌，副伤寒沙门氏菌，薛氏沙门氏菌，鼠霍乱沙门氏菌，鼠伤寒沙门氏菌，或其它2500个血清型的任何一个)，沙雷氏菌属(例如粘质沙雷氏菌，液化沙雷氏菌)，志贺氏菌属(例如索氏志贺氏菌，弗氏志贺氏菌，痢疾志贺氏菌，鲍氏志贺氏菌)，弧菌(例如霍乱弧菌，艾罗特弧菌)，和耶尔森氏菌属(例如小肠结肠炎耶尔森氏菌，假结核耶尔森氏菌，鼠疫耶尔森氏菌)。可以使用活性釉质物质治疗的革兰氏阳性菌可以是球菌例如链球菌(例如肺炎链球菌，绿色链球菌，粪链球菌，化脓链球菌)，葡萄球菌属(例如金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，腐生葡萄球菌，白葡萄球菌)，和杆菌，例如放线菌(例如以色列放线菌)，芽孢杆菌属(例如蜡状芽孢杆菌，枯草杆菌，炭疽芽孢杆菌)，梭菌属(例如肉毒梭菌，破伤风梭菌，产气荚膜梭菌，艰难梭菌)，棒状杆菌(例如白喉棒杆菌)，李斯特氏菌属和普罗威登斯菌属。其它一些引起感染的细菌包括疮疱丙酸杆菌和Pityosporonovale。釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白也可以被用来治疗由螺旋体例如疏螺旋体，钩端螺旋体，密螺旋体或假单胞菌引起的感染。和釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白联合使用的抗菌剂可以是具有抑制细胞壁合成活性的抗菌剂，例如β-内酰胺和万古霉素，最好是青霉素例如巴比妥霉素，氨苄青霉素，羟氨苄青霉素，阿洛西林，氨苄青霉素，苄星青霉素G，羧苄青霉素，邻氯青霉素，氨环己青霉素，双氯青霉素，甲基青霉素，梅兹洛西林，乙氧萘(胺)青霉素，苯甲异唑青霉素，青霉素G，青霉素V，哔哌青霉素，和羧噻吩青霉素；头孢菌素，例如第一代的头孢羟氨苄，氯头孢菌素，头孢氨苄，头孢菌素，头孢吡硫，和头孢环己烯，第二代氯头孢菌素，羟下四唑头孢菌素，盐头孢菌素，水溶性头孢菌素，头孢甲氧霉素和头孢噻甲羧肟，第三代氧哌羟苯唑头孢菌素族抗菌素，氨中噻肟头孢菌素，头孢双硫唑甲氧，去甲噻肟头孢菌素，菌必治，和羟羧氧酰胺菌素；carbapenems例如亚胺培南；或monobactem例如氨曲南；其它通过抑制蛋白质合成的抗菌药物有，例如氯霉素；其它四环素特别是地美环素，强力霉素，甲烯土霉素，二甲胺四环素，和地霉素；氨基肽酶例如氨基丁卡霉素，庆大霉素，卡那霉素，新霉素，乙基西梭霉素，巴龙霉素，奇放线菌素，链霉素，和托普霉素；多粘菌素例如粘菌素，colistimathate，和多粘菌素B，红霉素和林肯霉素；具有抑制核苷酸合成活性的抗菌剂药物特别是磺胺类药物例如sulfacytine，磺胺嘧啶，磺胺异嘧唑，磺胺甲基异恶唑，磺胺甲基硫代二嗪，和磺胺嘧啶，甲氧苄氨嘧啶，喹啉衍生物，新生霉素，乙嘧啶，和利福平。作为本发明的一个特殊实施方案，感染可以出现在口腔并且感染可以由细菌引起。可以被完全抑制或被抵抗的口腔细菌。例子(不是条件)包括引起溃疡的细菌，例如突变链球菌，乳酸杆菌。引起牙周疾病的细菌例如伴放线放线杆菌，牙龈卟啉单胞菌，中间普雷沃氏菌，微小消化链球菌，弯曲杆菌(梭杆菌，葡萄球菌)，B.forsythus。引起牙槽炎等的细菌例如葡萄球菌，放线菌和杆菌。引起尖周损害的细菌，例如螺旋体和所有上述细菌。抗炎效应本发明涉及釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白作为具有抗炎效应的治疗和预防制剂的应用。很多药物被用来抑制炎症的出现，包括肾上腺皮质类固醇，包含所谓非类固醇抗炎药物或称NSAID在内的一大组药物，和例如免疫抑制剂药物。肾上腺皮质类固醇，特别是糖皮质激素当使用药物学剂量时，具有强抗炎效应。它们通过降低血管的渗透性进而降低粒细胞的迁移以此特异性地抑制早期血管相的炎症进程。糖皮质激素也干扰晚期炎症和修复进程，这一效应是通过抑制间叶细胞的增殖和细胞外包括蛋白多糖和胶原在内大分子的生成来完成的。实验证明糖皮质激素还抑制例如巨噬细胞的功能，体液抗体的产生，细胞免疫，或许还有溶菌酶的释放。组织损害的严重程度依赖于机体的抗原抗体反应和受损伤区域炎症产物存在的程度。局部炎症介体的积聚加速了这个进程。在大多数情况下，这个进程是缓慢的，它伴随着组织的免疫渗透和包含炎症细胞的粒状组织的形成。在本文中术语“抗炎效应”指对抗或抑制炎症的发生。所治疗的炎症情况的种类的一般和特殊说明根据本发明所能治疗的炎症情况当然可以是机体任何部分内/上的或软(或硬)组织内出现的任何炎症情况。作为本发明的一个实施方案，炎症可以出现在口腔。关于口腔炎症情况的例子是牙槽炎，唇炎，牙周坏死(外伤后)，牙破碎。在本发明的另一个实施方案中，炎症的情况出现在骨髓捐献者的相应位置。在本发明的第三个实施方案中炎症出现在关节腔。该种炎症情况的例子是风湿性关节炎和与其相关的症状。与抗炎相对应的抗细菌作用与现今正在使用的多种抗菌剂相比，釉基质蛋白可以促进伤口愈合，因此反过来，它也就不会给慢性或长期存在的炎症进程的发生留有余地。而且，正如所叙述的那样，当釉基质衍生物作用于牙周感染后，适当组织的重新组成由快速的伤口愈合并且没有细菌或炎症反应而受益。釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白的应用可以导致手术伤口的快速愈合，这可能是通过它们可以产生一个与细菌接触的表面从而抑制细菌的生长并同时增强成纤维细胞的迁移和胶原的合成。如果炎症阶段缩短，其典型的迹象例如热，红肿，水肿和疼痛也不大容易观察到。釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白釉基质是釉质的前体，它可以从任何相关的自然原料获得，例如正处于牙齿发育阶段的哺乳动物。一个合适的来源是从被屠宰动物的正在发育的牙齿获得，例如小牛，猪或羊。另一个来源可以是例如鱼皮。釉基质可以通过先前所述的方法从发育的牙齿制备(EP-B-0337967和EP-B-0263086)。将釉基质刮下以制备釉基质衍生物，例如使用水溶液如一种缓冲液、稀酸或碱或水/溶剂混合物抽提，然后进行大小分离，除盐或其它纯化步骤，随后任选地冻干。酶类可以通过加热或溶剂处理灭活，这样可以使制备的衍生物以液体形式存在而无须冻干。在本文中，釉基质衍生物是指通过可变剪接或加工天然生成的，或通过对天然长度的蛋白用酶或化学方法切割得到的，或通过体外或体内的多肽合成获得的(重组DNA方法或二倍体细胞的培养)包含一个或多个釉基质蛋白或蛋白部分的釉基质的衍生物。釉基质蛋白衍生物也包括与釉基质相关的多肽或蛋白。这些蛋白或多肽可以被连接在适当的可生物学降解的载体分子上，例如聚氨基酸或多糖，或其组合。而且，术语釉基质衍生物也包括合成的类似物。蛋白是通过肽键连接起来的氨基酸残基所组成的生物学大分子。蛋白作为氨基酸的线形多聚体也叫多肽。典型的蛋白有50-800个氨基酸残基，因此分子量界于6000至几十万道尔顿之间。小的蛋白被称作肽或寡肽。釉基质蛋白一般是指存在于釉基质中的蛋白，即釉质前体(TenCate口腔组织学，1994；Robinson欧洲口腔科学杂志，1998年1月，106supp1.1282-91)，或通过切割此种蛋白而获得的新蛋白。一般来说，此种蛋白的分子量低于120，000道尔顿，具体包括珐琅蛋白，非珐琅蛋白，富含脯氨酸的非珐琅蛋白，成釉质蛋白(amelin)(成釉细胞蛋白(ameloblastin)，鞘质蛋白(sheathlin)和簇质蛋白(tuftelin)。根据本发明所使用的蛋白的例子包括珐琅蛋白，富含脯氨酸的非珐琅蛋白，簇质蛋白，簇蛋白(tuftprotein)，血清蛋白，唾液蛋白，成釉质蛋白，成釉细胞蛋白，鞘质蛋白，和其相应衍生物及混合物。含有用于本发明的活性釉质物质的制剂也包含至少两种上述蛋白物质。包含珐琅蛋白和可能的其它一些釉基质蛋白的商品化的产品品为EMDOGAIN(BioraAB)。一般来说釉基质的主要蛋白已知为珐琅蛋白。它们组成大约90％w/w的基质蛋白。剩余的10％w/w包含富含脯氨酸的非珐琅蛋白，簇质蛋白，簇蛋白，血清蛋白和至少一种唾液蛋白；然而也可存在一些其它蛋白，例如已经被鉴定的与釉基质相关的成釉质蛋白(成釉质细胞蛋白，鞘质蛋白)。而且各种蛋白可以被合成和/或加工成不同的大小(例如不同的分子量)。因此釉基质中的主要蛋白珐琅蛋白被发现以多种不同大小的形式存在，这些蛋白在一起组成超分子聚合物。它们在生理条件形成明显疏水性物质。它们可以携带其他蛋白或肽或是其他蛋白或肽的载体。其它一些蛋白也被认为适合本发明的使用。这些蛋白的例子包括例如富含脯氨酸的蛋白和聚脯氨酸。被认为适合本发明使用的其它物质的例子包括釉基质衍生物和/或釉基质蛋白的聚合物以及釉基质，釉基质衍生物和釉基质蛋白的代谢物。代谢物可以是分子量从蛋白质到短肽的任何大小。如上所述，根据本发明所使用的典型的蛋白，多肽和肽的分子量多数为大约120kDa，例如通过SDS-PAGE确定多数为100kDa，90kDa，80kDa，70kDa或60kDa。根据本发明所使用的蛋白一般是以制备物的形式存在，制备物中活性釉质物质的蛋白含量的范围在0.05％w/w至100％w/w之间，例如大约5-99％w/w，大约10-95％w/w，大约15-90％w/w，大约20-90％w/w，大约30-90％w/w，大约40-85％w/w，50-80％w/w，大约60-70％w/w，大约70-90％w/w，或大约80-90％w/w。根据本发明所使用的活性釉质物质的制备物也可包括不同分子量的活性釉质物质的混合物。一种釉基质的蛋白可以被分成高分子量部分和低分子量部分，且已经发现一种已熟知的釉基质蛋白的组分在牙周缺损(例如牙周伤口)的治疗中具有很高的价值。这种组分包括醋酸抽提的蛋白即通常所指的珐琅蛋白并组成釉基质的低分子量部分(参考EP-B-0337967和EP-B-0263086)。正如上面所讨论的，釉基质的低分子量部分具有诱导牙周缺陷中的硬组织连接的适当活性。然而在本文中，活性蛋白不只局限在釉基质的低分子量部分。本文中优选的蛋白包括釉基质蛋白例如珐琅蛋白，成釉质蛋白，簇质蛋白等，其分子量(体外SDS-PAGE测定)小于约60000道尔顿，但是大于60000道尔顿的蛋白在作为伤口愈合，抗细菌和/或抗炎候选制剂上也显示出很好的前景。相应的，根据本发明所使用的活性釉质物质的分子量大于大约40，000，例如分子量约在5000-25000之间。在本发明的范围内也包括WO97/02730中叙述的肽，即包括选自四肽DGEA(Asp-Gly-Glu-Ala)，VTKG(Val-Thr-Lys-G1y)，EKGE(Glu-Lys-Gly-Glu)和DKGE(Asp-Lys-Gly-Glu)的至少一个序列单元的肽，并且进一步包含一氨基酸序列，该序列的连续20个氨基酸与选自SEQIDNO1的氨基酸序列，SEQIDNO1中1到103位氨基酸及SEQIDNO2中的6到324位氨基酸的相同长度的氨基酸序列有至少80％相同性。术语“序列相同性”被认为是肽段之间氨基酸的序列和相应位置相同。一个或几个氨基酸不相同的间隔是合适的。该种肽可以包含6-300个氨基酸，例如至少20个氨基酸，至少30个氨基酸，至少60个氨基酸，至少90个氨基酸，至少120个氨基酸，至少150个氨基酸或至少200个氨基酸。一种分离釉基质蛋白的方法涉及对蛋白进行抽提和通过一种适当的方法从溶解的羟磷灰石中除去钙离子和磷酸根离子，所述方法例如凝胶过滤，透析或超滤(参见例如Janson，J-C&Ryden，L.(Eds.)，蛋白纯化，VCH出版社1989和Harris，ELV&Angal，S.，蛋白纯化方法-一种实用方法，IRS出版社，Oxford，1990)。一种典型的冻干蛋白质制备物可高至70-90％主要或仅包含分子量在40000到5000道尔顿之间的珐琅蛋白，另外10-30％是由短肽，盐和残余水分组成。主要的蛋白带位于20kDa，12-14kDa和大约5kDa。通过例如沉淀，离子交换层析，制备电泳，凝胶渗透层析，反向层析或亲和层析的方法分离蛋白，可以对不同分子量大小的珐琅蛋白进行纯化。不同分子量的珐琅蛋白的组合可以多种多样，从20kDa的化合物占主要成分到40-5kDa的不同分子量的聚集体直至5kDa的化合物占主要组分。在釉基质中经常发现的其它一些釉基质蛋白例如成釉质蛋白，簇质蛋白或蛋白水解酶也可以被加入到珐琅蛋白聚集体并被其携带。作为又一个来源，也可以使用本领域技术人员熟知的已经被应用的合成途径或通过用重组DNA技术改造的培养的细胞或细菌生成釉基质衍生物或蛋白。釉基质，釉基质衍生物和釉基质蛋白的理化特性釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白是疏水性物质，也就是水中溶解性很低，特别是在温度升高时。一般来说，这些蛋白在非生理条件的pH值和较低温度例如大约4-20℃时溶解，然而它们在体温(35-37℃)和中性pH条件下却积聚和沉淀。根据本发明所使用的釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白也包括活性釉质物质，其中至少部分活性釉质物质是以聚集体的形式存在或在体内使用时能够形成聚集体。聚集体中粒子的大小在20nm-1um之间。釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白的可溶性被认为是对该种物质所具有的预防和治疗活性非常重要的。当一个包含釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白的组合物(在下文中也使用“活性釉质物质”作为通用术语)作用于，例如人体时，其中的蛋白物质由于存在于正常的生理条件下的pH值占优势的条件将会发生沉淀。因此，就会在作用区域处形成一个釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白层，这一层(在聚集体形成时也可是一个分子层)在生理条件下很难被去除。而且由于该物质的生物学粘附特征(见下文)，该沉积层会与组织在沉积层和组织的边缘紧密结合。这样，施加了釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白或其组合物的组织就被该蛋白层覆盖，并且活性釉质物质在作用区域保持很长的时间，即不需以短间隔给予活性釉质物质。另外，在作用区域处形成的层可以被视作一个封闭的敷料，也就是说所形成的层可以阻止被其覆盖的组织与周围组织的的接触。在有受伤组织，感染组织或炎症组织的情况下，该层可保护组织避免被周围环境中存在的微生物进一步感染。而且，所形成的蛋白层可以通过与组织或存在于组织内/上的微生物的直接接触发挥作用。为了使用后能够在作用区域形成一个蛋白层，将适当的缓冲物质掺入釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白的药物或化妆品组合物是有利的，这种缓冲物质的目的是避免活性釉质物质在作用区域处溶解。釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白还(被本发明人)观察到具有生物粘附性质，即，它们可以粘附于皮肤或粘膜表面。这些性质至少是基于以下几个原因对于它们的治疗和/或预防作用是很有价值的-对治疗和/或预防起作用的活性物质可以在作用区域处保持很长的时间，(即ⅰ)给药频率可以降低，ⅱ)可获得活性物质的受控释放，ⅲ)在作用区域处的局部治疗可以得到改善)；-釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白本身还适于做其它治疗或预防活性物质的载体，因为包含釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白的载体可以被设计成一种生物粘附载体(也就是说，基于釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白的生物粘附性质的新型生物粘附药物输送系统)。与作用机制相关的原理釉基质是可以粘附于矿物表面及蛋白表面的细胞外蛋白基质的一个例子。在生理性pH值和温度条件下，该蛋白形成一种不溶的超分子聚集体(Fincham等，结构生物学杂志，19943-4月；112(2)103-9和结构生物学杂志19957-8月；115(1)50-9)，该聚集体在蛋白水解酶的作用下逐渐降解(如果蛋白酶不失活，此种情况可以在体内或体外都发生)。最近观察到的关于釉基质在牙根和牙根牙骨质的形成过程中形成并短暂存在的情况可以用来解释釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白是怎样促进牙周组织的再生的。然而本发明所观察到的釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白也具有对软组织缺损例如伤口愈合的积极作用是非常令人惊奇的。同样令人惊奇地观察到了这些物质在抗感染和抗炎上的功效。在很多物种中，当牙齿在口腔内长出时，在新生的矿化牙冠中发现有釉基质的残留物。这可能是由于新生的牙齿对通常的口腔细菌的侵害来说是非常脆弱的，除非在起始阶段有一个天然的保护存在。具有适当的抗细菌和/或抗炎的性质的不溶性的釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白在伤口表面应用会促进和改善伤口的愈合。正如在本文的实验部分所证实的那样，釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白或蛋白聚集体通过接触抑制阻止细菌的生长，而暴露的细胞作为正常的环境与釉基质反应以抑制炎症反应。根据本发明釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白可以用作治疗和预防。而且釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白还可以与其它有活性的药物物质例如抗细菌，抗炎，抗病毒，抗真菌物质一起使用，或与生长因子例如TGFβ，PDGF，IGF，FGF，角化细胞生长因子或其相应的肽类似物合并使用(据信EGF通过促进上皮细胞的迁移和细胞分化促进伤口愈合，另外，EGF通过增加伤口处的成纤维细胞的数目导致大量的胶原合成)。釉基质或其制剂中固有的或添加的酶也可以与釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白合并使用，特别是蛋白酶。活性釉质物质的制剂一般被配制成一种药物或化妆品组合物。这种组合物当然可以由蛋白制备物组成，或者它可以进一步包含可以接受的药物或化妆品赋形剂。药物和化妆品组合物中使用的特别合适的赋形剂是丙二醇海藻酸盐，或透明质酸，或其盐或衍生物。药物和/或化妆品组合物以下给出了包含活性釉质物质的适当组合物的例子。根据活性釉质物质的应用，组合物可以是药物组合物或化妆品组合物。在下文中，术语“药物组合物”也包含化妆品组合物以及属于界于药物和化妆品之间的所谓灰色区域的组合物，即药物化妆品。当给予个体(动物或人)时，釉基质，釉基质蛋白和/或釉基质衍生物(以下称作“活性釉质物质)，和/或其制剂优选设计成一个包含活性釉质物质以及任选的一种或几种药物学可接受的赋形剂的组合物。组合物可以以例如固体，半固体，或流体的形式存在，比如可生物吸收片，浸湿物，敷料，水凝胶，水状胶体敷料，薄膜，泡沫，薄片，绷带，膏药，输送装置，植入物，粉剂，小颗粒，颗粒，胶囊，琼脂糖或脱乙酰壳多糖珠，片剂，丸剂，小球，微胶囊，微球体，纳米颗粒，喷洒剂，气雾剂，吸入装置，凝胶，水溶胶，糊剂，软膏，乳膏，皂，栓剂，vagitorie，牙膏，溶液，分散液，悬浮液，乳状液，混合物，洗液，漱口液，洗发精，灌肠剂，试剂盒，其包含例如两个分开的容器，第一个容器含有活性釉质物质，任选地与其它活性药物和/或药物学可接受的赋形剂混合，第二个容器含有适当的介质以备在使用前加入第一个容器获得待用的组合物；以及其它一些合适的形式，例如植入物或植入物涂层或一种适合于植入和移植条件下使用的形式。用于皮肤或粘膜的组合物被认为是本发明最重要的。因此，包含待给药的活性釉质物质的组合物可适合任何适当的使用途径，例如，通过局部(皮肤)，口腔，面颊，鼻腔，耳腔，直肠或阴道使用和体腔使用，例如牙根或牙根槽。而且，组合物可适合与手术相关的使用，例如在机体的切口给药以推动内部伤口和软组织损伤的愈合。如上所述，活性釉质物质组合物可适合于手术中的应用，例如以一种凝胶，薄膜或干片剂的形式局部使用(例如口腔)，或作为清洗溶液或糊剂或乳膏作用于组织或表面阻止细菌侵入。牙根槽区域的手术或植入时，可以使用能封闭牙腔的糊剂。组合物可以根据常规的药物实践来配制，参见，例如“Remington′s药物科学”和“药物技术百科全书”，由Swarbrick,J.&J.C.Boylan编辑，MarcelDekker公司出版，纽约，1988。如上所述包括活性釉质物质的组合物趋向于使用在皮肤或粘膜上。当然其它一些应用也可涉及，例如在义齿，假体，植入物上的应用，以及应用于体腔例如口腔，鼻腔和阴道。粘膜优选选自口腔、颊、鼻腔、耳腔、直肠和阴道粘膜。另外，该组合物还可以直接作用于伤口或其它软组织损伤上。另外，在牙齿/牙科领域的应用也十分重要。相关的例子是应用于牙周(牙齿)袋，齿龈或齿龈伤口或位于口腔内或与口腔手术相关的其它伤口。根据本文叙述的活性釉质物质的抗细菌效应，可以进一步预期它们可以有利地应用于预防牙齿或牙根的溃疡和牙斑。为了支持这一应用，现已证实(Weinmann,J.P.等釉质形成和钙化的遗传干扰，美国牙科协会杂志，32397-418，1945；SundellS，遗传性釉质发育不完全，对瑞典儿童人群的流行病学，遗传学和临床研究，瑞典牙科杂志提供1986；311-38)，发育不完全的牙齿(釉质发育不完全)由于包含大量的珐琅蛋白对溃疡有很强的阻止作用。包括活性釉质物质的药物组合物可以充当药物输送系统。在本发明中，术语“药物输送系统”指当药物组合物(药物配制品或剂型)被使用时，可以将活性物质呈递给人或动物的机体。因此术语“药物输送系统”包括普通的药物组合物例如乳膏，软膏，液体，粉剂，片剂等以及更复杂的配方例如喷雾装置，膏药，绷带，敷料和器具等。除了活性釉质物质以外，根据本发明所使用的药物组合物还包含药物学或化妆品可接受的赋形剂。药物学或化妆品可接受的赋形剂是指当使用该组合物时对个体没有明显危害的物质。这种赋形剂一般满足国家健康管理部门颁布的要求。官方药典例如英国药典，美国药典和欧洲药典都规定了可接受的药物赋形剂的标准。一个可接受的药物赋形剂是否可以被一种药物组合物使用依赖于针对一个特殊形式的伤口所选择的剂型。以下是根据本发明用于不同形式的组合物的药学可接受的赋形剂的例子。以下是根据本发明对所使用的相关的药物组合物的综述。该综述是基于特定给药途径。然而，应理解的是，在那些药学可接受的赋形剂可以不同的剂型或组成使用的情形下，特定的药学可接受的赋形剂的应用将不限于某种特定的剂型或该赋形剂的某种特定功能。用于本发明的组合物的药学可接受赋形剂的选择及其相应的最适浓度一般不能预测，而是要基于对最终组合物的实验评价才能决定。然而，药物配制领域熟练技术人员可以在，例如“Remington′s药物科学”第18版，Mack出版公司，Easton，1990中得到指导。局部组合物针对于粘膜或皮肤的应用，根据本发明所使用的组合物可以含有常规的无毒性的药学可接受的载体和赋形剂，包括微球体和脂质体。根据本发明所使用的组合物包括所有形式的固体，半固体，和流体组合物。特殊相关的组合物是，例如，糊剂，软膏，亲水软膏，乳膏，凝胶，水凝胶，溶液，乳液，悬浮液，洗液，擦剂，洗发剂，者哩，皂剂，粘贴物，喷雾剂，粉末，薄膜，泡沫，垫料，海绵(例如胶原海绵)，敷剂，(例如吸收性伤口敷剂)，浸湿剂，绷带，膏药，和经皮输送系统。药学可接受的赋形剂可以包括，溶剂，缓冲试剂，防腐剂，湿润剂，螯合剂，抗氧化剂，稳定剂，乳化剂，悬浮剂，凝胶形成剂，药膏基质，渗透增强剂，香料，和皮肤保护剂。溶剂的例子是，例如，水，酒精，植物油或鱼油，(例如食用油，如杏仁油，蓖麻油，可可油，椰子油，玉米油，棉籽油，亚麻子油，橄榄油，棕榈油，花生油，罂粟油，菜籽油，芝麻油，大豆油，葵花油，和绒草油)，矿物油，脂肪油，液体石蜡，聚乙二醇，丙二醇，甘油，液体聚烷基硅氧烷，和其混合物。缓冲剂的例子是，例如，柠檬酸，醋酸，酒石酸，乳酸，磷酸，二乙胺等。组合物使用的保护剂的适当的例子是对羟基苯甲酸酯类，例如甲基、乙基、丙基对羟基苯甲酸酯，对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸异丁酯，对羟基苯甲酸异丙酯，山梨酸钾，山梨酸，安息香酸，安息香酸甲酯，苯氧乙醇，bronopol，bronidox，MDM乙内酰脲，氨基甲酸碘丙炔丁酯，EDTA，氯化benzalconium，和苄基醇或防腐剂混合物。湿润剂的例子是丙三醇，丙二醇，山梨(糖)醇，乳酸，尿素和相应的混合物。螯合剂的例子是EDTA钠和柠檬酸。抗氧化剂的例子是丁基化羟基苯甲醚(BHA)，抗坏血酸，和其相应衍生物，生育酚及其相应衍生物，半胱氨酸和其混合物。乳化剂的例子是天然存在的树胶，例如阿拉伯树胶或黄芪胶，天然存在的磷脂例如大豆卵磷脂；山梨聚糖单油酸衍生物，羊毛脂，羊毛醇，山梨聚糖酯；单甘油酯；脂肪醇；脂肪酸酯(例如脂肪酸甘油三酯)；及其混合物。悬浮剂的例子是，例如纤维素及纤维素衍生物，例如羧甲基纤维素，羟乙基纤维素，羟丙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，角叉菜胶，阿拉伯树胶，阿拉伯树胶，胶黄芪，和相应的混合物。凝胶基质，粘性增强剂或可以从伤口吸收渗出液的组分的例子是液体石蜡，聚乙烯，脂肪油，胶体二氧化硅，或胶体铝，锌皂，丙三醇，丙二醇，胶黄芪，羧乙烯基聚合物，硅酸镁铝，Carbopol亲水聚合物，例如淀粉或纤维素衍生物例如羧甲基纤维素，羟乙基纤维素，和其它纤维素衍生物，水溶胀性hydrocolloid，角叉菜胶，透明质酸(例如任选地包含氯化钠的透明质酸凝胶)和包括丙二醇藻酸盐的藻酸盐。软膏基质的例子是例如，蜂蜡，石蜡，鲸蜡醇，鲸蜡醇十六酸酯，植物油，失水山梨糖醇脂肪酸酯(Span)，聚乙二醇，以及失水山梨糖醇脂肪酸酯和环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(Tween)。疏水性或水乳化软膏基质的例子是石蜡，植物油，动物脂肪，合成甘油酯，蜡，羊毛脂，和液体聚烷基硅氧烷。亲水性软膏基质的例子是macrogols(聚乙二醇)。其它软膏基质的例子是三乙醇胺皂，硫化脂肪醇，和多乙氧基醚。粉末组分的例子是海藻酸盐，胶原，乳糖，当作用于伤口时可以形成凝胶的粉末(吸收液体/伤口渗出液)。一般来说，用于大的开放伤口的粉末必须是无菌的，其呈现的粒子必须是微小的。其它赋形剂的例子是聚合物，例如carmelose，carmelose钠，羟丙基甲基纤维素，羟基乙基纤维素，果胶，黄原胶，刺槐豆胶，阿拉伯树胶，白明胶，carbomer，乳化剂，例如维生素E，硬脂酸甘油酯，十六烷基糖苷，胶原，角叉菜胶，透明质酸，和藻酸盐和kitosans。敷料和/绷带也是重要的活性釉质物质的输送系统，活性釉质物质可以在敷料生产前或生产中可以与其它物质或成分一起混合加入，或者活性釉质物质可以涂覆在敷料上，例如，使用含有活性釉质物质的溶液或分散剂的溶液滴加在敷料上或者将含有有活性物质的的溶液或分散剂的溶液喷洒在敷料上。另外，活性釉质物质也可以以粉剂的形式加在敷料上。敷料可以以伤口吸收剂的形式渗入伤口。敷料还可以以水凝胶的形式(例如交联的聚合物，例如包含羧甲基纤维素，丙二醇，或多糖，二糖，亲水性聚亚氨酯膜，和蛋白，Intrasite公司)的形式或以封闭的敷剂例如藻酸盐，脱乙酰甲壳质，亲水性聚尿烷膜，胶原垫，片，粉末，泡沫，或海绵，泡沫(例如聚尿烷或硅酸盐)，水状胶体(例如羧甲基纤维素，CMC)，胶原和基于透明质酸的敷料以及相应的合并物。也可以设想活性釉质物质也可以被掺入组织粘合剂，包括例如血纤蛋白原和凝血酶和任选地因子ⅩⅢ或其它可以促进止血的血浆凝血因子。这些组织粘合剂也可以制备成活性釉质物质，血纤蛋白原和任选地因子ⅩⅢ的预混合物，凝血酶在组织粘合剂使用于伤口前立即加入该预混合物。或者，血纤蛋白原，活性釉质物质和任选地因子ⅩⅢ的预混合物也可以在使用凝血酶前施加于伤口。在作用区域处，凝血酶将血纤蛋白原转化成血纤蛋白，由此再现了伤口愈合中天然存在的凝血过程。组织粘合剂中活性釉质物质的存在可以起到如上所述的促进愈合的作用。可以适合包含活性釉质物质的商品化物质是Tisseel，其是由奥地利维也纳的ImmunoAG公司生产的一个二组分的纤维蛋白封闭剂。对于应用于牙齿或牙根的牙膏或漱口液配方或其它配方，活性釉质物质可以在略酸性pH条件的溶剂中以溶解状态存在，或者分散在中性pH的溶剂中。可以预测活性釉质物质在使用时可以在牙齿的表面形成一个保护层，以此阻止龋齿生成细菌的附着(参见下文的实施例4)。在这种牙齿护理制备物中，活性釉质物质可以被设计成与一种或多种具有抗龋齿效应的化合物配制在一起，最常见的是氟或其它微量元素例如钒或钼。在中性pH下，这些微量元素被认为是结合(如经离子键)或包埋在活性釉质物质中，釉质物质在由于例如龋齿生成细菌产生的酸性代谢物导致pH大约是5.5或更低时呈溶解状态时，微量元素从中释放出来显示抗龋齿效应。上述用于局部应用的组合物非常适合直接作用于伤口或适合引入机体的相关出口，例如直肠，尿道，阴道，耳腔，鼻腔或口腔。这些组合物也可以简单的直接应用于要治疗的部位例如粘膜，或通过其它合适的途径使用。已经证实的对局部应用非常重要的组合物是那些有触变性质的物质，即组合物的粘度受诸如摇动或搅拌的影响以至于在作用时其粘度降低，而在作用后其粘度又可以增加使得组合物保留在作用处。用于口腔或用于粘膜或皮肤的组合物根据本发明所使用的组合物可以以悬浮液，乳液或分散液的形式存在。这种组合物包含的活性釉质物质与分散剂或湿润剂，悬浮剂和/或一种或多种防腐剂和其它药学可接受的赋型剂混合在一起。该种组合物也适合活性釉质物质释放到作用区域例如完整的或受损伤的粘膜比如口腔，面颊，鼻腔，直肠或阴道粘膜，或向完整的或损伤的皮肤，或伤口给药。适当的分散剂或湿润剂是，例如，天然存在的磷脂，例如卵磷脂，大豆卵磷脂；环氧乙烷与例如脂肪酸的缩合产物，长链脂族醇，或由脂肪酸衍生的部分酯，和一种己糖醇或一种己糖醇酐，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯，聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯等。适合的悬浮剂是，例如天然存在的胶例如阿拉伯树胶，黄原胶，或黄芪胶；纤维素例如羧甲基纤维素钠，微晶纤维素(例如AvicelRC591，甲基纤维素)；藻酸盐和脱乙酰甲壳质例如藻酸钠等。根据本发明在组合物中所使用的适当的防腐剂与上文所述一致。根据本发明所使用的组合物也可以通过口腔途径使用。适当的口腔组合物可以被设计成颗粒配制品或固体，半固体或流体剂型。口腔使用的组合物包括固体剂型例如粉剂，小颗粒，颗粒，锭剂，片剂，胶囊，起泡片剂，咀嚼片剂，糖锭，速释片剂，或修饰的释放片剂以及流体或液体配方，例如溶液，悬浮液，乳液，分散液和混合物。另外，组合物可以是粉末，分散粉末，或适合于通过加入液体介质例如一种水性介质而制备成水性悬浮液的颗粒。对于口腔(或局部使用)的固体剂型，根据本发明所使用的组合物一般包括活性釉质物质和任何其它活性物质，它们任选地与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合。这些赋形剂包括，例如惰性稀释剂或填充剂，例如蔗糖，山梨糖醇，糖，甘露醇，微晶纤维素，淀粉包括马铃薯淀粉，碳酸钙，氯化钠，乳糖，磷酸钙，硫酸钙，或磷酸钠；颗粒或崩解剂例如淀粉衍生物，包括微晶纤维素，淀粉包括马铃薯淀粉，croscarmellose钠，藻酸盐，藻酸，和脱乙酰甲壳质；粘合剂例如蔗糖，葡萄糖，山梨糖醇，阿拉伯树胶，藻酸，海藻酸钠，白明胶，淀粉，预胶凝化淀粉，微晶淀粉，硅酸镁铝，羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，乙基纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯基乙酸酯，或聚乙二醇；和脱乙酰甲壳质；润滑剂包括助流剂和抗粘附剂，例如硬脂酸镁，硬脂酸锌，硬脂酸，二氧化硅，氢化植物油，或滑石。其它药学上可接受的赋形剂可以是着色剂，调味剂，可塑剂，保湿剂，缓冲剂等。在药物组合物以单位剂型的固体剂型存在的条件下(例如片剂或胶囊)，该单位剂型可以以以下所述的包被物的形式提供。在组合物以片剂，胶囊或多单位组合物的形式存在的条件下，组合物或各个单位或包含各个单位的片剂或胶囊可以用下列物质包被例如糖衣，薄膜，(例如基于羟丙基甲基纤维素，甲基纤维素，甲基羟乙基纤维素，羟丙基纤维素，羧甲基纤维素，丙烯酸酯共聚物(Eudragit)，聚乙二醇和/或聚乙烯吡硌烷酮)或肠衣(例如基于甲基丙酸烯共聚物(Eudragit)，邻苯二甲酸醋酸纤维素，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯，羟丙基甲基纤维素醋酸琥珀酸酯，聚乙烯基乙酸邻苯二甲酸酯，虫胶，和/或乙基纤维素)。另外，延时物质例如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯也可以使用。直肠和/或阴道组合物为了应用于直肠和阴道粘膜，根据本发明所使用的组合物包括栓剂(乳液或悬浮液型)，灌肠剂，直肠明胶胶囊(溶液或悬浮液)。适当的药物学可接受的栓剂基质包括可脂，酯化脂肪酸，甘油明胶，和各种水溶性或水分散性基质例如聚乙二醇和聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯。各种添加剂例如增强剂或表面活性剂也可以加入。鼻腔组合物针对鼻腔粘膜的使用(以及口腔粘膜)，适合吸入的喷雾剂或气雾剂是本发明适当的组合物。在一个典型的鼻腔组合物中活性釉质物质以颗粒形式存在并任选地分散在适当的载体中。在组合物中存在的药物学上可接受的载体和赋形剂和任选地其它药物学上可接受的材料例如稀释剂，增强剂，调味剂，防腐剂等均是根据常规药物实践以药物配制领域熟练技术人员所理解的方式选择。釉基质，釉基质衍生物和釉基质蛋白的剂量在根据本发明针对皮肤或粘膜使用的药物组合物中，活性釉质物质的浓度通常界于大约0.01％w/w至99.9％w/w之间。组合物的使用量通常针对每平方厘米的伤口/皮肤/组织面积的总蛋白量是从大约0.0lmg/cm2至大约20mg/cm2，例如从大约0.1mg/cm2至大约15mg/cm2。组合物的使用量依赖于组合物中活性釉质物质的浓度以及活性釉质物质从组合物中释放的速度，但是通常多数大约15-20mg/cm2。当活性釉质物质以流体组合物的形式给药时，组合物中活性釉质物质的浓度在大约0.1到大约50mg/ml之间。在某些情况下希望更高的浓度，也可以获得例如大约100mg/ml的浓度。当组合物应用于口腔时，下列剂量是相关的典型的口腔内的实验损伤面积(猴子)大约4×2×5-6mm，相应于50微升或大约0.025至大约0.15mg总蛋白/mm2或大约2.5-15mg/cm2。一般来说至多0.5，例如0.4，0.3，0.2，0.1ml的组合物，浓度大约是1-40mg/ml，例如5-30mg/ml被给药。人口腔由于牙周疾病所造成的损害面积典型大小是5-10×2-4×5-10mm，相应地需要使用浓度大约1-40mg总蛋白/ml，例如5-30mg/ml的大约200微升，通常多数大约0.5-1ml，例如0.2-0.3ml/每个牙齿的组合物。0.2-0.3mg/ml相应于每25-100cm2的损害面积6mg蛋白，或者如果仅按牙根面积计算大约0.1mg/mm2。一般来说常使用过量体积的组合物以覆盖整个表面。甚至一个多层的形成也仅需要上述剂量的一小部分。一般来说，大约0.1-0.5ml，例如大约0.15-0.3ml或大约0.25-0.35ml的包含活性釉质物质的组合物可以施加到拔牙后牙槽的缺陷空间内(拔牙后的孔洞)。组合物中活性釉质物质的浓度通常是1-40mg总蛋白/ml，例如5-30mg/ml。当0.3-0.4ml的这种组合物作用于智齿时，这一体积相应于0.1mg/cm2(牙槽的计算是按照直径5mm高20mm的圆柱体计算的)。药物组合物中活性釉质物质的浓度依赖于特异的釉质物质，其活性，需要治疗和预防的疾病的严重程度，及被治病人的年龄和身体情况。对于药物组合物中活性釉质物质相应浓度的选择为本领域技术人员熟知，并可以依据例如国际标准ISO/DIS14155医用设备的临床研究，1994和ICH(国际协调组织)的良好的临床应用的三方协定，Brookwood医学出版有限公司，Surrey，1996所叙述的良好临床应用(GCP)或研究新型药物条例中已建立的条款执行。在本领域中的技术人员可以使用如上所述的标准教科书，条例和规则以及本领域中的常用知识叙述的方法选择针对一些活性釉质物质的恰当摄入剂量，和/或简单地通过常规实验步骤选择出其它活性物质的剂量形式。在其它方面，本发明涉及下列方法，ⅰ)预防和/或治疗伤口，ⅱ)降低感染，ⅲ)预防和/或治疗炎症，这些方法包括给予需此治疗的哺乳动物有效量的活性釉质物质。正如将被理解的，关于使用活性釉质物质预防和或治疗伤口的细节与上文讨论的该物质的其它应用(抗细菌和抗炎效应)和方法是相同的或类似的，这意味着合适时，上述关于活性釉质物质，包含活性釉质物质的制备物，包含活性釉质物质的药物组合物，ⅰ)活性釉质物质的制备物，ⅱ)包含活性釉质物质的制备物，ⅲ)包含活性釉质物质的药物组合物，以及其改进的性质和使用可以应用于本发明所有方面有的变化情形。附图的简要说明通过参考附图可以对本发明进行进一步的揭示，其中图1显示出用EMD刺激或未刺激的人PDL细胞中的DNA合成；图2显示出用EMD刺激或未刺激的人PDL细胞中的TGF-β1生成；图3显示出下面的实施例3和4所述的流动实验中流动室和计算机系统的示意图；图4,5,6显示出粘放线菌与分别用EMD和乙酸处理过的玻璃板附着的3个独立实验的结果图；图7,8,9显示出突变链球菌与分别用EMD和乙酸处理过的玻璃板附着的3个独立实验的结果图；图10A显示出智齿摘除后的术后损伤的X-射线照片；图10B显示出下文实施例12所述的EMD处理后的牙周膜的再生过程的X-射线照片。实验部分材料和方法产于瑞典BIORAAB，S-20512Malmo的釉基质衍生物EMDOGAIN包含30mg冻干的釉基质蛋白(下文中简述为EMD)和1ml载体溶液(丙二醇藻酸盐)，其在使用前混合，除非蛋白和载体分别进行实验。主要的蛋白峰20,14,5kDa之间重量比大约是85/5/10。热处理的EMD指EMD在约80℃处理3小时用以灭活残余的蛋白酶。采用HPLC凝胶渗透层析(使用溶于0.9％NaCl的30％乙腈平衡的TSKG-2000SW)从EMD中分离20kDa的珐琅蛋白和5kDa的富含酪氨酸的珐琅蛋白肽(TRAP)，进一步使用乙腈梯度通过反向层析(Pro-RPC，HR5/10，Pharmacia-Upjohn，瑞典)进行纯化。然后将不同量的所分离的蛋白/多肽加入EMDOGAIN载体溶液中，除非是二者分开检测。透明质酸是来自日本东京的Seikagaku公司的HMT-0028(MW990000)。细菌和酵母都是最初从病人分离的，按照标准步骤根据代谢和抗原性质进行分类。所使用的细菌和酵母的种类在下表中列出。血清白蛋白(牛)和Ⅰ型胶原(牛)均购自Sigma，St.Louis，U.S.A.琼脂板均为脑心浸液琼脂，购自Difco，补加人血红细胞(每升琼脂100ml)。实施例实施例1用EMDOGAIN处理的PDL细胞的细胞增殖和TGF-β1生成将3ml无菌过滤的0.1％的HAc加入小瓶(含30mg的EMD)制备EMD的贮存液。60微升的EMD贮存液加入6000微升的含有10％胎牛血清和1％的青链霉素溶液的DMEM培养基。将300微升的混合物加入96孔微量滴定板(NUNCA/S，丹麦，目录号#167008)的每个孔中。1000个人牙周膜细胞(PDL)(取自由于畸齿矫正的原因需要进行前臼齿摘除的健康人的牙周组织，而后按照Somerman等，牙齿研究杂志67,1988,pp.66-70叙述的方法进行培养)被加入到每个孔，37℃，5％CO2培养5天。用作对照的PDL细胞基本如上所述在DMEM培养基中培养，但不加入EMD。孵育后的细胞按照厂商指导通过测定掺入的5-溴-2′-脱氧尿苷(BrdU)量的免疫分析来观察细胞增殖的情况(BoehringerMannheim，目录号#1647229)。在该步骤中，BrdU代替胸苷掺入到生长细胞的DNA中。通过ELISA方法对掺入的BrdU的量进行测定，用该方法测定的BrdU的掺入量是DNA合成速率的一个指示，相应的显示出PDL细胞的增殖速率。图1的结果显示出在EMD存在下培养的PDL细胞的增殖速率远远高于未用EMD培养的细胞。从微量滴定板上取100微升的细胞上清加入到20微升1N的HCl中，室温孵育10分钟。孵育混合物用20微升的1NNaOH/0.5MHEPES中和。100微升的该混合物加入400微升的稀释缓冲液。200微升的稀释液使用英国R&DSystems的QuantikinesTM试剂盒(目录号#DB100)按照说明书介绍的方法进行ELISA检测。图2的结果显示出与EMD保温的PDL细胞中TGF-β1生成的量比未用EMD处理的细胞显著增加。实施例2在釉基质衍生物和釉基质蛋白存在的条件下微生物生长情况的研究本实施例的目的是证实釉基质衍生物和釉基质蛋白在体外对微生物的生长有抑制作用。本实施例中所使用的蛋白溶解在用乙酸调节至pH5.5的磷酸盐缓冲液(PBS)中。所使用的微生物悬浮在pH6.8的PBS中，终浓度为OD6000.4。将50微升的EMDOGAIN(30mg的EMD溶解在1mlPGA中)和50微升的EMD，热处理的EMD，EMD组分A，B，C和H(均为每毫升PBS含10mg蛋白)滴在琼脂板上，使之在平板(9cm直径，根据每种微生物的需要加有用来确定抗性的补充物质的标准平板)上空气干燥。随后微生物的均一悬浮液(1mlOD280=0.5)涂布在琼脂板上，平板根据每种细菌生长的要求在CO2富集的空气中或厌氧条件下35℃孵育3天(需氧培养)或14天(厌氧培养)。所有培养物每天检查一次。在相同的条件下Ⅰ型胶原和血清白蛋白(均来源于牛)作为对照检测。未稀释的丙二醇藻酸盐(PGA-EMD载体)，PBS缓冲液和透明质酸(HA-另一种EMD载体)也作为阴性对照。表1的结果显示出仅有釉基质衍生物或釉基质蛋白或衍生物抑制一些微生物的生长。在蛋白周围没有扩散区的迹象表明所使用的EMD蛋白聚集在琼脂表面，并且只有与蛋白直接接触的微生物的生长被抑制。当收集被抑制区域的样品并在液体培养基(加入补充物质的LB肉汤)培养时，可以复活原始微生物的单培养物，这表明活性蛋白不是来自微生物。所有的对照均为阴性显示出没有非特异性的机制影响结果。表1在测试物质上的生长(+/-)EMD组分A多数为珐琅蛋白，约26-20kDaEMD组分B约17-13kDa的蛋白EMD组分C约10-5kDa的肽EMD组分HEMD中分子量大于27kDa的所有蛋白+指微生物的正常生长-指微生物的生长完全被抑制+/-指与阴性对照相比生长部分被抑制表中所有的结果是在孵育第二天(需氧培养)或第五天(厌氧培养)记录的。这些结果显示出EMD包含的蛋白和肽在表面聚集时可以抑制某些革兰氏阴性杆菌和某些革兰氏阳性球菌的生长。基于EMD蛋白的基本行为特性(参考jpc)，并且因为该种抑制效应不是来源于微生物，对所观察到的效应的一个合理的解释是蛋白聚集物形成一种不溶性屏障将微生物和其生长所需的底物隔开。实施例3EMD在体外对粘放线菌附着速率的作用介绍EMD对广泛存在于牙斑但一般不认为与严重的牙周炎相关的一种口腔微生物粘放线菌的最初附着的作用得到了研究。尽管该微生物可以与牙龈卟啉单胞菌形成聚集体并因此对潜在的牙周病原体在牙根表面的寄居有影响，但放线菌也被发现大量存在于健康的齿龈下部位(这些发现与Liljemark等，微生物免疫8，1993，pp.5-15的内容一致，Liljemark发现在牙周治疗后，放线菌的比例明显增加。Haffajee等在“牙周临床杂志”24，1997，pp.767-776中通过对对最初的牙周治疗反应较好的个体的牙龈下牙斑的微生物进行计数后得出结论，粘放线菌和T.denticola的数量相对丰富。材料粘放线菌HG85由A.J.vanWinkelhoff博士(口腔微生物系，ACTA)提供。Emdogain由BIORA提供(Malmo，瑞典)。RBS去污剂购自Fluka(FlukaChemieAG，Buchs，瑞士)。细菌生长和收获粘放线菌从血琼脂接种到Schaedler′s分批培养基，37℃培养24小时。该培养物被用来接种第二个培养基Schaedler′s肉汤，继续培养16小时。离心收集细胞(5分钟，6500xg)，用无离子水洗2次。随后微生物在30W下用超声波处理20秒(VibraCellmodel375,SonicsandMaterialsInc.,Danbury,CT,USA)打碎菌体链和聚集体。超声处理及将菌体放入冰水混合物间隔进行。使用Burker-Turker细胞计数器对细胞进行计数。最后将粘放线菌悬浮于粘附缓冲液(2mM磷酸钾，50mM氯化钾和1mM氯化钙，pH6.8)中。玻璃板的包被玻璃板先用5％的RBS去污剂通过超声波彻底洗净，进一步用自来水冲洗，然后再用甲醇洗涤，最后用蒸馏水冲洗。这些步骤使得水接触角为零度。EMD用0.01M的醋酸溶解，浓度为7.5mg/ml。玻璃板用聚四氟乙烯记号笔(DAKOA/S，Glostrup，丹麦)分割成相等的两部分。一边加入醋酸(0.01M)，另一边是250ug的EMD。玻璃板在一个流动橱柜中空气干燥4-6小时。流动试验本试验使用的流动室和计算机系统见图3所示。在试验进行以前，所有的试管及流动室均加满粘附缓冲液，应该注意的是系统内不能含有空气气泡。包被好的玻璃板组成流动室的底部。流动速度设置为2.5ml/min(与人体内唾液的平均流动速度相当)。细菌悬液在系统内大约循环3-4小时，计数附着于基材上的的细菌数。共进行3个独立的试验。所有的试验均用每250ml粘附缓冲液含有3×108细胞进行。在实验过程中，对于对照和EMD包被板上的6个预先确定的位置每隔10-15分钟呈像一次。平行的流动室的槽高度为0.6mm。数据分析在对所有图象中的吸附细胞进行计数后，数据被转变成每平方厘米细菌数。对于每一个实验，每平方厘米细菌最终数用于统计学分析(对于成对观察的Student′st-检验，以n作为实验次数)。结果实验1(图4)显示出特别是在流动的最初150分钟所粘附的微生物数量的逐渐增加。在这个时间段后，与EMD粘附的微生物的数量达到一个2.0×106个细菌/平方厘米的平台期，这个数量比用醋酸处理的玻璃板的数量高4倍。在实验2中(图5)，EMD也显示出强烈的刺激粘放线菌与基材粘附的能力。然而，在实验开始的最初阶段，这种效应不是很明显。也许这是由于此时流动系统中微生物尚处在低浓度。90分钟以后，与EMD粘附的细菌数量同对照相比逐渐增加，3小时后达到最大值1.6×106/每平方厘米，增加3倍。实验3(图6)表明在流动后5分钟就已经显示出对粘放线菌附着于EMD包被的玻璃板的刺激作用。EMD在最初的45分钟诱导附着微生物的数量快速增加。与乙酸处理的一面的附着作用也显示出相似的情况，但相比之下所吸附的微生物的数量要少。200分钟以后，对EMD包被板的附着比乙酸处理的表面上的附着高2倍。3个实验结合在一起看，其差异证明是统计学显著的(p＜0.05)。从这些结果看出，EMD作为玻璃表面的一个包被物，在体外对于粘放线菌的附着有非常显著的刺激效应。尽管现在还没有弄清是什么原因导致这种增强的初始附着，但现在的假设是微生物与商购的蛋白质混合物中的珐琅蛋白组分中富含的脯氨酸残基相互作用。细菌的粘附作用一般是由特异的蛋白质-肽和外源凝集素-碳水化合物的识别决定的。已知粘放线菌中的1型菌毛可以与富含脯氨酸的蛋白结合，例如唾液中的富含脯氨酸的蛋白(PRP)以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原。EMD和某些口腔微生物之间的特异性相互作用由于使得菌斑处的生态学发生改变因而对于口腔中生物膜的组成有重要作用。如果该种生态学的改变的方向是促使微生物不与牙周疾病相关，EMD的应用就可以通过发挥这种效应而改善牙周的情况。当然，这一点是在EMD的其它有益效应之外的。实施例4EMD在体外对突变链球菌附着速率的作用介绍已经有大量的证据显示菌斑微生物是引起例如牙周炎和龋齿的口腔疾病的原因。根据当前龈上菌斑形成的模型，链球菌被认为是牙齿表面的主要寄居者。因此菌斑的产生是由于细菌的生长或其它种类的细菌的进一步增加。这种增加可以经细菌和细菌的结合而发生或由唾液分子介导。细胞外大分子的生成也促进了菌斑的发生。突变链球菌现今被认为是值得密切注意的生物膜种类细菌中的一种，因为它与龋齿有关。尽管很多革兰氏阳性菌(即突变链球菌)已经显示出对限菌动物引起牙槽骨损伤，但这些微生物似乎不是造成牙周袋的生态学的主要因素。然而，潜在的致病微生物一定可以逃避宿主防御和免疫机制从而对宿主组织造成损伤。材料突变链球菌NS由H.vanderMei博士惠赠(材料技术，Groningen大学)。EMDOGAIN由BIORA提供(Malmo，瑞典)。RBS去污剂购自Fluka(FlukaChemieAG，Buchs，瑞典)。细胞生长和收获将突变链球菌从血琼脂板上接种到分批培养基ToddHewitt肉汤中，37℃培养24小时。该培养物用于第二次接种ToddHewitt肉汤，生长16小时。离心收获细胞(5分钟6000xg)，无离子水洗两次。最后微生物在30W下用超声波处理20sec(VibraCellmode1375,SonicsandMaterialsInc.,Danbury,CT,USA)打碎菌体链和聚集体。超声处理和即将菌体放入冰水混合物中间隔进行。使用Burker-Turker细胞计数器对细胞进行计数。最后将突变链球菌悬浮于粘附缓冲液(2mM磷酸钾，50mM氯化钾和1mM氯化钙，pH6.8)中。玻璃板的包被玻璃板先用5％的RBS去污剂通过超声波彻底洗净，进一步用自来水冲洗，然后再用甲醇洗涤，最后用蒸馏水冲洗。这些步骤使得水接触角为零度。EMD用0.01M的醋酸溶解，浓度为7.5mg/ml。玻璃板用聚四氟乙烯记号笔(DAKOA/S，Glostrup，丹麦)分割成相等的两部分。一边加醋酸(0.01M)，另一边是250ug的EMD。玻璃板在一个空气流动的橱柜中干燥4-6小时。流动试验本试验使用的流动室和计算机系统见图3所示。在试验进行以前，所有的试管及流动室均加满粘附缓冲液，应该注意的是系统内不能含有空气气泡。包被好的玻璃板组成流动室的底部。流动速度设置为2.5ml/min(与人体内唾液的平均流动速度相当)。细菌悬液在系统内大约循环3-4小时，计数附着于包被的基材的细菌数。共进行3个独立的试验。所有的试验均用每250ml粘附缓冲液含有3×108细胞进行。在实验过程中，对于对照和EMD包被板上的6个预先确定的位置每隔10-15分钟呈像一次。平行的流动室的槽高度为0.6mm。数据分析在对所有图象中的附着细胞进行计数后，数据被转变成每平方厘米细菌的数量。对于每一个实验，每平方厘米细菌最终数量用于统计学分析(对成对观察的Student′st-检验，以n作为实验次数)。结果在三个实验中的每一个实验中，EMD显示出对突变链球菌附着速率的抑制作用(图7,8,9；p＜0.05)。与乙酸处理的对照相比抑制大约为40-70％。第一个实验(图7)显示出在流动开始10分钟后就已经显示出附着于EMD包被的玻璃板附着的突变链球菌的数量受到抑制。3小时后，附着被抑制为对照的大约60％。在第二个实验中(图8)，流动开始1.5小时后，EMD开始抑制突变链球菌的附着。附着于EMD的突变链球菌数量在流动开始后大约40分钟达到一个平台期，500000个/cm2。大约3.5小时后，计数大约是对照的25％。第三个实验(图9)显示出从流动程序一开始，在EMD的影响下对突变链球菌附着的抑制作用就存在。如实验1所示，流动3小时后，抑制达到对照的大约60％。本发明的研究显示出EMD对突变链球菌在玻璃表面的附着有明显的抑制作用。对这种抑制作用的一种可能的解释是EMD混合物中疏水性化合物的存在。在混合物中大量存在的蛋白之一是珐琅蛋白，该蛋白除包含一个酸性亲水性C-端序列外，还包括一个富含脯氨酸，亮氨酸，蛋氨酸和谷氨酰胺的100-300个残基的疏水核心部分。Saito等在“口腔生物学报，42，1997，pp.539-545”报导发现各种突变链球菌菌株对固定化疏水性蛋白(OAIS)的附着受到抑制。作者将这种效应归因于微生物细胞表面的负电荷(突变链球菌即是如此)。其它一些表面特征也可以参与受影响的对基材的附着作用。突变链球菌包含一个表面抗原Ⅰ/Ⅱ，它具有特别富含丙氨酸的N-端部分和并包括串联重复。这种区域预测为α-螺旋，它采取一种卷曲构象，这可能是与抗原Ⅰ/Ⅱ表达有关的细胞表面疏水性的原因。实施例5EMD对一些牙周病原体生长的效应中间普雷沃氏菌和牙龈卟啉单胞菌在补加0.5mg/ml维生素K和5mg/ml血晶素的硫代乙醇酸盐肉汤培养基中，在通过GasPakPlus封袋在适当的发酵罐中产生的厌氧气氛下预培养10-16小时。当培养物的OD600值达到0.1-0.2，即相应的细胞密度至106-107cfu/ml(菌落形成单位)时，吸出100微升等份，菌体经离心沉淀。菌体沉淀用100微升新鲜配制的人血清和无菌盐水的混合物重悬，包含105-106个细胞的悬浮液转移到无菌的1.5ml的Eppendorf管中，与(ⅰ)100微升的EMD制备物(溶解在0.1mlPGA中的3mgEMD)，(ⅱ)100微升的PGA载体或(ⅲ)100微升的血清/NaCl溶液混合物混合作为生长对照。0,3,6,24小时后分别取10微升培养液进行生长测定。吸取的等份用无菌0.9％的NaCl溶液系列稀释，每个稀释度取10微升涂在Schaedler琼脂上。培养条件与预培养条件相同。琼脂板培养3-4天，随后测定cfu和细胞密度(cfu/ml)。所有实验重复6次。结果(以相对于开始时cfu/ml浓度百分比表示)1)不同时间点对照培养物<tablesid="table1"num="001"><table>03小时6小时24小时中间普雷沃氏菌1001602510牙龈卟啉单胞菌100100125150</table></tables>2)在PGA载体存在时不同时间点的培养物<tablesid="table2"num="002"><table>03小时6小时24小时中间普雷沃氏菌1001402510牙龈卟啉单胞菌10075505</table></tables>3)在EMD存在时不同时间点的培养物<tablesid="table3"num="003"><table>03小时6小时24小时中间普雷沃氏菌1004000牙龈卟啉单胞菌1003000</table></tables>与仅使用载体或不添加EMD的对照相比，EMD的存在显著抑制培养物的生长。实施例6对EMODGAIN在牙周手术后改善软组织伤口愈合效应的研究本实施例的目的是显示在牙周手术后釉基质衍生物和/或釉基质蛋白对改善软组织伤口愈合的影响。50个以上猕猴牙齿的牙周边缘的实验损伤是通过除去牙骨质，牙周膜和边缘牙槽骨后造成一个颈-尖距离大约5mm的牙齿毛刺。将釉基质衍生物(购自EMODGAIN，未重配的冻干粉末或重配的组合物)加入实验损伤处，或不加任何物质(对照)。在重配的组合物中蛋白质的含量大约是5-30mg/ml，每个实验损伤所加的体积介于大约0.1到0.2毫升。伤口愈合在接下来的8周内通过目测进行评价。在给药EMODGAIN的损伤处，可观察到很好的愈合效果(无红色和肿胀)，给药2周后拆线时几乎看不到斑，5周后可见良好的愈合，几乎无牙龈炎，8周即实验终止时完全愈合无任何并发症。相比之下，对照伤口2周后出现炎症，并伴有收缩和明显斑，5周和8周后出现明显的收缩和牙龈炎。实施例7对牙周手术后釉基质衍生物和釉基质蛋白的伤口愈合效应的研究本发明的目的是显示牙周手术后釉基质衍生物和釉基质蛋白对病人的快速伤口愈合的影响。需要进行牙周手术的55个病人被分成两组，一种进行常规的手术并使用改进过的Widman牙周翻瓣术(20个病人)，另一组使用相同的步骤但附加使用EMODGAIN(35个病人)(浓度为30mg蛋白/ml，每个牙齿大约使用0.3ml)。在手术时没有病人使用抗生素，但所有人均被指导每天使用无菌(洗必太)漱口水。在拆线时(手术后1-3周)每个病人被询问问题。尽管3个对照组病人(15％)出现术后问题需要使用抗生素，但仅有一个使用EMODGAIN处理的病人需要此种治疗。实施例8拔牙后釉基质衍生物和釉基质蛋白的伤口愈合效应的研究本实施例的目的是为了证明在第三磨牙摘除后釉基质衍生物和釉基质蛋白对伤口愈合的影响。30岁或大于30岁的需要摘除对称阻生或半阻生下颌第三磨牙的病人采用传统方法进行一个第三磨牙的摘除，该方法涉及垂直向翻瓣术以进行必要的骨切除术和切开，而另一个磨牙摘除后牙槽在缝合前添满EMODGAIN。所有的病人在手术前1-2小时使用抗生素(3g羟氨苄青霉素或1g红霉素)，手术后使用lbuprofen(600mg×3)。然后他们被指导使用洗必太漱口(0-1％，10ml×2)4周。2周后拆线。用EMODGAIN处理和对照位置的愈合情况由病人和牙科医生共同评价。在一个中心，9个病人对侧摘除后使用/不使用EMODGAIN处理。一个病人在两个位置的缝合处均有轻微疼痛，而其它病人仅在对照位置有严重痛觉，而在EMODGAIN处理的位置无任何问题。在第二个中心，6个病人中的3个仅在对照位置有疼痛。最终在第三个中心，一个病人被诊断为对照位置的牙槽有严重问题，即牙槽炎，EMODGAIN处理的位置无问题。另一个病人在两个摘除的缝合处均有轻微疼痛，但只有对照处出现炎症和明显疼痛，需要反复用盐水冲洗并摄入止痛剂。这些临床结果显示出在智齿被摘除后采用EMODGAIN处理牙槽可以改善愈合并缓解其它情况下经常出现的疼痛性肿胀。实施例9釉基质衍生物和釉基质蛋白对干痛牙槽炎愈合效应的研究本实施例的目的是显示釉基质衍生物和釉基质蛋白对干痛牙槽炎(干槽症)愈合的影响。在摘除一个70岁的男性患者的一个感染的35牙根残余物后，病人经历了与摘除牙槽有关的剧烈疼痛和肿胀。当他的牙科医生为他检查时发现他已经发展成干痛牙槽炎，即最初的凝结物已经分离，牙槽骨壁坏死。邻接的牙槽骨和软组织出现炎症。该病人有心脏病史，曾采用抗凝剂Marevan进行治疗。作为其病况的结果，他的外周血循环降低。他还经常每天吸多支烟。病人的牙槽炎按照传统方法除去坏死牙槽骨，导致新出血。而且病人的齿龈松动，采用缝合术封闭牙槽。而后对病人使用青霉素(apocillin660mg，早晚共2片，使用7天)以防止感染，同时建议病人使用洗必太每天漱口两次。5天后停用抗生素时病人仍显示出临床症状并抱怨有严重疼痛。对手术处进行肉眼观察，触摸和探测显示出牙槽炎持续存在并出现更多的骨坏死。X-射线显示骨破坏和坏死均出现在牙槽的顶点部分。手术处被再一次清理干净，所产生的骨损害处用EMODGAIN添满(30mg/m1，最多使用0.5m1)，在齿龈处使用新的缝合以封闭牙槽。未再采用其它的治疗方法，但病人被告知继续用洗必太漱口。两天后病人回到诊所报告说疼痛和肿胀均消失。临床检查和在EMODGAIN处理一周后拆线显示出良好的愈合效果，没有炎症和坏死的迹象，没有红色和肿胀的完整的齿龈覆盖伤口区域。当触摸和探测时没有流血和疼痛感。观察不到恶臭或怪味或渗出液。病人没有报告有任何痛觉和发现其它症状。实施例10釉基质衍生物和釉基质蛋白对干痛牙槽炎的预防效应的研究本实施例的目的是显示釉基质衍生物和釉基质蛋白抗干痛牙槽炎的预防效应。一个82岁的女性病人患有44号牙垂直根断裂。该牙齿是跨越35号到46号牙的桥梁的支柱，病人曾在很多年以前接受牙髓治疗。临床上，牙齿周围的牙龈出现炎症，有一个牙龈袋沿着垂直方向直至牙齿的顶端。X-射线显示44号牙的严重局部牙周炎。该病人有很好的口腔卫生，但由于使用Marevan(抗凝剂)治疗心脏病，牙槽在触探时很容易造成流血。6个月以前，病人由于严重的牙周炎通过手术摘除了第35号牙。那次手术后她经历了长时间的干痛牙槽炎。她非常关心的是44号牙的摘除会不会导致她曾经经历的相同的术后并发症。她被告知由于年龄大，使用过Marevan进行治疗和感染的牙根和牙龈袋的合并作用将使得她遭受术后综合症例如牙槽炎的危险性大大增加，而除了手术除去牙根碎片外无其它办法。该病人同意将44号牙摘除并且作为实验使用EMODGAIN进行预防治疗以阻止干痛牙槽炎的发生。病人在麻醉后被实施切口和摘除面颊骨，以使在不松动(牙齿)间桥的情况下摘除牙根碎片。摘除后牙槽经机械清洗后添满EMODGAIN(30mg/ml，最多使用0.5ml)，通过缝合使瓣重新复位。当天晚上病人报告(通过电话)在手术区域有长时间流血(手术前未停止使用Marevan)，但无其它症状。当手术5天后拆线时，手术过的软组织损伤完全愈合。病人没有报告有任何例如疼痛或肿胀的症状，对此治疗大体上非常满意。实施例11釉基质衍生物和釉基质蛋白对外伤后并发症的愈合效应本实施例的目的是为了显示釉质蛋白/釉基质衍生物对病人外伤后并发症愈合的影响。在一次意外事故后，病人在一个急诊所将受伤的上前牙进行连接。牙科医生发现11和21号牙齿死亡，12和22号牙齿有Ⅰ或Ⅱ类近中切骨折。边缘龈出现严重的炎症，与牙齿表面的附着非常差。病人有疼痛和麻木，肿胀和味嗅觉不好的并发症。在11和21号牙的根尖区还出现牙周膜损伤。两个中切牙被清洁，将新鲜混合的Ca(OH)2添满牙根。4个星期后，伤口的愈合仍被判断为不理想。情况发展成一种慢性炎症，牙齿被视作失去。对于此种情形的标准的治疗方法是取出全部4个切牙并用间桥或植入物代替。然而，病人强烈反对这种治疗方法，作为保存牙齿的最后努力，对所有四个受伤的牙齿(11,12,21,22)进行龈翻瓣术。使用了两瓶EMODGAIN(60mg在3ml溶液中)。在瓣用7针缝合以前，用注射器向每个牙齿内注入至多0.2ml的EMODGAIN(30mg/ml)。手术5天后拆除4针缝合线。在主观和临床条件下均有显著改善。病人不再抱怨疼痛，麻痹的感觉消失，伤口区域不再有恶臭味。两周后拆除剩余的缝合线，齿龈不显示任何炎症，病人没有任何抱怨。齿龈完好无任何炎症，它牢牢的与牙齿和/或牙槽骨附着，颜色为粉色(没有炎症区域内存在的鲜红色)，存在正常的牙齿间突起(非肿胀)。而且观察到牙齿受伤部分的牙周膜重新出现，显示出很好的改善效果，通过X-射线检查可以观察到新的牙槽骨沉积。实施例12相邻牙齿和神经的外伤愈合病例报告一个39岁的女性病人其下方左侧的智齿(38)的周围患有严重的冠周炎。在公共牙科诊所其牙齿被部分摘除，在下颚留有牙齿的根尖部分，并伴有手术造成的根部骨折。由于疼痛，第二天，该病人给推荐到一个牙科手术的专家处以除去牙根碎片。手术后两天，病人去见她的常务牙科医生进行处置。她的面颊左侧肿胀，并且其左侧下颌骨神经显示出持续的和完全的阻滞。临床检查和X-射线照片显示手术时对下颌骨、37号牙齿的牙根末梢的三分之一根尖和下颌神经槽造成严重的钻开损害(见X-射线照片，图1A)。对37号牙齿的探洞深度穿越末梢根部至牙冠顶端为25mm。为了诱导37号牙齿的骨骼和神经的愈合和失去的牙周膜的再生，手术伤口被打开并仔细清理干净。当用盐水去除残余碎片后，37号牙齿暴露的骨头，末梢根部的表面和下颌神经使用EMODGAIN(30mg/ml，过量提供，约1ml)覆盖，然后将伤口使用三针缝合在一起。病人被指导使用洗必太溶液(Corsodyl)在接下来的5天里每天漱口两次，并开始使用青霉素(氨卞青霉素，660mg×4)进行为期5天的预防治疗。10天后，病人返回，拆除缝合线。此时肿胀消失，软组织的愈合良好。然而下颌神经的完全麻痹仍然存在，病人被告知其受损伤的神经的前景至多是难以预料的。此时麻痹使得37号牙齿的存活难以预料。通常情况下，象这个病人呈现出来的根部损伤会导致牙髓坏死和牙齿僵硬。为了阻止这种并发症，需要进行牙髓治疗。然而为了看到所使用的实验治疗是否可以促进牙周膜的愈合，病人同意此时不对牙齿进行治疗。此后病人被安排每月接受一次处置。上述处置两个月后，病人左侧下嘴唇出现过敏感觉，显示出神经愈合的迹象。37-38号牙之间区域的软组织完全愈合无任何伤疤。X-射线也显示出在摘除位置的牙槽出现新骨的形成。但37号牙齿和其周围组织仍处于麻痹状态。治疗后四个月，麻痹消失，牙齿被证实存活，但处于过敏状态，对温度和电刺激均敏感。X-射线显示摘除位置的牙槽明显被骨填充，37号牙齿的根部末梢显示出牙周再生的迹象。在使用EMODGAIN治疗后5个月，37号牙齿的存活经检测正常。此时通过X-射线可以证实有功能的牙周膜的完全再生(图1B)和正常外观的新形成的牙槽骨已经添满骨骼缺损和摘除位置的牙槽。没有僵硬的迹象。37号牙末梢的孔洞探测深度现仅约10mm，在釉质牙骨质界之下约1mm。经过这种处置后，病人被认为完全康复，只安排每一年一次的常规复诊。评价在手术去除智齿后相邻牙齿和神经外伤的完全和快速愈合是很少见的。经常出现的严重程度如上所述的并发症往往以被损伤牙齿的完全摘除而结束，或者至少也是牙髓的去除和牙根填充，随后出现伴有僵硬的骨愈合。受损伤的神经一般需要8到12个月才能愈合，即使如此经常在一些区域会出现麻痹现象，而且维持数年。上文报道的良好和快速的愈合是非常少见的，应被认为是EMODGAIN伤口愈合能力的一个体现。X-射线A38号牙摘除后两天的病人。注意到存在于牙齿37远中端的大的缺损并累及下颌管。而且37号牙齿远中颊的牙槽骨在手术中被摘除。B手术后5个月的病人。注意到在37号牙齿远在中根损伤处完全的、有功能的牙周膜(laminadura)迹象。没有僵硬的迹象。此时可以看到下颌管的轮廓，并且摘除位置的牙槽完全被骨添满。同时也观察到37号牙周围有新的远中颊牙槽骨的形成。实施例13釉基质衍生物和釉基质蛋白对小腿部溃疡(静脉溃疡)愈合效应的研究病人1病人为男性，生于1926年，有血栓病史和很严重的血栓后遗症和反复发作的静脉溃疡。他采用过抗凝集香豆素衍生物的系统治疗，溃疡在局部使用Crupodex(右旋糖单体)和3％的硼酸溶液治疗。在开始启动EMODGAIN治疗以前他的静脉溃疡为一个椭圆形，大小5×4cm，深度为0.5mm，病程处于肉芽化阶段，有很差的上皮化。伤口用3％的双氧水消毒后，将500微升的EMODGAIN滴加施用并用无菌的拭子均匀铺开。EMODGAIN在空气中暴露10分钟，然后伤口用10％的Prvidone碘药膏浸湿的Inadine(Johnson&Johnson)Rayon敷料覆盖。5天后，在最接近溃疡的位置出现上皮形成，溃疡面减少至1.8×2.2cm，无任何副反应(炎症)。不再加EMODGAIN。12天后在最接近溃疡的位置出现进一步的上皮化，并且侧部出现新的上皮化，面积大约为2×2cm。大约一半的溃疡得到愈合。使用400微升的EMODGAIN。19天后在最接近溃疡的位置和其侧面出现进一步的上皮化，但在远端部分未上皮化，溃疡很深(大约1mm)。一半以上的溃疡得到愈合。继续使用300微升的EMODGAIN。自从启动了EMODGAIN的治疗，病人与这种治疗开始以前相比不再感觉溃疡处有疼痛感。EMODGAIN再继续每周使用一次至第40天(200微升)，在47天后溃疡被认为全部愈合。病人2该病人为女性，生于1949年，患有血管曲张，长期静脉供血不全和反复发作的静脉溃疡。她对于药物(药物，药剂)多价过敏并静脉曲张(excemavaricosum)。该病人曾使用Otosporin滴剂(硫酸多粘菌素B+硫酸新霉素+氢化可的松)和氢化可的松敷布接受过局部治疗。在启动使用EMODGAIN治疗时，她的静脉溃疡是直径1cm，深度2mm。使用300微升的EMODGAIN。5天后，在伤口周围(周长)2mm的范围内出现上皮化，无任何副反应(炎症)。此时不再使用EMODGAIN。12天后，溃疡缩小到直径大约2mm，此时再使用100微升的EMODGAIN。19天后溃疡仍为直径2mm，但底部很好地肉芽化，溃疡不再很深(仅大约0.2mm)。使用100微升的EMODGAIN。同样是该病人在另一条腿出现一个大约0.3×1cm的溃疡。此时使用200微升的EMODGAIN。7天后，出现新的上皮化，底部出现良好的肉芽化，溃疡面积缩小到大约0.2×0.5cm。随后针对每一个溃疡每周使用100微升EMODGAIN直至第40天。47天后，溃疡被认为全部愈合。没有发现对EMODGAIN的过敏反应。在同一条腿上又形成另一个溃疡，面积为0.5×0.3cm，使用了100微升EMODGAIN进行治疗。病人3该病人为女性，1929年生，患有丹毒后出现的严重静脉血栓，在启动EMODGAIN治疗前有15×19cm的大面积小腿溃疡，并且由于使用了各种治疗方法后几乎没有效果，病程处于发展中。700微升的EMODGAIN作用于从上边开始3cm的面积。7天后没有出现上皮生成，但治疗区域变得更透明(更结构类似)，并伴有小的分散区域的肉芽化，在这一区域无疼痛感和进展现象。再使用700微升的EMODGAIN作用于同一区域。4周后，病人在未使用EMODGAIN治疗的溃疡远端出现感染，被确认为假单胞菌所致。加入700微升的EMODGAIN。感染7天后消失。病人4该病人为女性，1947年出生，患有血管曲张和丹毒后引起的血栓性静脉炎，在启动EMODGAIN治疗时，她有一个面积为2×0.8cm的小腿溃疡，溃疡底部清洁但没有肉芽化。先使用300微升的EMODGAIN。7天后，溃疡面积减少至0.3×0.7cm，表皮生成开始出现，底部开始出现肉芽化。再使用200微升的EMODGAIN，随后每周使用100微升EMODGAIN，共五周。溃疡在5周后被认定全部愈合。实施例14EMODGAIN作为一种辅助物对平坦表面位置上的非手术牙周治疗目的本研究的目的是评价EMODGAIN是否可以用于改善非手术牙周治疗的愈合结果。本研究的特殊目的是评价在平表面位置上的效应。研究设计本研究是针对一个个体在6个月的时间里的垂直试验进行的。本研究采取双盲，分说(split-mouth)，安慰剂对照和随机的设计。受检者Goteborg大学的牙科学系中的14个病人被视做牙科临床病人，需要对他们的中等严重程度的牙周疾病进行治疗。包括的标准在探测袋深度≥5mm的2个对侧四分体的每一个，至少有3个平坦的牙齿表面部位，其中至少一对部位的探测袋深度≥6mm所选择的牙齿必须有通过热或电刺激确定为存活的牙髓，或者，如果进行牙根管治疗，必须是无症状的和没有技术remars的。治疗在进行完基本检查后，所有病人被告知疾病情况并被指导使用恰当的龈上斑控制措施。进行定位和牙根设计。当袋流血停止时，24％的EDTA(购自BioraAB，瑞典)作用于袋2分钟。待用盐水仔细清洗后加入测试物质(EMODGAIN)或者对照物质(PGA凝胶)。评估基线测定，1,2,3,8和24周跟踪检查包括以下变量1．口腔卫生情况-出现或/没有牙斑2．牙龈情况-(牙龈指数；Loe1967)3．探测袋深度4．探测附着水平5．探测出血-出现/未出现(15秒)6．牙质超敏-鼓风机刺激7．不舒适程度-在1,2和3周跟踪检查记录，使用一个10cm＜＜视觉类似水平(VAS)牙斑平均值(sd)牙龈指数；平均值(sd)探测出血；％病人主观评价；VAS得分第一周第三周结论病人仅有很轻的术后问题，流血少，牙斑少，并有改进的牙龈指数。这一结果支持了EMODGAIN对伤口愈合的效应。实施例15猪中先导伤口愈合研究介绍目的该先导研究的目的是评价猪中深度裂口伤口的愈合和EMD对这些伤口的效应选择该种动物物种的原因猪作为实验模型被选出是因为该种动物已被证实是评价人的伤口愈合的一个良好模型。材料和方法动物本实验将在4个雌性SPF猪(丹麦乡村杂交种，Yorkshire和Duroc)上进行。在观察初期动物的体重大约35kg。观察期需要1周，其间每天对动物进行观察以淘汰身体状况不好的个体。所有的观察需要记录。饲养舍本研究在有滤过空气供给，温度21℃±3℃，湿度55％±15％和空气变化10次/小时的动物舍中进行。室内提供一个每天12小时照明和12小时黑暗的循环的条件。照明时间是从6点到18点。动物在隔离栏中分开饲养。草垫草垫为软木锯屑”LIGNOCELH3/4”，购自Hahn&Co，D-24796Bredenbek-Kronsburg。对相关的可能污染物需要进行定期分析。食物一种商购猪食“Altromin”购自Chr.PetersonA/S，DK-4100。食物按份提供(大约800g，每天2次)。对食物中主要的营养成分和相关的可能性污染物的分析定期进行。饮用水动物每天被提供2次家庭质量的饮用水。对相关的可能性的污染物的分析定期进行。伤口伤口在第一天建立。动物用StresnilVet.Janssen，比利时(40mgazaperone/ml，1ml/10kg)，和AtropinDAK，丹麦(1mg阿托品/ml，0.5mg/10kg)进行一次肌肉内注射而麻醉，，紧接着静脉注射HypnodilJanssen，比利时(50mgmetomidate/ml，大约2ml)。动物背部任何一面的一个侧面区域被切开，用肥皂和清水洗涤，70％的乙醇消毒，无菌盐水冲洗，最后用灭菌纱布敷干。使用ACCU-Dermatom(GA630，Aesculap)在制备区域获得8个深度裂口伤口(25×25×0.4mm)，其中每四个位于脊柱的一侧。动物左侧的伤口被编号为1(从头部开始)至4(尾部)号，动物右侧的伤口被编号为4(从头部开始)至8(尾部)号。凝集的血液用灭菌纱布除去。在即将手术前，手术停止后约8小时，和其后必要时的任何时间给动物肌内注射AnorfinA/SGEA，丹麦(0.3mg丁丙诺啡叔丁啡/ml，0.04ml/kg)。剂量受伤后伤口将按以下方式处理A=对照B=EMD在用药前大约15分钟，EMD配制品按照生产商的指导进行制备。EMD配制品在制备后2小时使用。对于伤口的B治疗，EMD将作为一个薄层作用于伤口表面。每4个伤口使用1瓶EMD。伤口敷料伤口用Tegaderm覆盖。该敷料用无菌纱布覆盖，Fixomul固定。敷料，纱布和Fixomul被网状袜Bend-a-rete(Tesval，意大利)保持。每天观察敷料的情况。敷料将在第二天(所有动物)和第3天(动物编号3和4)更换。在每次更换以前在动物颈部肌肉注射Zoletil50Vet.，Virbac，法国(125mg替来他明和125mgzolazepam，溶解在5ml溶剂中，5ml)，RompunVet.，Bayer，德国(20mg甲苯噻嗪/ml，6.5ml)和MethadonDAK，丹麦(10mg美沙酮/ml，2.5ml)的混合物(1.0ml/10kg体重)而麻醉。伤口的观察所有伤口分别在第二天(所用动物)，第三天(所有动物)和第四天(动物编号3和4)进行观察和照相。渗出液和炎症的水平将被评估。移植表皮的出现将被详细记录。临床迹象所有可以观察到的疾病健康和行为变化每天都被记录。一些与正常情况的背离将按照出现的时间，持续的时间和强度进行记录。体重所有动物在到来，伤口的出现日和研究结束时都要被称重。终期观察在第三天(大约伤口出现后56小时)，1和2号动物使用栓枪击昏后，由锁骨下静脉和动脉刺入致死。在第四天(大约伤口出现时72小时)，3和4号动物使用栓枪击昏后，由锁骨下静脉和动脉刺入致死。组织取样每一个伤口分块从骨骼肌肉组织切割下来。如果伤口与下层的骨骼肌肉组织发生一些粘连，部分肌肉将被包含在用于固定的材料中。每一个伤口切块用含4％甲醛的中性磷酸缓冲液固定。组织学制备固定后从所有伤口中选择4个有代表性的样品包被在石蜡中，切成一般5μm的厚度，使用苏木素和曙红进行染色。染色后使用栅栏在光学显微镜下进行观察。这种观察可以对伤口的总长度和表层面积进行测定。取每个伤口的平均值，然后用于计算群平均值。统计学数据经加工后计算出群平均值和适当的标准方差。可能的出入也被鉴定出来。此后每一个连续的变化将用Bartllet′s实验测定变化的同质性，如果这些差异是同质的，即可对变化进行差异的分析。如果检测到一些有意义的差异，可能的群内差异将用Dunnett’s实验评估。如果变化是异质的，每一个变化将按通常的Shopiro-Wilk方法测定。在正常分布的情况下，可能的群内差异将用Student′st-检验鉴定，否则其它可能的群内差异将用Kruskal-Wallis′s检验评估。如果检测到一些有意义的群内差异，将使用WilcoxonRank-Sum检验对这些群作随后的鉴定。统计学的分析将使用“SAS/STAT使用者指导，第6版，第4次编辑，Vol.1+2”，SASInstituteInc.，NorhtCarolina27513，美国”中介绍的SAS程序(版本6.12)进行。序列表<110>拜奥拉公司<120>用于伤口愈口的基质蛋白组合物<130>20542PCl<160>2<170>FastSEQ软件，Windows3.0版<210>1<211>407<212>PRT<213>未知<400>1MetSerAlaSerLysIleProLeuPheLysMetLysGlyLeuLeuLeu151015PheLeuSerLeuValLysMetSerLeuAlaValProAlaPheProGln202530ArgProGlyGlyGlnGlyMetAlaProProGlyMetAlaSerLeuSer354045LeuGluThrMetArgGlnLeuGlySerLeuGlnGlyLeuAsnAlaLeu505560SerGlnTyrSerArgLeuGlyPheGlyLysAlaLeuAsnSerLeuTrp65707580LeuHisGlyLeuLeuProProHisAsnSerPheProTrpIleGlyPro859095ArgGluHisGluThrGlnGlnProSerLeuGlnProHisGlnProGly100105110LeuLysProPheLeuGlnProThrAlaAlaThrGlyValGlnValThr115120125ProGlnLysProGlyProHisProProMetHisProGlyGlnLeuPro130135140LeuGlnGluGlyGluLeuIleAlaProAspGluProGlnValAlaPro145150155160SerGluAsnProProThrProGluValProIleMetAspPheGlyAsp165170175ProGlnPheProThrValPheGlnIleAlaHisSerLeuSerArgGly180185190ProMetAlaHisAsnLysValProThrPheTyrProGlyMetPheTyr195200205MetSerTyrGlyAlaAsnGlnLeuAsnAlaProGlyArgIleGlyPhe210215220MetSerSerGluGluMetProGlyGluArgGlySerProMetGlyTyr225230235240GlyThrLeuPheProGlyTyrGlyGlyPheArgGlnThrLeuArgGly245250255LeuAsnGlnAsnSerProLysGlyGlyAspPheThrValGluValAsp260265270SerProValSerValThrLysGlyProGluLysGlyGluGlyProGlu275280285GlySerProLeuGlnGluProSerProAspLysGlyGluAsnProAla290295300LeuLeuSerGlnIleAlaProGlyAlaHisAlaGlyLeuLeuAlaPhe305310315320ProAsnAspHisIleProAsnMetAlaArgGlyProAlaGlyGlnArg325330335LeuLeuGlyValThrProAlaAlaAlaAspProLeuIleThrProGlu340345350LeuAlaGluValTyrGluThrTyrGlyAlaAspValThrThrProLeu355360365GlyAspGlyGluAlaThrMetAspIleThrMetSerProAspThrGln370375380GlnProProMetProGlyAsnLysValHisGlnProGlnValHisAsn385390395400AlaTrpArgPheGlnGluPro405<210>2<211>324<212>PRT<213>未知<400>2MetLysProAsnSerMetGluAsnSerLeuProValHisProProPro151015LeuProSerGlnProSerLeuGlnProHisGlnProGlyLeuLysPro202530PheLeuGlnProThrAlaAlaThrGlyValGlnValThrProGlnLys354045ProGlyProHisProProMetHisProGlyGlnLeuProLeuGlnGlu505560GlyGluLeuIleAlaProAspGluProGlnValAlaProSerGluAsn65707580ProProThrProGluValProIleMetAspPheGlyAspProGlnPhe859095ProThrValPheGlnIleAlaHisSerLeuSerArgGlyProMetAla100105110HisAsnLysValProThrPheTyrProGlyMetPheTyrMetSerTyr115120125GlyAlaAsnGlnLeuAsnAlaProGlyAr9IleGlyPheMetSerSer130135140GluGluMetProGlyGluArgGlySerProMetGlyTyrGlyThrLeu145150155160PheProGlyTyrGlyGlyPheArgGlnThrLeuArgGlyLeuAsnGln165170175AsnSerProLysGlyGlyAspPheThrValGluValAspSerProVal180185190SerValThrLysGlyProGluLysGlyGluGlyProGluGlySerPro195200205LeuGlnGluProSerProAspLysGlyGluAsnProAlaLeuLeuSer210215220GlnIleAlaProGlyAlaHisAlaGlyLeuLeuAlaPheProAsnAsp225230235240HisIleProAsnMetAlaArgGlyProAlaGlyGlnArgLeuLeuGly245250255ValThrProAlaAlaAlaAspProLeuIleThrProGluLeuAlaGlu260265270ValTyrGluThrTyrGlyAlaAspValThrThrProLeuGlyAspGly275280285GluAlaThrMetAspIleThrMetSerProAspThrGlnGlnProPro290295300MetProGlyAsnLysValHisGlnProGlnValHisAsnAlaTrpArg305310315320PheGlnGluPro权利要求1．一种活性釉质物质在制备用于伤口愈合的药物或化妆品组合物中的应用。2．一种活性釉质物质在制备用于改善伤口愈合的药物或化妆品组合物中的应用。3．一种活性釉质物质在制备用于软组织再生或修复的药物或化妆品组合物中的应用。4．根据权利要求1-3任一项的应用，其中伤口存在于口腔中。5．根据权利要求1-3任一项的应用，其中伤口是身体损伤或与口腔手术包括牙周手术，拔牙术，牙髓治疗，牙植入物的插入，假牙应用相关的外伤。6．根据权利要求1-3任一项的应用，其中伤口选自无菌伤口，挫伤伤口，切割伤口，撕裂伤口，非穿透伤口，开放伤口，穿透伤口，穿孔伤口，刺破伤口，脓毒伤口，梗死和皮下伤口。7．根据权利要求1-3任一项的应用，其中伤口选自缺血性溃疡，褥疮，瘘，严重咬伤，热灼伤和供体部位伤口。8．根据权利要求1-4中任一项的应用，其中伤口是口疮伤口，外伤伤口或与疱疹相关的伤口。9．一种活性釉质物质制剂在制备用于预防和/或治疗感染的药物组合物中的应用。10．根据权利要求9的应用，其中感染由微生物引起。11．根据权利要求9或10的应用，用于预防或治疗粘膜表面的微生物生长。12．根据权利要求9或10的应用，用于预防或治疗指甲或牙齿表面的微生物生长。13．根据权利要求9或10的应用，其中感染存在于口腔中。14．根据权利要求13的应用，用于预防和/或治疗口腔中的微生物症状。15．根据权利要求9-14任一项的应用，其中感染由如下细菌导致，即引起龋齿的细菌，例如突变链球菌；引起牙周疾病的细菌，例如伴放线放线杆菌，牙龈卟啉单胞菌，中间普雷沃氏菌，微小消化微链球菌，弯曲杆菌(梭杆菌，葡萄球菌)，B.forsythus；引起牙槽炎的细菌，例如葡萄球菌，放线菌和芽孢杆菌；和引起尖周损害的细菌，例如螺旋体。16．根据权利要求9-11任一项的应用，其中细菌存在于皮肤上。17．一种活性釉质物质制剂在制备用于治疗和/或预防炎症的药物组合物中的应用。18．根据权利要求17的应用，其中炎症存在于口腔。19．根据权利要求17的应用，其中炎症存在于骨供体部位。20．根据前述任一项权利要求所述的应用，其中所述活性釉质物质是釉基质，釉基质衍生物和/或釉基质蛋白。21．根据前述任一项权利要求所述的应用，其中活性釉质物质选自釉质蛋白(enamelin)，珐琅蛋白，非珐琅蛋白，富含脯氨酸的非珐琅蛋白，成釉质蛋白(amelin)(成釉细胞蛋白(ameloblastin)，鞘质蛋白(sheathlin))，簇质蛋白(tuftelin)和其衍生物和混合物。22．根据前述任一项权利要求所述的应用，其中活性釉质物质的分子量多数为大约120kDa，例如通过SDS-PAGE电泳确定多数为100kDa，90kDa，70kDa，或60kDa。23．根据前述任一项权利要求所述的应用，其中活性釉质物质制剂包含不同分子量的活性釉质物质的混合物。24．根据前述任一项权利要求所述的应用，其中活性釉质物质制剂包含选自珐琅蛋白，富含脯氨酸的非珐琅蛋白，簇质蛋白，簇蛋白(tuftprotein)，血清蛋白，唾液蛋白，成釉质蛋白，成釉质细胞蛋白，鞘质蛋白，和它们的衍生物的至少两种物质。25．根据前述任一项权利要求所述的应用，其中活性釉质物质的分子量高至大约40,000。26．根据前述任一项权利要求所述的应用，其中活性釉质物质的分子量在大约5,000到25,000之间。27．根据前述任一项权利要求所述的应用，其中活性釉质物质的主要部分的分子量大约20kDa。28．根据前述任一项权利要求所述的应用，其中活性釉质物质中至少有一部分呈聚集体形式或在体内使用后可以形成聚集体。29．根据权利要求26的应用，其中聚集体的颗粒大小从大约20nm至1μm。30．根据前述任一项权利要求所述的应用，其中活性釉质物质制剂中的蛋白质含量从大约0.05％w/w到100％w/w，例如大约5-99％w/w，大约10-95％w/w，大约15-90％w/w，大约20-90％w/w，大约30-90％w/w，大约40-85％w/w，大约50-80％w/w，大约60-70％w/w，大约70-90％w/w或大约80-90％w/w。31．根据前述任一项权利要求所述的应用，其中药物组合物进一步包含药物学上可接受的赋形剂。32．根据权利要求31的应用，其中药物学上可接受的赋形剂是丙二醇藻酸盐。33．根据权利要求31的应用，其中药物学上可接受的赋形剂是透明质酸或其盐或衍生物。34．EMDOGAIN或其包含的任何蛋白质或肽根据权利要求1-31任一项的用于伤口治疗的应用。35．一种用于改善伤口愈合的方法，该方法包括给予有相应需要的哺乳动物治疗和预防有效量的一种活性釉质物质。36．根据权利要求35所述的方法，其中伤口是身体损伤或与口腔手术包括牙周手术，拔牙术，牙髓治疗，牙植入物的插入，假牙应用相关的外伤；或者其中伤口选自无菌伤口，挫伤伤口，切割伤口，撕裂伤口，非穿透伤口，开放伤口，穿透伤口，穿孔伤口，刺破伤口，脓毒伤口，梗死和皮下伤口；或者其中伤口选自缺血性溃疡，褥疮，瘘，严重咬伤，热灼伤和供体部位伤口；或者其中伤口是口疮伤口，外伤伤口或与疱疹有关的伤口。37．根据权利要求36所述的方法，其中活性釉质物质选自釉质蛋白(enamelin)，珐琅蛋白，非珐琅蛋白，富含脯氨酸的非珐琅蛋白，成釉质蛋白(amelin)(成釉细胞蛋白(ameloblastin)，鞘质蛋白(sheathlin))，簇质蛋白(tuftelin)和其衍生物和混合物。38．根据权利要求36所述的方法，其中活性釉质物质的分子量多数为大约120kDa，例如通过SDS-PAGE电泳确定多数为100kDa，90kDa，70kDa，或60kDa。39．根据权利要求36所述的方法，其中应用于伤口上的活性釉质物质的量是相应于每平方厘米的总蛋白从大约0.01mg到大约20mg，例如每平方厘米大约0.1mg到15mg。40．一种促进软组织再生和/或修复的方法，该方法包括给予有相应需要的哺乳动物预防或治疗有效量的一种活性釉质物质。41．根据权利要求40所述的方法，其中活性釉质物质选自釉质蛋白(enamelin)，珐琅蛋白，非珐琅蛋白，富含脯氨酸的非珐琅蛋白，成釉质蛋白(amelin)(成釉细胞蛋白(ameloblastin)，鞘质蛋白(sheathlin))，簇质蛋白(tuftelin)和其衍生物和混合物。42．根据权利要求40所述的方法，其中活性釉质物质的分子量多数为大约120kDa，例如通过SDS-PAGE电泳确定多数为100kDa，90kDa，70kDa，或60kDa。43．根据权利要求40所述的方法，其中应用于伤口上的活性釉质物质的量是相应于每平方厘米的总蛋白从大约0.01mg到大约20mg，例如每平方厘米大约0.1mg到15mg。44．一种预防或治疗感染的方法，该方法包括给予有相应需要的哺乳动物预防或治疗有效量的一种活性釉质物质。45．根据权利要求44所述的方法，其中活性釉质物质选自釉质蛋白(enamelin)，珐琅蛋白，非珐琅蛋白，富含脯氨酸的非珐琅蛋白，成釉质蛋白(amelin)(成釉细胞蛋白(ameloblastin)，鞘质蛋白(sheathlin))，簇质蛋白(tuftelin)和其衍生物和混合物。46．根据权利要求44所述的方法，其中活性釉质物质的分子量多数为大约120kDa，例如通过SDS-PAGE电泳确定多数为100kDa，90kDa，70kDa，或60kDa。47．根据权利要求44所述的方法，其中感染是皮肤或粘膜表面的细菌感染。48．根据权利要求44所述的方法，其中细菌感染是发生在口腔的感染。49．根据权利要求48所述的方法，其中感染由如下细菌导致，即引起龋齿的细菌，例如突变链球菌；引起牙周疾病的细菌，例如伴放线放线杆菌，牙龈卟啉单胞菌，中间普雷沃氏菌，微小消化微链球菌，弯曲杆菌(梭杆菌，葡萄球菌)，B.forsythus；引起牙槽炎的细菌，例如葡萄球菌，放线菌和芽孢杆菌；和引起尖周损害的细菌，例如螺旋体。50．一种预防或治疗炎症的方法，该方法包括给予有相应需要的哺乳动物预防或治疗有效量的一种活性釉质物质。51．根据权利要求50所述的方法，其中活性釉质物质选自釉质蛋白(enamelin)，珐琅蛋白，非珐琅蛋白，富含脯氨酸的非珐琅蛋白，成釉质蛋白(amelin)(成釉细胞蛋白(ameloblastin)，鞘质蛋白(sheathlin))，簇质蛋白(tuftelin)和其衍生物和混合物。52．根据权利要求50所述的方法，其中活性釉质物质的分子量多数为大约120kDa，例如通过SDS-PAGE电泳确定多数为100kDa，90kDa，70kDa，或60kDa。53．根据权利要求50所述的方法，其中应用于伤口上的活性釉质物质的量是相应于每平方厘米的总蛋白从大约0.01mg到大约20mg，例如每平方厘米大约0.1mg到15mg。全文摘要活性釉质物质可以用来制备用于伤口愈合,改善伤口愈合、软组织再生或修复,或预防或治疗炎症感染的药物组合物或化妆品组合物。文档编号A61P17/02GK1297356SQ99805220公开日2001年5月30日申请日期1999年2月26日优先权日1998年2月27日发明者斯蒂纳·格斯特瑞里埃斯,拉尔斯·哈马斯特伦,彼得·林斯塔多斯,克里斯特·安德松,伊万·斯拉比,托马斯·哈马尔格伦申请人:拜奥拉拜奥爱克斯公司