1、81'、1。2'-11修饰的具体例子都是2'4和 2' -0甲基。糖修饰的核苷酸包含不同于核糖的糖基团，例如经修饰的核糖基团，其中2'-OH 基团被选自H、R、0R、卤素、SH、SR、NH2、NHR，NR^CN的基团取代，其中尺是^-^烷基或 烷氧基，或者C2-C6烯基或炔基，并且卤素是F、Cl、Br、I。2' -0H修饰的具体例子是2' -F和 2' -0甲基。在主干-修饰的构建区块中，连接相邻的构建区块的磷酸酯基团可以被经修饰 的连接基团例如硫代磷酸酯基团所取代。在核碱基-修饰的构建区块中，可以存在非天然 发生的核碱基而不是天然发生的核碱基。嘌呤或嘧啶核碱基的相应类似物是本领域所熟知 的。应指出的是可以组合上述修饰。
[0065] 核酸分子优选地选自适合于药学应用的核酸分子，特别是反义分子，或者选自能 够调节RNA干扰的RNA分子如siRNA分子或其前体。其他合适的RNA分子包括miRNA分子、 antagomirs、核酶及其前体。
[0066] 术语"核苷组分"还包括核苷或核苷酸及其类似物。核苷是包含核碱基和糖基团的 化合物。核苷酸是包含核碱基、糖基团和磷酸基团的化合物组。糖_、磷酸-和核碱基-修 饰的化合物也包括在本发明中，特别是适用于治疗癌症和/或病毒感染的核苷或核苷酸的 类似物治疗剂，例如AZT、阿昔洛韦、更昔洛韦、伐昔洛韦、吉西他滨、阿糖胞苷等。
[0067] 核苷组分可以通过分子的核碱基、糖或磷酸基团连接至脂肪酸残基。如果这种化 合物是核酸，它可通过核酸分子中存在的构建区块进行连接，特别是通过末端构建区块，即 位于核酸链的5'或3'-末端的构建区块，更特别是通过核酸链的3'-末端构建区块。在 优选的实施例中，通过存在于核酸分子特别是RNA分子中的经修饰的末端核碱基而发生连 接。
[0068] 在优选的实施例中，与多不饱和脂肪酸残基的共价连接可以附着至核苷组分中存 在的核碱基，例如DNA或RNA分子的构建区块，例如至嘌呤碱基的位置8或嘧啶碱基的位置 5〇
[0069] 核酸分子，如DNA或RNA的分子，通常具有长度为从5、10、12、15或18个构建区块 和多至25、30、50或100个构建区块或更多。核酸分子可以通过化学合成法或通过酶法从核 酸模板来制备，例如通过转录，由RNA聚合酶的催化，如由T3、I7或SP6RNA聚合酶，或通过 DNA复制或通过逆转录。优选地，化学或酶促合成过程中，并入构建区块包含功能基团，例如 Click-功能基团，如末端炔烃基团或叠氮化物基团，受限的烯烃基团，例如降冰片烯基团、 腈氧化物基团、丁腈亚胺基团或四嗪基团。在特定的实施方式中，并入通过（任选地通过连 接体）包括末端炔烃基团而修饰的构建区块。W02006/117161和W02008/052775描述了将Click修饰的构建区块并入核酸分子的方法，其内容通过引用并入本文。根据已知的方法， 核苷组分上的功能基团可以缀合至互补的功能基团，其附着至多不饱和脂肪酸残基。优选 地，通过例如Click-反应与互补的Click-功能反应基团，例如叠氮化物组进行缀合。
[0070] 备选地，根据标准方法在固相合成中，例如使用亚磷酰胺构建区块，可将连接至多 不饱和脂肪酸残基的经修饰的核酸构建区块引入核酸，例如RNA分子。
[0071] 本发明还提供了用于制备具有通式（V)的本发明缀合物的试剂
[0072] Fn-(L，)m-(RGl)r (V)
[0073] 其中
[0074] F、n、m、r是如上文所定义的，
[0075] L'是连接体，和
[0076] RG1是反应基团，特别是Click反应基团，例如叠氮化物基团。
[0077] 此外，提供了制备具有通式（VI)的本发明核酸缀合物的其他试剂：
[0078] BB- (L)m-Fn (VI)
[0079] 其中
[0080] F、L、n和m是如上文所定义的，和
[0081] BB是用于合成核酸分子的构建区块如核苷三磷酸，或适用于固相合成的构建区块 如亚磷酰胺。
[0082] 本发明的还有另一个方面是制备本发明缀合物的方法，包括
[0083] (i)试剂（V)与至少一个经修饰的核苷组分（VII)进行缀合
[0084] (N)r- (L//)m-RG2 (VII)
[0085] 其中
[0086] N、r和n是如上文所定义的，
[0087] L〃是连接体，
[0088] m是 0 或 1，和
[0089] RG2是这样的反应基团，其能够与RG1，特别是Click-反应基团如炔烃基团反应， 从而形成缀合物，或者
[0090] (ii)试剂（V)与至少一个经修饰的核酸酸构建区块（VIII)进行缀合
[0091] BB- (L"),,-RG2 (VIII)
[0092] 其中
[0093] BB是用于合成核酸分子的构建区块
[0094] L〃是连接体，
[0095] m是 0 或 1，和
[0096] RG2是这样的反应基团，其能够与RG1，特别是Click反应基团如炔径基团反应，从 而形成试剂（VI)，并且将试剂（VI)并入核酸分子，如通过化学或酶促合成，从而形成缀合 物。
[0097] 本发明的另一个方面涉及调节细胞或生物体中靶特异性核酸修饰的方法，包括以 下步骤：
[0098] (a)将细胞或生物体与本发明的缀合物在其中发生靶特异性核酸修饰的条件下接 触，和
[0099] (b)调节受缀合物的核苷组分影响的靶特异性核酸修饰朝向靶核酸。
[0100] 接触步骤（a)可以包括将缀合物引入靶细胞，例如分离的靶细胞，其可以是存在 于细胞培养物中，单细胞的微生物，或者在多细胞生物中的靶细胞或多个靶细胞。靶细胞优 选地是哺乳动物细胞，包括人细胞。靶生物体优选地是哺乳动物生物体，如人生物体。引入 生物体可以包括胃肠外施用，例如通过注射或输液，经粘膜施用或经皮施用。
[0101] 调节步骤（b)包括抑制革E核酸，例如当使用siRNA缀合物时通过RNA干扰，或当使 用反义分子缀合物时通过抑制mRNA转录，或通过使用治疗性核苷/核苷酸缀合物对病毒或 肿瘤细胞复制的抑制。
[0102] 优选地通过受体-介导的内吞作用，更优选地通过大麻素受体-介导的内吞作用 将缀合物引入靶细胞。因此，可以在缺少递送媒介物和/或转染试剂的情况下将缀合物可 以引入靶。
[0103] 在一个实施方式中，本发明的缀合物是用于体外转染细胞，特别是用于体外转染 哺乳动物细胞，包括人细胞。惊奇地发现本发明的缀合物是特别适合于转染免疫细胞如B 细胞、T细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞及其前体，以及神经元细胞、星形胶质细胞或其他表 达大麻素受体的细胞。表达大麻素受体CB2的免疫细胞的实例描述在（49、50和51)中，其 内容通过引用并入本文。表达大麻素受体CB1的神经元细胞的实例描述在（52、53、54和 55)中，其内容通过引用并入本文。
[0104] 在进一步的【具体实施方式】中，本发明的缀合物用于医学，特别是人类医学，但也用 于兽医学。因此，本发明还提供了药物组合物，其包含如上文所述的缀合物作为活性成分以 及合适的载体。对于诊断或治疗应用，所述药物组合物可以为溶液的形式，例如用于输液或 注射的溶液、乳剂、软膏、片剂、悬浮液等等。可以以任何合适的方式施用组合物，例如通过 胃肠外施用，如注射或输液，通过透粘膜应用，或通过透皮应用，或通过口服、局部、鼻、直肠 应用等。
[0105] 所述药物组合物可包含以非封装形式的所述缀合物作为活性剂，例如没有递送媒 介物如脂质体和/或没有转染试剂。
[0106] 本发明的缀合物可以用于细胞或生物体中基因的下调，例如病毒基因或细胞疾病 相关基因，如癌基因，或者自身免疫或过敏性疾病相关基因。优选的细胞靶基因是例如syk 基因，其是一种自身免疫或过敏性疾病相关的基因，编码脾酪氨酸激酶（SYK)，参与IgE依 赖性炎症信号传导级联。人SYK直系同源物描述在UniProtP43405,小鼠SYK直系同源物 描述在UniProtP48025。另一个优选的靶基因是APP基因，其编码淀粉样前体蛋白（APP)。 人APP直系同源物描述在UniProtP05067。APP被0-或y分泌酶切割成神经毒性碎片， 与阿尔茨海默氏症的发展相关联。优选的病毒靶基因是编码单股反链病毒目的病毒例如埃 博拉病毒、麻瘆病毒和狂犬病病毒的N或P蛋白的基因。
[0107] 如下描述了本发明的其他方面。这些方面的特定性质或性质的组合可以来自上述 方面的公开内容。
[0108] 缀合物包含如上所述的受体配体组分，例如多不饱和脂肪酸残基，叶酸，胆固醇或 激素，以及如上所述的与其共价结合的至少一个核苷组分，其中所述缀合物包含一个受体 配体组分和至少2个分子的核苷组分，例如2、3、4、5、6、7或8个分子。
[0109] 缀合物包含如上所述的受体配体组分，例如多不饱和脂肪酸残基，叶酸，胆固醇 或激素，以及与如上所述的其共价结合的至少一个核苷组分，其中所述受体配体组分通过 连接体结合至核苷组分，所述连接体包含如上文描述的通过Click反应形成的基团，例如 1，2, 3-三氮唑基团。
[0110] 缀合物包含如上所述的至少一个C=C不饱和化合物和与其共价结合的至少一个 核苷组分，其中C=C不饱和化合物通过连接体结合至核苷组分，所述连接体包含如上文描 述的通过Click反应形成的基团，例如1，2, 3-三氮唑基团。所述C=C不饱和化合物包含 至少一个C=C键，特别是以Z构型的C=C键。优选的实例是萜和不饱和脂肪酸，如单或 多不饱和脂肪酸。
[0111] 所述c=C不饱和化合物优选地是C4-C24化合物，特别是脂肪酸包括其衍生物， 如茉莉酮酸例如茉莉酸或茉莉酮酸醋，例如茉莉酸甲酯。
[0112] 在一些实施方式中，所述C=C不饱和化合物包含单C=C键，特别是以Z构型。
[0113] 通过下述附图和实施例更详细地概述了本发明。
【附图说明】
[0114] 图 1
[0115] 叠氮化物修饰的大麻素（1)以及叶酸⑵和胆固醇（3)衍生物的合成。
[0116] 5 = 11-叠氮-3, 6, 9-三氧杂^^一烷-1-胺，
[0117] PyBOP=六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基，
[0118] 了81^ = 0-(苯并三氮唑-1-基），州州'，^-四甲基脲四氟硼酸，
[0119] DIPEA=N，N-二异丙基乙胺
[0120] DBU= 1，8-二氮杂二环[5.