用于防止结核病的口服灭活分枝杆菌的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及口服施用用于防止结核病的医药产品领域，特别地，涉及控制所述疾 病的潜伏性感染转化为活动性感染。
【背景技术】
[0002] 结核病是一种由结核分枝杆菌复合群（MTB-C)的细菌引起的慢性传染病，该结核 分枝杆菌复合群包括结核分枝杆菌（M.化berculosis)、牛结核分枝杆菌（M. bovis)、田鼠 分枝杆菌（M. microti)和非洲分枝杆菌（M. a化icanum)，其中，结核分枝杆菌是与人类结核 病相关的最重要且最普遍的媒介。虽然所述疾病主要影响肺部，但是在许多病例中，其还会 扩散到其他器官。如果没有适当地处理，结核病会是致命的。
[0003] 根据世界卫生组织2011年的报告，全世界每年有9百万人新病例出现该疾病，并 且报告有大约170万人死亡。报告中还提到，每年全球有超过25亿人感染，大约1亿人是 新增加的感染者。
[0004] 结核病通过空气传播，该样，患者肺部的结核空洞是该种疾病的主要传播源，例 女口，J.Grosset, Studies in short-course chemotherapy for tuberculosis. Basis for short-course chemotherapy, Chest, 1981, 80, 719-720 ; W 及 J.Grosset, Mycobacterium tuberculosis in the Extracellular Compartment:an Underestimated Adversary, Antimicrob. Agents Qiemother. , 2003, 47, 833-836 中的描述。
[0005] 如在所述文献中所描述的，病人通过咳嗽或打喷喔，喷出大量的可W传播杆菌的 微滴，它们会进入到吸入该些微滴的人的肺泡腔。
[0006] 吸入后，该些芽抱杆菌被肺泡巨瞻细胞吞瞻，并可在巨瞻细胞中繁殖，直至引起细 胞破坏的程度。该些芽抱杆菌在细胞外空间被新的巨瞻细胞再次吞瞻，并且该个过程一直 重复，直到巨瞻细胞耗尽，感染出现在肺口淋己结，产生基于细胞免疫的免疫反应。
[0007] 感染后的大约6周，杆菌的生长停止，宿主的皮肤结核菌素测试呈阳性，特征是延 迟型超敏值TH)反应，而所谓的干酪样坏死是在感染时出现的。
[0008] 结核性感染的一个主要特征是，结核分枝杆菌能在宿主的组织中潜伏的"结核 性感染形式保留几年，而不会发展成疾病，但却保持其产生活动性感染的可能性。
[0009] 该种感染的潜伏状态与所谓的干酪样坏死的发生有关，干酪样坏死是发生在最初 的肺泡病变部位和周围的肺组织中，导致包含正在复制的杆菌的巨瞻细胞的破坏，导致质 实的坏死灶 kolid necrotic lesion)。
[0010] 该种坏死反应的起因不是很确切地知道，但是与DTH型反应相关。本质上，控制杆 菌群的免疫反应是一种细胞型的免疫反应，主要由化1CD4引起，即，其能产生DTH型的反 应，并且能识别受感染的巨瞻细胞，并激活它们来破坏其中的杆菌。
[0011] 在大约10%的感染个体中，所述质实的坏死会软化，该是结核病感染最重要的事 件之一，因为该随后就是感染进展成活动性结核病，即结核性疾病。
[0012] 在大多数的病例中，软化与已软化的组织流向支气管树化ronchial tree)形成结 核空洞相关，并且与杆菌的爆炸性细胞外生长相关，其中氧气通过支气管开口进入。咳嗽 时，充满杆菌的软化的干酪（caseum)扩散到支气管的其他部位、肺部W及体外。
[0013] 结核病的药物治疗，其特征在于它是一种持续很久的治疗，该使得治疗依从性很 复杂，同时偏向出现耐药的细菌。
[0014] 人们认为，控制结核病最好的策略是基于一防止性（preventive)的方法。
[0015] 目前胃肠外给药用于防止性治疗结核病的疫苗是基于称为BCG(卡介苗）的菌株 的细菌，它是牛结核分枝杆菌的减毒变种。然而，可W看到，其效力随时间推移而下降，并且 对成人中该疾病的防止不起作用。事实上，人们认为，其仅能保护致命的结核病（粟粒性结 核或结核性脑膜炎）进展的小环境（niches)。
[0016] 已经开发的其他结核病的预防性（91'〇地如3(3^(3)治疗主要是基于其他活的减毒 分枝杆菌菌株，或基于细菌性亚单位。
[0017] 此外，基于灭活分支杆菌的结核病的预防性治疗在现有技术中也有研究，其目的 是获得与使用基于减毒分枝杆菌的疫苗获得的免疫反应相似的免疫反应，即，产生干扰素 Y的化1。
[0018] 因此，例如，文献 Opie et al. , Protective ino州lation against human tuber 州 losis with heat-killed tubercle bacilli,Am. J.Hyg., 1939,29, 155-164 描述了 一临床研究，其中，通过加热灭活的5份（doses)结核分枝杆菌经皮内注射，用于产生抵抗 疾病的保护。
[0019] 此外，文献 Agger et al. , Specific acquired resistance in mice immunized with killed mycobacteria, Scand. J. Immunol. , 2002, 56, 443-447 描述了一试验研究，其 中，小鼠经皮下给药接种3份1000 y g的通过加热灭活的结核分枝杆菌，每份剂量之间相隔 2周，显示出基于特异性T-细胞的诱导的免疫。
[0020] 还测试了用于诱导抵抗结核病的保护的其他灭活分枝杆菌，通常通过胃肠外给 药。
[0021] 例 女口，Gupta et al. , Immunogenicity and protective efficacy of "Mycobacterium w" against Mycobacterium tuberculosis in mice Immunized with live versus heat-killed M. w by the aerosol or parenteral route, Infect. Immun. , 2009, 77(1), 223-231中描述了给予活的结核分枝杆菌w(M. w mycobacteria)或通 过加热灭活的结核分枝杆菌w。皮下给予单一剂量的通过加热灭活的结核分枝杆菌w，能够 观察到基于产生干扰素的Thl细胞的诱导的免疫反应。
[0022] 尤其希望提供一种口服给药的有效的预防性治疗，因为该种给药途径非常便于药 物的给药和治疗依从性。
[0023] 在该个意义上说，根据与一般化疗药物结合的方案，现有技术中有文献涉及到口 服给予通过加热灭活的结核分枝杆菌，母牛分枝杆菌（Mycobacterium vaccae)，W获得活 动性结核病的治疗效果。
[0024] 在实验水平，Herndndez-Pando et al. , Orally a血inistered Mycobacterium vaccae modulates expression of immunoregulatory molecules in BALB/c mice with pulmonary tuberculosis, Clin. Vaccine Immunol. , 2008, 15 (11), 1730-1736 中描述了在 小鼠上进行的试验，小鼠经口给予5份0. 1 y g的通过加热灭活的母牛分枝杆菌，每次给药 间隔28天，在给药第一份后23小时，通过气管内诱导结核分枝杆菌感染。该研究确认了产 生细胞免疫反应，Thl细胞分泌增加，同时体液免疫下降，如Th2型细胞和TGF-目生长因子 的减少所表明。
[00巧]通常，现有技术显示有利的是Thl诱导，随后干扰素-Y产生，而化2反应（随后 IL-4产生）或化3反应（其使调节性T细胞（Treg)产生），可具有活动性结核病诱导作用。
[0026] 该描述在例如，Kursar et al. , Cutting Edge: Regulatoir T Cells Prevent Efficient Clearance of Mycobacterium tuberculosis, J. Immunol. ,2007, 178, 2661-2665中，其中，调节性T细胞（Treg)的产生归因于CD4T-细胞没 有能力杀死干酪病灶中的菌，防止实验性结核病的小鼠模型中的潜伏性感染。该文献掲示 了 Thl反应和Treg反应之间失去平衡而倾向于Treg反应的放松管制是活动性结核病诱发 的原因。
[0027] 按照现有