一种稳定的抗TNF-α抗体制剂及其用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，具体地涉及一种稳定的抗TNF- a抗体制剂及其用途。
【背景技术】
[0002] 类风湿性关节炎（RA)是一种以慢性侵蚀性关节炎为特征的全身性自身免疫病，病 变特点为滑膜炎，目前类风湿性关节炎已成为一种严重影响人类健康和生活质量的疾病， 也是发达国家导致患者残疾的主要疾病之一。
[0003] 近10年来，用于治疗RA的制剂已从广泛的免疫调节剂转变为仅针对涉及RA发病 机制的特定的分子靶向细胞因子和细胞，阻断RA发病过程中的不同阶段，达到治疗RA的目 的。有多种炎性细胞和因子参与了 RA的发病，其中肿瘤坏死因子（TNF-a )处于支配地位。 目前研究最深入、开发最成功的是TNF-a拮抗剂，如全球第一个上市的全人源抗TNF-a抗 体药物阿达木单抗。
[0004] 由于抗体为生物大分子，其结构非常复杂，因此在生产过程中，表达的抗体分子会 发生各种翻译后修饰和降解反应，如N末端环化，糖基化，脱酰胺，异构化，氧化，片段化，二 硫键错配等等。这些质量属性可能会对最终产品安全性和有效性产生影响，因此，控制产品 质量的正确性和一致性非常重要。
[0005] 目前已知的多数抗TNF-a抗体制剂的稳定性不高，储存中易发生化学变化(例 如脱酰胺和某些氧化)，导致电荷异构体的增多，使得产品的质量一致性受到潜在影响。此 外，用药时常引起病人皮下注射部位疼痛、痒、红肿等副反应。因此有必要开发一种新型抗 TNF_a抗体制剂以提商抗体的稳定性，从而提商广品质量的均一性和一致性，以及提商临 床使用稳定性。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种稳定的抗TNF-a抗体制剂及其用途。
[0007] 本发明第一方面提供了一种抗体液体制剂，所述制剂包括：
[0008] (i)治疗有效量的抗TNF-a抗体；
[0009] (ii)含0? 8-6. 2mg/ml组氨酸的缓冲体系；
[0010] a ii)渗透压调节剂；以及
[0011] (iv)表面活性剂，
[0012] 其中，所述制剂的pH为5. 5-6. 5。
[0013] 在另一优选例中，所述抗TNF- a抗体的浓度为40_60mg/ml。
[0014] 在另一优选例中，所述抗TNF-a抗体的浓度为45_55mg/ml，优选为48_52mg/ml， 最优选为50mg/ml。
[0015] 在另一优选例中，所述组氨酸的浓度为1. 6-5. Omg/ml，优选为3. 0-3. 8mg/ml。
[0016] 在另一优选例中，所述组氨酸的pH为5. 5-6. 5,优选为5. 8-6. 2。
[0017] 在另一优选例中，所述抗TNF-a抗体为单克隆抗体。
[0018] 在另一优选例中，所述单克隆抗体为全长抗体。
[0019] 在另一优选例中，所述单克隆抗体为IgGl抗体。
[0020] 在另一优选例中，所述单克隆抗体为人源化抗体。
[0021] 在另一优选例中，所述单克隆抗体为包含抗原结合区的抗体片段。
[0022] 在另一优选例中，所述抗体片段为Fab或F(ab' )2片段。
[0023] 在另一优选例中，所述单克隆抗体结合TNF-a。
[0024] 在另一优选例中，所述抗TNF-a抗体选自：阿达木单抗（adalimumab)、英夫利昔 单抗（infliximab)、戈利木单抗（Golimumab)。
[0025] 在另一优选例中，所述制剂的pH为5. 8-6. 2,优选为5. 9-6. 1，最优选为6. 0。
[0026] 在另一优选例中，所述渗透压调节剂包括多元醇和氯化钠。
[0027] 在另一优选例中，所述多元醇为甘露醇或山梨醇。
[0028] 在另一优选例中，所述多元醇的浓度为8-20mg/ml，优选为10-15mg/ml。
[0029] 在另一优选例中，所述NaCl的浓度为2-10mg/ml，优选为4_8mg/ml，更优选为 5. 5-6. 5mg/ml 〇
[0030] 在另一优选例中，所述表面活性剂的浓度为〇? 6-1. Omg/ml，优选为0? 8-1. Omg/ ml〇
[0031] 在另一优选例中，所述表面活性剂为聚山梨酯。
[0032] 在另一优选例中，所述聚山梨酯为聚山梨酯80。
[0033] 在另一优选例中，所述制剂具有下组的一种或多种特征：
[0034] (a)所述制剂在2-8 °C可保存至少2年；
[0035] (b)所述制剂适合皮下注射。
[0036] 在另一优选例中，所述制剂包括：
[0037] (a) 40-60/ml 抗 TNF- a 单克隆抗体；
[0038] (b) 0? 8-6. 2mg/ml 组氨酸；
[0039] (c) 8_20mg/ml 多兀醇；
[0040] (d) 2-10mg/mlNaCl ；
[0041] (e)0. 6-1. Omg/ml 聚山梨酯，
[0042] 并且所述制剂的pH为5. 5-6. 5。
[0043] 本发明第二方面提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括：
[0044] 第一方面所述的抗体液体制剂；以及
[0045] 用于盛装所述液体制剂的容器。
[0046] 在另一优选例中，所述试剂盒还包括使用说明书。
[0047] 本发明第三方面提供了一种第一方面所述制剂的用途，所述制剂用于制备治疗 TNF-a表达过多或有害的病症的药物。
[0048] 本发明第四方面提供了一种用于稳定抗体的方法，所述方法通过将治疗有效量的 抗TNF- a抗体、含0. 8-6. 2mg/ml组氨酸的缓冲体系、渗透压调节剂以及表面活性剂进行组 合，并控制该组合的pH为5. 5-6. 5来进行。
[0049] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【具体实施方式】
[0050] 本发明人经过广泛深入的研究发现，抗TNF-a抗体与特定浓度的含组氨酸的缓 冲体系、多元醇(如甘露醇或山梨醇)、氯化钠以及表面活性剂(如聚山梨酯）组成的液体制 剂在pH为5. 5-6. 5的条件下，不仅在外观、蛋白浓度、浊度、纯度等方面保持优异的稳定性， 而且制剂的化学稳定性得到显著地提高，制剂中电荷异构体的生成速率明显降低，制剂的 存放时间得到有效延长。在此基础上完成了本发明。
[0051] 如本文所用，所述"液体制剂"是指如下形式的制备物，使得容许活性组分的生物 学活性有效，且不含别的对会施用该制剂的受试者有不可接受的毒性的成分。受试者包括 哺乳动物，优选为人。
[0052] 如本文所用，所述"抗体稳定性"是指一种抗体在贮藏后基本上保留其物理稳定性 和/或化学稳定性和/或生物学活性。贮藏期一般基于制剂的预定货架期来选择。多种用 于测量抗体稳定性的分析技术是本领域所公知的。
[0053] 可以在选定温度下用选定时间测定稳定性。优选的是，所述制剂在室温或30°C至 40°C下能稳定至少1个月和/或在大约2-8°C下稳定至少2年。
[0054] 如果在通过对颜色和/或透明度进行肉眼检查，或通过UV光散射或通过大小排阻 层析测定时基本没有表现出明显的聚集，沉淀和/或变性的迹象，则制剂中的抗体保持它 的物理稳定性。
[0055] 如果在特定时间化学稳定性使得抗体被认为仍然保留了下面所定义的生物学活 性，则在制剂中，所述抗体保持它的化学稳定性。可以通过检测和定量所述抗体的化学改变 形式评估化学稳定性。化学改变可能涉及大小改变（例如，剪切），例如，可以通过采用大 小排阻层析，SDS-PAGE和/或矩阵辅助的激光解析离子化/飞行时间质谱分析（MALDI/T0F MS)进行评估。其他类型的化学改变包括电荷改变（例如，因为脱酰胺导致的改变），例如， 可以通过离子交换层析对它进行评估。
[0056] 如果一种制剂中的抗体具有它预期用途的生物学活性，则所述抗体在制剂中保持 它的生物学活性。例如，如果所述制剂中的抗体的生物学活性为在制备所述制剂时所表现 出的生物学活性的大约70%~130%(在测定的误差范围内）内，就认为保持了它的生物学 活性（例如，通过抗原结合测定确定）。
[0057] 如本文所用，所述"治疗有效量"或"有效量"表示在药理学含义上，在本发明的范 围内，在预防或治疗疾病方面的有效量。对于所述疾病的治疗来说，所述抗体是有效的。"治 疗"表示治疗性治疗和预防性或防御性措施。需要治疗的受试者包括业已患有有关病症的 受试者，以及需要预防有关疾病的受试者。
[0058]如本文所用，所述"TNF-a"是指人TNF-a(本文简称为hTNF-a)，表示人细 胞因子，它是以17kD的分泌形式和26kD膜缔合形式存在的，它的生物学活性形式包括 非共价结合的17kD分子的三聚体。hTNF-a的结构进一步披露于以下文献中：例如， Pennica，D.，等（1984)Nature312 :724_729 ;Davis，J.M?，等（1987)Biochemistry26 : 1322-1326 ;和 Jones,E.Y?，等（1989)Nature338 :225-228。术语人TNF-a意在包括重组 人TNF-a (rhTNF-a)，它可以是通过标准重组表达方法制备的或通过商业渠道购买的（如 R&D Systems，Catalog No. 210-TA，Minneapolis，MN)。
[0059] 如本文所用，所述"抗TNF-a抗体"是指以足够亲和力和特异性结合TNF-a的抗 体。在某些实施方案中，所选择的抗体通常会具有足够的对TNF-a的结合亲和力。抗体亲 和力可通过例如基于表面等离振子共振的测定法；酶联免疫吸附测定法（ELISA)和竞争测 定法（例如RIA)来测定。
[0060] 抗体液体制剂
[0061] 本发明的抗体液体制剂，主要包括：
[0062] (i)治疗有效量的抗TNF-a抗体；
[0063] (ii)含0? 8-6. 2mg/ml组氨酸的缓冲体系；
[0064] (iii)渗透压调节剂；和
[0065] (iv)表面活性剂。
[0066] 其中，可用于本发明制剂中的抗TNF-a抗体包括单克隆抗体，重组抗体，单链抗 体，杂合抗体，嵌合抗体，人源化抗体，或它们的片段。还可以使用包括一个或两个用于结 合抗原的结合位点和免疫球蛋白的Fc-部分的抗体分子。本发明优选为单克隆抗体，本 发明所述的抗TNF-a单克隆抗体可来源以下文献：Guidingtheselectionofhuman antibodiesfromphagedisplayrepertoirestoasingleepitopeofanantigen Biotechnology(NY). 1994,12(9) :899-903)和专利：CN1935260B。通过本领域所公知的方 法进行制备，也可以选用其它基因工程技术获得的抗TNF-a单克隆抗体。一类优选的由其 它基因工程技术获得的抗TNF-a单克隆抗体包括阿达木单抗（adalimumab)、英夫利昔单 抗（infliximab)、戈利木单抗（Golimumab)等。用于本发明制剂中的优选抗体是人抗体，它 是从人细胞或从代表人抗体所有组成成分的基因文库中克隆的。特别优选的人抗体是针对 抗原TNF-a，包括人TNF-a(或hTNFa)的抗体。
[0067] 存在于本发明制剂中