治疗动物类风湿性关节炎的试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医学和生物医学工程领域，具体涉及一种治疗骨关节炎的生物制品及 其制备方法。
【背景技术】
[0002] 类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis,RA)是一种在世界范围内常见的由自身 免疫障碍导致的免疫系统攻击关节的慢性炎症，其病理特征是关节滑膜的慢性炎性增生、 血管翳形成、软骨及软骨下骨破坏，最终导致关节畸形和强直。其患病率大约占到了世界成 年人总人口的1%，我国约为0. 32%~0. 36%。患者的平均寿命缩短5~10年，至少有50% 的患者在发病10年后丧失工作能力。临床表现为慢性、进行性、对称性、侵蚀性多关节炎， 以双手近指、掌指、腕、肘关节和双足跖趾、踝、膝关节受累最为常见，造成关节软骨、骨和关 节囊破坏，最终导致关节畸形和功能丧失。患者同时可有发热、关节疼痛及晨僵等症状。疾 病进展亦会系统地影响其他关节外的组织，包括皮肤、血管、心脏、肺部及肌肉等。
[0003] 当前治疗类风湿关节炎的常用药物分为四大类：非甾类抗炎药（NSAIDs)、改善病 情的抗风湿药（DMARDs)、糖皮质激素、和植物药。但是上述药物均不能完全控制关节破坏， 而只能缓解疼痛、减轻或延缓炎症的发展。经过积极正规的内科治疗，仍不能控制病情者， 为纠正畸形，改善生活质量可考虑手术治疗。常用的手术主要有滑膜切除术、关节形成术、 软组织松解或修复手术、关节融合术等。但手术并不能根治类风湿关节炎，故术后仍需内科 药物治疗。
[0004] 因此，传统的治疗方案尚远不能控制疾病的进展或彻底治愈类风湿关节炎，迫使 人们寻求新的治疗方法。近十年来，干细胞移植治疗骨关节炎已有大量研究报道。目前骨关 节炎的干细胞治疗研究大多采用骨髓来源的间充质干细胞，脂肪多能细胞治疗骨关节炎也 已有大量文献报道，临床前研究和临床研究显示骨髓间充质干细胞和脂肪多能干细胞都有 可能改善病情，并有增加软骨含量报道，但离完全恢复关节还有一定距离。骨髓间充质干细 胞获取需穿刺骨髓，对供体造成较大伤害，相比而言从脂肪获取多能细胞更具优势，1)取材 对人体损伤小；2)脂肪中具CFU-F形成能力的多能细胞含量高于1%，而骨髓中小于0. 001% ; 3)脂肪来源丰富，多能细胞的含量多；4)脂肪来源细胞增殖能力较骨髓间充质干细胞强。 因此脂肪多能干细胞治疗骨关节炎更具优势。
[0005] 基质血管成分含有脂肪多能细胞，并含有多种其他类型细胞，最早是采用酶消化 方法从脂肪组织获得，可经过提取纯化分离出脂肪多能干细胞。基质血管成分对关节炎治 疗也具有治疗效果，并且基质血管成分从分离到移植2-3小时，能减少移植时间，且价格便 宜，还能减少细胞培养中的风险，但是含有的脂肪多能细胞含量少。同时基质血管成分中含 有⑶34+⑶31-和⑶34+⑶31+的多能细胞，具有较强的促进血管再生能力，而经培养后的 脂肪多能细胞⑶34+表达减少或消失。目前尚未见基质血管成分或纯化的⑶34+⑶31-和 CD34+CD31+的多能细胞联合脂肪多能细胞用于治疗关节炎的研究，而将这两者联用有可能 提高血管再生能力，产生明显的改善治理的效果。
[0006] 富含血小板的血浆（PRP)能分泌多种促进软骨恢复细胞因子，但在治疗关节炎领 域，PRP的作用存在争议，有研究报道其对软骨修复产生负面效果。
[0007] 目前，多种成分联合应用于骨关节炎治疗已有报道，然而，现有技术中，仅仅对各 有效组分进行简单叠加，而很少有对组分的选择，配比，有效成分和杂质的含量等参数进行 优化。且现有的关节内注射制品的注射体积普遍偏大，如给人的关节注射5ml、8. 5ml液态 组合物，过量的液体注入关节腔会导致压力增加，给患者造成不适。
[0008] 综上所述，本领域尚缺乏一种成分优化，杂质含量少，有效成分含量高的的治疗类 风湿性关节炎的液态制剂。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的是提供一种成分优化，杂质含量少，有效成分含量高的治疗骨关节 炎的液态组合物。
[0010] 本发明的第一方面，提供了一种治疗动物类风湿性关节炎的药物组合，其特征在 于，包括药物组合物A和药物组合物B，以及任选的药物组合物C ;
[0011] 且所述的药物组合物A包括以下组分：
[0012] al.任选的富含血小板的血浆（PRP);和/或脂肪干细胞培养上清液；
[0013] a2.支架材料；
[0014] a3.抗炎药物；和
[0015] a4.药学上可接受的载体；
[0016] 所述的药物组合物B包括以下组分：
[0017] bl.脂肪多能细胞组分；和/或软骨前体细胞组分；
[0018] b2.药学上可接受的载体；
[0019] 所述的药物组合物C包括以下组分：
[0020] cl.抗炎药物；
[0021] C2.药学上可接受的载体。
[0022] 在另一优选例中，所述的富含血小板的血浆是现制的或预制的。
[0023] 在另一优选例中，所述的富含血小板的血浆是自体的或异体的。
[0024] 在另一优选例中，所述的脂肪干细胞培养上清液是现制的或预制的。
[0025] 在另一优选例中，所述的脂肪干细胞培养上清液是自体的或异体的。
[0026] 在另一优选例中，所述组合物为液态组合物。
[0027] 在另一优选例中，所述的组合物是注射剂。
[0028] 在另一优选例中，所述的药学上可接受的载体是注射用载体。
[0029] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分是自体脂肪多能细胞组分或异体脂肪 多能细胞组分。
[0030] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分选自下组：从基质血管成分中纯化的 脂肪多能细胞、经培养扩增的脂肪多能细胞，或其组合。
[0031] 在另一优选例中，所述的经培养扩增的脂肪多能细胞是在无血清培养基或含血清 的培养基中进行扩增的。
[0032] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分是即时制备或冻存复苏的。
[0033] 在另一优选例中，除脂肪多能细胞外，所述的脂肪多能细胞组分还可含有选自下 组的细胞：脂肪细胞、内皮细胞、平滑肌细胞、周细胞、成纤维细胞、肥大细胞、神经细胞、月旨 肪前体细胞、淋巴细胞、血液细胞、基质细胞、巨噬细胞，或其组合。
[0034] 在另一优选例中，在所述脂肪多能细胞组分中，脂肪多能细胞数量占总细胞数量 的0· 5~100%，较佳地为1~100%，更佳地为10~100%。
[0035] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分是自体的或同种异体的。
[0036] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分具有软骨分化潜能。
[0037] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分中还含有细胞因子。
[0038] 在另一优选例中，所述的软骨前体细胞组分是自体的或同种异体的。
[0039] 在另一优选例中，所述的软骨前体细胞组分具有软骨分化潜能。
[0040] 在另一优选例中，所述的含软骨前体细胞组分中还含有细胞因子。
[0041] 在另一优选例中，所述的细胞因子选自下组：TGF-P、PDGF、VEGF、IL-1、IL-6、TNF、 IRAP、CTGF、EGF、IGF、BFGF，或其组合。
[0042] 在另一优选例中，所述脂肪多能细胞在所述组合物中的浓度为IX 103-5X 108/mL， 较佳地为 IX IO4-IX 108/mL，更佳地为 IX IO5-IX 107/mL。
[0043] 在另一优选例中，所述的脂肪多能细胞组分是⑶45-⑶235a-⑶31-⑶34+细胞，和 /或⑶45-⑶13+⑶36+⑶73+细胞富集的脂肪多能细胞组分。
[0044] 在另一优选例中，所述的软骨前体细胞组分是⑶45-⑶235a-⑶31-⑶34+细胞，和 /或⑶45-⑶13+⑶36+⑶73+细胞富集的含软骨前体细胞组分。
[0045] 在另一优选例中，所述的CD45-CD235a-CD31-CD34+细胞和/或 ⑶45-⑶13+⑶36+⑶73+细胞富集指所述的⑶45-⑶235a-⑶31-⑶34+细胞和/或 CD45-⑶13+⑶36+⑶73+细胞的含量占组分中细胞总量的15-100%。
[0046] 在另一优选例中，所述的"⑶45-⑶235a-⑶31-⑶34+"细胞指含有⑶34细胞因子 而不含有⑶45、⑶235a和⑶31细胞因子。
[0047] 在另一优选例中，所述的富含血小板的血浆选自下组：活化后的PRP，未活化PRP 液体、PRP凝胶，或其组合。
[0048] 在另一优选例中，所述富含血小板的血浆中，血小板浓度范围为 0. 5 X IO6-L 5 X IOltVmL,且所述血浆中白细胞和红细胞的总浓度为彡IX 106/mL。
[0049] 在另一优选例中，所述富含血小板的血浆中，血小板浓度范围为5X 107-5XlO8/ HlLo
[0050] 在另一优选