的存活率的确显著地降低了(如图1C所示)。因此，我们的相关实验证实了 NLR/RIP2是启动针对金黄色葡萄球菌抗菌免疫反应的关键转导途径，而非TLR所介导的途径；相比之下，TLR所介导的途径则与全身机制更加相关。
[0061]实施例2
[0062]RIP2缺陷所造成的金黄色葡萄球菌肺部感染影响早期细胞因子反应:
[0063]在感染后的早期阶段，健康适当的固有免疫反应，尤其是中性粒细胞和巨噬细胞反应，对于肺部细菌病原体的防范和根除非常重要，所以我们观测了金黄色葡萄球菌感染初期炎性细胞因子的变化情况。RIP2+和WT动物均被气管给予金黄色葡萄球菌，并于12h后进行支气管肺泡灌洗(bronchoalveolar lavage, BAL)。经过对RIP2+动物的肺泡灌洗液观测后发现，几种重要的促炎性细胞因子(包括IL-1 β、IL-6)、中性粒细胞趋化因子KC(如CXCLl)和MIP-2 (如CXCL2)的含量显著减少(如图2所示)。
[0064]实施例3
[0065]肺对于金黄色葡萄球菌的炎症反应:
[0066]本发明发明人随后研究细胞因子表达上所观测到的变化是否进一步反应在细胞炎症反应中。我们对来源于RIP2+和WT动物金黄色葡萄球菌感染12h后的支气管肺泡灌洗液中的细胞进行计数和微分，并发现在这个时间点上肺部细菌的CFU没有显著差异。但是，我们发现RIP2+小鼠的细胞总数、中性粒细胞绝对数(如图3A所示)、中性粒细胞百分t匕(如图3B所示)均有所下降。另外，肺组织匀浆中髓过氧化物酶(MPO)的活性亦大幅降低(如图3C所示)。
[0067]随后我们对WT和RIP2+动物气管给予金黄色葡萄球菌Oh和12h后的肺组织切片进行比较，未被感染的WT和RIP2+动物肥组织结构上显示正常；而在感染后，我们发现相对于RIP2+动物，同样被感染的WT动物表现出强势的细胞炎症反应，相关数据与BAL数据相符(如图4所示)。可见，RIP2+动物感染早期炎症反应的削弱很可能妨碍了细菌廓清，并在24h即导致细菌负荷的显著上升。
[0068]实施例4
[0069]IL-1R2+动物与RIP2V_动物具有类似表现:
[0070]RIP2介导NODl和N0D2的下游信号，从而通过NF_kB的激活诱导多种促炎基因的表达，如同激活pro-1L-1至IL-1 β的过程，我们因此研究从多大程度上可以用IL-1响应的缺陷来解释 RIP2+动物的表现，并对 IL-1R+ (animals deficient in IL-1receptorsignaling)进行了一系列相关实验。对RIP2+、IL-1R+和WT控制组动物进行气管给予金黄色葡萄球菌，并对他们的肺部CFU进行计数。我们发现在24h时，RIP2+和IL-1R+小鼠在细菌廓清能力(如图5A所示)和MPO水平(如图5B所示)上变化程度类似；且与RIP2+动物类似的是，IL-1R+动物在12h时中性粒细胞响应大幅削弱(如图5C所示)，可见IL-1在肺部针对金黄色葡萄球菌的中性粒细胞反应诱导和细菌廓清中起着至关重要的作用。
[0071]实施例5
[0072]给予IL-1 β能够恢复RIP2+动物对于金黄色葡萄球菌的免疫反应:
[0073]为了进一步有效证明IL-1 β在体内RIP2所介导的免疫反应的重要作用，我们将气管给予小鼠rIL-lb和气管金黄色葡萄球菌感染同时进行，并观测肺部细菌廓清和MPO响应。我们发现气管IL-1 β治疗确实强化了 RIP2+动物对于金黄色葡萄球菌的廓清能力，且24h时治疗后的RIP2+小鼠与未接受治疗的WT动物肺CFU水平相近(如图6A所示)。而相对应的是，未接受治疗的RIP2+动物相对于WT动物细菌廓清能力明显受损，IL-1 β治疗后的WT动物在肺部细菌负荷上仅略微低于未接受治疗的WT动物。另外，IL-1 β治疗加强了肺部MPO的活性(如图6Β所示)。以上数据验证了 IL-Ιβ在RIP2所介导的免疫反应的重要作用。
[0074]实施例6
[0075]IL-1对于CXC趋势因子和IL-6的调节:
[0076]在给出了 RIP+和IL-1R+动物的细胞响应和细菌清除的损伤情况比较以后，我们探寻在RIP+动物中，IL-1响应受损所带来的细胞因子表达量到何种程度。我们在气管内感染金黄色葡萄球菌12小时以后对IL-1R+动物的支气管肺泡灌洗液中的细胞因子进行检测。与RIP2+动物中类似的是，IL-1R+动物的确在CXC趋势因子、KC和ΜΙΡ2的表达量上有所降低，与IL-6—样(如图7所示)。实验结果表明，IL-1通路对于调节RIP2的影响有着重要的作用。
[0077]实施例7
[0078]巨噬细胞炎症因子的表达:
[0079]为了进一步研究IL-1是否直接导致了这些细胞因子的表达量下降，我们检测了IL-1 β和KC mRNA的时序性表达。从WT和RIP2+动物获得骨髓衍生巨噬细胞，并使用金黄色葡萄球菌对其进行刺激。我们的研究表明对于活的和热灭活细菌的响应在各时间点基本相同，所以仅给出一组数据。我们发现IL-Ιβ早在WT巨噬细胞受刺激2小时后就有表达(图8A)。在RIP+巨噬细胞中，直至6小时时表达量仍很小，但是RNA水平却与WT巨噬细胞相似。WT巨噬细胞中KC的表达量6小时内没有上升，而RIP+巨噬细胞中则始终保持初始水平(图8B)。从而从蛋白层面反应出，RIP+巨噬细胞中IL-Ιβ的水平在6小时时被削弱，可见尽管在这个时间点IL-1 β的mRNA已经处于高水平，其活性蛋白形式依然处于低水平状态。类似的，RIP+巨噬细胞中与WT巨噬细胞比较下，其KC和IL-6蛋白的诱导也显著的减少(图8C)这些结果表明，IL-1 β是激活N0D/RIP2通路后的早期响应，会诱导其他对于嗜中性粒细胞非常重要的炎症因子。
[0080]综上所述，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
[0081]上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
【主权项】
1.1L-1 β在制备用于治疗由金黄色葡萄球菌易感所引起的炎症的药物中的用途。
2.如权利要求1所述的IL-1β在制备用于治疗由金黄色葡萄球菌易感所引起的炎症的药物中的用途，其特征在于，所述炎症为RIP2或IL-1R缺陷导致的金黄色葡萄球菌易感所引起的。
3.如权利要求1所述的IL-1β在制备用于治疗由金黄色葡萄球菌易感所引起的炎症的药物中的用途，其特征在于，所述炎症为肺炎。
4.如权利要求1所述的IL-1β在制备用于治疗由金黄色葡萄球菌易感所引起的炎症的药物中的用途，其特征在于，所述药物的给药方式为气管给药。
【专利摘要】本发明涉及生物医药领域，特别是涉及IL-1β在制备用于治疗由金黄色葡萄球菌易感所引起的炎症的药物中的用途。本发明发明人提供IL-1β在制备用于治疗由金黄色葡萄球菌易感所引起的炎症的药物中的用途，并发现NOD-RIP2激酶通路以IL-1-依赖的方式在对于金黄色葡萄球菌肺部感染的宿主防御中起着关键性的作用，且进一步证实了RIP2、IL-1β在筛选用于治疗由S.aureus易感所引起的肺炎的药物中具有实际应用价值。
【IPC分类】A61P11-00, A61P31-04, A61P29-00, A61K38-20
【公开号】CN104740615
【申请号】CN201410072481
【发明人】田晓丽, 李卫东
【申请人】上海索菲里奥生物医药科技发展有限公司, 田晓丽, 李卫东
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2014年2月28日