液中杀菌1分钟，用2L无菌水冲洗干净；再放 入30 %的过氧化氢溶液中杀菌20分钟，并用无菌水冲洗10分钟。
[0098] 3、形成层组织的诱导
[0099] 将灭菌的苹果新生枝条用接种刀剥离形成层、韧皮部、皮质和表皮等组织，丢弃木 质部和髓；将获得的组织接种至新鲜的固体培养基中，以每Ig组织接种IOcm2固体培养基 的密度进行接种，在受控的暗室内25°C连续培养10天，获得形成层组织。
[0100] 4、继代培养形成层组织
[0101] 将再生的形成层组织与其他组织分离开；以每Ig组织接种IOcm2固体培养基的 密度，将再生的形成层组织接种至新鲜的固体培养基中，在受控的暗室内25°C连续培养10 天，获得愈伤组织。
[0102] 5、单细胞培养
[0103] 在1000 ml三角瓶中加入200ml液体培养基、灭菌处理的20g、直径0. 5cm的玻璃 珠；将IOg愈伤组织转移到三角瓶中；将三角瓶置于25°C、120转/分钟的摇床上进行培养， 每小时用20W的白炽灯照射10分钟；第7天，加入400ml新鲜的液体培养基至细胞密度为 其中细胞的密度为IX105/ml，然后继续培养7天；培养后用100目的不锈钢筛网过滤，除去 细胞团、玻璃珠和残渣，得到单细胞悬液，
[0104] 6、放大培养
[0105] 将单细胞悬液转移至20L生物反应器中进行大规模培养，生物反应器中容纳5L的 增殖培养基。培养第7天时，加入IOL的新鲜液体培养基，继续培养后获得细胞悬液。
[0106] 7、冻干粉的制备
[0107] 苹果干细胞悬液用Ium过滤器过滤，去掉培养基，收获截留的黏胶状细胞取出；将 细胞放入_30°C的冰箱内预冻3小时；放入液氮罐中超低温速冻2小时；取出解冻30分钟 后，再放入-30°C冰箱内预冻和液氮罐内速冻，依次2遍；将细胞取出，室温下维持10分钟， 入低温冷冻真空干燥机内，真空冷冻干燥后，高速粉碎成60目冻干粉。
[0108] 实施例2改善睡眠组合物的制备
[0109] 先将苹果干细胞冻干粉100g、酸枣仁提取物100g、Y_氨基丁酸40g，分别进行粉 碎（其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和Y-氨基丁酸进行普通研磨），过 100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
[0110] 实施例3改善睡眠组合物的制备
[0111] 先将苹果干细胞冻干粉l〇〇g、酸枣仁提取物l〇〇g、y_氨基丁酸75g，分别进行粉 碎（其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和Y-氨基丁酸进行普通研磨），过 100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
[0112] 实施4改善睡眠组合物的制备
[0113] 先将苹果干细胞冻干粉l〇〇g、酸枣仁提取物150g、Y-氨基丁酸40g，分别进行粉 碎（其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和Y-氨基丁酸进行普通研磨），过 100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
[0114] 实施例5改善睡眠组合物的制备
[0115] 先将苹果干细胞冻干粉l〇〇g、酸枣仁提取物150g、Y-氨基丁酸75g，分别进行粉 碎（其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和Y-氨基丁酸进行普通研磨），过 100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
[0116] 实施例6改善睡眠组合物的制备
[0117] 先将苹果干细胞冻干粉150g、酸枣仁提取物100g、Y-氨基丁酸40g，分别进行粉 碎（其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和Y-氨基丁酸进行普通研磨），过 100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
[0118] 实施例7改善睡眠组合物的制备
[0119] 先将苹果干细胞冻干粉150g、酸枣仁提取物100g、Y-氨基丁酸75g，分别进行粉 碎（其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和Y-氨基丁酸进行普通研磨），过 100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
[0120] 实施例8改善睡眠组合物的制备
[0121] 先将苹果干细胞冻干粉150g、酸枣仁提取物150g、Y-氨基丁酸40g，分别进行粉 碎（其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和Y-氨基丁酸进行普通研磨），过 100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
[0122] 实施例9改善睡眠组合物的制备
[0123] 先将苹果干细胞冻干粉150g、酸枣仁提取物150g、Y-氨基丁酸75g，分别进行粉 碎（其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和Y-氨基丁酸进行普通研磨），过 100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
[0124] 实施例10改善睡眠组合物的制备
[0125] 先将苹果干细胞冻干粉100g、酸枣仁提取物100g、y-氨基丁酸52g，分别进行粉 碎（其中，对苹果干细胞冻干粉液氮研磨，酸枣仁提取物和Y-氨基丁酸进行普通研磨），过 100目筛，然后将已粉碎、过筛的物料于混合机中混合均匀。
[0126] 实施例11改善睡眠片剂的制备
[0127] 用纯化水将9g聚维酮K30配制成质量分数为7%的水溶液，作为粘合剂；4°C条 件下，240g将实施例2提供的改善睡眠的组合物、60g微晶纤维素、45g预胶化淀粉、18g交 联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒；放置12小时后在干燥箱中进行干 燥，干燥后的颗粒采用快速整理剂进行整粒，经整粒后与I. 5g二氧化硅、3g硬脂酸镁混合 后，采用压片机进行压片制得改善睡眠的片剂。
[0128] 实施例12改善睡眠片剂的制备
[0129] 用纯化水将Ilg聚维酮K30配制成质量分数为8%的水溶液，作为粘合剂；4°C条 件下，275g将实施例3提供的改善睡眠的组合物、72g微晶纤维素、58g预胶化淀粉、22g交 联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒；放置12小时后在干燥箱中进行干 燥，干燥后的颗粒采用快速整理剂进行整粒，经整粒后与2g二氧化硅、3. 5g硬脂酸镁混合 后，采用压片机进行压片制得改善睡眠的片剂。
[0130] 实施例13改善睡眠片剂的制备
[0131] 用纯化水将12g聚维酮K30配制成质量分数为9%的水溶液，作为粘合剂；4°C条 件下，290g将实施例4提供的改善睡眠的组合物、60g微晶纤维素、60g预胶化淀粉、18g交 联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒；放置12小时后在干燥箱中进行干 燥，干燥后的颗粒采用快速整理剂进行整粒，经整粒后与3g二氧化硅、6g硬脂酸镁混合后， 采用压片机进行压片制得改善睡眠的片剂。
[0132] 实施例14改善睡眠片剂的制备
[0133] 用纯化水将13g聚维酮K30配制成质量分数为10%的水溶液，作为粘合剂；4°C条 件下，325g将实施例5提供的改善睡眠的组合物、86g微晶纤维素、64. 5g预胶化淀粉、26g 交联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒；放置12小时后在干燥箱中进行 干燥，干燥后的颗粒采用快速整理剂进行整粒，经整粒后与2g二氧化硅、4. 3g硬脂酸镁混 合后，采用压片机进行压片制得改善睡眠的片剂。
[0134] 实施例15改善睡眠片剂的制备
[0135] 用纯化水将12g聚维酮K30配制成质量分数为9%的水溶液，作为粘合剂；4°C条 件下，290g将实施例6提供的改善睡眠的组合物、58g微晶纤维素、62g预胶化淀粉、21g交 联羧甲基纤维素钠混合，加入所述粘合剂制软材后制粒