西番莲种子提取物及含有其的化妆品、药物、皮肤病学和营养学组合物的制作方法_4

文档序号:8926172阅读:来源:国知局
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[0190] 实施例3 :用于口服施用的组合物
[0191] 紫果西番莲提取物可以有利地合并入口服组合物中,典型地合并入允许每天施用 50mg至200mg紫果西番莲提取物的组合物中。
[0192] 1/软胶囊形式的抗妊娠纹组合物
[0194] 以每天四至六粒500mg胶囊施用该组合物。
[0195] 2/抗脱发片剂
[0196]
[0198] 3/纤体粉末棒的实施例

[0206] 5/香草味谷物棒的实施例
[0207]
[0210] 实施例4 :枏据本发明的提取物的牛物活件的测试
[0211] 实施例1的西番莲的肽和糖的提取物在以下实施例中被称为西番莲水解产物。
[0212]A-在lH常人角质细朐(KHN)h.的活件筛诜
[0213] 通过测试KHN培养物上基因表达的调变来评估西番莲水解产物的生物活性:在含 有43376个基因序列的安捷伦全基因组微阵列芯片上研宄表达谱。
[0214] a_材料和方法
[0215] 培养KHN 24小时,然后以0.05%干物质浓度用西番莲水解产物处理。以交错方式 处理角质细胞(72h、24h、6h)以使得每个分析点被培养相同的时间,72+24小时。
[0216] 通过定量RT - PCR评估所选择的基因的表达。
[0217] 针对每个基因和每个处理条件计算处理样品对比于对照的强度比(Ri)。
[0218] b _ 结果
[0219] 被认为是显著的结果是那些每个动力学时间点但也是在两个连续的时间3_6h或 6-2处处氏>2的结果。
[0220] 显示如下:
[0221] 抗凋亡作用,表示为西番莲水解产物抑制转录因子ATF3,其本身为GADD家族的促 凋亡基因,和其它应激可诱导的促凋亡基因例如DDIT4、FANCE、IRS2及其靶点F0X03的转录 因子。
[0222] 对于细胞增殖的活化剂作用(effet activateur),其通过诱导细胞周期蛋白 CCNB1、CCNDl和细胞周期蛋白依赖性激酶CDKl的基因而发生。该观察结果由诱导在各种 细胞活化相关机制中涉及的基因支持,所述细胞活化相关机制例如DNA (法语缩写为ADN) 复制(RFC4、TIPIN)、有丝分裂(CDCA7、CDCA8)、剪接(SF3A3、SRSF7)、RNA (法语缩写为 ARN) 转录(POPl)和蛋白质翻译(WDR3、N0P56、MRT04)。
[0223] 对于留醇生物合成的活化剂作用,提示对于角质层且因此对于表皮屏障的保护活 性。其通过激活以下基因发生:ACATI、ACAT2、HMGCSI、HMGCR、MVD、FDPS、FDFTI、SQLE、LSS、 MSM01/SC4M0L、DHCR、EBP、DHCR7、LIPA 和 SOATl。
[0224] 对于抗氧化机制的活化剂作用,其通过诱导金属硫因MT1A、MT1B、MT1E、MT1F、 1!16、]\0'111、]\0'比、]\0'1]\1、]\0'1乂、]\0'24,刺激谷胱甘肽生物合成中涉及的几种酶 :65144、651]\0、 MGST2、GPX1、GPX2、GPX8、GSS、PRDX1或超氧化物歧化酶SODl的基因,和刺激MAFB、ATF3和 JUN编码的几种转录因子的基因,刺激通过结合至抗氧化反应元件(ARE)和缺氧反应元件 (HRE)基序对于氧化应激反应很重要的因子的基因而发生。
[0225] B-在lH常人纤维母细朐(FHN)h筛诜活件
[0226] 通过测试FHN培养物上基因表达的调变评估西番莲水解产物的生物活性。因此, 在西番莲水解产物的存在下于培养基中,通过qRT -PCR研宄真皮生物学中涉及的46个基 因的表达、结蹄组织的重建和老化、以及表皮关键功能中涉及的46个基因,所述表皮关键 功能例如与皮肤含水量、抗氧化反应、或黑色素细胞着色有直接关系的屏障功能。
[0227] a -材料和方法
[0228] 将西番莲水解产物稀释于培养基中。用0. 01%和0. 05%西番莲水解产物处理FHN 培养物24小时(使用对照分子,TGF M)。应用结束时,通过qRT - PCR分析基因表达的差 另IJ。由西番莲水解产物诱导的基因表达的改变表示为相对于对应于未经处理的培养物的条 件的相对数量(RQ)(如果RQ>1 :刺激基因表达,和RQ〈1 :抑制基因表达)。
[0229] b _ 结果
[0230] 对于抗氣化机制的活化剂作用
[0231] 0. 01 %西番莲水解产物诱导MSRA (线粒体肽蛋氨酸亚砜还原酶A)(-种已知具有 抗氧化能力的线粒体酶)的基因表达。
[0232] 相似地,0. 05%西番莲水解产物诱导NQOl (NAD(H)脱氢酶醌1)( 一种具有与超氧 化物歧化酶相同活性的抗氧化酶)的基因表达。
[0233]通过增加MSQRA和NQOl,西番莲水解产物使得人真皮的纤维母细胞对于氧化损伤 更耐受,所述氧化损伤是细胞老化的原因从而使皮肤老化。
[0234] 对于细朐外基质的化合物的作用
[0235] 0. 01 %和0. 05%西番莲水解产物诱导编码多配体聚糖1的SDCl基因的表达,所述 多配体聚糖1是组织内聚力中起决定性作用的跨膜蛋白聚糖。
[0236] 表 1
[0237]
[0238] C-在黑化的重律皮肤h筛诜活件
[0239] 通过在黑化的重建皮肤上测试基因表达调变评估西番莲水解产物的生物活性。因 此,在西番莲水解产物的存在下于培养基中,通过qRT_PCR研宄真皮生物学中涉及的46个 基因的表达、结蹄组织的重建和老化、以及表皮关键功能中涉及的46个基因,所述表皮关 键功能例如与皮肤含水量、抗氧化反应、或黑色素细胞着色有直接关系的屏障功能。
[0240] a-材料和方法
[0241] 将西番莲水解产物稀释于培养基中。用0.01 %和0. 05%西番莲水解产物处理皮 肤样品24小时(使用对照分子,TGFM)。应用结束时,通过qRT-PCR分析基因表达的差 另IJ。由西番莲水解产物诱导的基因表达的改变表示为相对于对应于未经处理的培养物的条 件的相对数量(RQ)(如果RQ>1 :刺激基因表达,和RQ〈1 :抑制基因表达)。
[0242] b_ 结果
[0243] 对于直皮/表皮内聚力中涉及的基闵的作用
[0244] 0. 05%西番莲水解产物诱导LAMC2(编码层粘连蛋白C2的基因)的表达;因此西 番莲水解产物能够有助于加强真皮_表皮接合并因此促进皮肤的紧致。
[0245] 对于皮肤屏障功能中涉及的基闵的作用
[0246] 0.05%西番莲水解产物诱导编码外皮蛋白(IVL)的基因的表达,所述外皮蛋白是 一种在角质细胞启动和成熟中涉及的角膜包膜的结构蛋白,因此其在皮肤屏障功能中起重 要作用。其还刺激水合作用和屏障功能中也涉及的丝聚合蛋白(FLG)基因的表达。
[0247] 对于其灾基闵的作用
[0248] 西番莲水解产物减少黑色素生成过程中涉及的MClR的表达,炎症应答中涉及的 PTGS2的表达,和BIRC5,抗凋亡因子和干细胞标记物的表达。
[0249] 表 2
[0250]
[0251] D.对于人脂肪组织脂类分解的作用
[0252] 人白色脂肪组织通过向生物体的其它组织提供由脂肪细胞脂类分解过程释放的 脂肪酸形式的能量分子而发挥基本代谢功能。脂肪细胞通过储存在脂肪酸中的三酸甘油酯 的水解和甘油调动其能量储备。因此,血液中释放的脂肪酸可以被其它组织用作能量来源。
[0253] 通过分析在三维系统中培养的储存在成熟人脂肪细胞中的三酸甘油酯水解期间 释放的甘油来评估西番莲水解产物对于脂肪细胞脂类分解的作用。
[0254] a)材料和方法
[0255] 在西番莲水解产物的存在下,于37°C孵育从四名正常体重或超重女性供者的皮下 脂肪组织的活组织检查分离的成熟脂肪细胞4小时。使用比色法分析释放的甘油,并且将 获得的值归一化为DNA的量。通过单因素方差分析和随后的邓尼特检验(Dunnett's test) 对结果进行统计学上比较。
[0256] b)结果
[0257] 结果呈现于下表中:
[0258]表 3
[0261] 0.005%西番莲水解产物显著刺激甘油释放,显示对于脂肪细胞脂类分解的活化 剂作用。
[0262] E.抗酪氨酸酶活性
[0263] 酪氨酸酶是黑色素合成中的关键酶。该酶的特异性抑制剂能够导致黑色素合成的 抑制,因此产生脱色作用。
[0264] 评估西番莲水解产物对于从人黑色素细胞提取的酪氨酸酶的活性
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