（无细胞试 验）。
[0265] a)材料和方法
[0266] 将西番莲水解产物和测试标准物（曲酸）与酶提取物（酪氨酸酶）放在一起并在 冰上孵育10分钟。在孵育结束时，加入底物L - DOPA(2mM)并将样品于37°C孵育1小时。 通过比色法（在540nm处读取光密度）评估酶活性。结果表示为酪氨酸酶活性的百分比并 且使用学生t检验对结果进行统计学上比较。
[0267] b)结果
[0268] 结果呈现于下表：
[0269] 表 4
[0270]
[0271] 西番莲水解产物以清楚且浓度依赖的方式抑制酪氨酸酶的酶活性（IC5tl = 0. 16% ) 〇
[0272] F.对抗氧化应激的保护作用
[0273] 无论是内源性诱导还是外源性诱导（烟草使用、大气污染、UV辐射）的氧化应激 均是很多皮肤疾病的原因。事实上，通过产生自由基，氧化应激能够改变皮肤细胞的各种成 分：蛋白质、脂质、细胞核和线粒体DNA。在经历氧化应激的细胞中通过首先评估西番莲水 解产物调节自由基产生的能力和其次评估其对抗脂质的过氧化反应的保护作用，来确认西 番莲水解产物的抗氧化作用。
[0274] 1.对角质细胞中活性氧产生的作用
[0275] 通过测量产生的活性氧的量评估西番莲水解产物对于由角质细胞中的过氧化氢 (H2O 2)产生的氧化应激的抗氧化作用。该测试基于破坏活性氧（ROS)并与活性氧接触发荧 光的探针（DCFH - DA)的使用。因此，发射的荧光与对于氧化应激反应的细胞产生的ROS的 量成比例。
[0276] a)材料和方法
[0277] 在西番莲水解产物或参照分子：10 y M槲皮素或500 y M维生素C的存在下，将正 常人角质细胞预孵育24小时。然后，仍然在西番莲水解产物或参照分子的存在下，在探针 DCFH - DA存在下将细胞孵育1小时，然后用100 y M H2O2处理20分钟。通过测量发射荧光 进行ROS分析。将结果归一化为使用平行进行的中性红摄入试验确定的活细胞数目。因 此发射的ROS的量表示为荧光强度（DFU)/由性红试验产生的光密度（OD 54tl)(法语缩写为 DO54tl)。通过单因素方差分析和随后的图基检验（Tukey' s test)对结果进行统计学上分 析。
[0278] b)结果
[0279] 结果呈现于下表：
[0280]表5
[0281]
[0282] 西番莲水解产物强烈地且以非常显著的方式抑制由H2O2应激诱导的ROS的产生。
[0283] 2.对于脂质过氧化反应的保护作用
[0284] 在UV-辐射的Jurkat细胞中评估西番莲水解产物对于脂质过氧化反应的保护作 用。
[0285] a)材料和方法
[0286] 在西番莲水解产物或参照物（50 y M BHT)存在或不存在下，在特异性测量脂质过 氧化物的荧光探针（Cll-氟）的存在下，孵育Jurkat细胞45分钟。该荧光探针是融入膜 的脂质类似物并且当被过氧化时其荧光强度降低。然后，在西番莲水解产物或参照物存在 下，用UV辐射（UVB 240mJ/cm2+UVA 3. 5J/cm2)细胞。辐射结束时，在用流式细胞术分析前， 于37°C孵育细胞30分钟。获得的荧光强度结果表示为被辐射对照的百分比。
[0287] b)结果
[0288] 结果呈现于下表中：
[0289]表6
[0291] 0.05%西番莲水解产物保护细胞免于由UV辐射诱导的脂质过氧化反应（24%保 护）。
【主权项】
1. 组合物，其含有西番莲种子，特别是粉色西番莲Passifloraincarnata种子或紫果 西番莲Passifloraedulis种子，有利地紫果西番莲种子的肽和糖的提取物作为活性剂，和 如果需要的合适的赋形剂。2. 根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，通过酶水解，有利地在至少一种蛋白酶 和至少一种碳水化物酶的存在下，获得所述肽和糖的提取物。3. 根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，在所述肽和糖的提取物中，所述肽 具有3500Da以下的大小。4. 根据前述权利要求任一项所述的组合物，其特征在于，在所述肽和糖的提取物中，所 述肽/糖的重量比在0. 75以上，优选在1和2之间。5. 根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述肽和糖的提取物含有按重量计 20 %至70 %，有利地30 %至65 %，典型地55 %的肽。6. 根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述肽和糖的提取物含有按重量计 20%至60%，有利地30%至55%，典型地40%的糖。7. 根据前述权利要求任一项所述的组合物，其含有相对于所述组合物的总重量按重量 计0. 001 %至10%，有利地0. 01 %至5%的所述西番莲种子的肽和糖的提取物，其中所述提 取物的重量以干提取物表示。8. 根据前述权利要求任一项所述的组合物，其进一步含有除了西番莲种子的肽和糖的 提取物以外的一种其它活性剂，所述一种其它活性剂有利地选自： -润肤剂、保湿活性剂、角蛋白合成活化剂、角质调节剂、角质剥脱剂、重建皮肤屏障的 试剂（皮脂合成活化剂）、过氧化物酶体增殖剂-激活受体（PPAR)激动剂、RXR或LXR激动 剂、皮脂调节剂、抗刺激剂、舒缓剂、抗炎剂、抗氧化剂和抗老化剂、脱色剂或低脱色剂、着色 剂、脂解剂或脂肪生成抑制剂或抗橘皮组织或还原剂、无机或有机滤光剂和防晒剂、抗真菌 化合物、防腐剂、抗细囷剂、生兀和生囷、抗生素、免疫调节剂； _植物提取物；和 -噁唑啉类。9. 制备西番莲种子，特别是粉色西番莲种子或紫果西番莲种子，有利地紫果西番莲种 子的肽和糖的提取物的方法，其包括至少一个酶水解步骤。10. 根据权利要求9所述的方法，其特征在于，其包括以下连续的步骤： a) 将磨碎的种子分散于水相，然后 b) 有利地通过加入至少一种蛋白酶和至少一种碳水化物酶，酶处理步骤a)中获得的 水性分散体，然后 c) 如果需要，热处理以使酶变性，和 d) 在步骤b)或c)结束时，收集肽和糖的提取物。11. 根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述酶处理接着包括加入碳水化物酶 的步骤bl)，所述碳水化物酶有利地选自果胶酶、纤维素酶、阿聚糖酶、半纤维素酶、木聚糖 酶和0 _葡聚糖酶，然后包括加入蛋白酶的步骤b2)。12. 根据权利要求10至11任一项所述的方法，其特征在于，在步骤a)之前将种子脱 脂。13. 根据权利要求10至12任一项所述的方法，其特征在于，其在步骤b)，或者如果需 要的步骤c)，和步骤d)之间包括另外的过滤或离心步骤，任选地然后是超滤、渗滤或纳滤。14. 根据权利要求13所述的方法，其特征在于，其包括15kDa超滤的步骤。15. 能够通过根据权利要求9至14任一项所述的方法获得的西番莲种子，特别是粉色 西番莲种子或紫果西番莲种子，有利地紫果西番莲种子的肽和糖的提取物，其含有按重量 计10 %至90 %的肽和按重量计10 %至90 %的糖。16. 根据权利要求15所述的提取物，其含有按重量计20 %至70%，有利地30 %至 65 %，典型地55 %的肽和按重量计20 %至60 %，有利地30 %至55 %，典型地40 %的糖。17. 根据权利要求15或16所述的提取物或根据权利要求1至8中任一项所述的组合 物，其用于预防和/或治疗： -皮肤和/或粘膜和/或皮肤附属器的疾病或病理学病症， -血管疾病， -脂肪组织改变， -氧化应激。18. 皮肤和/或皮肤附属器和/或粘膜的化妆品护理方法，其目的是改善皮肤和/或皮 肤附属器和/或粘膜的状况和/或外观，所述方法包括施用根据权利要求1至8中任一项 所定义的化妆品组合物或根据权利要求16或17中任一项所定义的提取物。
【专利摘要】本发明涉及含有西番莲种子，优选紫果西番莲种子提取物的组合物。所述组合物有利地为化妆品、药物、皮肤病学或营养学组合物。本发明的主题还为提取西番莲种子优选紫果西番莲种子提取物的方法，以及还为可以通过所述方法获得的提取物。本发明还涉及所述组合物或所述提取物，其用于预防或治疗皮肤、粘膜或皮肤附属器的疾病或病理学病症，用于预防或治疗血管疾病，用于对抗氧化应激，或者用于预防或治疗脂肪组织改变。最后，本发明涉及皮肤、皮肤附属器或粘膜的化妆品护理方法，其目的是改善皮肤、皮肤附属器或粘膜的状况或外观，其包括施用所述组合物或所述提取物。
【IPC分类】A61P17/00, A61Q19/06, A61K8/97, A61P9/00, A61K36/185
【公开号】CN104902962
【申请号】CN201380069649
【发明人】P·姆西卡, S·勒克莱尔-比安费, S·德布罗克, S·布雷迪夫, S·加尼耶
【申请人】科学发展实验室
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2013年12月18日
【公告号】CA2895218A1, EP2934702A1, WO2014095983A1