] 实施例16对中药提取物的质量控制
[0095] 1、方法
[0096] 1. 1中药提取物中总黄酮的含量测定方法：精密称取柚皮苷对照品5mg，置50ml容 量瓶中，甲醇定容至刻度，作为对照品溶液，再分别吸取对照品溶液〇. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、 3. 0ml于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，以甲醇为空白，在283nm处测吸收度，以吸收 度（A)为纵坐标，浓度（C)为横坐标，经回归得标准曲线方程为A= 0. 0292C-0. 0577,r= 0. 9998,线性范围为5. 0~30yg?mLi。精密称取实施例1和4所得的中药提取物10mg， 置50ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，再精密吸取lml于10ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，于 283nm处测定吸收度。按回归方程计算总黄酮含量。
[0097] 1. 2中药提取物中指标性成分新北美圣草苷（neoeriocitrin)的含量测定方法
[0098] 1. 2. 1 色谱条件：Waters2695 高效液相色谱仪，Waters2996Photodiode ArrayDetector检测器，EmpowerPro软件系统，自动进样；色谱柱为Hypersil 0DS2(250mmX4.6mm，5ym，大连依利特公司）；流动相为乙睛-0? 1%磷酸水溶液（20 :80); 流速为1.OmL/min检测波长为283nm;柱温为30°C;进样量为20yL。在上述色谱条件下， 新北美圣草苷分离度良好。
[0099] 1.2. 2线性关系考察：精密称取新北美圣草苷对照品10mg，置10mL容量瓶中，用 甲醇溶解并定容至刻度。分别精密量取新北美圣草苷对照品溶液〇. l、〇. 25、0. 5、1. 0、2. 0、 4.OmL，置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。将此系列浓度的新北美圣草苷溶液 按上述色谱条件进样分析。以新北美圣草苷的峰面积为纵坐标（Y)，质量浓度为横坐标（X) 进行线性回归，得回归方程：Y=2. 35X105-183(r= 0. 9999)，新北美圣草苷的质量浓度在 10-400yg?mL1范围内与峰面积线性关系良好。
[0100] 1. 2. 3样品溶液制备及测定：精密称取实施例1和4所得中药提取物lOOmg，置 100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。按上述色谱条件进样分析，测定峰面积，按回归 方程计算新北美圣草苷含量。
[0101] 2、结果
[0102] 2. 1中药提取物中总黄酮的含量测定结果：经测定，实施例1所得的中药提取物的 总黄酮含量为71. 38%，实施例4所得的中药提取物的总黄酮含量为63. 29%。
[0103] 2. 2中药提取物中指标性成分新北美圣草苷（neoeriocitrin)的含量测定结果： 经测定，实施例1所得的中药提取物的新北美圣草苷含量为16. 41%，实施例4所得的中药 提取物的新北美圣草苷含量为14. 27%。
[0104] 尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不 脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本 发明的范围由权利要求及其等同物限定。
【主权项】
1. 一种用于预防和治疗阿尔茨海默病的中药提取物的制备方法，其特征在于，所述制 备方法如下： (1) 原料粉碎：选取骨碎补干燥药材，粉碎成粗粉； (2) 提取：使用提取溶剂对步骤（1)获得的粗粉进行提取；具体操作为：使用常规中药 提取方法对步骤（1)获得的粗粉进行提取，提取次数为1-3次，每次提取溶剂用量为药材质 量的2-10倍，浸泡过夜，每次提取0. 5-2h，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏； (3) 精制：利用液-液有机溶剂萃取法或大孔吸附树脂柱层析法对步骤（2)获得的浸 膏进行精制； 其中，使用大孔吸附树脂柱层析法精制的过程如下：首先将步骤（2)中所得的所述浸 膏分散溶解于水中，使浸膏水溶液浓度为〇. 01-lg/mL ;然后将浓度为0. 01-lg/mL的浸膏水 溶液通过大孔吸附树脂，上样量以浸膏量与树脂量之比计算为1 :1〇,吸附流速为3-9BV/h， 树脂柱径高比为I :3-1 :20,上样液浓度为0. 01-lg/mL，水或者0-5 %乙醇洗脱1-3倍树脂 体积进行除杂，除杂流速为3-9BV/h，50-95%乙醇洗脱3-7倍树脂体积，洗脱流速为3-9BV/ h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明的中药提取物； 使用液-液有机溶剂萃取法精制的过程如下：首先将步骤（2)中所得的所述浸膏分散 溶解于水中，使浸膏水溶液浓度为〇. 01-lg/mL ;然后将浓度为0. 01-lg/mL的浸膏水溶液与 中等极性有机溶剂充分混合萃取，溶液_溶剂体积比为0.5 静置分层后，收集有机 溶剂层，萃取1-3次，收集有机溶剂层，回收溶剂，减压干燥，即得本发明的中药提取物； 所述中药提取物中总黄酮含量为20-90%，所述中药提取物中新北美圣草苷含量为2-20 % 〇2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述中药提取物中总黄酮含量为 40-80 %〇3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述提取溶剂是水、或醇类。4. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂为非极性、弱极 性、中等极性大孔吸附树脂中的任意一种。5. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，使用液-液有机溶剂萃取法精制时， 先用非极性有机溶剂除杂质，具体步骤为：将步骤（2)中所得的浸膏分散溶解于水中，使浸 膏水溶液浓度为〇. 01-lg/mL;然后将浓度为0. 01-lg/mL的浸膏水溶液与非极性有机溶剂 充分混合萃取，溶液-溶剂体积比为0. 5 :1-5 :1，静置分层后，除去有机溶剂层，萃取1-3 次，剩余水溶液层再使用中等极性有机溶剂进行萃取精制。6. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法如下：取骨碎补干燥药 材5000g，用20L 60%乙醇浸泡过夜，加热回流提取2h，过滤，收集滤液，药渣再用IOL 60% 乙醇提取两次，合并滤液，减压浓缩得到相对密度为1. 15浸膏；将浸膏分散溶解于水中，使 浸膏水溶液浓度为lg/mL，上样于AB-8型大孔吸附树脂柱中，上样量以浸膏量与树脂量之 比计算为1:10,吸附流速为3BV/h，静态吸附30min，以3倍树脂体积的水进行除杂，除杂流 速为5BV/h，然后以5倍树脂体积的75%乙醇洗脱，洗脱流速为5BV/h，收集乙醇洗脱液，回 收溶剂，减压干燥，即得所需的中药提取物；所述中药提取物中总黄酮含量为71. 38%、所 述中药提取物中新北美圣草苷含量为16. 41 %。7. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法如下：取骨碎补干燥药 材5000g，用20L 60%乙醇浸泡过夜，加热回流提取2h，过滤，收集滤液，药渣再用IOL 60% 乙醇提取两次，合并滤液，减压浓缩得到相对密度为1. 15浸膏；将浸膏分散溶解于水中，使 水溶液浓度为lg/mL，与等体积石油醚充分混合萃取，静置分层后，除去有机溶剂层，萃取3 次，剩余水溶液层再与等体积正丁醇充分混合萃取，静置分层后，收集有机溶剂层，萃取3 次，收集有机溶剂层，回收溶剂，减压干燥，即得所需的中药提取物；所述中药提取物中的总 黄酮含量为63. 29%，所述中药提取物中的新北美圣草苷含量为14. 27%。8. 利用权利要求1-7中任一项所述的制备方法制备的中药提取物。9. 权利要求8所述的中药提取物在制备预防和治疗学习记忆障碍的保健品或药物制 剂中的应用。10. 权利要求8所述的中药提取物在制备预防和治疗阿尔茨海默病保健品或药物制剂 中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种用于预防和治疗阿尔茨海默病的中药提取物、制备方法及其应用。本发明通过水或者有机溶剂提取获得粗提物，之后利用有机溶剂萃取法或者大孔树脂吸附柱层析法对上述粗提物进行纯化，即可获得所需的中药提取物，该中药提取物中总黄酮含量为20-90％，新北美圣草苷含量为2-20％。本发明的中药提取物经实验证明对阿尔茨海默病患者的典型症状-学习记忆障碍的疗效更好、明显优于骨碎补药材或骨碎补的简单水提物，而且毒副作用小、价格便宜，适于临床普及使用。
【IPC分类】A23L1/29, A61P25/28, A61K36/126
【公开号】CN105055462
【申请号】CN201510489912
【发明人】张宁, 单军娜, 耿放, 韩振远, 顾婷, 刘俊岑, 于修芳
【申请人】张宁
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年8月11日