一种具有降尿酸活性的侧柏叶多酚及其制备方法和应用
【专利说明】一种具有降尿酸活性的侧柏叶多酚及其制备方法和应用
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技术领域
[0002]本发明涉及天然提取物领域，具体涉及一种具有降尿酸活性的侧柏叶多酚的制备方法及其应用。
【背景技术】
[0003]侧说IPlatycIadus orientails (L.) Franco),别名香柯树、香树、扁桧、香柏、黄柏，隶属于裸子植物门(Gymnospermae)^松柏纲(Coniferopsida)、松杉目(Ctwi/kraJes)、柏科(侧柏属6.)。下级分类有金塔柏、金黄球柏、千头柏、窄冠侧柏。侧柏嫩枝、叶及果皆可入药，其味苦、湿，性微寒，入肺、肝、大肠经，有凉血止血、乌须发、止咳喘的功效。在古代，侧柏的枝叶是备受道家推崇的延年上品，具有重要的食疗养生价值。明代李时珍《本草纲目》记载侧柏叶“治风痹关节作痛”。若感受风热之邪，与湿相并，而致风湿热合邪为患。风湿热痹，症见关节疼痛、灼热红肿、发热、口渴等，可用侧柏叶，苦寒清热，祛风降湿而通络止痛。
[0004]侧柏叶所含的主要成分为多酚类化合物、黄酮类化合物、鞣质及挥发油类等，相关活性研究包括抗肿瘤作用、抗炎作用、抑菌作用、改善睡眠作用、神经保护作用、抗红细胞氧化作用等。
[0005]蒋继宏等对侧柏叶、种皮及种子的挥发油进行了抗人肺癌细胞实验，结果表明侧柏叶、种皮和种子的挥发油对肺癌细胞NC1-H 460有明显抑制作用，抑制率分别为86.24%、47.80%和97.73% ;并且可从侧柏叶挥发油中重结晶得到纯度高达97.06%的雪松醇，其对人肺癌细胞NC1-H 460半致死浓度为44.98 μ g/mL (林业科学研究，2006，19 (3):311-315)。该论文与本发明所报道内容差异较大，所用原料部位及目标成分不同。
[0006]梁统等以二甲苯致炎小鼠耳片肿胀及角叉菜胶诱发大鼠足爪肿胀模型研究了侧柏总黄酮的抗炎作用及机制，发现侧柏总黄酮具有较强的抗炎作用，其对中性粒细胞花生四烯酸代谢产物白三烯B4 (LTB4)、5-羟廿碳四烯酸(5-HETE)生物合成及β -葡糖苷酸酶释放具有抑制作用(中国药理学通报，2005，19(12): 1407-1410)。该论文主要关注侧柏总黄酮的抗炎作用，与本
【发明内容】
差异较大。
[0007]李园园等采用菌丝生长速率法测定了侧柏叶、小枝、球果和种子4个不同部位乙醇提取物对21种植物病原真菌的抑菌活性，其中侧柏叶提取物的抑菌效果最好，对供试葡萄白腐病菌、葡萄黑痘病菌、番茄绵腐病菌和青霉病菌的EC5。分别为:5.424,3.186,8.913和19.000 g/L (西北植物学报，2008，28(5): 1056-1060)。该论文主要研究侧柏不同部位(叶、枝、果和种子等)，活性重点为抑菌活性，不同于本
【发明内容】
。
[0008]王连萍研究了侧柏叶黄酮的提取和纯化工艺，优化得到的工艺条件为:以70%乙醇提取侧柏叶黄酮，利用溶剂萃取法将侧柏叶醇提取液分为4个部位，测定α -葡萄糖苷酶抑制活性，结果发现乙酸乙酯部位活性最高；并利用中低压柱层析法对乙酸乙酯部位进行成分分析，得到2个化合物即槲皮苷和穗花杉双黄酮，测定α -葡萄糖苷酶抑制活性，结果显示槲皮苷抑制作用不明显，而穗花杉双黄酮活性较高(吉林农业大学2012年硕士学位论文)。该论文与本发明所报道提取方法及纯化方法不同，目标化学成分亦不同。
[0009]专利申请公开号为CN104069135Α的专利公开了 “一种侧柏叶总黄酮的提取工艺”，公开日期为2014-10-01，申请人为南京泽朗医药科技有限公司。该专利发明一种匀浆-微波协同提取侧柏叶总黄酮的方法，其特点是以匀浆法除去脂溶性物质，再采用微波提取侧柏叶总黄酮，该公开专利与本发明所用提取方法不同，目标化学成分亦不同，且未涉及降尿酸功效。
[0010]专利申请公开号为CN201310102863.5的专利公开了 “一种扁柏双黄酮的制备方法”，公开日期为2013-06-05，申请人为南京中医药大学。方法如下:取侧柏叶，加入其质量5-8倍量体积的石油醚加热回流1~3小时，滤过，取滤渣加水后投入微波萃取装置中进行萃取、过滤、浓缩，通过大孔吸附树脂吸附，水洗脱除杂，然后以60~80%乙醇洗脱，洗脱液减压回收乙醇并浓缩，加到聚酰胺层析柱上，以比例为3:1的二氯甲烷甲醇混合溶剂作为洗脱剂洗脱，收集对应于聚酰胺薄膜上Rf= 4-4.5的流份，回收溶剂，加入丙酮结晶，洗涤、干燥。该公开专利与本发明所用提取方法不同，目标化学成分亦不同，且未涉及降尿酸功效。
[0011]专利申请公开号为CN201310360308.2的专利公开了 “一种高从侧柏叶中提取扁柏双黄酮的方法”，公开日期为2013-12-18，申请人为南京标科生物科技有限公司。该发明公开了一种从侧柏叶中提取扁柏双黄酮的方法:取侧柏叶粉碎加入饱和石灰水浸泡提取，提取液用超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩；浓缩液调节PH至3~5后加入大孔树脂柱吸附，乙醇溶液梯度洗脱，洗脱液浓缩调节pH3~5结晶；滤出结晶用50%~80%甲醇溶液溶解，浓缩至醇浓度至10°/『30%，加入大孔树脂吸附，乙醇溶液梯度洗脱，洗脱液浓缩结晶，结晶物再用70%乙醇溶液重结晶、干燥。该公开专利与本发明所用提取方法不同，目标化学成分亦不同，且未涉及降尿酸功效。
[0012]专利申请公开号为US 5773005的美国专利公开了“一种从侧柏中提取纯化具有5 α -还原酶(5α -reductase)抑制活性的黄酮和二蔽的方法”，公开日期为1998-06-30，申请人为Takahashi, Hidehiko等。方法如下:取侧柏叶粉，按料液比1:5加入正己烧混合后加热回流，过滤后真空浓缩；滤饼用初始原料2倍体积的60%乙醇溶解后过滤，将滤液真空浓缩得到组分A。正己烷萃取后的滤饼，加入5倍体积的60%乙醇，加热回流然后过滤；取滤饼加入3倍体积的纯净水，加热回流然后过滤；真空浓缩滤饼即得组分B，滤液回收浓缩即得组分C。因此，该公开专利与本发明所用提取方法不同，目标化学成分及功效功效。
[0013]专利申请公开号为US 20100112107的美国专利公开了“一种具有睡眠促进作用的侧柏提取物的制备方法”，公开日期为2010-05-06，申请人为Xie，Xueji等。该专利发明了一种具有缓解生理睡眠障的侧柏提取物及其组合物。该组合物还可以包括睡眠促进功效的酸枣仁提取物、远志提取物或它们的混合物的至少一个。活性的评价方法为小鼠动物实验，研究巴比妥钠催眠的睡眠时间诱发、对小鼠自由活动的副作用、牵引试验以及斜板爬坡试验。因此，该公开专利与本发明所用提取方法不同，目标化学成分及功效亦不同。
[0014]综上所述，目前关于以侧柏叶为原料，依次经过超高压浸提、常压高温浸提、过滤浓缩、大孔吸附树脂纯化，并用分离纯化后的侧柏叶多酚进行降尿酸活性的报道尚无。而本发明提供了一种具有降尿酸活性的侧柏叶多酚的制备方法及其应用，为侧柏叶的深加工及其高效利用奠定了理论基础和技术基础。
【发明内容】
[0015]本发明所要解决的技术问题在于对侧柏叶中的多酚进行有效提取和分离纯化，并对分离纯化后的侧柏叶多酚的降尿酸活性进行研究，提供一种具有降尿酸活性的侧柏叶多酚及其制备方法和应用。
[0016]本发明的具体技术方案如下。
[0017]一种具有降尿酸活性的侧柏叶多酚的制备方法，以侧柏叶为原料，经过如下工艺制备:超高压低温浸提、常压高温浸提、过滤浓缩、大孔吸附树脂纯化后获得。
[0018]进一步地，所述制备方法具体包括以下步骤:
(1)将侧柏叶于50-90 ° C下干燥3 ~ 6 h，然后用打粉机粉碎，得侧柏叶粉末；
(2)将侧柏叶粉末与溶剂按料液比混合搅拌均匀，进行超高压浸提，得浸提液，将浸提液离心，收集滤液，并将滤渣进行常压高温浸提，再次离心，合并两次浸提滤液；
(3)采用抽滤法或离心法去除不溶物，取滤液或上清液进行真空旋转蒸发浓缩；
(4)利用大孔吸附树脂纯化步骤(4)浓缩后的粗提取液，洗脱溶剂为乙醇水溶液，以洗脱液中总酚含量为评价指标，收集侧柏叶多酚洗脱峰；
(5)对大孔吸附树脂