C浓度为 0的处理组的吸光度为对照，即100%，计算各组细胞的相对活性。
[0037] 相对活性（％ )=各组吸光值/对照组吸光值 阳03引实验结果如图1，其中图1-a示不同浓度SAMC对化pG2细胞相对活性的影响；图 1-b示不同浓度SAMC对化h-7细胞相对活性的影响。
[0039] 结果显示，经SAMC处理后肝癌细胞化巧G2和化h-7)的活性显著降低（p<0. 01)。 W40] 实施例2
[0041] 将肝癌细胞化pG2细胞培养至细胞所占表面面积为培养孔总面积60 %~70 %后 W不同浓度SAMC处理，SAMC浓度为 0、50ymol/l、100ymol/l、250ymol/l、500ymol/l、 1000ymol/l、2000ymol/L。处理24小时后，通过MTT测定法两种细胞经SAMC处理后的生 长活性变化。M1T检测步骤为：经处理的细胞中加入MTT(终浓度0. 5mg/ml)解育3小时后 酶标仪测定570皿处吸光度。WSAMC浓度为0的处理组的吸光度为对照，即100%，计算各 组细胞的活性抑制率。
[0042] 活性抑制率（％ )=1-各组吸光值/对照组吸光值
[0043] 实验结果如图2。
[0044] 结果显示，SAMC抑制肝癌细胞HepG2的ICs。为1. 21mmol/L。 W45] 实施例3
[0046] 将正常细胞L0-2培养至细胞所占表面面积为培养孔总面积60 %~70 %后分别W SAMC处理，SAMC的浓度为0、250ymol/l、lmmol/L。处理24小时后，通过MTT法检测两种 细胞经SAMC处理后的生长活性变化。MTT检测步骤为：经处理的细胞中加入MTT(终浓度 0. 5mg/ml)解育3小时后酶标仪测定570nm处吸光度。WSAMC浓度为0的处理组的吸光度 为对照，即100%，计算各组细胞的相对活性。
[0047] 相对活性（％ )=各组吸光值/对照组吸光值
[0048] 实验结果如图3。 W例结果显示，经SAMC处理后L0-2细胞的活性的影响不显著。
[0050] 实施例4
[0051] 将肝癌细胞：HepG2细胞和化h-7细胞培养至细胞所占表面面积为培养孔总面积 60%~70%后分别^541(：处理，541(：的浓度为0、250 ^111〇1/1、1111111〇1/1。处理24小时后， 活细胞染色舰化丙晚（终浓度5ug/ml)和DAPI(终浓度5ug/ml) 15分钟，然后巧光显微镜 观察。深蓝色细胞核为正常细胞，亮蓝色为调亡中早期细胞，红色信号为调亡晚期细胞和坏 死细胞。取亮蓝和红色细胞数除W总细胞数即为调亡比例。
[0052] 肝癌细胞经SAMC处理后调亡比例如图4所示，其中，图4-a示不同浓度SAMC对 化pG2细胞调亡比例的影响；图4-b示不同浓度SAMC对化h-7细胞调亡比例的影响。
[0053] 结果显示，经SMAC处理，肝癌细胞调亡比例极显著（p<0. 001)上升，且该变化呈剂 量依赖关系。
[0054] 实施例5 阳化日]将肝癌细胞化pG2细胞和化h-7细胞培养至密度为60 %~70 %，后分别WSAMC处理，SAMC的浓度为0、250ymol/l、Immol/L。处理24小时后
[0056] 使用transwell系统（8-jim孔径Costar公司产品）对肝癌细胞的粘附和侵袭能 力进行检测。
[0057] 侵袭实验步骤：SAMC处理后将细胞重悬于含0.1 %BSA的无血清DMEM培养基 中，置于transwell系统上方培养室。在下方培养室加入含20%胎牛血清和10yg/ml的 fibronectin的DMEM培养基。然后37度解育3小时，通过苏木素染色确定迁移到下层的细 胞量。
[0058] 粘附实验步骤：SAMC处理后的细胞用含0. 2%膜酶抑制剂的无血清DMEM洗涂并 在完全培养基中重悬。然后取100 重悬细胞加到已包被10μg/mlFN的96孔板里，加 入lμg/mlBSA封闭。在二氧化碳培养箱中解育指定时间，用PBS洗掉没有粘附的细胞，用M1T法测定粘附上的细胞.
[0059] 结果如图5和表1，其中图5-a示SAMC对化pG2细胞侵袭能力的影响；图5-b示 SAMC对化h-7细胞侵袭能力的影响；图中可见，SAMC对肿瘤细胞的侵袭能力具有显著的抑 制作用，该作用呈剂量依赖关系。 W60] 表1SAMC对化pG2细胞和化h-7细胞的粘附能力的影响[0061]
[0062] 其中，# 不 250ymol/L组、Immol/L组与 0ymol/L比较p><0. 05，* 不 250ymol/L 与Immol/L组比较p<0. 05。
[0063] 可见，SAMC对肿瘤细胞的粘附能力具有显著的抑制作用，该作用呈剂量依赖关系。
[0064] W上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来 说，在不脱离本发明原理的前提下，还可W做出若干改进和润饰，运些改进和润饰也应视为 本发明的保护范围。
【主权项】
1. SAMC在制备肝癌细胞活性抑制剂中的应用。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，SAMC对肝癌细胞的IC 5。值为I. 21mmol/ L03. 根据权利要求1所述的应用，所述肝癌细胞为H印G2或Huh-7。 4. SAMC在制备肝癌细胞侵袭能力或吸附能力抑制剂中的应用。5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，SAMC用于抑制肝癌细胞侵袭或吸附的剂 量为 250 y mol/L ~lmmol/L〇6. 根据权利要求4所述的应用，所述肝癌细胞为H印G2或Huh-7。 7. SAMC在制备治疗肝癌的药物中的应用。8. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述SAMC治疗肝癌机理为抑制肝癌细胞 活性、抑制肝癌细胞的侵袭或吸附。9. 一种治疗肝癌的药物，其特征在于，包括SAMC和药学上可接受的辅料。10. 根据权利要求9所述的药物，其特征在于，其剂型为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、汤 剂、膏剂、露剂、口服液剂、滴丸剂、糖浆剂、注射液或粉针剂。
【专利摘要】本发明涉及医药领域，尤其涉及SAMC的新用途。本发明提供了SAMC在抑制肝癌细胞活性、抑制肝癌细胞的侵袭或吸附中的应用。本发明的试验表明：与未经SAMC细胞的活性为对照，经1mmol/L？SAMC处理的HepG2细胞的相对活性不足60％，而经1mmol/L？SAMC处理的Huh-7细胞的相对活性不足50％。经1mmol/LSAMC处理的HepG2细胞的凋亡率为23％，而经1mmol/L？SAMC处理的Huh-7细胞的凋亡率24％。且经SAMC处理后，肝癌细胞的侵袭或吸附能力显著降低。因此，本发明提供了SAMC在制备治疗肝癌的药物中的应用。
【IPC分类】A61P35/00, A61K31/198
【公开号】CN105147655
【申请号】CN201510565678
【发明人】肖佳, 邢飞跃, 熊永佳, 郑颜儿, 朱江, 林词雄
【申请人】深圳市泰华细胞工程有限公司
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年9月7日