谱峰匹配，结果1~4号峰在 10批样品色谱图中均出现。因此标定4个峰为共有色谱峰，据此建立该提取物的HPLC质量 控制图谱，结果见图1。该10批次的芋头花提取物药理活性相似。
[0049] 实施例7 :提取物药理试验
[0050] -、材料与方法
[0051] 1. 1试验药物：芋头花提取物①~⑥分别按照实施例1~5制备，用生理盐水配成 混悬液，4°C保存。阳性药甘露聚糖肤，片剂，成都利尔药业有限公司，用研鉢研成粉末，生理 盐水配制成Img/mL的混悬液，4°C保存。环憐酷胺（CT讶，白色冻干粉剂，山西泰盛制药有限 公司，用生理盐水溶解，配制成4mg/血的溶液，4°C避光保存。
[0052] 1. 2动物：昆明种小鼠，雌雄各半，一级，体重20±2g，由四川大学实验动物中屯、提 供。
[0053]1. 3试剂：印度墨汁（C皿0MA-GE沈化SCHAFTSCHMDGMB服C0.出品），2, 4-二硝基 氯苯值NCB，上海S爱思试剂有限公司）。
[0054] 1. 4 方法
[0055] 1. 4. 1芋头花提取物对CTX所致免疫低下小鼠模型巨隧细胞吞隧能力的影响
[0056] 将216只小鼠按性别体重随机分为18组（空白对照组、模型组、阳性药组，芋头花 提取物①~⑥低中高剂量组），除空白对照组外，其余各组小鼠均腹腔注射CTX40mg/kg连 续4天，同时灌胃给药10天。末次给药比后，小鼠尾静脉注射印度墨汁（1 :4)生理盐水溶 液0. 5血/只，分别于注射后2min和5min眼眶取血20yL，加入2血0. 1 %胞2〇)3溶液中， 在590皿比色。将动物处死后，取肝、脾称重，计算吞隧指数K和校正吞隧指数a。
[0057] 1. 4. 2芋头花提取物对小鼠迟发型超敏反应值TH)的影响
[005引将170只小鼠按性别体重随机分为17组，腹部去毛3cmX3cm，每鼠涂50化1%DNCB(1:1丙酬麻油溶解）致敏，并于第二日强化致敏一次，阴性组除外。灌胃给药8天后， 将10yL1 %DNCB涂于小鼠右耳两面，24h后处死，剪下左右耳分别打孔取直径8mm耳化称 重。W左右耳片重量差为肿胀度比较组间差异。
[0059] 1. 4. 3芋头花提取物对CTX所致免疫低下模型小鼠血清溶血素含量的影响
[0060] 180只小鼠按性别体重随机分为18组，除空白对照组外，其余各组小鼠均腹腔注 射CTX20mg/kg连续5天，同时各给药组灌胃给药（0. 2血/lOg) 10天。所有组均在给药第S 天腹腔注射5%绵羊红细胞0. 2mL/只致敏。末次给药比后，眼眶取血，离屯、分离血清，用生 理盐水稀释100倍。取稀释血清1血，与5%绵羊红细胞0. 5血、10%补体（豚鼠血清）0. 5血 混匀，置37°C水浴箱中30min，0°C终止反应，离屯、取上清液于540皿处比色。
[0061] 1. 4. 4芋头花提取物对CTX所致小鼠腹腔巨隧细胞吞隧功能的影响
[0062] 180只小鼠按性别体重随机分为18组，每组10只，除空白对照组外，其余各组小鼠 均腹腔注射CTX20mg/kg(0.ImL/lOg)连续5天，同时各给药组灌胃给药10天。末次给药 比后，各鼠腹腔注射5%绵羊红细胞生理盐水溶液0. 4mU化后处死，剖腹露腹膜，注入NS 2血，轻揉腹部Imin，吸取腹腔液涂于载玻片上，37°C解育30min，取出W生理盐水冲洗玻片 上未被吞隧的SRBC及其他细胞，吹干，甲醇固定5min，Giemsa染色20min。水洗惊干后，在 显微镜下观察200个巨隧细胞，计算吞隧百分率和吞隧指数。
[0063] 二、结果
[0064] 2. 1芋头花提取物对CTX所致免疫低下模型小鼠巨隧细胞吞隧能力的影响结果见 表1(注：与模型组相比冲<0. 05,*冲<0. 01)。由实验结果可知，免疫低下模型组与空白对 照组相比，其吞隧指数和校正吞隧指数显著性的低于空白对照组；芋头花提取物①~③中、 高剂量组W及阳性组与模型组相比，吞隧指数和校正吞隧指数显著性的高于模型组；芋头 花提取物④~⑥各剂量组与模型组相比无显著差异。结果：芋头花提取物①~③中、高剂量 对CTX所致免疫低下小鼠模型具有免疫增强的作用。
[0065] 表1芋头花提取物对CTX所致小鼠巨隧细胞吞隧能力的影响（X+S)
[0066]
[0068] 2. 2芋头花提取物对CTX所致小鼠免疫低下模型的血清溶血素含量的影响结果见 表2(注：与模型组相比冲<0. 05,*冲<0. 01)。由结果可知，模型组血清溶血素含量非常显 著低于空白组；芋头花提取物①~③中高剂量组的血清溶血素含量显著高于模型组；芋头 花提取物④~⑥各剂量组与模型组无显著差异。
[0069] 表2芋头花提取物对CTX所致小鼠血清溶血素含量的影响（X+S)
[0070]
[007。 2 J芋头花提取物对CTX所致小鼠腹腔巨隧细胞吞隧功能的影响结果见表3(与模 型组相比冲<0. 05,*冲<0. 01)。由结果可知，模型组腹腔巨隧细胞的吞隧百分率和吞隧指 数非常显著低于空白组；阳性药及芋头花提取物①~③各剂量组腹腔巨隧细胞的吞隧百分 率和吞隧指数均显著性的高于模型组；芋头花提取物④~⑥各剂量组与模型组相比无显著 差异。
[0073] 表3芋头花提取物对CTX所致小鼠腹腔巨隧细胞吞隧功能的影响（X+S)
[0074]
[0076] 综上可见，芋头花提取物具有提高小鼠免疫功能的作用，但是运种作用与芋头花 提取物中甘草的含量有重要关系，甘草的含量对芋头花提取物的活性起到至关重要的作 用。
[0077] 实施例8 :片剂的制备
[0078] 按实施例1方法制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:10的比例加入赋形剂，审U 粒压片。
[007引实施例9 : 口服液的制备
[0080] 按实施例1方法先制得提取物，按常规口服液制法制成口服液。
[008。 实施例10 :胶囊剂或颗粒剂的制备
[0082] 按实施例1方法先制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:9的比例加入赋形剂，制 成胶囊或颗粒剂。
[008引实施例11进射液的制备
[0084] 按实施例1方法制得提取物，加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。
[0085] 实施例12 :无菌粉针的制备
[0086] 按实施例1方法先制得提取物，溶于无菌注射用水中，揽拌使溶，用无菌抽滤漏斗 过滤，再无菌精滤，分装于安飯，低溫冷冻干燥后无菌烙封得粉针剂。
【主权项】
1. 一种芋头花提取物，其特征在于所述提取物由以下方法制备：(a)以重量计，每100 份药材包含干燥的芋头花75~85份和干燥的甘草15~25份，混合粉碎，用乙醇热回流提 取，合并提取液，浓缩至无醇味；(b)将步骤（a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油 醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物；（c)正丁醇萃取物用大孔树脂富集，先用5~15%乙醇冲洗8~12个柱体积除去多 糖，再用65~75%乙醇洗脱7~9个柱体积，收集65~75%洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。2. 根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：步骤（a)中所述用乙醇热回流提取所 采用的乙醇浓度为85~95 %。3. 根据权利要求2所述的提取物，其特征在于：步骤（a)中所述用乙醇热回流提取所 采用的乙醇浓度为90 %。4. 根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：步骤（c)中所述大孔树脂为AB-8型大 孔树脂。5. 根据权利要求4所述的提取物，其特征在于步骤（c)为：正丁醇萃取物用AB-8型大 孔树脂富集，先用10%乙醇冲洗10个柱体积除去多糖，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，收 集70 %洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。6. 根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：所述提取物的液相分析方法为： 色谱柱：Agilent TC C18 柱（4.6mmX250mm，5iim); 流动相：A为乙腈，B为0. 1 %甲酸溶液（三乙胺调节pH值至6. 0); 梯度洗脱程序：〇 ~4min，A 35% ;4 ~14min，A 35% - 70% ;14 ~16min，A 70% -35% ;16 ~20min，A 35% ; 流动相流速：1. OmL ? min S 检测波长：267nm ;柱温：30°C ; 进样量IOu L。7. 药物制剂，其特征在于：含有治疗有效量的权利要求1所述的提取物和药学上可接 受的载体。8. 权利要求1所述的提取物在制备增强免疫的药物中的应用。9. 权利要求7所述的药物制剂在制备增强免疫的药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种芋头花提取物及其制备方法和医药用途，制备方法包括：(a)以重量计，每100份药材包含干燥的芋头花75～85份和干燥的甘草15～25份，混合粉碎，用乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味；(b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(c)正丁醇萃取物用大孔树脂富集，先用5～15％乙醇冲洗8～12个柱体积除去多糖，再用65～75％乙醇洗脱7～9个柱体积，收集65～75％洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。芋头花提取物具有提高小鼠免疫功能的作用，可以开发成增强免疫的药物。
【IPC分类】G01N30/88, A61P37/04, A61K36/888
【公开号】CN105147907
【申请号】CN201510688870
【发明人】高忠青
【申请人】淄博夸克医药技术有限公司
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年10月22日