)，154. 44 (s)，147. 61 (s)，140. 2 3 (s)，136. 50 (s)，134. 79 (s)，131. 31 (s)，128. 44 (s)，118. 85 (s) ,69.31 (s) ,52.96 (s) ,47.7 5 (s)，45. 55 (s)，37. 58 (s)，33. 65 (s)，26. 22 (s)，25. 20 (s)，24. 72 (s)，23. 55 (s)，23. 24 (s)， 22. 70 (s)，12. 35 (s) ?
[0031] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C26H38NO3:412. 2852 ;found:412. 2855。
[0032]
[0033] 实施例4 Salviskinone A的0-(吗啉基）乙基衍生物（IV)的合成
[0034] 将化合物II (210mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾 (345mg，2. 5mmol)，鹏化钾（84mg，0. 5mmol)和吗啉（1742mg，20mmol)，混合物加热回流 12h。 反应结束后将反应液倒入30mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取4次，合并有机相。依次用水 和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物 粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油醚/丙酮=100:0. 5, v/v)，收集黄色 集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物IV的黄色粉末（121. lmg，57% )。
[0035] 1H NMR (500MHz, DMS〇-d6) 8 6. 41 (d, J = 108. 0Hz, 1H), 6. 29 (s, 1H), 5. 75 (s, 1H), 4 .21 (s, 2H), 3. 84 (s, 1H), 3. 52 (s, 4H), 3. 02 (s, 2H), 2. 47 (s, 4H), 2. 09 (s, 1H), 2. 00 (s, 1H), I .84 (s, 1H), I. 60 (s, 1H) ,1-31 (s, 3H), I. 02 (s, 6H), 0. 95 (s, 6H).
[0036]13C NMR (125MHz, DMS0-d6) S 188. 17 (s)，183. 78 (s)，154. 44 (s)，147. 61 (s)，140. 2 3 (s)，136. 50 (s)，134. 79 (s)，131. 31 (s)，128. 44 (s)，118. 85 (s) ,69.31 (s) ,66.84 (s) ,54.7 6 (s)，52. 97 (s)，45. 54 (s)，37. 62 (s)，33. 64 (s)，26. 21 (s)，25. 19 (s)，24. 71 (s)，23. 59 (s)， 23. 23 (s)，22. 69 (s) ?
[0037] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C26H36NO4:426. 2644 ;found:426. 2641。
[0038]
[0039] 实施例5组合物抗人体真菌活性
[0040] 组合物的制备：将80mg化合物III的粉末和20mg化合物IV的粉末装入带盖的小 管中并用涡轮搅拌仪混合即得到IOOmg组合物。
[0041] 抗人体真菌活性实验是采用浓度稀释的方法，每次测定重复三次，测试的病原菌 有红色毛癣菌、羊毛状小孢子菌和断发癣菌，菌液浓度为IO 5个/mL。药物的起始浓度为 50. 00 y g/mL (5 %二甲基亚砜DMS0)，梯度稀释至0. 10 y g/mL，等量体积的菌液和测试样品 混合培养在96孔板中（形成的最终浓度有：25. 00、12. 50、6. 25、3. 13、1. 56、0. 78、0. 39、 0. 20、0. 10和0. 05 y g/mL)，人体真菌培养温度分别为28°C，培养时间24h后观察，若发现没 有菌落形成的处理孔中最低的那个浓度为样品最低抗菌浓度，即MIC值。该实验阳性对照 为酮康唑，组合物抗人体真菌结果见表1。
[0042] 表1组合物抗人体真菌MIC值（y g/mL)
[0044] 结论：组合物具有很强的抗人体真菌活性，因此本发明的组合物有望被用于制备 新型抗人体真菌药物。化合物III和化合物IV无抗人体真菌活性，因此不能用于制备新型 抗人体真菌药物。
[0045] 实施例6组合物抗幽门螺杆菌活性
[0046] 1)供试菌株
[0047] 幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp)标准菌株ATCC 43504购于美国菌种保 存中心（American Type Culture Collection，ATCC)。13株Hp临床菌株米自南京市鼓楼 医院胃镜室接受胃镜检查的患者；在连续胃镜检查中对消化性溃疡、十二指肠球炎或疣状 胃炎的患者，先经快速尿素酶实验确定为Hp阳性者，再取胃窦黏膜1-2块，切碎后接种于含 8%马血清、三甲氧节氨啼啶（trimethropin，TMP)l. 25g/L、多粘菌素（polymyxin)B2500U/ L、万古霉素（vancomycin) 10mg/L的Columbia选择性琼脂培养基中，于37°C在微氧环境下 (5% 02, 10% 0)2和85% N2)培养72小时。收集细菌，经涂片革兰氏染色，氧化酶、触酶和 尿素酶鉴定为阳性后，传代纯培养，所得菌株作为实验菌株。
[0048] 2)菌株培养
[0049] 我们采用微需氧袋（购自上海医科大学）进行HP的菌株培养，它可通过化学反应 产生Hp所需要的微需氧环境。
[0050] 3)生物活性测定
[0051] 采用纸片法（Microbiological paper method)测定药物对幽门螺杆菌 的抑制作用，用琼脂稀释法来测定供试样品的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration, MIC)〇
[0052] I ?纸片法实验
[0053] (A)准备培养基将配制好的Columbia培养基经高压蒸汽灭菌后，冷却至50_60°C， 加8 %马血清或绵羊血，混匀倾注于已经灭菌的培养皿中，每皿7-10ml，培养基厚度为 I. 5mm(无菌操作）。
[0054] (B)转接实验菌（涂菌）用微量取样器取稀释好的10sCFU/ml (IOD66q= 10 8 CFU/ ml)Hp的菌悬液0.1 ml均匀地涂抹在适宜的培养皿表面。倒置于37°C烘干箱中15min后取 出，目的使琼脂表面干燥，备用。
[0055] (C)贴样品纸片用微量取样器取6 iU待测样品（质量浓度2mg/ml)注入已经灭菌 的圆滤纸片上。用无菌镊子镊取含样品的纸片和对照空白纸片，按无菌操作分别纸片紧贴 于含菌琼脂表面，每隔一定距离贴一张纸片。每种菌做3皿，所得结果求其平均值。
[0056] (D)培养将各平皿置于微需氧袋中，封口，打开气体发生器，再置于37°C培养箱中 培养72h。
[0057] (E)测抑菌圈直径取出平板后，分别测量各纸片周围抑菌圈直径的大小。参照对照 组的结果，可得出待测样品敏感实验的结果。重复三次。
[0058] II?琼脂稀释法测定MIC
[0059] (A)药物平板的制备首先将测试的药物用二甲基亚砜（DMSO)溶液配制成0. 5mg/ ml 的母液，再用无菌水稀释，最终配成 100. 0,80. 0,60. 0,45. 0,40. 0, 35. 0, 30. 0, 25. 0， 20. 0,15. 0,10. 0, 5. 0和2. 5 μg/ml的浓度系列，DMSO在介质中的浓度小于1%。将Iml配 制好的测试药物溶液与保温于50°C的8ml哥伦比亚培养基，另加Iml保温于50°C的马血清 充分混匀，浇制入培养皿中冷却即成（培养皿中药物的终浓度为10. 0,8. 0,6. 0,4. 5,4. 0， 3. 5, 3. 0, 2. 5, 2. 0,1. 5,1. 0,0. 5和0. 25 y g/ml，如果有抑菌作用，则MIC值即这些值当中的 一个）。
[0060] (B)转接实验菌（涂菌）用微量取样器吸取稀释好的I X 10sCFU/ml Hp的菌悬液 0.1ml均匀地涂抹在培养皿表面，倒置于37°C烘干箱中15min后取出，目的使琼脂表面干 燥，备用。
[0061] (C)确定MIC将待测培养皿在微需氧袋（含：85% N2, 10% 0)2和5% O2)中，保 温37°C培养72小时，观察Hp生长情况，与空白组相对照，以完全没有菌生长的样品最低浓 度为最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration, MIC)值。阳性对照为氨节西林 (Ampicillin)〇
[0062] 实验结果
[0063] 体外实验表明，组合物具有很强的抗幽