治疗和预防缺血性损伤的组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种用于治疗和预防缺血性损伤的组合物。更具体而言，本发明涉及 一种含有衍生自端粒酶的肽的组合物，该组合物对治疗和预防缺血性损伤有效。
【背景技术】
[0002] 缺血性损伤是指由于对需要供血的器官（诸如心脏、脑部、肾脏等）限制供血所引 发的组织损伤（心肌梗塞、脑梗塞、肾梗塞等），可导致器官的功能障碍和死亡率上升。缺血 性损伤引发心脏、脑部、肾脏等的致命性并发症，增加了器官移植的急性排异反应风险，且 长期而言降低了移植器官的存活率。
[0003] 由于缺血造成的实质供氧不足诱发一种称为缺氧的病理状况。长时间的缺血及缺 氧可导致组织的功能丧失，甚至细胞死亡。各种自发及医源性病理状况诱发缺血及缺氧。非 限制性实例包括血管阻塞疾病、冠状动脉血栓、脑血管血栓、动脉瘤破裂、全身性出血、挤压 损伤、败血症、重度皮肤烧伤、血管结扎术（例如，胸腹动脉瘤手术后的脊髓缺血）、心肺转 流术、器官移植、心肺衰竭（心源性猝死）、室息等。
[0004] 大体而言，通过增加全身性供氧或移除血管闭塞的原因可将供血及供氧恢复至正 常水平，从而治疗由此引发的缺血及缺氧。当与长时间缺血或缺氧的情况相比时，预计可通 过恢复供血获得改善结果。然而，在恢复供血及供氧期间，除缺血或缺氧所引发的损伤外， 可另外诱发细胞死亡或功能丧失。
[0005] 恢复供血及供氧期间所诱发的额外损伤称为再灌注损伤。由再灌注损伤 所引发的看似反常的组织损伤似乎与由炎性细胞附着至再灌注的组织、炎性细胞 的活化及自由基的后续产生所引起的急性发炎症状类似[Granger等人，Ann.Rev. Physiol.，57, 311-332,（1995)]。再灌注的组织内的自由基及其它细胞毒性生物分子的产 生可通过坏死或凋亡路径的激活而诱发细胞死亡。
[0006] 器官移植期间发生的缺血-再灌注（Ischemic-reperfusion;IR)组织损伤导致在 器官移植后器官功能的延缓恢复，并且此情况由于炎性组织反应通常是长期维护移植器官 功能的过程中不合需要的预后标志。伴随器官（尤其是肾脏）移植偶发的初期缺血-再灌 注损伤可导致后续器官衰竭及移植排异反应。
[0007] 最近，已将肾缺血-再灌注损伤（ischemic-reperfusioninjury;IRI)新确认为 一种急性炎症反应，其中涉及先天性免疫系统及后天性免疫系统两者的炎性细胞。
[0008] 皮瓣是指取自身体的一个部位并移动至另一部位的皮肤或组织，其包括可使组织 存活的血管。皮瓣手术用于不可通过（例如）植皮治疗的软组织丧失、慢性创口等。此为 整形与重建手术中最常用的外科方法。具体而言，其优点在于通过移植包括骨骼、腱、肌肉、 神经等在内的各种复合组织可以进行一期重建（primaryreconstruction)，从而允许快速 恢复。在皮瓣手术中，皮瓣的存活率对于缺血-再灌注损伤的治疗至关重要。因此，稳定改 善皮瓣存活率的方法将非常有用。
[0009] 如上所述，用于治疗经常发生的缺血-再灌注损伤的有效方法并不容易获得。因 此，预防及治疗缺血-再灌注损伤的有效方法将很有价值。
【发明内容】
[0010] 技术问题
[0011] 本公开的发明人努力开发对治疗和预防缺血-再灌注损伤有效的组合物，并已完 成本发明。
[0012] 本公开的发明人已发现，衍生自端粒酶的肽对治疗和预防缺血-再灌注损伤可具 有优良效果。
[0013] 本发明系针对提供一种对治疗和预防缺血-再灌注损伤有效的组合物。
[0014] 技术方案
[0015] 在一方面，本公开提供一种用于治疗和预防缺血性损伤的组合物，该组合物包含： 含有SEQIDNO. 1所示氨基酸序列的肽、与所述氨基酸序列具有80%或以上序列同源性的 肽或系上述肽的片段。
[0016] 在本发明的示例性实施方式中，所述片段可包括三个以上氨基酸。
[0017] 在本发明的示例性实施方式中，所述缺血性损伤可由选自以下的一种或多种引 发：缺血-再灌注损伤、血管疾病、冠状动脉血栓、脑血管血栓、动脉瘤破裂、全身性出血、挤 压损伤、败血症、皮肤烧伤、血管结扎手术、心肺转流术、器官移植、心肺衰竭（心源性猝死） 及室息。
[0018] 在本发明的示例性实施方式中，缺血性损伤可由缺血-再灌注损伤引发。
[0019] 在本发明的示例性实施方式中，缺血-再灌注损伤可选自由以下组成的组：脑血 管缺血-再灌注损伤、肾缺血-再灌注损伤、肝缺血-再灌注损伤、缺血-再灌注心肌症、缺 血-再灌注皮肤损伤、肠胃缺血-再灌注损伤、肠道缺血-再灌注损伤、胃缺血-再灌注损 伤、缺血-再灌注肺损伤、胰腺缺血-再灌注损伤、缺血-再灌注骨骼肌损伤、缺血-再灌注 腹肌损伤、缺血-再灌注肢损伤、缺血-再灌注结肠炎、肠系膜缺血-再灌注损伤及无症状 缺血-再灌注损伤。
[0020] 在本发明的示例性实施方式中，缺血-再灌注损伤可由器官移植引发。
[0021] 在本发明的示例性实施方式中，缺血-再灌注损伤可在肾脏中发生。
[0022] 在本发明的示例性实施方式中，缺血-再灌注损伤可在皮瓣中发生。
[0023] 在本发明的示例性实施方式中，肽可衍生自人类端粒酶。
[0024] 在本发明的示例性实施方式中，组合物可为药物组合物。
[0025] 在本发明的示例性实施方式中，组合物可为食品组合物。
[0026] 在另一方面，本发明提供一种用于治疗和预防缺血性损伤的方法，该方法包括：将 上文所描述的组合物施用于有需要的受试者。
[0027] 有益效果
[0028] 包含SEQIDNO. 1所示氨基酸序列的肽、与该氨基酸序列具有80%或以上序列同 源性的肽或上述肽的片段对治疗和预防缺血性损伤具有优良效果。因此，含有所述肽的组 合物可有效用于缺血性损伤，尤其是由器官移植等引发的缺血-再灌注损伤。
【附图说明】
[0029] 图1图示在缺血-再灌注24小时后测量血尿素氮（bloodureanitrogen;BUN) 及肌酸水平的结果。
[0030] 图2图示在缺血-再灌注24小时后用过碘酸-希夫氏（periodicacid-Schiff; PAS)染色剂对肾组织染色的结果。
[0031] 图3图示在缺血-再灌注24小时后实施肾组织损伤计分的结果。
[0032] 图4图示在缺血-再灌注24小时后用TUNEL染色剂对肾组织染色的结果。
[0033] 图5图示在缺血-再灌注24小时后测量用TUNEL染色剂所染色的TUNEL阳性细 胞的结果。
[0034] 图6图示在缺血-再灌注24小时后通过用F4/80 (巨噬细胞标记物）及Gr-Ι(嗜 中性粒细胞标记物）对肾组织进行免疫组织学染色，从而评估先天性免疫细胞的浸润的结 果。
[0035] 图7图示在缺血-再灌注24小时后测量肾组织中的F4/80 (巨噬细胞标记物）及 Gr-Ι(嗜中性粒细胞标记物）阳性细胞的结果。
[0036] 图8至图10图示在缺血-再灌注24小时后肾组织中炎性细胞因子的受抑制的分 泌。
[0037] 图11图示用于评估皮瓣存活率的诱发缺血-再灌注损伤的程序。
[0038] 图12图示在诱发缺血-再灌注7天后PEP1处理组及盐水处理组的皮瓣存活率的 测量结果。
[0039] 图13图示使用ImageJ程序所获得的数字图像。
【具体实施方式】
[0040] 可以以各种方式修改及体现本发明。在下文中，将经由示例性实施方式更详细描 述本发明。然而，以下实例不欲限制本发明。确切而言，本发明可基于所附权利要求作出各 种改变。应理解，本发明包括落入本发明的技术构思及范围内的任何改变、等效物或替代方 式。在描述中，可忽略公知特征及技术的细节以避免不必要地模糊所呈现的实施方式。
[0041] 端粒已知为染色体的末端处所发现的遗传物质的重复序列，用于防止染色体遭受 损坏或合并至其它染色体上。每次细胞分裂时，端粒的长度缩短，且在若干次细胞分裂后， 端粒长度极度缩短以至于达到细胞停止分裂并死亡的程度。另一方面，已知延长端粒可延 伸细胞的寿命。举例而言，癌细胞分泌一种称为端粒酶的酶，端粒酶防止端粒缩短，从而导 致癌细胞增生。本发明的发明人已发现，衍生自端粒酶的肽对治疗和预防缺血-再灌注损 伤有效，并已完成本发明。
[0042] 在本