具有增加抗肿瘤药物疗效的载体溶媒、制备方法及其给药途径的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及用于增加抗肿瘤药效的载体溶媒和制备方法，本发明还涉及该载体溶 媒的给药途径，本发明还涉及联合使用的抗肿瘤药物。属于生物医药领域。
【背景技术】
[0002] 据统计，由于恶性肿瘤引起的死亡，全世界每年有850万以上，因此，有效地控制 恶性肿瘤，是医药工作者艰巨而迫切的任务。
[0003] 对恶性肿瘤的治疗主要是应用手术、放疗和各种抗恶性肿瘤药物化疗，上述方法 各有其特点，但也存在有一定的局限性，特别是抗恶性肿瘤药物化疗时，药效下降，效果不 明显等。增加已有抗肿瘤药物的疗效是提高化疗效果重要方法。
[0004] 许多抗肿瘤药物，由于药物理化性质、药动学、药效学原因，必须采取注射全身给 药或局部注药途径给药。常用的溶媒有生理盐水和葡萄糖溶液。此类溶媒仅作为抗肿瘤药 物的载体溶媒，本身不具备抗肿瘤功效，也不能增强其他抗肿瘤药物的药效。
[0005] 重水，化学名：氧化氣，英文：Deuteriumoxide,分子式：D20,从海水中分离获得。 在体内浓度30 %以上有害，以成人体重60kg计，人体内有重水18kg时，始有毒性，由于人 体内有重水18kg是不可能，因此重水属于无毒或低毒物质[D.M.Czajka:Physiological effectsofdeuteriumoxideondogs.Am.J.Physiol. 201 (1961) :357-362]〇
[0006] GrossP.R.于上世纪60年代发现重水有抑制细胞DNA合成酶的作用（Blockade ofDeoxyribouncleicacidsynthesisbydeuteriumoxide.Science133(1961)： 1131-1133。Theinhibitionofmitosisbydeuteriumoxide.AnnNYAcadSci 84(1960) :745-754)。随后，Laissue等采用体外肿瘤细胞培养，研究重水抗肿瘤作用 (Survivaloftumorbearingmiceexposedtoheavywaterorheavywaterplus methotrexate，CancerRes. 42 (1982) 1125-1129)。Altermatt等使用人肿瘤细胞株裸 鼠荷瘤模型，研究口服重水在体内抗肿瘤作用（Heavywaterdelaygrowthofhuman carcinomainnudemice.Cancer62(1988) :462-466.Heavywaterenhancethe antieoplasticeffectof5-fluoro-uracilandbleomycieinnudemicebearing humancarcinoma.Int.JCancer. 45(1990) :475-480.)。近 10 年来，Hartmann等证实重 水可抑制膜腺癌细胞增殖（Effectsofheavywater(D20)onhumanpancreatictumor cells.AnticancerRes. 25(2005) :3407-3412)。Bahk等证实重水可抑制膀胱癌细胞增殖 (AnticancereffectofdeuteriumoxideonabladdercancercellrelatedtoBCL2 andbax.J.Ind.Eng.Chem. 13 (2007) :501-507)。2005 年欧盟卫生当局宣布，批准Orphan designation公司（EU/3/04/239)，使用重水进行人体治疗胰腺癌的临床前试验（Doc. Ref. ：EMEA/C0MP/69735/2004Rev. 1)〇
[0007] 综合上述研究，本申请人发现，体内研究都是采用传统的口服重水方式，而且为达 到有效的治疗剂量，必须给予动物或病人口服相当剂量，比如在动物试验中，将重水加入饮 用水中到丰（浓）度为30%，任动物随意饮用。此种口服重水给药方式有严重缺陷：一来 用量大，易达到重水毒性剂量范围；二来每只动物饮用水量不同，重水用量不能量化，无法 比较不同动物的治疗效果，并受到消化、吸收、代谢等药动学因素影响，致摄入量大且药效 有限，成药可能性小；三来大多数抗肿瘤药物因各种原因不能口服给药，如常用抗肿瘤药5 氟尿嘧啶（5-FU) 口服吸收不完全，因此很难将重水与抗肿瘤药物联合使用；四来许多中晚 期肿瘤病人已有吞咽困难、或消化道手术，无法进食进水。
[0008] 针对上述技术缺陷，本发明突破传统的口服重水方式，使用重水配制成各种溶液， 并以此类溶液作为载体溶媒，溶解或稀释临床所用各种抗肿瘤药物，作为抗肿瘤药物的载 体，直接注射给药或灌注给药，例如：静脉注射、静脉滴注、动脉导管注射、瘤体注射、直肠灌 洗、膀胱灌洗、胸腔灌洗、腹腔灌洗。改变了重水在体内药动学，其重水本身具有抗肿瘤的药 效；而且又协同增强其他抗肿瘤药物的药效，治疗恶性肿瘤，取得意想不到的效果。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的在于提供一种疗效好、使用方便、毒副作用小的具有抗肿瘤增效的 载体溶媒和制备方法。本发明的另一目的在于提供该载体溶媒的使用途径。
[0010] 本发明提供的用于抗肿瘤增效的载体溶媒，是由下述重量配比的原料制成：用重 水配制，重水，化学名：氧化氣，英文：Deuteriumoxide,分子式：D20,分子量20,配制用丰 (浓）度为：1-99. 999%。重水用于配制临床抗肿瘤药物的载体溶媒，包括但不限于：① 不含其他成份的纯重水溶液；②含〇. 9 %氯化钠的注射用或灌洗用生理盐重水溶液；③含 5-25%葡萄糖的注射用或灌洗用重水溶液；④含0. 9%氯化钠和5-10%葡萄糖的注射用或 灌洗用重水溶液；⑤含5-50%碳酸氢钠的注射用或灌洗用重水溶液；⑥以重水参入为基质 成份0. 1-99. 9 %的乳剂、霜剂、油剂、脂质体等制剂。
[0011] 该载体溶媒具有增加临床所用抗肿瘤药物疗效的功效，溶解或稀释临床所用抗肿 瘤药物，采用静脉注射、静脉滴注、灌洗用等途径给药。疗效好、使用方便、毒副作用小。
【附图说明】：
[0012] 图1.生理盐重水（DJ001)浓度-细胞存活率曲线。
[0013] 图2.生理盐重水（DJ001)联合5Fu对结肠癌细胞的生长抑制作用。
[0014] 图3.生理盐重水（DJ001)联合吉西他滨（GM)对肺癌A549细胞的生长抑制作用。
[0015] 图4.生理盐重水（DJ001)联合5-Fu对人结肠癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用。
[0016] 图5.生理盐重水（DJ001)联合5-Fu对人胃癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例及临床观察试验报告对本发明作进一步的说明。
[0018] 实施例1
[0019] 称取药用级氯化钠9克，加入上述重水920ml溶解氯化钠9克，搅拌使溶解，用氢 氧化钠溶液调PH值至7. 0~8. 0,加上述重水至1000ml，用G4垂熔漏斗滤过，灌装密封，灭 菌消毒，即得本发明〇. 9%氯化钠生理盐重水溶液。
[0020] 实施例2
[0021] 称取药用级葡萄糖50-250克，加入上述重水920ml，搅拌使溶解，用氢氧化钠溶液 调PH值至7. 0~8. 0,加上述重水至1000ml，用G4垂熔漏斗滤过，灌装密封，灭菌消毒，即 得本发明5-25 %葡萄糖重水溶液。
[0022] 实施例3
[0023] 称取药用级氯化钠9克、葡萄糖50-100克，加入上述重水920ml，搅拌使溶解，用氢 氧化钠溶液调PH值至7. 0~8. 0,加上述重水至1000ml，用G4垂熔漏斗滤过，灌装密封，灭 菌消毒，即得本发明〇. 9%氯化钠5-10%葡萄糖重水溶液。
[0024] 实施例4
[0025] 称取药用级碳酸氢钠50-500克,加入上述重水920ml,搅拌使溶解,用氢氧化钠溶 液调PH值至7. 0~8. 0,加上述重水至1000ml，用G4垂熔漏斗滤过，灌装密封，灭菌消毒， 即得本发明5-50 %碳酸氢钠的注射用或灌洗用重水溶液。
[0026] 实施例5
[0027] 配制以重水参入为基质成份0. 1-99. 9%的乳剂、霜剂、油剂、脂质体等制剂，加入 重水至任何乳剂、霜剂、油剂、脂质体等制剂内，达到0. 1-99. 9%浓度，灌装密封，灭菌消毒。
[0028] 实施例6
[0029] 重水体外抑制人肿瘤细胞增殖的研究，MTT法：
[0030]方法：
[0031] 1.取培养3~4天处于指数生长期的培养细胞一瓶，加人适量0. 25 % 1'巧?以114014液，使贴壁细胞脱落，用101111含10%胎牛血清的1?^11640培养液配成悬液。
[0032] 2.血细胞计数板上作细胞计数，一般活细胞应在97%以上。
[0033] 3.用完全培养基稀释细胞悬液，配成1X104个细胞/ml悬液。
[0034] 4.取12孔平板，每孔加细胞悬液300μ1。加细胞过程应控制在4小时以内。将 平板置37°C、5%C02温箱中培养24小时。
[0035] 5.重水如表1作稀释，加入细胞培养板中。
[0036] 6.将12孔板在37°C，含5%C02空气及100%湿度的温箱中孵育3天。
[0037] 7.MTT用无血清RPMI1640培养液配成lmg/ml溶液，每孔加200μ1，37°C温育4小 时，使MTT还原为甲臜。
[0038] 8.吸出上清液，加入200μ1DMS0使甲職溶解，用平板摇床摇匀。
[0039] 9.用酶标仪在参考波长450nm，检测波长570nm处检测每个小孔的吸光度。结果 计算：以溶剂对照处理的肿瘤细胞为对照组，计算药物对肿瘤细胞的抑制率。以药物的不同 浓度及对细胞的抑制率作图可得到剂量反应曲线，从中求出药物的半数抑制浓度（IC5。)。
[0040]
[0041] 结果：重水对肺癌细胞株A549、NCI-H460、NCI-1975;胰腺癌细胞株CFPAC-1、 ASPC-UPANC-1;结肠癌细胞株HCT-116;胃癌细胞株BGC-823均有一定的抑制生长作用，重 水浓度越高，对肿瘤细胞生长的抑制作用越明显（表1)。
[0042] 表1.重水体外抑制人肿瘤细胞增殖
[0043]
[0044] 根据上面抑制率（％ )，计算出重水浓度-细胞存活率曲线，详见图1。
[0045] 实施例7
[0046] 生理盐重水联合5-氟尿嘧啶（5-FU)对人结肠癌HCT-116细胞株增殖实验：
[0047] 取10%生理盐重水，稀释5-氟尿嘧啶，加入细胞培养板中，体外抑制肿瘤细胞增 殖，MTT法，实验方法同实施例7。
[0048] 结果：5_Fu对人结肠癌HCT-116细胞有一定的抑制生长作用，与10%生理盐重水 联用，可明显增加5-Fu抗肿瘤作用。
[0049] 也计算出不同5-Fu浓度与10%重水联用-细胞存活率曲线，详见图2。
[0050] 表2.生理盐重水联合5-FU对人结肠癌HCT-116细胞增殖
[0051]
[0052] 实施例8
[0053] 生理盐重水联合5-氟尿嘧啶（5-FU)对人结肠癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用：
[0054] 方法
[0055] 1.取瘤种复苏并接种取瘤种复苏加无菌生理盐水制成细胞悬液，接种于动物右 上肢腋窝皮下。接种肿瘤细胞数约为5X106/只。
[0056] 2.分组给药接种后第6天分组给药并按下式测量肿瘤体积，每3天1次。实验 共设4组：①生理盐水对照组，②5-氟尿嘧啶（5-Fu)阳性药对照组：生理盐水稀释5-氟 尿嘧啶（5-FU)，尾静脉注射给药每3天1次；③生理盐重水9. 6ml/kg组，尾静脉注射，每天 1次；④生理盐重水9. 6ml/kg稀释5-氟尿啼陡（5-FU)，尾静脉注射给药每3天1次，连续 11天。
[0057] 相对瘤体积（mm3) =l/2a2b(a为宽，b为长）
[0058]
[0059] 停药后24小时处死动物，剥瘤称重，并用统计学方法处理数据。进行疗效评价。
[0060] 结果实验结果表明，给药21天后，生理盐重水（9. 6ml/k