Egcg在制备对抗脓毒症细菌内毒素靶向药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体设及一种EGCG在制备对抗脈毒症细菌内毒素祀向 药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 革兰阴性菌感染的危害性主要源自其释放的内毒素LPS。内毒素WS结构在20世纪 90年代中期就已经研究清楚，由多糖0抗原、核屯、多糖和类脂Adipid A)=部分组成。核屯、 多糖由庚糖、半乳糖、2-酬基-3-脱氧辛酸（2-ket〇-3-deoxyoctonic acid，KD0)等组成，类 月旨A是葡萄胺二糖脂化形成特殊的糖脂化合物。其结构中类脂A是革兰氏阴性细菌内毒素的 毒性成分。通常LPSW完整的形式存在于细菌细胞外膜上，当其从菌体上游离下来，成为可 溶性的游离WS时具有广泛的生物活性，其活性是细胞壁上内毒素的50~100倍。研究还表明 细菌内毒素可通过两种途径进入血液循环导致内毒素血症:一是外源性革兰阴性菌感染， 二是肠道系统内源性革兰阴性菌转位。很多严重疾病(如损伤、烧伤、屯、、肾、消化系统、呼吸 系统、肿瘤、屯、血管手术、自动免疫等方面的疾病)都直接或间接与革兰阴性菌感染及其释 放的内毒素有关。
[0003] 已知细胞表面受体化R4是革兰氏阴性细菌LPS于祀细胞表面特异性的结合受体， 而CD14是外周血中LPS特异性的受体，革兰氏阴性细菌释放LPS入血形成内毒素血症，LPS通 过识别和结合外周血中CD14形成LPS-CD14复合物，LPS-CD14复合物是LPS进一步识别和结 合祀细胞表面受体化34所必需的；LPS借助CD14与化1?4结合形成LPS-llRA-CDM复合物，从 而激活TLR4信号系统，介导LPS诱导的炎症反应及细胞巧超载损伤等脈毒症反应。因此， CD14-化R4复合物是LPS活化化R4信号从而启动致死性毒性反应的关键因素。如果能封闭 CD14的功能，就能最大限度的抑制WS对化R4的活化，从而阻断WS介导的炎症反应、巧超载 损伤，对于脈毒症、感染性性休克的治疗具有重要的临床意义。
[0004] 表没食子儿茶素EGCG(((-)-Epigallocatechingallate，EGCG)的主要作用具有 抗氧化、抗炎症反应及调节机体免疫功能，但对WS诱导的CD14-TLR4活化W及细胞巧离子 代谢的作用没有报道。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术对治疗脈毒症存在的技术难题，本发明的目的在于提供一种EGCG在 制备对抗脈毒症细菌内毒素祀向药物中的应用。
[0006] 本发明具体通过W下技术方案实现： 本发明提供了 EGCG在制备对抗脈毒症细菌内毒素祀向药物中的应用，所述脈毒症可W 为重症脈毒症、脈毒症休克。
[0007] 所述EGCG特异性作用于CD14-TLR4受体复合物，是LPS诱导脈毒症细胞巧超载的药 物作用祀点。
[000引本发明所述EGCG加入其它治疗脈毒症的药物中，起到祀向作用，其中所述其它治 疗药物为抗感染类药物或重组人活化蛋白c，所述抗感染类药物为抗生素类、抗真菌类、抗 病毒类、抗支原体类、抗肿瘤类或免疫抑制剂;其中所述抗生素类为e-内酷胺类、氨基糖武 类、四环素类、酷胺醇类或大环内脂类，所述抗真菌类为多締类、=挫类、喀晚类或棘白菌素 类。
[0009] 本发明所述EGCG可和适量药学上可W接受的载体制备成药物制剂，其中所述药用 载体可W是pH缓冲系统，渗透压调节剂，防腐剂，稳定剂等辅助成分，优选自：憐酸钢 (Sodium Phosphate)、班巧酸钢（SodiumSuccinate)、组氨酸（Histidine)、甘露醇 (Mannitol )、聚山梨醇醋 20/80(Polyso;rbate20/80)、氯化钢（Sodium畑Ioride)、薦糖 (SucroseKS径甲基氨基甲烧（Trometamol)和乳糖等。
[0010] 本发明所述药物制剂为溶液制剂或干粉制剂，所述药物制剂的给药形式为静脉给 药，皮下注射，腹腔内注射或肌肉注射。
[0011]本发明的有益效果为：本发明发现了EGCG的新药理作用，即EGCG特异性作用于 CD14-TLR4受体复合物，可显著抑制外周血中CD14的水平，W及CD14-TLR4复合物水平，从而 阻断LPS对LTR4信号的活化，抑制了化R4信号介导的炎症反应介质的释放，W及巧超载损 伤，降低脈毒症小鼠的死亡率。
【附图说明】
[0012] W下结合附图所示实施例的【具体实施方式】，对发明的上述内容再作进一步的详细 说明。
[001 ；3 ]图巧小鼠肺血管内皮细胞的巧离子曲线。
[0014] 图2为EGCG对内毒素血症小鼠生存率(Survi val%)的影响。
【具体实施方式】
[0015] 下面结合实施例对本发明做进一步的说明，W下所述，仅是对本发明的较佳实施 例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述掲示 的技术内容加W变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明 的技术实质对W下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
[0016] 本研究采用腹腔注射WS的方法构建WS诱导的BALB/c小鼠脈毒症、内毒素血症模 型，研究EGCG预处理脈毒症小鼠外周血中的CDl4、肺组织中化R4、CD 14-化R4复合物，发现 CD14-TLR4显著被抑制，脈毒症小鼠的血管内皮细胞巧超载被显著逆转，从而证明EGCG能特 异性阻断CD14-TLR4信号，及SOCE信号，逆转LPS介导的内毒素血症、巧超载及脈毒症，并改 善脈毒症小鼠的预后。
[0017] ( - )实验材料； 1、构建LPS诱导小鼠脈毒症模型:采用LPS腹腔注射的方法构建内毒素血症、急性肺损 伤的脈毒症模型。
[001引2、表没食子儿茶素EGCG，浓度IOOuM/只，具有抗氧化、抗炎症和调节免疫功能。
[0019] 3、CD14、TLR4等抗体、巧离子巧光探针，巧成像仪等。
[0020] 4、商品化的TLR4(-/-)基因敲除小鼠。
[0021] (二)实验原理： 1、LPS诱导小鼠脈毒症模型建立:采用WS腹腔注射的方法(LPS lOmg/kg)，构建小鼠脈 毒症模型，LPS-次性注射后正常饲养，检测外周血中LPS浓度，W及小鼠肺组织中的炎症反 应，观察小鼠的死亡率应达到90% W上。
[0022] 2、66〔6对〔014、化34、50〔6的抑制研究：观察66〔6预处理脈毒症小鼠外周血中 CD 14、化R4的水平，W及CD 14-TLR4复合物的水平，W及巨隧细胞巧离子内流情况。TLR4 (-/-)组小鼠平行进行研究作为TLR4正常表达小鼠的对照。
[0023] 3、EGCG对脈毒症小鼠肺损伤的抑制研究：运用RT-PCR、Western blot、ELISA法检 测EGCG处理过的脈毒症小鼠肺组织中TLR4、NFkB、比-6及TNF的表达情况。
[0024] 4、EGCG对对脈毒症小鼠的生存率的影响:BALB/c小鼠给予EGCG灌胃（lOOuM/只）， 连续灌胃3天后，LPS腹腔注射法制作小鼠脈毒症模型，观察5天，记录小鼠死亡情况，计算生 存率。
[002引（立)研究结果： UEGCG预处理的脈毒症小鼠外周血CD14、化R4被显著抑制：与正常对照组比较，EGCG连 续灌胃组，给予EGCG药物3天后，LPS腹腔注射制备脈毒症模型，外周血中CD14的水平，W及 CD 14-化R4复合物水平显著降低，如表1所示EGCG抑制外周血中CD 14的水平和表2所示EGCG 下调CD 14-TLR4复合物的水平。
[0026] 表1 EGCG抑制外周血中CD14的氷平(mean± s，im/ml)
表2 EGCG下调CD 14-TLR4复合物的水平(mean ± S)
表1和表2说明：正常BALB/c小鼠随机分组，每组10只，分组情况：con化〇1即正常对照 组，无任何药物干预;LPS组即WS对照组，即给予LPS(IOmgAg)制作小鼠脈毒症模型;EGCG+ LPS分为3个剂量组：IOuM组，IOOuM组W及ImM组，