成10、5、2.5mg/mL浓度的混悬液；吗I噪美辛肠溶片用纯水配制成0.5mg/mL浓度的混悬 液;秋水仙碱片用纯水配制成0.05mg/mL浓度的混悬液。尿酸钢的配制：取194mL蒸馈水加 6mL Imol/L NaOH,煮沸，加 Ig尿酸，用Imol/L Hcl调PH值至7.2，揽拌冷却，4°(3冰箱保存 2地，去上清液，用滤纸将沉淀物水分吸干，放入干燥箱，70°C烘化，取出，刮下粉末，放入研 鉢内研成细末，装瓶备用。临用时用1 %吐溫-80配成20mg/mL的混悬液，注射时振摇均匀。
[0060] 实验取20~22g雄性ICR小鼠60只，按体重随机分为6组:对照组；阳性对照吗I噪美 辛片lOmg/kg、秋水仙碱片l.Omg/kg、芹菜巧提取物200、100、50mg/kg组;每组10只。除吗I噪 美辛和秋水仙碱仅于实验当天灌胃给药一次外，其余各组动物均每日按剂量灌胃给药一 次，连续3天，溶媒对照组给予20mL/kg.bw的纯水。末次给药后30分钟，于小鼠左足趾向踩关 节方向皮下注射自制尿酸钢混悬液0. 〇5mL/只（Img/只）。致炎后化脱颈椎处死动物，用利剪 于踩关节处取下双足称重，W两足重量之差作为肿胀度。为减小系统误差，试验采用平行操 作。
[0061 ]低、中、高剂量芹菜巧提取物组及吗I噪美辛片、秋水仙碱对对尿酸致小鼠足肿胀的 影响结果见表4。由表4可见，除芹菜巧提取物低剂量组外仅有作用趋势外，阳性对照吗I噪美 辛片lOmg/kg、秋水仙碱片l.Omg/kg、芹菜巧提取物高中剂量组均能明显抑制尿酸所致小鼠 的足肿胀，与对溶媒照组相比差异均具有统计学意义。
[0062]表4对尿酸钢致小鼠足肿胀的影响
[0064] 与对照组相比，**P<0.0 l
[00化]实施例5:
[0066] 芹菜巧提取物体外黄嚷岭氧化酶抑制率实验：
[0067] 实施例1的芹菜巧提取物，取1. OOmg，用20化DMSO溶解并用缓冲液稀释至1. OmL， 得到1.OOmg/血母液。经过W下步骤，样品测试的终浓度为200.OOiig/ml。在空白对照组中加 入10化L焦憐酸钢缓冲液(抑=7.4);阴性对照组先加入60化缓冲液;酶组中加入20化缓冲 液和40化酶溶液(2.5U/L);样品测定组加入20化样品和40化酶溶液(2.5U/L);样品阴性对 照组加入20化样品溶液和40化缓冲液；阳性对照组中加入20化别嚷醇溶液巧OiiM)和40化酶 溶液(2.抓/L)。加样完成后，将其放入恒溫箱中在25°C下解育15分钟。解育完成后，除了空 白对照组，其余均加入40化黄嚷岭溶液(400iiM)，每组的终体积为0 . ImL,并立即在295nm波 长进行动态法测定，读取时间为30分钟，5分钟/次，平行测定=次。
[0068] 黄嚷岭氧化酶抑制率计算公式：（A酶一A样/A酶一A阴）X 100%，通过计算来 检测受试样品的黄嚷岭氧化酶抑制率活性强弱，芹菜巧提取物对黄嚷岭氧化酶抑制率为 45.32% ±8.94% (x±sd)，具有显著的抑制活性。
[0069] 实施例6:
[0070] HPLC检测芹菜巧提取物中Graveobioside A的含量：
[0071 ] 色谱条件为岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪，SHIMADZIK5皿，VP-ODS，150L X 4.6) 色谱柱，检测波长345nm，流速为0.8ml/min，柱溫30°C，流动相为乙腊:0.05 %甲酸水溶液 (19:81)。
[0072] 对照品配制:精密称取对照品Graveobioside A 5.OOmg,置于IOml的容量瓶中，用 50%的乙醇超声溶解，并定容至刻度，WO.45WI1滤膜过滤。供试品配制:精密称取实施例1的 芹菜巧提取物25.OOmg,置于IOml的容量瓶中，用50%的乙醇超声溶解，并定容至刻度，W 0.45]im滤膜过滤。
[0073] Graveobioside A结构式见图1 ,Graveobioside A对照品及芹菜巧提取物色谱图 见图2、图3。经四次平行测定芹菜巧提取物中的Graveobioside A，根据外标法计算含量， Graveobioside A对照品的峰面积为5345953,杂质峰的峰面积为205175,其纯度为 96.30%。芹菜巧提取物中Graveobioside A四次检测峰面积为2532486、2439593、2256169、 2228582，平均值为2364207(RSD% ) ,Graveobioside A含量平均值为9.519±0.28% ( ± sd)。
[0074] 实施例7:
[0075] 按实施例1的方式先获得芹菜巧提取物，按其与赋形剂重量比4:1的比例混合均 匀，制粒，压片。治疗高尿酸血症和痛风3~5片/次，3次/日。
[0076] 实施例8:
[0077] 按实施例1的方式先获得芹菜巧提取物，按其与赋形剂重量比8:1的比例混合均 匀，制粒，压片。治疗高尿酸血症和痛风2~4片/次，2次/日。
[007引实施例9:
[0079] 按实施例1的方式先获得芹菜巧提取物，按其与赋形剂重量比3:1的比例混合均 匀，制粒，制成胶囊剂。治疗高尿酸血症和痛风3~6粒/次，3次/日。
[0080] 实施例10:
[0081] 按实施例1的方式先获得芹菜巧提取物，按其与赋形剂重量比6:1的比例混合均 匀，制粒，制成胶囊剂。治疗高尿酸血症和痛风2~4粒/次，3次/日。
[0082] 实施例11:
[0083] 按实施例1的方式先获得芹菜巧提取物，按常规口服液的制法制成口服液。治疗高 尿酸血症和痛风5~20ml粒/次，2-3次/日。
【主权项】
1. 一种芹菜籽提取物在制备抗高尿酸血症和抗痛风的药物或保健食品中的应用，其特 征在于，所述的药物以芹菜籽提取物为活性成分，芹菜籽提取物含量占药物活性成分质量 的 10~100% 〇2. 根据权利要求1所述的一种芹菜籽提取物在制备抗高尿酸血症和抗痛风的药物或保 健食品中的应用，其特征在于，所述的序菜籽提取物中Graveobioside A含量为8~11%。3. 根据权利要求1所述的一种芹菜籽提取物在制备抗高尿酸血症和抗痛风的药物或保 健食品中的应用，其特征在于，所述的芹菜籽提取物由以下方法获得:取芹菜干燥种子，以8 ~15倍量30~70%V/V乙醇渗漉提取或加热提取2~4次，每次1.5~3小时，提取液减压浓 缩，干燥。4. 根据权利要求1所述的一种芹菜籽提取物在制备抗高尿酸血症和抗痛风的药物或保 健食品中的应用，其特征在于所述的应用是芹菜籽提取物通过降低血清的黄嘌呤氧化酶活 性，降低血清尿酸水平，达到降尿酸作用。5. 根据权利要求1所述的一种芹菜籽提取物在制备抗高尿酸血症和抗痛风的药物或保 健食品中的应用，其特征在于所述的应用是芹菜籽提取物通过抑制对角叉菜胶所致足肿 胀，达到预防痛风性关节炎足肿胀作用。6. 根据权利要求1所述的一种芹菜籽提取物在制备抗高尿酸血症和抗痛风的药物或保 健食品中的应用，其特征在于所述的应用是通过抑制尿酸所致足肿胀，达到预防痛风性关 节炎足肿胀作用。7. 根据权利要求1所述的一种芹菜籽提取物在制备抗高尿酸血症和抗痛风的药物或保 健食品中的应用，其特征在于所述的应用是芹菜籽提取物浓度为200yg/mL时对体外黄嘌呤 氧化酶抑制率为45.32±8.94%(x土sd)。8. 根据权利要求1所述的一种芹菜籽提取物在制备抗高尿酸血症和抗痛风的药物或保 健食品中的应用，其特征在于所述的应用是每人每天服用以〇. 5g~6.0g芹菜籽提取物为活 性成分制成的药物制剂。9. 抗高尿酸血症和抗痛风的药物组合物，含有芹菜籽提取物及可药用载体或赋形剂， 所述的序菜籽提取物中Graveobioside A的含量为8~11%，由以下方法获得:取序菜干燥 种子，以8~15倍量30~70%V/V乙醇渗漉提取或加热提取2~4次，每次1.5~3小时，提取液 减压浓缩，干燥，芹菜籽提取物含量占药物活性成分质量的10~100%。
【专利摘要】本发明涉及一种芹菜籽提取物在制备抗高尿酸血症和抗痛风的药物或保健食品中的应用。本发明还提供一种治疗高尿酸血症和抗痛风的药物或保健食品，以芹菜籽提取物为活性成分，配入适量医药上的载体或辅助性成分制成的制剂。本发明制备工艺简单，芹菜籽提取物可明显降低氧嗪酸钾盐致高尿酸血症模型小鼠的血清尿酸，不同程度降低黄嘌呤氧化酶活性，对小鼠关节炎有明显抑制作用。对高尿酸血症或痛风具有防治作用，可应用于制备抗高尿酸血症或抗痛风的药物或保健食品。
【IPC分类】A61K36/23, A61P19/06, A23L33/105, A61P19/02
【公开号】CN105535048
【申请号】CN201610003095
【发明人】陈纪军, 杨通华, 黄晓燕, 马云保, 张雪梅, 沈勇, 耿长安, 卢承杰
【申请人】中国科学院昆明植物研究所, 北京维亿阳光日用品销售有限公司
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年1月4日