一种益气活血药物在制备保护血管内皮细胞药物中的应用

一种益气活血药物在制备保护血管内皮细胞药物中的应用
【专利摘要】本发明公开了一种益气活血药物在制备保护血管内皮细胞药物中的应用，所述药物组合物的原料药组成为：黄芪100?150重量份、党参80?120重量份、丹参60?100重量份、葛根60?100重量份、淫羊藿60?100重量份、山楂60?100重量份、地黄40?80重量份、当归40?80重量份、黄连40?80重量份、醋延胡索40?80重量份、灵芝40?80重量份、人参20?30重量份、炙甘草20?30重量份；取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床可接受的片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂、滴丸、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。用于保护血管内皮细胞，可抑制缺氧内皮细胞生成MDA、TXA2、VEGF、内皮素、提高缺氧内皮细胞SOD的活力、促进PGI2、NO、eNOS的合成。
【专利说明】-种益气活血药物在制备保护血管内皮细胞药物中的应用 发明领域
[0001] 本发明设及一种益气活血的药物的新用途，特别设及一种益气活血药物在制备保 护血管内皮细胞药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 冠状动脉粥样硬化性屯、脏病(冠屯、病)一直是危害人类健康甚至生命的严重疾病， 冠屯、病的发生，致使相当数量的患者不同程度的丧失劳动能力，既给患者造成生活上的困 难，肉体上的痛苦，又给国家、社会带来一系列问题和严重损失。
[0003] 长期的临床研究，医生们发现冠屯、病屯、绞痛又分多种，有的分为劳动性屯、绞痛、中 间型、变异性屯、绞痛，还有的分为:稳定型、不稳定型和变异型屯、绞痛，各类型屯、绞痛在治疗 上也各有特殊性。
[0004] 专利号为201010212568,发明名称为"一种益气活血的药物组合物及其制备方法 检测方法和用途"的发明专利公开了一种具有益气活血作用的药物，该药物具有扶正固本， 益气活血，行脉止痛的作用。
[0005] 本发明在前述发明专利的基础上继续对该药物的药效作用进行了深入研究。

【发明内容】

[0006] 本发明目的在于公开一种药物的新用途，特别设及一种益气活血药物在制备保护 血管内皮细胞药物中的应用。
[0007] 本发明的技术方案具体如下：
[000引本发明药物的原料药组成为： 黄巧100-150重量份 党参80-120重量份 丹参日0-]00重量份 葛根60-100重量份 淫羊蹇60-100重量化 山植60-100重量份
[0009] 地黄40-80重量份 当 归40-80重量份 黄连40-80重量份 醋延胡索40-80重量份灵芝40-80重量份 人参20-30重量份 炙甘草20-30重量份。
[0010] 本发明药物的原料药组成优选为： 黄巧120重量份 党参100重量份 丹参80重量份 葛根80重量份 淫羊蕾80重量份 山桂80重量份
[0011] 地黄60重量份 普巧㈱重量份 黄连60重量份 醋延胡索60重量化 灵芝納重量份 人参巧重量份
[0012] 炙甘草巧重量份。
[0013] 本发明药物的原料药组成优选为： 黄巧140重量份 党参90重量份 丹参70重量份 葛根90重量份 淫羊蹇90重量份 山桂70重量份
[0014] 地黄50重量份 当归70重量份 黄连70重量份 醋延胡索日0重量份 灵芝日0重量儉 乂参激重量粉 炙甘草28重量份。
[0015] 本发明药物的原料药组成为： 黄巧110重量份 党参110重量份 丹参90重量份 葛根70重量份 淫羊蕾70重量份 山植90重量份
[0016] 地黄70重量份 当 归50重量份 黄连加重量份 醋延胡索70重量份 灵芝：70重量份 人参22重量份 炙甘草22重量份。
[0017] 本发明药物的原料药组成为： 黄巧130重量份 党参100重量份 丹参60重量份 葛根60重量份 淫羊蕾70重量份 山植60重量份
[0018] 地黄40重量份 当归45重量份 黄连40重量份 醋延胡索46重量份灵芝50童量撥 人参26重量份 炙甘草23重量份。
[0019] 取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床可接受的片剂、颗粒剂、丸 剂、胶囊剂、滴丸、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。
[0020] 本发明药物的制备方法包括如下步骤：
[0021] 取原料药中的人参、黄连、醋延胡索、山植与一半量的黄巧，粉碎成细粉，其余八味 原料药与剩余黄巧加水煎煮1-3次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至90-95 °C时相 对密度为1.05~1.15，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并浓缩至90-95 °C 时相对密度为1.15~1.25的清膏，与上述药粉混合，制成片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂、滴丸、 软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。
[0022] 本发明药物的制备方法优选包括如下步骤：
[0023] 取原料药中的人参、黄连、醋延胡索、山植与一半量的黄巧，粉碎成细粉，其余八味 原料药与剩余黄巧加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩 至90°C时相对密度为1.06~1.12，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并浓缩 至90°C时相对密度为1.20~1.22的清膏，与上述药粉混合，制成片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊 剂、滴丸、软胶囊剂、缓释剂、日服液体制剂或冻干粉针剂。
[0024] 本发明药物制剂中滴丸的制备方法包括如下步骤：
[0025] 取原料药，用8-12重量倍的水浸40-80分钟，煮沸1-3小时，取出药液，药渣再加 6-10重量倍的水煎煮70-110分种，合并二次药液，滤过;药液通过已处理好的JD-1 (WLD) 大孔吸附树脂柱，树脂用量为原料药重量的1-3倍，控制吸附流速2-4ml/min，吸附完毕，用 水冲洗树脂柱至流出液澄清后，用树脂重量2-4倍的60-90 %乙醇洗脱，收集洗脱液，后用 1-2体积倍水冲洗，合并洗脱液，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.05-1.20，喷雾干燥，得提 取物喷雾干燥药粉，加入常规辅料制备得滴丸。
[0026] 本发明药物制剂中滴丸的制备方法优选包括如下步骤：
[0027] 取原料药，用10重量倍的水浸60分钟，煮沸2小时，取出药液，药渣再加8重量倍的 水煎煮90分钟，合并二次药液，滤过;药液通过已处理好的JD-l(WLD)大孔吸附树脂柱，树脂 用量为原料药重量的1.5倍，控制吸附流速2-4ml/min，吸附完毕，用水冲洗树脂柱至流出液 澄清后，用树脂重量3倍的70 %乙醇洗脱，收集洗脱液，后用1.5体积倍水冲洗，合并洗脱液， 回收乙醇，浓缩至相对密度为1.08-1.15,喷雾干燥，得提取物喷雾干燥药粉，加入常规辅料 制备得滴丸。
[002引其中，上述制备方法中喷雾干燥的条件控制为:进料速度为35-40ml/min，雾化速 度:25000-35000巧m，进风溫度：130-160 °C，出风溫度:70-80 °C。
[0029] 其中，上述制备方法中喷雾干燥的条件控制优选为:进料速度为37ml/min，雾化速 度:30000巧m，进风溫度：145~147 °C，出风溫度:71~76 °C。
[0030] 其中，上述制备方法中得提取物后，滴丸的制备方法还可W为：
[0031] 称取聚乙二醇-4000,于60-90°C下水浴至彻底溶胀，加入上述提取物喷雾干燥药 粉，加入比例为药粉:聚乙二醇-4000 = 1:2-6，于80-90°C下保溫揽拌均匀，使药粉完全溶 解分散在聚乙二醇-4000中；移入滴丸机中，保持滴距和滴溫，调整滴制参数为：油浴溫度： 80-90°C，药液溫度:75-85°C，滴盘溫度:85-90 °C，制冷溫度：10-15 °C，管口溫度:35- 40°C，滴头口径为:3mm/5mm，滴速:1滴/1秒-----1滴/7秒;调节开关使液滴适速滴入冷凝剂 二甲基硅油或液体石蜡中，药滴经过冷凝收缩成滴丸，收集滴丸，W转速1000-4000转/分离 屯、脱油，再进入筛选干燥机进行筛选干燥，即得本发明药物滴丸。
[0032] 其中，上述制备方法中得提取物后，滴丸的制备方法还可W优选为：
[0033] 称取聚乙二醇-4000,于80-85 °C下水浴至彻底溶胀，加入上述提取物喷雾干燥药 粉，加入比例为药粉:聚乙二醇-4000 = 1:4,于85°C下保溫揽拌均匀，使药粉完全溶解分散 在聚乙二醇-4000中；移入滴丸机中，保持滴距和滴溫，调整滴制参数为:油浴溫度:85°C，药 液溫度:80°C，滴盘溫度：87°C，制冷溫度：12°C，管口溫度：37°C，滴头口径为：3mm/5mm，滴 速：1滴/2秒--1滴/5秒;调节开关使液滴适速滴入冷凝剂二甲基硅油或液体石蜡中，药 滴经过冷凝收缩成滴丸，收集滴丸，W转速1500-3000转/分离屯、脱油，再进入筛选干燥机进 行筛选干燥，即得本发明药物滴丸。
[0034] 本发明带来的有益效果：
[0035] 本发明实施例1片含药血清对缺氧内皮细胞具有一定的保护作用，具体表现在:本 发明实施例1片含药血清可抑制缺氧内皮细胞生成MDA、TXA2、VEGF及内皮素;提高缺氧内皮 细胞SOD的活力;促进PGI2、N0和eNOS的合成。
[0036] 目P:促进血管内皮细胞的生长、能提高细胞内在的抗氧化酶活性、抑制缺氧内皮细 胞分泌VEGF，提高细胞上清液中NO含量、提高细胞上清液中eNOS含量、降低血管内皮细胞的 内皮素浓度、抑制TXA2的合成，促进PGI2的合成。
【附图说明】
[0037] 图1本发明实施例1对血管内皮细胞的影响
[003引注：与正常组比较，#p<0.05，#胖<0.01;与缺氧模型组比较，冲<0.05，*冲<0.01。组 别如下:A:空白组;M:模型组;B:阳性对照组;C:本发明实施例1低剂量组;D:本发明实施例1 中剂量组;E:本发明实施例1高剂量组。
[0039] 下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
[0040] 实验例1本发明药物片剂-本发明实施例1片(按实施例1制备)含药血清对缺氧诱 导血管内皮细胞损伤的保护作用的研究。
[0041] 1实验材料和仪器
[0042] 人厮静脉内皮细胞株ECV-304购自中科院上海细胞所。本发明实施例1片按实施例 1制备。DMEM培养基，膜蛋白酶，四甲基偶氮挫蓝(MTT)购于美国GIBC0公司。胎牛血清为杭州 四季青公司产品。二甲基亚讽(DMS0)购于Amresco公司。
[0043] 酶标仪(Multiskan MK3)购于上海雷勃分析仪器有限公司。紫外可见分光光度计 (UV-2501PC)为日本岛津公司产品。巧光显微镜为Olympus公司产品。细胞培养箱为T肥RM0 产品。
[0044] 2实验方法
[0045] 2.1含药血清的制备
[0046] 将20只SD大鼠随机分为5组。A组灌服等量生理盐水;B组（阳性对照组)灌胃复方丹 参片组混悬液563mg/kg体重（112.6mg/只/200g，相当于成人一倍临床等效剂量），每日1次， 连续给药3d;C组灌胃本发明实施例1片混悬液563mg/kg体重（112.6mg/只/200g，相当于成 人一倍临床等效剂量），每日1次，连续给药3d; D组灌胃本发明实施例1片混悬液2815mg/kg 体重(相当于成人五倍临床等效剂量)每日1次，连续给药3d;E组灌胃本发明实施例1片混悬 液5630mg/kg体重(相当于成人十倍临床等效剂量)每日1次，连续给药3d。末次给药后比，清 醒状态下行颈动脉分离插管采血，无菌分离血清，即得含药血清和空白血清，56°C，30min灭 活，-20°C存放备用。
[0047] 2.2实验分组
[004引实验分为正常细胞培养组(正常对照组，培养于普通细胞培养箱），缺氧模型组，置 于培养箱中培养，依照"2.1含药血清的制备"中的血清获取情况进行分组:A组:空白组，采 用A组大鼠血清（占10%，下同）培养，细胞培养于普通培养箱;Μ组:模型组，采用A组大鼠血 清培养，细胞培养于缺氧装置中；B组：阳性对照组，采用B组大鼠血清培养，细胞培养于缺氧 装置中；C组:本发明实施例1低剂量组，采用C组大鼠血清培养，细胞培养于缺氧装置中；D 组:本发明实施例1中剂量组，采用D组大鼠血清培养，细胞培养于缺氧装置中；E组:本发明 实施例1高剂量组，采用E组大鼠血清培养，细胞培养于缺氧装置中。
[0049] 2.3检测方法
[0化0] 2.3.1MTT法检测本发明实施例1对血管内皮细胞的影响
[0化1] 取ECV-304细胞5*1〇4,培养于DMEM培养基(含10%胎牛血清，青霉素 lOOU/ml，链霉 素 lOOg/ml)，3代W后，收集细胞，接种于96孔细胞培养板内，8h后弃去细胞培养液，分别向 孔中加入不同浓度的本发明实施例1药液200U 1，每个浓度组设重复孔3个，空白对照组每 孔加入20化1不含本发明实施例1药液的DMEM培养液，除A组外，其余各组覆盖无菌石蜡油 50ul/孔)37 °C、C02培养箱培养4她。终止培养前每孔加入MTT(最终浓度0.5mg/ml)，37 °C、 5%C02解育4h。弃去上清液，每孔内加入DMSO 15化1，静置lOmin。在酶标仪57化m下测定各 孔吸光度值。
[00对 2.3.2MDA含量、SOD活力测定
[0053]参照试剂盒说明书进行。0.25%膜蛋白酶消化细胞，计数，去6*105个细胞，用PBS 洗涂2次。将细胞充分裂解后离屯、，取10化1细胞上清按试剂盒说明进行操作。
[0化4] 2.3.3VEGF浓度检测
[0055]收集不同实验条件下的培养液上清，离屯、去除细胞碎片，加入1%的FCS，-20°C保 存。采用购买的VEGFELISA试剂盒(R&D，USA)检测上清中VEGF的浓度。按产品说明书操作，在 结合有VEGF抗体的微量滴定板中加入倍比稀释的VEGF标准品和样品，解育30min，洗涂缓冲 液洗涂3次，加入酶标VEGF抗体解育30min，洗涂3次，加入底物液反应20min，终止反应。 450nm波长下测光吸收值。VEG阿农度W细胞数校正。
[0056] 2.3.4eN0S含量的测定
[0057]采用操作步骤按照N0S测定试剂盒的说明进行。细胞Wl*l〇4/ml接种于24孔板， 1ml/孔(每实验组6孔），分组及处理方法同上。终止培养后收集各组细胞上清液lOOuL，利用 752型紫外光栅分光光度计于530nm波长测定其吸光值，计算各组eNOS的含量。
[0化引 2.3.5N0含量的测定
[0059] 采用硝酸还原酶法，具体操作步骤按照NO试剂盒的说明书进行。细胞W巧1〇5/孔 接种于24孔板(每实验组4孔），分组及处理方法同上。终止培养后收集各组细胞上清液10化 L，于550nm波长测定其吸光值，计算各组NO分泌量。
[0060] 2.3.6内皮素的测定
[0061] 各组均于干预前和干预后2地后取上清液10化L，置于用抑肤酶处理过的离屯、管 中，-20 °C保存，采用放免法测定内皮素，浓度单位ng/L。
[0062] 2.3.71'皿2和?612的检测
[0063] 设重复孔6个，各组分别培养24h后收集细胞上清液，并在低溫离屯、机中W 3000巧111，离屯、5111^，然后再次收集细胞上清液，胆存于-20°(：冰箱内待测，酶标仪检测。2.4 观察指标及检测方法
[0064] MTT法检测本发明实施例1对血管内皮细胞的影响；自动生化仪检测MDA含量、SOD 活力;ELISA法检测VEGF、Txa2和PGI2浓度;紫外光栅分光光度计检测eNOS含量;采用硝酸还 原酶法检测NO含量;放免法测定内皮素含量。
[0065] 2.5统计学分析
[0066] 所有数据W均数±标准差表示(X±S)，两组间均数比较用t检验，多组间均数比较 用单因素方差分析(one-way AN0VA，各组间两两比较采用SNK-q检验。采用SPSS 17.0统计 分析软件进行处理，P<〇. 05有统计学意义。
[0067] 3 结果
[006引 3.1MTT法检测本发明实施例1对血管内皮细胞的影响
[0069] MTT实验结果发现，与正常对照组比较，模型组血管内皮细胞增殖明显受到抑制(P <0.01)。复方丹参和本发明实施例1各剂量组能显著促进血管内皮细胞的生长(P<〇.01)，见 图1。
[0070] 3.2本发明实施例1片对各组血管内皮细胞MDA含量、SOD活力的影响
[0071] 缺氧能显著加剧细胞膜的脂质过氧化反应，与正常对照组比较，缺氧损伤的各组 血管内皮细胞中MDA含量明显升高(P<0.01)。复方丹参和本发明实施例1均能显著抑制缺氧 弓旭的MDA升高(P<0.01)。缺氧模型组细胞SOD活性明显下降，与正常对照组比较，差异有显 著性(P<0.01 )，不同浓度的本发明实施例1可剂量依赖地抑制SOD活性降低，表明本发明实 施例1片能通过提高细胞内在的抗氧化酶活性，保护细胞膜免受自由基的攻击。见表1
[0072] 表1本发明实施例1片对MDA含量、SOD活力的影响
[0073]
[0074] 注：与正常组比较，*P<0.05,林P<0.01;与缺氧模型组比较，ΔΡ<〇.〇5, Δ ΔΡ< 0.01。!!为重复孔数。
[007引3.3本发明实施例1片对各组血管内皮细胞分泌的VEGF的影响
[0076] 细胞生长至90%融合，去血清2地，分别加入含不同剂量的含药血清解育1她，收集 上清液测VEGF浓度，加药情况如"2.4实验分组"所示。结果发现，与正常组相比较，模型组 VEGF含量明显升高(Ρ<0.01)与模型组相比较，本发明实施例1片各剂量和复方丹参均能明 显抑制缺氧内皮细胞分泌VEGF(P<0.01)，并呈剂量依赖性。见表2
[0077] 表2本发明实施例1片对内皮细胞分泌的VEGF的影响 [00781
[0079]
[0080] 注：与正常组比较，*P<0.05,林P<0.01;与缺氧模型组比较，ΔΡ<〇.〇5, Δ ΔΡ< 0.01。!!为重复孔数。
[0081] 3.4各组血管内皮细胞NO的含量的变化
[0082] 结果表明，与正常组相比较，模型组细胞上清液中NO含量明显下降(P<0.01);和模 型对照组相比较，复方丹参及本发明实施例1片各剂量均能提高细胞上清液中NO含量，差异 有统计学意义(P<〇. 01)。见表3
[0083] 表3各组细胞上清液中NO含量情况
[0084]
[0085] 注：与正常组比较，*P<0.05,林P<0.01;与缺氧模型组比较，ΔΡ<〇.〇5, Δ ΔΡ< Ο.ΟΚη为重复孔数。
[00化]3.5各组血管内皮细胞eNOS的含量变化
[0087]结果表明，和正常组相比较，模型组细胞上清液中eNOS含量明显下降(P<0.01);与 模型对照组相比较，复方丹参W及各本发明实施例1片各剂量均能提高细胞上清液中eNOS 含量，差异有统计学意义(P<〇.01)。见表4 [008引表4各组细胞上清液中eNOS含量情况
[0089]
[0090]
[0091] 注：与正常组比较，*P<0.05,林P<0.01;与缺氧模型组比较，ΔΡ<〇.〇5, Δ ΔΡ< 0.01。!!为重复孔数。
[0092] 3.6本发明实施例1片对各组血管内皮细胞分泌内皮素的影响
[0093] 结果表明，与正常组相比，模型组的内皮素浓度明显升高(Ρ<0.01);与模型组相比 较，复方丹参和本发明实施例1各剂量均能显著降低血管内皮细胞的内皮素浓度(ρ<〇.〇ι，ρ <0.05)。运表明，急性缺氧可显著增加培养的血管内皮细胞的内皮素浓度，复方丹参片和本 发明实施例1片可显著降低缺氧引起的内皮素浓度的增加，从而起到保护作用。见表5
[0094] 表5本发明实施例1片含药血清对缺氧致血管内皮细胞分泌内皮素的影响
[0095]
[0096] 注：与正常组比较，*Ρ<0.05,林Ρ<0.01;与缺氧模型组比较，ΔΡ<〇.〇5, Δ ΔΡ< 0.01。!!为重复孔数。
[0097] 3.7本发明实施例1片对各组血管内皮细胞合成了乂42和口612的影响
[0098] 检测发现，与正常组相比较，模型组ΤΧΑ2含量明显上升（Ρ<0.01);与模型组相比 较，复方丹参和本发明实施例1各剂量组均能使其含量下降(Ρ<〇.01，Ρ<〇.05);与正常组相 比较，模型组PGI2含量下降；与模型组相比较，复方丹参及本发明实施例1各剂量均能增加 其含量。<〇.〇1，？<〇.〇5)。说明缺氧损伤可^导致血管内皮细胞合成了乂42增加，口612下降， 不同浓度本发明实施例1含药血清可W抑审化XA2的合成，促进PGI2的合成。见表6
[0099] 表6本发明实施例1片含药血清对缺氧致血管内皮细胞分泌TXA2和PGI2的影响
[0100]
[0101] 注：与正常组比较，*P<0.05,林P<0.01;与缺氧模型组比较，ΔΡ<0.05, Δ ΔΡ< 0.01。!!为重复孔数。
[0102] 4结论
[0103] 本发明实施例1片含药血清对缺氧内皮细胞具有一定的保护作用，具体表现在:本 发明实施例1片含药血清可抑制缺氧内皮细胞生成MDA、ΤΧΑ2、VEGF及内皮素;提高缺氧内皮 细胞SOD的活力;促进PGI2、N0和eNOS的合成。
[0104] 下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。
【具体实施方式】
[0105] 实施例1:本发明药物片剂 黄巧120g 觉参1佩g 丹参80g 葛根80g 淫羊蕾滿g 山植80g
[0106] 地黄60g 当 归敞g 黄连60g 醋延胡索60g 灵芝城g 人参巧g 炙甘草25g;
[0107] 取原料药中的人参、黄连、醋延胡索、山植与一半量的黄巧，粉碎成细粉，其余八味 原料药与剩余黄巧加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩 至90°C时相对密度为1.06~1.12，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并浓缩 至90°C时相对密度为1.20~1.22的清膏，与上述药粉混合，制成颗粒，干燥，压制成1000片 (小片），包糖衣或薄膜衣片，或压制成500片(大片），包薄膜衣，即得。小片每片重0.3g，每日 服用3次，一次4~6片；大片每片重0.6g，每日服用3次，一次2~3片。用于保护血管内皮细 胞、抑制缺氧内皮细胞生成MDA、TXA2、VEGF及内皮素；提高缺氧内皮细胞SOD的活力；促进 PGI2、N0和eNOS的合成；即:促进血管内皮细胞的生长、能提高细胞内在的抗氧化酶活性、抑 制缺氧内皮细胞分泌VEGF，提高细胞上清液中NO含量、提高细胞上清液中eNOS含量、降低血 管内皮细胞的内皮素浓度、抑审化XA2的合成，促进PGI2的合成。
[010引实施例2:本发明药物胶囊剂 黄巧HOg; 觉参90g 丹参70g 葛根90g 淫羊蕾90g 山植70g
[0109] 地黄加 g 当 归70g 黄连70g 醋延胡索甜g 灵.芝.日Og 人参2始 炙甘草28g;
[0110] 取原料药中的人参、黄连、醋延胡索、山植与一半量的黄巧，粉碎成细粉，其余八味 原料药与剩余黄巧加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩 至90°C时相对密度为1.06~1.12，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并浓缩 至90°C时相对密度为1.20~1.22的清膏，与上述药粉混合，制成胶囊剂。用于保护血管内皮 细胞、抑制缺氧内皮细胞生成MDA、TXA2、VEGF及内皮素;提高缺氧内皮细胞SOD的活力;促进 PGI2、N0和eNOS的合成；即:促进血管内皮细胞的生长、能提高细胞内在的抗氧化酶活性、抑 制缺氧内皮细胞分泌VEGF，提高细胞上清液中NO含量、提高细胞上清液中eNOS含量、降低血 管内皮细胞的内皮素浓度、抑制TXA2的合成，促进PGI2的合成。
[0111] 实施例3:本发明药物颗粒剂 黄茂巧Og .觉参lOOg 丹参60g 葛根60g 淫羊蕾70g 山植60g
[0112] 地黄40g 当归45g 黄连40g 醋延胡索46g 灵芝50g 人参％g
[0113] 炙甘草23呂;：
[0114] 取原料药中的人参、黄连、醋延胡索、山植与一半量的黄巧，粉碎成细粉，其余八味 原料药与剩余黄巧加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩 至90°C时相对密度为1.06~1.12，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并浓缩 至90°C时相对密度为1.20~1.22的清膏，与上述药粉混合，制成颗粒剂。用于保护血管内皮 细胞、抑制缺氧内皮细胞生成MDA、TXA2、VEGF及内皮素;提高缺氧内皮细胞SOD的活力;促进 PGI2、N0和eNOS的合成；即:促进血管内皮细胞的生长、能提高细胞内在的抗氧化酶活性、抑 制缺氧内皮细胞分泌VEGF，提高细胞上清液中NO含量、提高细胞上清液中eNOS含量、降低血 管内皮细胞的内皮素浓度、抑制TXA2的合成，促进PGI2的合成。
[0115] 实施例4:本发明药物丸剂 黄庚120g 觉参lOOg 丹参80g 葛根80g 淫羊蕾8始 山植80g
[0116] 地黄60g 当归賴g 黄连6()g 醋延胡索锁g 灵芝撕g 人参巧g 炙甘草巧吕
[0117] 取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成丸剂。用于保护血管内皮细胞、 抑制缺氧内皮细胞生成MDA、TXA2、VEGF及内皮素;提高缺氧内皮细胞SOD的活力;促进PGI2、 NO和eNOS的合成；即：促进血管内皮细胞的生长、能提高细胞内在的抗氧化酶活性、抑制缺 氧内皮细胞分泌VEGF，提高细胞上清液中NO含量、提高细胞上清液中eNOS含量、降低血管内 皮细胞的内皮素浓度、抑制TXA2的合成，促进PGI2的合成。
[0118] 实施例5:本发明药物口服液 黄蔑140g 觉参90g 丹参70g 葛根90g 淫羊蕾90g 山植70g
[0119] 地黄50g 当 归70g 黄连70g 醋延胡索日Og 灵芝日Og 人参28g 炙甘草28g;
[0120] 取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成口服液。用于保护血管内皮细 胞、抑制缺氧内皮细胞生成MDA、TXA2、VEGF及内皮素；提高缺氧内皮细胞SOD的活力；促进 PGI2、N0和eNOS的合成；即:促进血管内皮细胞的生长、能提高细胞内在的抗氧化酶活性、抑 制缺氧内皮细胞分泌VEGF，提高细胞上清液中NO含量、提高细胞上清液中eNOS含量、降低血 管内皮细胞的内皮素浓度、抑制TXA2的合成，促进PGI2的合成。
[0121] 实施例6:本发明药物注射剂 黄巧nOg 觉参UOg: 丹参90寫 葛根70g 淫羊薰7Qg 山植90g
[0122] 地黄70g 当旧拂g 黄连50g 醋延胡索7Qg 灵芝巧g 人参22g 炙甘草2確；
[0123] 取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成注射剂。用于保护血管内皮细 胞、抑制缺氧内皮细胞生成MDA、TXA2、VEGF及内皮素；提高缺氧内皮细胞SOD的活力；促进 PGI2、N0和eNOS的合成；即:促进血管内皮细胞的生长、能提高细胞内在的抗氧化酶活性、抑 制缺氧内皮细胞分泌VEGF，提高细胞上清液中NO含量、提高细胞上清液中eNOS含量、降低血 管内皮细胞的内皮素浓度、抑审化XA2的合成，促进PGI2的合成。
[0124] 实施例7:本发明药物滴丸 黄茂1卽g 猜參1狐哲 丹参微得 葛根80g 淫羊蕾80g 山植80g
[0125] 地黄60g 当 归60g 黄连如g 醋延胡索6姑 灵芝獄g 入参毁径 炙甘草巧g;
[0126] 取原料药，用10重量倍的水浸60分钟，煮沸2小时，取出药液，药渣再加8重量倍的 水煎煮90分钟，合并二次药液，滤过;药液通过已处理好的JD-l(WLD)大孔吸附树脂柱，树脂 用量为原料药重量的1.5倍，控制吸附流速2-4ml/min，吸附完毕，用水冲洗树脂柱至流出液 澄清后，用树脂重量3倍的70 %乙醇洗脱，收集洗脱液，后用1.5体积倍水冲洗，合并洗脱液， 回收乙醇，浓缩至相对密度为1.08-1.15，喷雾干燥，得提取物喷雾干燥药粉，加入常规辅料 制备得滴丸，丸重49-52mg/粒，口服，一次10粒，一日3次。用于保护血管内皮细胞、抑制缺氧 内皮细胞生成MDA、TXA2、VEGF及内皮素;提高缺氧内皮细胞SOD的活力;促进PGI2、N0和eNOS 的合成；即：促进血管内皮细胞的生长、能提高细胞内在的抗氧化酶活性、抑制缺氧内皮细 胞分泌VEGF，提高细胞上清液中NO含量、提高细胞上清液中eNOS含量、降低血管内皮细胞的 内皮素浓度、抑制TXA2的合成，促进PGI2的合成。
[0127] 实施例8:本发明药物滴丸 黄巧120g 觉参lOOg 丹参8()g 葛根8;0g 淫羊曇:渊g 山植80g
[012引地黄说)g 当 归说)g 黄连60径 醋延胡索60g 灵芝6始 人参巧g 炙甘草巧g;
[0129]取原料药，用10重量倍的水浸60分钟，煮沸2小时，取出药液，药渣再加8重量倍的 水煎煮90分钟，合并二次药液，滤过;药液通过已处理好的JD-l(WLD)大孔吸附树脂柱，树脂 用量为原料药重量的1.5倍，控制吸附流速2-4ml/min，吸附完毕，用水冲洗树脂柱至流出液 澄清后，用树脂重量3倍的70 %乙醇洗脱，收集洗脱液，后用1.5体积倍水冲洗，合并洗脱液， 回收乙醇，浓缩至相对密度为1.08-1.15，喷雾干燥，喷雾干燥的条件为:进料速度为37ml/ min，雾化速度:30000巧m，进风溫度：145~147°C，出风溫度:71~76°C，得提取物喷雾干燥 药粉;称取聚乙二醇-4000，于80-85 °C下水浴至彻底溶胀，加入上述提取物喷雾干燥药粉， 加入比例为药粉:聚乙二醇-4000 = 1:4,于85°C下保溫揽拌均匀，使药粉完全溶解分散在聚 乙二醇-4000中；移入滴丸机中，保持滴距和滴溫，调整滴制参数为:油浴溫度:85°C，药液溫 度：80°C，滴盘溫度：87°C，制冷溫度：12°C，管口溫度：37°C，滴头口径为：3mm/5mm，滴速：1 滴/2秒-----1滴/5秒;调节开关使液滴适速滴入100#二甲基硅油或液体石蜡中，药滴经过 冷凝收缩成滴丸，收集滴丸，W转速1500-3000转/分离屯、脱油，再进入筛选干燥机进行筛选 干燥，即得本发明药物滴丸，丸重50mg/粒，口服，一次10粒，一日3次。用于保护血管内皮细 胞、抑制缺氧内皮细胞生成MDA、TXA2、VEGF及内皮素；提高缺氧内皮细胞SOD的活力；促进 PGI2、N0和eNOS的合成；即:促进血管内皮细胞的生长、能提高细胞内在的抗氧化酶活性、抑 制缺氧内皮细胞分泌VEGF，提高细胞上清液中NO含量、提高细胞上清液中eNOS含量、降低血 管内皮细胞的内皮素浓度、抑审化XA2的合成，促进PGI2的合成。
【主权项】
1. 一种益气活血药物在制备保护血管内皮细胞药物中的应用，所述药物的原料药组成 为:黄芪100-150重量份、党参80-120重量份、丹参60-100重量份、葛根60-100重量份、淫羊 藿60-100重量份、山楂60-100重量份、地黄40-80重量份、当归40-80重量份、黄连40-80重量 份、醋延胡索40-80重量份、灵芝40-80重量份、人参20-30重量份、炙甘草20-30重量份;取上 述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床可接受的片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂、滴 丸、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。2. 如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的保护血管内皮细胞是指:可抑制缺氧内 皮细胞生成104、丁乂42^6?、内皮素或/和提高缺氧内皮细胞500的活力或/和促进?612、勵、 eNOS的合成。3. 如权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述药物的原料药组成为： 黄蔑120重量份 党参100重量份 丹参80重量份 葛根80重量份 淫羊藿80重量份 山楂80重量份 地黄60重量份 当 归60重量份 黄连60重量份 醋延胡索60重量份 灵芝60重量份 人参25重量份' 炙甘草25重量份。4. 如权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述药物的原料药组成为： 黄苗140重量份 .党参90重量份 丹参7Q重量份 葛根90重量份 淫羊藿90重量份 山楂70重量份 地黄50重量份 当归70重量份 黄连70重量份 醋延胡索50重量份 灵芝50重量份 人参28重量份 炙甘草28重量份&5. 如权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述药物的原料药组成为： 黄芪110重量份 党参110重量份 丹参90重量份 葛根70重量份 掙羊藿70重量份 山楂90重量份 地黄70重量份 当归50重量份 黄连50重量份 醋延胡索70重量份 灵芝70重量份 人参22重量份 炙甘草22重量汾。6. 如权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述药物的原料药组成为： 黄芪130重量份 党参100重量份 丹参60重量份 葛根60重量份 淫羊藿70重量份 山楂60重量份 地黄40重量份 当归45重量份 黄连40重量份 醋延胡索46重量份灵芝50重量份 人参26重量份 炙甘草23重量份。7. 如权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述药物的制备方法包括如下步骤： 取原料药中的人参、黄连、醋延胡索、山楂与一半量的黄芪，粉碎成细粉，其余八味原料 药与剩余黄芪加水煎煮1-3次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至90-95 °C时相对密 度为1.05~1.15，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并浓缩至90-95°C时相 对密度为1.15~1.25的清膏，与上述药粉混合，制成片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂、滴丸、软胶 囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。8. 如权利要求7所述的应用，其特征在于所述药物的制备方法包括如下步骤： 取原料药中的人参、黄连、醋延胡索、山楂与一半量的黄芪，粉碎成细粉，其余八味原料 药与剩余黄芪加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至90 °C时相对密度为1.06~1.12，放冷，加一倍量乙醇使沉淀，取上清液，回收乙醇，并浓缩至90 °C时相对密度为1.20~1.22的清膏，与上述药粉混合，制成片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂、滴 丸、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。9. 如权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述药物滴丸制剂的制备方法包括如下步 骤： 取原料药，用8-12重量倍的水浸40-80分钟，煮沸1 一3小时，取出药液，药渣再加6- 10重量倍的水煎煮70-110分种，合并二次药液，滤过;药液通过已处理好的JD-I大孔吸附 树脂柱，树脂用量为原料药重量的1 一3倍，控制吸附流速2-4ml/min，吸附完毕，用水冲洗树 脂柱至流出液澄清后，用树脂重量2-4倍的60-90 %乙醇洗脱，收集洗脱液，后用1一2体积 倍水冲洗，合并洗脱液，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.05-1.20，喷雾干燥，得提取物喷雾 干燥药粉，加入常规辅料制备得滴丸。10. 如权利要求9所述的应用，其特征在于所述药物滴丸制剂的制备方法包括如下步 骤： 取原料药，用10重量倍的水浸60分钟，煮沸2小时，取出药液，药渣再加8重量倍的水煎 煮90分钟，合并二次药液，滤过;药液通过已处理好的JD-I大孔吸附树脂柱，树脂用量为原 料药重量的1.5倍，控制吸附流速2-4ml/min，吸附完毕，用水冲洗树脂柱至流出液澄清后， 用树脂重量3倍的70%乙醇洗脱，收集洗脱液，后用1.5体积倍水冲洗，合并洗脱液，回收乙 醇，浓缩至相对密度为1.08-1.15，喷雾干燥，得提取物喷雾干燥药粉，加入常规辅料制备得 滴丸。11. 如权利要求9或10所述的应用，其特征在于所述喷雾干燥的条件为：进料速度为 35-40ml/min，雾化速度：25000-35000rpm，进风温度：130-160 °C，出风温度：70-80 °C。12. 如权利要求11所述的应用，其特征在于所述喷雾干燥的条件为:进料速度为37ml/ min，雾化速度:30000rpm，进风温度：145~147 °C，出风温度:71~76 °C。13. 如权利要求9所述的应用，其特征在于在得提取物物喷雾干燥药粉后，按如下方法 制备成滴丸： 称取聚乙二醇-4000，于80-85 °C下水浴至彻底溶胀，加入上述提取物喷雾干燥药粉，加 入比例为药粉:聚乙二醇-4000 = 1:4,于85°C下保温搅拌均匀，使药粉完全溶解分散在聚乙 二醇-4000中；移入滴丸机中，保持滴距和滴温，调整滴制参数为：油浴温度:85°C，药液温 度：80 °C，滴盘温度：87 °C，制冷温度：12 °C，管口温度：37 °C，滴头口径为：3mm/5mm，滴速：1 滴/2秒-----1滴/5秒;调节开关使液滴适速滴入冷凝剂二甲基硅油或液体石蜡中，药滴经 过冷凝收缩成滴丸，收集滴丸，以转速1500-3000转/分离心脱油，再进入筛选干燥机进行筛 选干燥，即得本发明药物滴丸。
【文档编号】A61P9/10GK105998340SQ201610465929
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月23日
【发明人】荆志伟, 姜作玲, 洪毅, 欧阳竞锋
【申请人】上海医药集团青岛国风药业股份有限公司