专利名称：具抗癌活性的藤黄酸类化合物的复合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及新颖的以藤黄酸类化合物与不同碱基或离子形成的药用复合物，其制备方法，以及该药用复合物在治疗肝癌、肺癌及其他肿瘤中的应用。
项守仁、程廷楷等人在“江西医学院学报”1980(1),17；1981(1),13中报道藤黄酸对肉瘤(S180)和艾氏腹水癌有抑制作用。孙周等人在“江西医学院学报”1983(3)，5中报道将藤黄用乙醇提取，得到的乙醇总提取物回收乙醇，用硼酸水溶解，并加吐温80助溶制成针剂，对此针剂进行有关毒性研究。潘德年等人在“天津医药肿瘤学附刊”1981,8:230中报道将藤黄制成注射液用于临床治疗50例恶性肿。目前报道主要是将藤黄的总提取物溶于生理盐水使用。据报道(《江西医药》1982年3期1)藤黄临床使用对血管有局部刺激作用，当滴注过速或浓度稍高或时间较长时，可致浅静脉炎；注射时药液渗漏至血管外，可引起局部肿胀与疼痛。一般化疗抗癌药不但杀死癌细胞，而且影响正常的造血系统和白细胞。
本发明的目的是提供一类新的具有抗癌活性的藤黄酸类化合物与不同碱基或离子形成的药用复合物，其水溶解增加，且刺激性与毒性降低，同时，不影响正常的造血系统和白细胞。
本发明的另一目的是提供一种制备上述藤黄酸类化合物与不同碱基或离子形成药用复合物的方法。藤黄酸类化合物或其形成的药用复合物水溶性好，可与药学上可接受的载体形成药物组合物。
本发明的进一步目的是提供一种治疗肝癌、肺癌及其他肿瘤的药物组合物，其疗效优于5-Fu(5-氟尿嘧啶)，刺激性与毒性均低，而且不影响正常的造血系统和白细胞。
本发明的另一目的是提供上述药用组合物在制备治疗肝癌、肺癌及其他肿瘤的药物方面的用途。
本发明的技术方案如下。
下述通式(Ⅰ)为藤黄酸类化合物的复合物 其中R表示-CH=CH-或-CH2-CH(OH)-；B表示C1-C8的含氮有机碱。
上述藤黄酸类化合物的复合物的优选方案是，其中R表示-CH=CH-或-CH2-CH(OH)-；B表示碱性氨基酸。
上述藤黄酸类化合物的复合物的更为优选的方案是，其中R表示-CH=CH-或-CH2-CH(OH)-；B表示精氨酸或赖氨酸。
藤黄酸类化合物的复合物的制备方法，其特征在于总藤黄酸、藤黄酸或新藤黄酸与含氮有机碱以1∶0.8～2.0的比例(摩尔比)，在水和/或醇溶剂中反应。
藤黄酸类化合物的复合物的制备方法，其特征在于总藤黄酸、藤黄酸或新藤黄酸与碱性氨基酸以1∶0.8～2.0的比例(摩尔比)，在水和/或醇溶剂中反应。
所述藤黄酸类化合物的复合物的制备方法，其特征在于总藤黄酸、藤黄酸或新藤黄酸与碱性氨基酸以1∶1～1.5(摩尔比)的比例，在水和/或醇溶剂中反应。
上述藤黄酸类化合物的复合物的制备方法，其特征在于总藤黄酸、藤黄酸或新藤黄酸以1∶1～1.5(摩尔比)的比例，与精氨酸或赖氨酸或反应。
用于治疗肝癌、肺癌及其他肿瘤的药物组合物，其中含有治疗有效量的上述复合物和药学上可接受的载体。
上述任意一项的复合物在制备治疗肝癌、肺癌及其他肿瘤的药物中的应用。
发明人用总藤黄酸或藤黄酸、新藤黄酸与C1-C8的含氮有机碱形成药用复合物，尤其是与碱性氨基酸形成复合物，增加了水中的溶解性，减少其刺激性和毒性。总藤黄酸或藤黄酸、新藤黄酸可以从藤黄(Garcinia hanburryi)分泌的干燥树脂中提取得到的，也可以合成或用其它方法得到。
下面是按文献方法(《江西医学院学报》1980,(2):1)制备总藤黄酸或藤黄酸、新藤黄酸藤黄(Garcinia hanburryi)分泌的干燥树脂用有机溶剂提取，得到R为-CH=CH-和-CH2-CH(OH)-的混合物(总藤黄酸)，经层析分离得到化合物1,R为-CH=CH-(藤黄酸)和化合物2,R为-CH2-CH(OH)-(新藤黄酸)。
其中R为-CH=CH-和-CH2-CH(OH)-组成的总藤黄酸类化合物与C1-C8的含氮有机碱形成药用复合物的制备包括以下步骤将所得的总藤黄酸与水和/或醇混合，按1∶0.8～2.0的比例(摩尔比)，加入C1-C8的含氮有机碱，较好的选择是碱性氨基酸，优选精氨酸或赖氨酸，搅拌混合均匀，过滤。
总藤黄酸或藤黄酸、新藤黄酸的复合物的制备将化合物1和2分别溶解在水和/或醇溶剂中，按1∶0.8～2.0的比例(摩尔比)与C1-C8的含氮有机碱，较好的选择是碱性氨基酸，优选精氨酸或赖氨酸，反应。
过滤得到的滤液，加入药用辅料，制备成药物制剂。
发明人在研究中发现本发明中藤黄酸类化合物与C1-C8的含氮有机碱，尤其是碱性氨基酸，形成药用复合物对肝癌、肺癌等癌症具有良好的治疗作用，且毒性降低；同时，由于藤黄酸类化合物的复合物的水溶性增加，不但适于配制各种剂型，而且，水溶性增加本身也促进了药物在体内的吸收，从而使疗效增加。文献报道(孙周等人，《江西医学院院报》1983,No3:5)藤黄乙醇总提取物小鼠腹腔注射的LD50为33mg/kg,抑癌半数的有效量为5mg/kg；本发明中，将总藤黄酸钠与总藤黄酸精氨酸复合物进行比较，总藤黄酸钠小鼠静脉注射LD50为28.56mg/kg，而总藤黄酸精氨酸复合物的小鼠静脉注射LD50为41.46mg/kg，腹腔抑癌的半数有效量为0.76mg/kg。
本发明还发现藤黄酸类化合物与C1-C8的含氮有机碱形成药用复合物，尤其是与碱性氨基酸形成的复合物后，其抗癌作用与一般的化疗抗癌药有所区别，该组合物能选择性的杀死癌细胞，而对正常的造血系统和白细胞没有影响，见实施例11。
本发明还表明藤黄酸类化合物与C1-C8的含氮有机碱形成药用复合物在血管途径给药时所产生的局部刺激性副作用比单用藤黄酸低。如家兔耳缘静脉无菌操作分别缓慢静脉滴注总藤黄酸钠盐、总藤黄酸碱性氨基酸复合物如总藤黄酸精氨酸复合物及0.9％氯化钠注射液，间日一次，连续3次，结果表明，与对照组相比藤黄酸碱性氨基酸复合物对家兔耳缘静脉无刺激性，组织切片检查兔耳缘静脉血管结构正常，无内皮损伤，无血栓形成及其它药理性变化，总藤黄酸钠盐对家兔耳缘静脉有刺激性，组织切片检查兔耳缘静脉血管略有扩张，部分内皮细胞坏死、脱落，周围组织见炎症反应。
本发明的药用组合物除含有治疗有效量的上述通式(Ⅰ)为活性成分，还应含有一种或多种药学上可接受的载体。
上文所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如稀释剂、赋形剂和水等，填充剂如淀粉、蔗糖，乳糖，微晶纤维素等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂如甘油；崩解剂如羧甲基淀粉钠，羟丙纤维素，交联羧甲基纤维素，琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇，十二烷基硫酸钠；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、微粉硅胶和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。
本发明的药用组合物可通过口服、直肠或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂等，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆、口服液、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、粉针、水或油性悬浮剂等。优选的形式是片剂、包衣片剂、胶囊、颗粒剂、口服液和注射剂。
本发明的药用组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使通式(Ⅰ)为活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。
本发明的药用组合物优选含有摩尔比为0.1％--99.5％的通式(Ⅰ)的活性成分，最优选含有摩尔比为0.5％--95％的通式(Ⅰ)的活性成分。
本发明的通式(Ⅰ)药用组合物的施用量可根据用药途径、患者年龄、体重、体表面积、所治疗的疾病的类型和严重程度等变化，其日剂量可以是0.01-100mg/m2体表面积，优选10-100mg/m2体表面积。可以一次或多次施用。
下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1 总藤黄酸精氨酸复合物的制备取总藤黄酸10克置适宜容器中，加水，加入L-精氨酸2.5克搅匀至溶解，减压条件下抽去水得到浅黄色固体15克。
实施例2 藤黄酸精氨酸复合物的制备取藤黄酸100克置适宜容器中，加乙醇溶解，取L-精氨酸25克溶于水加入藤黄酸的溶液中，搅匀，减压条件下抽去溶剂得到浅黄色固体150克。
实施例3 总藤黄酸精氨酸复合物粉针剂的制备实施例1复合物10克甘露醇 30克取实施例1复合物置适宜容器中，加注射用水约1800ml，加入甘露醇搅拌均匀，加注射用水至2000ml，用0.22μm的微孔滤膜过滤，无菌条件下，灌装于10ml西林瓶中，每瓶10ml，部分塞上丁橡胶塞，装盘，送入冻干箱中，插入共晶点及温度探头，关闭箱门，开启冻干机，利用导热油对板层制冷，使品温下降，当品温达到共晶点(约-22℃)时，继续制冷，当共晶温达到-30℃以上时，停板冷，开启冷凝器，当冷凝器温度达-40℃时，开启真空系统，开始升温升华至干燥，最后干燥温度为35℃，停机，密塞，放气，出箱，扎盖，即可。
实施例4 总藤黄酸精氨酸复合物片剂的制备实施例1复合物10克微晶纤维素 40克乳糖 50克羧甲基淀粉钠 6克10％淀粉浆 适量硬脂酸镁 1克取实施例1复合物过160目筛，微晶纤维素，乳糖，羧甲基淀粉钠分别过100筛，将复合物与上述辅料混合均匀，以10％淀粉浆为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，湿颗粒于60℃烘箱可鼓风干燥；干颗粒过20目筛整粒，与硬脂酸镁混匀，压片。
实施例5 总藤黄酸精氨酸复合物胶囊剂的制备实施例1复合物 10克微晶纤维素 40克乳糖 50克羧甲基淀粉钠 6克10％淀粉浆 适量硬脂酸镁 1克微粉硅胶 1克取实施例1复合物过160目筛，微晶纤维素，乳糖，羧甲基淀粉钠分别过100目筛，将复合物与上述辅料混合均匀，以10％淀粉浆为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，湿颗粒于50℃烘箱可鼓风干燥；干颗粒过20目筛整粒，与硬脂酸镁和微粉硅胶混匀，灌装于胶囊中。
实施例6 总藤黄酸胶囊剂的制备总藤黄酸10克微晶纤维素 30克乳糖60克羧甲基淀粉钠6克羟丙纤维素 8克10％淀粉浆 适量硬脂酸钠1克微粉硅胶1克取总藤黄酸过160目筛，微晶纤维素，乳糖，羧甲基淀粉钠，羟丙纤维素分别过100目筛，将复合物与上述辅料混合均匀，以10％淀粉浆为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，湿颗粒于50℃烘箱可鼓风干燥；干颗粒过20目筛整粒，与硬脂酸镁和微粉硅胶混匀，灌装于胶囊中。
实施例7 总藤黄酸片剂的制备总藤黄酸 10克微晶纤维素40克乳糖 50克羧甲基淀粉钠 6克羟丙纤维素5克10％淀粉浆适量硬脂酸镁 1克微粉硅胶 1克取总藤黄酸过160目筛，微晶纤维素，乳糖，羧甲基淀粉钠，羟丙纤维素分别过100目筛，将复合物与上述辅料混合均匀，以10％淀粉浆为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，湿颗粒于60℃烘箱可鼓风干燥；干颗粒过20目筛整粒，与硬脂酸镁和微粉硅胶混匀，压片。
实施例8 总藤黄酸乳剂的制备总藤黄酸 25克注射用油 5升表面活性剂2升注射用水 加至 250升取总藤黄酸，加入注射用油搅拌使其溶解，加入表面活性剂，搅拌混匀，慢慢加入注射用水至250升。
实施例9 总藤黄酸精氨酸复合物对小鼠的移植性肿瘤的活性实施例1的复合物对小鼠的移植性肿瘤S180、EC及Heps实体瘤的影响实验用体重18-22g的昆明种小鼠，按移植性肿瘤研究法分别接种S180、EC及Heps实体瘤，接种4h称重，每个瘤种各接种50只，并随机分为五组，每组10只，雌雄各半，实验例1复合物设三个剂量组(8,4,2mg/kg),5-Fu(30mg/kg)组作为阳性对照组，生理盐水组(0.4ml/20g)作为阴性对照组，于接种肿瘤细胞后的第24h静脉注射给药，每2天一次，共给药4次，于停药后第2天称重，处死小鼠并分离瘤块，称重并进行统计学处理(t检验)。研究结果见表1、2、3。
表1实施例1的复合物iv对小鼠移植性S180的抑制作用(X±SD,n=10)
**P＜0.01 与生理盐水对照组相比表2实施例1复合物iv对小鼠移植性EC的抑制作用(X±SD,n=10)
**P＜0.01与生理盐水对照组相比表3实施例1复合物iv对小鼠移植性Heps的抑制作用(X±SD,n=10)
**P＜0.01与生理盐水对照组相比结果表明与空白对照组相比iv注射实施例1复合物能显著的抑制小鼠移植性S180、EC及Heps实体瘤的肿瘤生长作用，并对小鼠的体重增长无明显影响。而5-Fu组有严重影响小鼠的体重生长作用。iv注射实施例1复合物对小鼠移植瘤Heps作用最强。
实施例10 总藤黄酸精氨酸复合物对小鼠的移植性肿瘤的生命延长作用实施例1的复合物ip对腹水型小鼠移植瘤的生命延长作用(a)实施例1复合物ip对小鼠移植性S180腹水瘤和艾氏EAC腹水瘤的生命延长作用取已接种肿瘤细胞的小鼠，于接种后的第一天，称体重，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，设实施例1复合物三个剂量组，5-Fu组及空白对照组。接种24h后给药，腹腔注射，每2天一次，共给药4次，在给药期间及停药后每天记录死亡鼠数并计算存活天数(存活超过60天的小鼠按60天计)及存活率(存活60天以上，且无症状小鼠)。所得数据进行统计学处理。研究结果见表4、5。
表4实施例1复合物ip对S180腹水癌小鼠生命延长作用(X±SD)
*P＜0.05,**P＜0.01与空白对照组相比表5实施例1复合物ip对EAC小鼠生命延长作用(X±SD)
**P＜0.01与空白对照组相比(b)实施例1复合物ip对小鼠移植性Heps腹水瘤的生命延长作用取已接种Heps小鼠，于接种后的第一天，称体重，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，设实施例1复合物三个剂量组，5-Fu组及空白对照组。接种24h后给药，腹腔注射，每2天一次，共给药4次，在给药期间及停药后每天记录死亡鼠数并计算存活天数(存活超过60天的小鼠按60天计)及存活率(存活60天以上，且无症状小鼠)。所得数据进行统计学处理。
实验结果表明，与空白对照组相比，实施例1复合物三个剂量组及5-Fu组皆有非常显著延长Heps小鼠的存活天数作用(P＜0.01)。实施例1复合物高剂量(1.5mg/kg)延长Heps小鼠的存活天数优于5-Fu(30mg/kg)，其生命延长率高于5-Fu达62.8％。
表6、实施例1的复合物ip对Heps小鼠生命延长作用(X±SD)
**P＜0.01与空白对照组相比；P＜0.05与5-Fu组相比文献报道(《江西医药》1982年3期1)的ip藤黄酸总提物(7mg/kg×7天)对Heps小鼠生命延长率最高为80％相比，将本发明表6中的数据与其相比，在剂量减小至4.6倍时，存活率仍比其高3倍多。
实施例11 总藤黄酸精氨酸复合物对小鼠血中白细胞数的影响实施例1复合物iv对小鼠移植瘤Heps的抑制作用及对外周血中白细胞数的影响实验用体重18-22g的昆明种小鼠50只，按移植性肿瘤研究法接种Heps实体型，接种后24小时称鼠重，并随机分为5组，每组10只，雌雄各半，生理盐水组与5-Fu组分别为阴、阳性对照组，实施例1复合物组设高、中、低三个剂量组。接种24h后给药，每2天一次，共给药4次。于停药后第3天处死解剖，以上小鼠在处死前称重并由眼眶静脉取血，镜检白细胞总数，同时解剖分离瘤块，称瘤重并进行统计学处理(t检验)。
实验结果结果表明，与生理盐水对照组相比，实施例1复合物(8,4,2mg/kg)三个剂量组及5-Fu组皆有非常显著地抑制小鼠Heps肿瘤生长作用(P＜0.01),5-Fu具有明显地抑制小鼠体重增长及明显地降低小鼠外周血中白细胞作用(P＜0.01)，但在有效剂量范围内实施例1复合物对小鼠体重增长及小鼠外周血中白细胞数无明显影响，结果见表7。
表7实施例1的复合物iv对小鼠移植性Heps的抑制作用及对外周血中白细胞数的影响(X±SD,n=10)
**P＜0.01与生理盐水对照组相比总藤黄酸赖氨酸复合物及藤黄酸、新藤黄酸的精氨酸复合物、赖氨酸复合物的药理实验也有上述实验的效果。
权利要求
1．下述通式(Ⅰ)为藤黄酸类化合物的复合物 其中R表示-CH=CH-或-CH2-CH(OH)-；B表示C1-C8的含氮有机碱。
2．按照权利要求1的藤黄酸类化合物的复合物，其中R表示-CH=CH-或-CH2-CH(OH)-；B表示碱性氨基酸。
3．按照权利要求1的藤黄酸类化合物的复合物，其中R表示-CH=CH-或-CH2-CH(OH)-；B表示精氨酸。
4．按照权利要求1的藤黄酸类化合物的复合物，其中R表示-CH=CH-或-CH2-CH(OH)-；B表示赖氨酸。
5.藤黄酸类化合物的复合物的制备方法，其特征在于总藤黄酸、藤黄酸或新藤黄酸与含氮有机碱以1∶0.8～2.0的比例(摩尔比)，在水和/或醇溶剂中反应。
6.藤黄酸类化合物的复合物的制备方法，其特征在于总藤黄酸、藤黄酸或新藤黄酸与碱性氨基酸以1∶0.8～2.0的比例(摩尔比)，在水和/或醇溶剂中反应。
7.依据权利要求5所述藤黄酸类化合物的复合物的制备方法，其特征在于总藤黄酸、藤黄酸或新藤黄酸与碱性氨基酸以1∶1～1.5(摩尔比)的比例，在水和/或醇溶剂中反应。
8.依据权利要求5所述藤黄酸类化合物的复合物的制备方法，其特征在于总藤黄酸、藤黄酸或新藤黄酸以1∶1～1.5(摩尔比)的比例，与精氨酸或赖氨酸或反应。
9．用于治疗肝癌、肺癌及其他肿瘤的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1-4的复合物和药学上可接受的载体。
10．权利要求1-4中任意一项的复合物在制备治疗肝癌、肺癌及其他肿瘤的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及新颖的以藤黄酸类化合物与不同碱基或离子形成复合物(通式Ⅰ),及其制备方法,其中B为C
文档编号C07D493/18GK1309125SQ01108049
公开日2001年8月22日 申请日期2001年1月17日 优先权日2001年1月17日
发明者尤启冬, 郭青龙, 冯锋, 柳文媛 申请人:中国药科大学