专利名称：一种从珍珠质中提取可溶性基质蛋白的方法
技术领域：
本发明涉及一种从珍珠质中提取可溶性珍珠质基质蛋白的方法，属医学组织工程领域。
本方法包括下列步骤1)将粉碎后的珍珠质中加入磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液中，于4℃搅拌72小时，离心，收集上清；2)上清液经超滤、透析除盐浓缩后，干燥得珍珠质可溶性基质；3)将可溶性基质进行柱层析，收集280nm下有吸收峰的小分子组分；4)将以上组分进行高效液相色谱分离，收集280nm下有吸收峰的蛋白组分，干燥得成品。
在上述过程中，所述将珍珠层粉在4℃条件下搅拌时所用的是珍珠层粉质量2～5倍，pH为7.0，浓度1～2mM的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液。
所述采用超滤、透析等方式除盐时，超率拄和透析袋的截留分子量小于3KD；干燥采用冷冻干燥的方式。
所述柱层析中的填料为Sephadex G-75葡聚糖凝胶，流动相为pH为7.0，浓度1～2mM的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液，收集的为280nm下有吸收的分子量较小的，相对较晚洗脱下来的组分。
所述高效液相色谱中的填料为C18颗粒，流动相为浓度在0-100％之间梯度递增的乙腈水溶液，收集的为280nm下有吸收的三个主要蛋白峰中的第三个峰所对应时间洗脱下来的蛋白组分。
用本方法分离纯化的珍珠质可溶性基质蛋白，其分子量约为10kD，富含甘氨酸(37.2％)、亮氨酸(15.7％)及丙氨酸(13.3％)。体外实验表明该蛋白具有有良好的诱导成骨作用，并且能独立促使碳酸钙结晶形成有序的文石晶体，说明其在制备预防和治疗骨质疏松药物、制备医用生物新材料、珍珠或类珍珠材料的体外培养及提高珍珠产量与质量等领域有广阔的应用前景。
权利要求
1.一种从珍珠质中提取可溶性基质蛋白的方法，其特征是由下列步骤组成1)将粉碎后的珍珠质中加入磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液中，于4℃搅拌72小时，离心，收集上清；2)上清液经超滤、透析除盐浓缩后，干燥得珍珠质可溶性基质；3)将可溶性基质进行柱层析，收集280nm下有吸收峰的小分子组分；4)将以上组分进行高效液相色谱分离，收集280nm下有吸收峰的蛋白组分，干燥得成品；在上述过程中，所述将珍珠层粉在4℃条件下搅拌时所用的是珍珠层粉质量2～5倍，pH为7.0，浓度1～2mM的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液；所述采用超滤、透析等方式除盐时，超率拄和透析袋的截留分子量小于3KD；干燥采用冷冻干燥的方式；所述柱层析中的填料为Sephadex G-75葡聚糖凝胶，流动相为pH为7.0，浓度1～2mM的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液，收集的为280nm下有吸收的分子量较小的，相对较晚洗脱下来的组分；所述高效液相色谱中的填料为C18颗粒，流动相为浓度在0-100％之间梯度递增的乙腈水溶液，收集的为280nm下有吸收的三个主要蛋白峰中的第三个峰所对应时间洗脱下来的蛋白组分。
全文摘要
一种从珍珠质中提取可溶性基质蛋白的方法，属医学组织工程领域。本发明方法包括下述步骤1)将珍珠层粉中加入磷酸氢二钠－磷酸二氢钾缓冲液中，于4℃搅拌72小时，离心，收集上清；2)上清液经超滤、透析除盐浓缩后，干燥得珍珠质可溶性基质；3)将可溶性基质进行柱层析，收集280nm下有吸收峰的小分子组分；4)将以上组分进行高效液相色谱分离，收集280nm下有吸收峰的蛋白组分，干燥得成品。本发明分离纯化的珍珠质可溶性基质蛋白，可以广泛应用于制备预防和治疗骨质疏松药物、制备医用生物新材料、珍珠或类珍珠材料的体外培养及提高珍珠产量与质量等领域。
文档编号C07K1/14GK1478793SQ0314595
公开日2004年3月3日 申请日期2003年7月18日 优先权日2003年7月18日
发明者张荣庆, 张岑, 李硕, 谢莉萍, 王洪钟, 范为民 申请人:清华大学