专利名称：从银杏叶中提取分离银杏内酯a的方法
技术领域：
本发明涉及从植物中提取有效成份的方法，具体涉及从银杏叶中提取 分离银杏内酯A的方法。
(二)
背景技术：
银杏树又称白果树，属裸子植物，是银杏科银杏属的唯一生存的老树 种之一，其叶和果具有重要的药用价值。目前研究最多的是银杏叶提取物， 它包括黄酮类化合物和银杏内酯类化合物。黄酮类化合物约有38种，总 含量为22-27%;银杏内酯类化合物包括银杏内酯和白果内酯，总含量为 5.4-6.6%。银杏内酯主要包括银杏内酯A、 B、 C、 J和M单体；据文献报 道，银杏内酯中各单体的药物功能有一定差异，其中，银杏内酯A、 B对 治疗心脑血管疾病具有显著疗效，而白果内酯对治疗神经系统疾病则药效 独特，为了提高其药用治疗效果，有时必须将各单体分离纯化；由于白果 内酯是倍半萜物质，而银杏内酯A、 B、 C、 J、 M是二萜类物质，它们的分 子结构较为相似，极性差异也很小，致使银杏内酯中的各单体的提取与分 离比较困难，只有少许企业将它们单独分离出来，如申请号为00117758.3, 名称为《由银杏叶或银杏叶浸膏制备药物银杏内酯A、 B的方法》的中国 发明专利，公开了一种银杏内酯A、银杏内酯B单体的分离纯化方法，该 方法是向银杏叶或其浸膏加入乙醇等浸取剂，得到的浸取液经过滤、分层， 取出有机相去杂，然后经浓縮、干燥获得富集银杏内酯A和B的粗品，采 用制备型液相色谱再分离，分别得到银杏内酯A和银杏内酯B。
(三)
发明内容
本发明将公开一种提取所得率高、纯度高的从银杏叶中提取分离银杏 内酯A的方法。
本发明从银杏叶中提取分离银杏内酯A的方法，其步骤如下 l)取银杏叶，用由高到低不同浓度的乙醇进行提取，合并提取液，回 收乙醇，得到浓縮后的提取液；
称取一定量的银杏叶，可先用体积浓度为60-80%的乙醇在50-7(TC时 对银杏叶提取1-3个小时，其中，银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量 乙醇的体积二l: 8-10;将银杏叶分离出来，再用体积浓度为30-55%的乙醇 在50-7(TC时对银杏叶提取1-3个小时，其中，银杏叶与乙醇的配比按银
杏叶的重量乙醇的体积=1: 6-8;再将银杏叶分离出来，用体积浓度为
10-25%的乙醇在50-70〔时对银杏叶提取1-3个小时，其中，银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量乙醇的体积=1: 5-7;合并提取液，回收乙醇， 将提取液浓缩至银杏叶重量的8-10倍体积；
2) 向浓縮后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有机相后浓縮至浸
膏；
可向浓縮液中加入等体积的乙酸乙酯萃取， 一般来说，萃取3次所达 到的效果较好；
3) 将步骤2)所得浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗 脱，所得洗脱液回收乙醇后，再用乙醇结晶得到银杏内酯类化合物；
所述选择性极性无孔吸附树脂柱的型号可为ADS-15，或ADS-17，或 ADS-F8;将步骤2)所得浸膏用50-200倍于其重量的水稀释后上柱，可先 用水洗，直至流出液无色；然后再用体积浓度为50-70%的乙醇洗脱，所述 洗脱剂的体积用量可为上述浸膏重量的30-60倍；将收集得到的洗脱液回 收乙醇，浓縮至浸膏，再用体积浓度为50-80%的乙醇为溶剂结晶，所得结 晶即为银杏内酯类化合物；
4) 将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液 洗脱，收集洗脱液，得到富集银杏内酯A的洗脱液；
所述正己烷和乙酸乙酯的混合液中正己烷和乙酸乙酯的体积比最好
为9: 1-2: 8;在洗脱的过程中，以蒸发光散射检测器在线检测定位，待
溶剂峰出完后的第二个峰处开始收集洗脱液，得到富集银杏内酯A的洗脱 液；
5) 回收步骤4)中收集的洗脱液中的溶剂，再用乙醇结晶，得到银杏内 酯Ao
回收步骤4)中收集的洗脱液中的溶剂，再用体积浓度为60-80%的乙 醇对其结晶，所得结晶即为银杏内酯A单体。 本发明的优点
本发明采用由高到低不同浓度的乙醇对银杏叶进行提取，使银杏内酯 A的提取率提高了 10%以上；本发明中还采用了特殊的选择性极性无孔吸 附树脂进行除杂，可除掉大部分影响硅胶柱分离的杂质，实现了一次上柱 即可分离得到银杏内酯A单体，且其纯度达到99%以上；与现有技术相比， 本发明提供的方法工艺简单、生产成本低，所得产品纯度高，更易于产业 化的生产。
具体实施例方式
实施例1
l)取10千克银杏叶，用100升体积浓度为80%的乙醇在5(TC时对银 杏叶提取1小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；再用60升体积浓 度为55%的乙醇在7(TC时对银杏叶提取1小时，用200目的滤布将银杏叶 分离出来；再用50升体积浓度为25%的乙醇在5(TC时对银杏叶提取1小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；合并三次提取所得的提取液，回 收乙醇，将提取液浓縮至100升浓縮液；
2) 向浓縮液中加入100升乙酸乙酯萃取3次，合并萃取分离出的有机
相，回收有机相后浓縮得到500克浸膏；
3) 将步骤2)中所得浸膏加50倍体积水稀释后上ADS-15柱，先用水洗， 直至流出液无色，再用15升体积浓度为50%的乙醇洗脱，收集洗脱液，回 收乙醇，浓縮至浸膏，再用体积浓度为50%的乙醇结晶，得到70克银杏内 酯类化合物晶体；
4) 将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己垸和乙酸乙酯的混合液 进行梯度洗脱，其中，正己垸和乙酸乙酯的体积比为9: 1-2: 8;在洗脱
过程中，以蒸发光散射检测器在线检测定位，待溶剂峰出完后的第二个峰
处开始收集洗脱液，得到富集银杏内酯A的洗脱液；
5) 回收步骤4)中收集的洗脱液中的溶剂，再用体积浓度为60%的乙醇 对其结晶，得到银杏内酯A单体9.12克。
实施例2
1) 取50千克银杏叶，用400升体积浓度为60%的乙醇在7(TC时对银 杏叶提取3小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；再用400升体积浓 度为30%的乙醇在70°(:时对银杏叶提取3小时，用200目的滤布将银杏叶 分离出来；再用300升体积浓度为10%的乙醇在7(TC时对银杏叶提取3小 时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；合并三次提取所得的提取液，回 收乙醇，将提取液浓縮至500升浓縮液；
2) 向浓縮液中加入500升乙酸乙酯萃取3次，合并萃取分离出的有机 相，回收有机相后浓縮得到1. 5千克浸膏；
3) 将步骤2)中所得浸膏加200倍体积水稀释后上ADS-17柱，先用水 洗，直至流出液无色，再用60升体积浓度为70%的乙醇洗脱，收集洗脱液， 回收乙醇，浓縮至浸膏，再用体积浓度为70%的乙醇结晶，得到233克银 杏内酯类化合物晶体；
4) 将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液
进行梯度洗脱，其中，正己垸和乙酸乙酯的体积比为9: 1-2: 8;在洗脱
过程中，以蒸发光散射检测器在线检测定位，待溶剂峰出完后的第二个峰
处开始收集洗脱液，得到富集银杏内酯A的洗脱液；
5) 回收步骤4)中收集的洗脱液中的溶剂，再用体积浓度为75%的乙醇 对其结晶，得到银杏内酯A单体28.71克。
实施例3
l)取40千克银杏叶，用280升体积浓度为70%的乙醇在7(TC时对银 杏叶提取1小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；再用280升体积浓度为50%的乙醇在60°(:时对银杏叶提取2小时，用200目的滤布将银杏叶 分离出来；再用280升体积浓度为20%的乙醇在7(TC时对银杏叶提取2小 时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；合并三次提取所得的提取液，回 收乙醇，将提取液浓縮至400升浓縮液；
2) 向浓縮液中加入400升乙酸乙酯萃取3次，合并萃取分离出的有机 相，回收有机相后浓縮得到1. 2千克浸膏；
3) 将步骤2)中所得浸膏加100倍体积水稀释后上ADS-F8柱，先用水 洗，直至流出液无色，再用70升体积浓度为60%的乙醇洗脱，收集洗脱液， 回收乙醇，浓縮至浸膏，再用体积浓度为80%的乙醇结晶，得到225克银 杏内酯类化合物晶体；
4) 将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液 进行梯度洗脱，其中，正己烷和乙酸乙酯的体积比为9: 1-2: 8;在洗脱 过程中，以蒸发光散射检测器在线检测定位，待溶剂峰出完后的第二个峰
处开始收集洗脱液，得到富集银杏内酯A的洗脱液；
5) 回收步骤4)中收集的洗脱液中的溶剂，再用体积浓度为70%的乙醇 对其结晶，得到银杏内酯A单体31.76克。
权利要求
1、从银杏叶中提取分离银杏内酯A的方法，其步骤如下1)取银杏叶，用由高到低不同浓度的乙醇进行提取，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩后的提取液；2)向浓缩后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有机相后浓缩至浸膏；3)将步骤2)所得浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，所得洗脱液回收乙醇后，再用乙醇结晶得到银杏内酯类化合物；4)将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，收集洗脱液，得到富集银杏内酯A的洗脱液；5)回收步骤4)中收集的洗脱液中的溶剂，再用乙醇结晶，得到银杏内酯A。
2、 根据权利要求1所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A的方法， 其特征在于步骤l)中，先用体积浓度为60_80%的乙醇对银杏叶进行提 取；然后用体积浓度为30-55%的乙醇对银杏叶进行提取；再用体积浓度为 10-25%的乙醇对银杏叶进行提取。
3、 根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A的方 法，其特征在于步骤1)中，所述提取的温度为50-7CTC。
4、 根据权利要求2所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A的方法， 其特征在于步骤1)中，第一次提取时银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量乙醇的体积=1: 8-10;第二次提取时银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的 重量乙醇的体积=1: 6-8;第三次提取时银杏叶与乙醇的配比按银杏叶 的重量乙醇的体积=1: 5-7。
5、 根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A的方 法，其特征在于步骤2)中，所述加入的乙酸乙酯的体积与浓縮后的提取 液的体积比为l: 1，萃取的次数为3次。
6、 根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A的方 法，其特征在于步骤3)中，所述选择性极性无孔吸附树脂型号为ADS-15, 或ADS-17，或ADS-F8。
7、 根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A的方 法，其特征在于步骤3)中，所述洗脱用乙醇的体积浓度为50-70%。
8、 根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A的方 法，其特征在于步骤3)中，所述结晶用乙醇的体积浓度为50-80%。
9、 根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A的方 法，其特征在于步骤4)中，所述正己垸和乙酸乙酯混合液中，正己垸和乙酸乙酯的体积比为9: 1-2: 8。
10、 根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离银杏内酯A的方 法，其特征在于步骤4)中，以蒸发光散射检测器在线检测定位，收集洗脱液。
全文摘要
本发明将公开一种从银杏叶中提取分离银杏内酯A的方法，其步骤如下1)取银杏叶，用由高到低不同浓度的乙醇进行提取，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩后的提取液；2)向浓缩后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有机相后浓缩至浸膏；3)将步骤2)所得浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，所得洗脱液回收乙醇后，再用乙醇结晶得到银杏内酯类化合物；4)将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，收集洗脱液，得到富集银杏内酯A的洗脱液；5)回收步骤4)中收集的洗脱液中的溶剂，再用乙醇结晶，得到银杏内酯A单体。本发明提供的方法工艺简单、生产成本低，所得产品纯度高，更易于产业化的生产。
文档编号C07D493/00GK101468998SQ20071005024
公开日2009年7月1日 申请日期2007年10月15日 优先权日2007年10月15日
发明者唐江明, 孙莉莉, 李振志, 罗增桂 申请人:桂林市振达生物科技有限责任公司