专利名称：从银杏叶中提取分离白果内酯的方法
技术领域：
本发明涉及从植物中提取有效成份的方法，具体涉及从银杏叶中提取 分离白果内酯的方法。
(二)
背景技术：
银杏树又称白果树，属裸子植物，是银杏科银杏属的唯一生存的老树 种之一，其叶和果具有重要的药用价值。目前研究最多的是银杏叶提取物， 它包括黄酮类化合物和银杏内酯类化合物。黄酮类化合物约有38种，总 含量为22-27%;银杏内酯类化合物包括银杏内酯和白果内酯，总含量为 5.4-6.6%。银杏内酯主要对治疗心脑血管疾病具有显著疗效；而白果内酯 对治疗神经系统疾病则药效独特，为了提高其药用治疗效果，有时必须将 各单体分离纯化；由于白果内酯是倍半萜物质，而银杏内酯是二萜类物质， 它们的分子结构较为相似，极性差异也很小，致使银杏内酯类化合物中的 各单体的提取与分离比较困难，只有少许企业将它们单独分离出来，如申 请号为200410061284. 1,名称为《银杏叶中银杏内酯B和白果内酯的提取 方法》的中国发明专利，公开了一种银杏叶中银杏内酯B和白果内酯的提 取方法，先将银杏叶烘干、去杂、粉碎，用乙醇水溶液提取，上吸附柱去 杂质，然后用乙酸乙酯萃取出银杏内酯，上氧化铝柱纯化，分步结晶及重 结晶，获得较纯的银杏内酯A和银杏内酯B，再将结晶后的母液加入l-2 倍水后在75-8(TC回收乙醇，冷却后析出的结晶为银杏内酯C，分离出结 晶后的母液减压蒸干后得到白果内酯，其纯度可达95%。但该发明得到白 果内酯的工艺较复杂。
(三)
发明内容
本发明将公开一种提取所得率高、所得各单体纯度高的从银杏叶中提 取分离白果内酯单体的方法。
本发明从银杏叶中提取分离白果内酯单体的方法，其步骤如下
l)取银杏叶，用由高到低不同浓度的乙醇进行提取，合并提取液，回 收乙醇，得到浓縮后的提取液；
称取一定量的银杏叶，可先用体积浓度为60-80%的乙醇在50-70'C时 对银杏叶提取l-3个小时，其中，银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量 乙醇的体积=1: 8-10;将银杏叶分离出来，再用体积浓度为30-55%的乙醇 在50-7(TC时对银杏叶提取1-3个小时，其中，银杏叶与乙醇的配比按银
杏叶的重量乙醇的体积=1: 6-8;再将银杏叶分离出来，用体积浓度为10-25%的乙醇在50-70"时对银杏叶提取l-3个小时，其中，银杏叶与乙
醇的配比按银杏叶的重量乙醇的体积=1: 5-7;合并提取液，回收乙醇，将提取液浓縮至银杏叶重量的8-10倍体积；
2) 向浓縮后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有机相后浓缩至浸
膏；
可向浓縮液中加入等体积的乙酸乙酯萃取， 一般来说，萃取3次所达到的效果较好；
3) 将步骤2)所得浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，所得洗脱液回收乙醇后，再用乙醇结晶得到银杏内酯类化合物；
所述选择性极性无孔吸附树脂柱的型号可为ADS-15,或ADS-17，或ADS-F8;将步骤2)所得浸膏用50-200倍于其重量的水稀释后上柱，可先用水洗，直至流出液无色；然后再用体积浓度为50-70%的乙醇洗脱，所述洗脱剂的体积用量可为上述浸膏重量的30-60倍；将收集得到的洗脱液回收乙醇，浓縮至浸膏，再用体积浓度为50-80%的乙醇为溶剂结晶，所得结晶即为银杏内酯类化合物；
4) 将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，收集洗脱液，得到富集白果内酯的洗脱液；
所述正己垸和乙酸乙酯的混合液中正己垸和乙酸乙酯的体积比最好为9: 1-2: 8;在洗脱的过程中，以蒸发光散射检测器在线检测定位，待
溶剂峰出完后的第二个峰处开始收集洗脱液，得到富集白果内酯的洗脱液；
5) 回收洗脱液中的溶剂，再用乙醇结晶，得到白果内酯。回收洗脱液中的溶剂，再用体积浓度为20-40%的乙醇结晶，所得结晶
即为白果内酯单体。本发明的优点
本发明采用由高到低不同浓度的乙醇对银杏叶进行提取，使银杏内酯类化合物的提取率提高了 10%以上，特别是白果内酯的提取率较现有技术提高了 15%;本发明中还采用了特殊的选择性极性无孔吸附树脂进行除杂，可除掉大部分影响硅胶柱分离的杂质，实现了一次上柱即可得到白果内酯单体，且其纯度达到99%以上；与现有技术相比，本发明提供的方法工艺简单、生产成本低，所得单体纯度高，更易于产业化的生产。
具体实施例方式实施例1
l)取10千克银杏叶，用100升体积浓度为80%的乙醇在5CTC时对银杏叶提取1小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；再用60升体积浓度为55%的乙醇在7(TC时对银杏叶提取1小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；再用50升体积浓度为25%的乙醇在50。C时对银杏叶提取1小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；合并三次提取所得的提取液，回收乙醇，将提取液浓縮至100升浓縮液；
2) 向浓縮液中加入100升乙酸乙酯萃取3次，合并萃取分离出的有机
相，回收有机相后浓縮得到500克浸膏；
3) 将步骤2)中所得浸膏加50倍体积水稀释后上ADS-15柱，先用水洗，直至流出液无色，再用15升体积浓度为50%的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓縮至浸膏，再用体积浓度为50%的乙醇结晶，得到70克银杏内酯类化合物晶体；
4) 将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己垸和乙酸乙酯的混合液
进行梯度洗脱，其中，正己烷和乙酸乙酯的体积比为9: 1-2: 8;在洗脱
过程中，以蒸发光散射检测器在线检测定位，待溶剂峰出完后的第二个峰
处开始收集洗脱液，得到富集白果内酯的洗脱液；
5) 回收洗脱液中的溶剂，然后用体积浓度为20%的乙醇对白果内酯洗脱液进行结晶，得到12.01克的白果内酯单体。
实施例2
1) 取50千克银杏叶，用400升体积浓度为60%的乙醇在70'C时对银杏叶提取2小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；再用400升体积浓度为30%的乙醇在70。C时对银杏叶提取3小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；再用300升体积浓度为10%的乙醇在7CTC时对银杏叶提取3小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；合并三次提取所得的提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至500升浓縮液；
2) 向浓縮液中加入500升乙酸乙酯萃取3次，合并萃取分离出的有机相，回收有机相后浓縮得到1. 5千克浸膏；
3) 将步骤2)中所得浸膏加200倍体积水稀释后上ADS-17柱，先用水洗，直至流出液无色，再用60升体积浓度为70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓縮至浸膏，再用体积浓度为70%的乙醇结晶，得到233克银杏内酯类化合物晶体；
4) 将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液
进行梯度洗脱，其中，正己垸和乙酸乙酯的体积比为9: 1-2: 8;在洗脱
过程中，以蒸发光散射检测器在线检测定位，待溶剂峰出完后的第二个峰处开始收集洗脱液，得到富集白果内酯的洗脱液；
5) 回收洗脱液中的溶剂，然后用体积浓度为30%的乙醇对白果内酯洗脱液进行结晶，得到5.17克的白果内酯单体。
实施例3
l)取40千克银杏叶，用280升体积浓度为70%的乙醇在70'C时对银杏叶提取1小时，用200目的滤布将锒杏叶分离出来；再用280升体积浓度为50%的乙醇在6(TC时对银杏叶提取2小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；再用280升体积浓度为20%的乙醇在70"C时对银杏叶提取2小时，用200目的滤布将银杏叶分离出来；合并三次提取所得的提取液，回收乙醇，将提取液浓縮至400升浓縮液；
2) 向浓縮液中加入400升乙酸乙酯萃取3次，合并萃取分离出的有机相，回收有机相后浓縮得到1. 2千克浸膏；
3) 将步骤2)中所得浸膏加100倍体积水稀释后上ADS-F8柱，先用水洗，直至流出液无色，再用70升体积浓度为60%的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至浸膏，再用体积浓度为80%的乙醇结晶，得到225克银杏内酯类化合物晶体；
4) 将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己垸和乙酸乙酯的混合液进行梯度洗脱，其中，正己烷和乙酸乙酯的体积比为9: 1-2: 8;在洗脱过程中，以蒸发光散射检测器在线检测定位，待溶剂峰出完后的第二个峰处开始收集洗脱液，得到富集白果内酯的洗脱液；
5) 回收洗脱液中的溶剂，然后用体积浓度为25%的乙醇对白果内酯洗脱液进行结晶，得44.51克的白果内酯单体。
权利要求
1、从银杏叶中提取分离白果内酯的方法，其步骤如下1)取银杏叶，用由高到低不同浓度的乙醇进行提取，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩后的提取液；2)向浓缩后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有机相后浓缩至浸膏；3)将步骤2)所得浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，所得洗脱液回收乙醇后，再用乙醇结晶得到银杏内酯类化合物；4)将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，收集洗脱液，得到富集白果内酯的洗脱液；5)回收洗脱液中的溶剂，再用乙醇结晶，得到白果内酯。
2、 根据权利要求1所述的从银杏叶中提取分离白果内酯的方法，其 特征在于步骤1)中，先用体积浓度为60-80%的乙醇对银杏叶进行提取； 然后用体积浓度为30-55%的乙醇对银杏叶进行提取；再用体积浓度为 10-25%的乙醇对银杏叶进行提取。
3、 根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离白果内酯的方法， 其特征在于步骤1)中，所述提取的温度为50-7(TC。
4、 根据权利要求2所述的从银杏叶中提取分离白果内酯的方法，其特征在于步骤1)中，第一次提取时银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量 乙醇的体积=1: 8-10;第二次提取时银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量 乙醇的体积=1: 6-8;第三次提取时银杏叶与乙醇的配比按银杏叶的重量 乙醇的体积=1: 5-7。
5、 根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离白果内酯的方法， 其特征在于步骤2)中，所述加入的乙酸乙酯的体积与浓缩后的提取液的 体积比为h 1，萃取的次数为3次。
6、 根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离白果内酯的方法， 其特征在于步骤3)中，所述选择性极性无孔吸附树脂型号为ADS-15，或 ADS-17，或ADS-F8。
7、 根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离白果内酯的方法， 其特征在于步骤3)中，所述洗脱用乙醇的体积浓度为50-70%。
8、 根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离白果内酯的方法， 其特征在于步骤3)中，所述结晶用乙醇的体积浓度为50-80%。
9、 根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离白果内酯的方法， 其特征在于步骤4)中，所述正己垸和乙酸乙酯混合液中，正己烷和乙酸 乙酯的体积比为9: 1-2: 8。
10、 根据权利要求1或2所述的从银杏叶中提取分离白果内酯的方法， 其特征在于步骤4)中，以蒸发光散射检测器在线检测定位，收集洗脱液。
全文摘要
本发明将公开一种从银杏叶中提取分离白果内酯的方法，其步骤为1)取银杏叶，用由高到低不同浓度的乙醇进行提取，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩后的提取液；2)向浓缩后的提取液中加入乙酸乙酯萃取，回收有机相后浓缩至浸膏；3)将浸膏稀释后上选择性极性无孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，所得洗脱液回收乙醇后，用乙醇结晶得银杏内酯类化合物；4)将银杏内酯类化合物结晶上硅胶柱，用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脱，收集洗脱液，得到富集白果内酯的洗脱液；5)回收洗脱液中的溶剂，再用乙醇结晶，得到白果内酯。本发明提供的方法工艺简单、生产成本低，所得单体纯度高，更易于产业化的生产。
文档编号C07D493/00GK101468997SQ20071005024
公开日2009年7月1日 申请日期2007年10月15日 优先权日2007年10月15日
发明者唐江明, 孙莉莉, 李振志, 罗增桂 申请人:桂林市振达生物科技有限责任公司