专利名称：一种山楂叶总黄酮的提取制备方法
技术领域：
本发明涉及一种从植物中提取总黄酮的生产工艺，具体地说是一种从山楂叶中提取总黄酮的生产工艺。
背景技术：
山楂叶是蔷薇科山楂属植物山楂Cratogwp/""加:/ ^Bge.的叶子。现代药理试验表明，从山楂叶中所提取的总黄酮，具有扩张血管、改善冠脉供血、保护心肌、抑制血小板聚集等作用。临床资料也表明山楂总黄酮对冠心病、心绞痛病人总有效率为94.4%;对降低血脂总效率为85%;对冠心病、心肌炎及心肌并引起的早搏总有效率为62.5%。此外，山楂总黄酮对降低舒张压、防治心律失常和活血化瘀也有重要作用。山楂总黄酮所具有的显著药理活性，已引起医药行业研究人员的高度关注。目前，从山楂叶中提取总黄酮通常是在提取过程中，利用乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，该方法操作工艺复杂、制造成本高，且药液中的有机溶剂残留物不易彻底清除。CN1436785专利公开了一种用大孔树脂提取山楂叶总黄酮的方法。该方法是选用净山楂叶，用50%的乙醇控温55°。提取三次，然后回收乙醇、静置沉淀、过滤浓縮，过滤液用强碱、强酸清洗后再用大孔树脂分离、洗脱。该方法提取的总黄酮，其中的鞣质不易去除，从而影响了提取物的纯度和疗效，尤其不宜作为注射剂原料药使用。另外该方法使用较高浓度的酸洗碱洗会造成一定的环境污染。
发明内容
本发明的目的是提供一种工艺流程简单、生产成本低廉、产品纯度高、且益于环境保护的山楂叶总黄酮的提取制备方法。本发明的目的是这样实现的
本发明方法包括以下步骤
a、取干燥山楂叶粉末，加入山楂叶粉末重量5~10倍量的20%~80%乙醇，在30 80 'C温度条件下，浸提2~6小时，过滤；将滤渣再加入滤渣重量5 10倍量的20%~80%乙醇，在30 8(TC温度条件下，浸提2 6小时，过滤；合并两
3次滤液，减压浓缩至无乙醇味，再向滤液中加入山楂叶粉末重量3 8倍量的水，混匀，混合液加热至沸，静置放冷，冷藏12—36小时后，吸取上清液，下层滤过，滤液与上清液合并，得山植叶提取液；
本步骤中乙醇浓度优选60%~80% ，乙醇加入量优选山楂叶粉末重量的8~10倍。该优选参数，可进一步提高山楂叶总黄酮的得率。
b、 将上述山楂叶提取液上D101大孔树脂，用蒸馏水和10%~90%不同浓度的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集用盐酸镁粉鉴别反应显阳性反应的乙醇洗脱液，回收乙醇，待溶液无乙醇味时，得浓縮液；
c、 在上述浓縮液中加入浓縮液重量4~10倍量的蒸馏水，静置，过滤，滤液上聚酰胺层析柱，用蒸馏水和10~80%乙醇分别洗脱，收集加稀醋酸和滴加4 5滴明胶氯化钠后，无絮状沉淀产生的乙醇洗脱液；
d、 减压浓縮干燥c步骤中的乙醇洗脱液，得山楂叶总黄酮提取物。本发明所制备的山楂叶总黄酮提取物中的主要化学成分为牡荆素鼠李糖苷
和牡荆素葡萄糖苷。
本发明方法具有以下有益效果
(1) 本发明工艺中的山楂叶提取液经大孔树脂柱分离后，直接使用聚酰胺柱层析分离，从而改变了现有技术中采用乙酸乙酯和正丁醇等有机溶剂进行萃取的工艺步骤。它一方面简化了工艺过程，降低了生产成本，同时也从根本上解除了提取物中有机溶剂残留物的存在。
(2) 本发明工艺采用大孔树脂柱和聚酰胺柱联用分离，有效去除了鞣质，提高了提取物的纯度。其所含总黄酮以牡荆素鼠李糖苷计>85%;山楂叶总黄酮中牡荆素鼠李糖苷与牡荆素葡萄糖苷HPLC色普图峰面积之比可控制在1.2 2.5: 1。该方法所提取的山楂叶总黄酮可以直接作为山楂叶注射液的原料药使用。
本发明方法所提取的山楂叶总黄酮在用于制备山楂叶注射剂时，可以制成粉针剂，也可以制成水针剂。注射液每毫升溶液所含总黄酮以牡荆素鼠李糖苷计，可为0.2—30mg。在临床应用时，水针剂可以直接加入生理盐水或5—10%的葡萄糖溶液中静脉滴注；粉针剂可以先加入少量注射用水或生理盐水溶解后再加入到生理盐水或5—10%的葡萄糖溶液中静脉滴注。
本发明方法所提取的山楂叶总黄酮经急性毒性以及长期毒性实验表明，其无
4毒副作用。
具体实施例方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制于此。实施例1
(1) 山楂叶提取液的制备
采集山西晋城的山楂属植物山楂Cratoegw / /""加y^/a Bge.的新鲜山楂叶于室温阴干后，称取500g粉碎成山楂叶粉末，以加入醇浓度为20。/。的乙醇2500g于30 'C浸提2小时，过滤，将滤渣再加入醇浓度为20%的乙醇3000 g于30 °C浸提2小时，过滤；合并两次滤液，减压浓縮至无乙醇味。再向滤液中加入1500g的水，混匀，静置，加热至沸，静置放冷，冷藏过夜后，吸取上清液，下层滤过，滤液与上清液合并得山楂叶提取液；
(2) 山楂叶总黄酮的制备
将上述山楂叶提取液上D101大孔树脂，用蒸馏水和10%~90%不同浓度乙醇溶液分别洗脱，收集盐酸镁粉显阳性反应的乙醇洗脱液，回收乙醇，待溶液无乙醇味时，加浓縮液4倍量的蒸馏水，静置，过滤，滤液上聚酰胺层析柱，用蒸馏水和10~80%乙醇分别洗脱。收集加稀醋酸和滴加4 5滴明胶氯化钠，无絮状沉淀产生的乙醇洗脱液；洗脱液减压浓縮干燥成棕红色粉末状，得含量为86.5%的山楂叶总黄酮。实施例2
(1) 山楂叶提取液的制备
称取干燥山楂叶750 g粉碎成粉末，以8倍量的50%乙醇于6(TC浸提4小时，过滤，将滤渣再以8倍量的50。/。乙醇于6(TC浸提4小时，过滤，合并两次滤液，减压浓縮至无乙醇味。再向滤液中加入山楂叶重量5倍量的水，混匀，加热至沸，静置放冷，冷藏24小时后，吸取上清液，下层滤过，滤液与上清液合并得山楂叶提取液。
(2) 山楂叶总黄酮的制备
将上述山楂叶提取液上DIOI大孔树脂，用蒸馏水和10%~90%不同浓度乙醇溶液分别洗脱，收集盐酸镁粉显阳性反应的乙醇洗脱液，回收乙醇，待溶液无乙醇味时，加浓縮液8倍量的蒸馏水，静置，过滤，滤液上聚酰胺层析柱，
5用蒸馏水和10 80%乙醇分别洗脱。收集加稀醋酸和滴加4 5滴明胶氯化钠，无絮状沉淀产生的乙醇洗脱液，减压浓縮干燥成棕红色粉末状，即得含量为88.8%的山楂叶总黄酮。实施例3:
(1) 山楂叶提取液的制备
称取干燥山楂叶750 g粉碎成粉末，以10倍量的80%乙醇于8(TC浸提6小时，过滤，将滤渣再以10倍量的80。/o乙醇于8(TC浸提6小时，过滤，合并两次滤液，减压浓縮至无乙醇味。再向滤液中加药材重量8倍量水混悬，加热至沸，静置放冷，冷藏过夜后，吸取上清液，下层滤过，滤液与上清液合并得山楂叶提取液。
(2) 山楂叶总黄酮的制备
将上述山楂叶提取液上D101大孔树脂，用蒸馏水和10% 90%不同浓度乙醇溶液分别洗脱，收集盐酸镁粉显阳性反应的乙醇洗脱液，回收乙醇，待溶液无乙醇味时，加浓縮液IO倍量的蒸馏水，静置，过滤，滤液上聚酰胺层析柱，用蒸馏水和10~80%乙醇分别洗脱。收集加稀醋酸和滴加4 5滴明胶氯化钠，无絮状沉淀产生的乙醇洗脱液，减压浓縮干燥成棕红色粉末状，即得含量为87.6%的山楂叶总黄酮。
权利要求
1、一种山楂叶总黄酮的提取制备方法，其特征在于它包括以下步骤a、取干燥山楂叶粉末，加入山楂叶粉末重量5～10倍量的20％～80％乙醇，在30～80℃温度条件下，浸提2～6小时，过滤；将滤渣再加入滤渣重量5～10倍量的20％～80％乙醇，在30～80℃温度条件下，浸提2～6小时，过滤；合并两次滤液，减压浓缩至无乙醇味，再向滤液中加入山楂叶粉末重量3～8倍量的水，混匀，混合液加热至沸，静置放冷，冷藏12—36小时后，吸取上清液，下层滤过，滤液与上清液合并，得山楂叶提取液；b、将上述山楂叶提取液上D101大孔树脂，用蒸馏水和10％～90％不同浓度的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集用盐酸镁粉鉴别反应显阳性反应的乙醇洗脱液，回收乙醇，待溶液无乙醇味时，得浓缩液；c、在上述浓缩液中加入浓缩液重量4～10倍量的蒸馏水，静置，过滤，滤液上聚酰胺层析柱，用蒸馏水和10～80％乙醇分别洗脱，收集加稀醋酸和滴加4～5滴明胶氯化钠后，无絮状沉淀产生的乙醇洗脱液；d、减压浓缩干燥c步骤中的乙醇洗脱液，得山楂叶总黄酮。
2、根据权利要求l所述的山楂叶总黄酮的提取制备方法，其特征在于a步 骤中所说的乙醇浓度为60% 80% ,加入量是山楂叶粉末重量的8 10倍。
全文摘要
本发明公开了一种山楂叶总黄酮的提取制备方法，它主要包括以下工艺a.取干燥山楂叶粉末，加入山楂叶粉末重量5～10倍量的20％～80％乙醇，在30～80℃温度条件下，浸提2～6小时；浸提两次；滤液减压浓缩加入3～8倍量的水加热、静置放冷，得山楂叶提取液；b.山楂叶提取液上D101大孔树脂，用蒸馏水和乙醇溶液进行梯度洗脱；滤液上聚酰胺层析柱，洗脱液减压浓缩干燥。本发明方法工艺流程简单、生产成本低廉、产品纯度高、且有益于环境保护。
文档编号C07D311/22GK101463025SQ20071018545
公开日2009年6月24日 申请日期2007年12月20日 优先权日2007年12月20日
发明者李振江 申请人:神威药业有限公司