专利名称：(z)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羟基苯基)丙烯酸及其合成方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属药物合成领域，具体涉及(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羟基苯基)丙烯酸 及其合成方法和在药学上的应用。
背景技术：
丹参素(化学名"-(+)-(3-3，4-二羟基苯基乳酸)是中药丹参中的一种主要有 效成分，已有大量药理实验证明丹参素有抑制血小板合成、聚集，抑制TXA2等 收縮血管物质的释放，提高抗氧化酶活性，减少氧自由基的产生，增加冠脉血流 量等药理作用。目前丹参素的来源主要是从中药丹参中提取，以丹参素为主要成 分的多种中药复合制剂如复方丹参注射液、复方丹参滴丸等已广泛应用于临床。
关于消旋丹参素的化学合成方法已有一些报道，例如薛芬等(薜芬，戴华娟，
丁丽蓉，J:塵第一度学腐学叛，1983， 70(2人133-136.)。由于丹参素结构中有两个
极易被氧化的酚羟基，不宜利用直接拆分的方法对丹参素外消旋体进行手性拆分
来获得天然的右旋丹参素。寻找新的丹参素的衍生物及其合成方法成为本领域研
究人员的关注热点。
发明内容
本发明的目的是提供新结构的化合物(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羟基苯基)丙 烯酸。
本发明的另一目的是提供(2)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羟基苯基)丙烯酸的合成 方法。
本发明提供的化合物(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羟基苯基)丙烯酸具有式(I ) 的结构<formula>formula see original document page 3</formula>
C I )
本发明还提供了上述化合物的合成方法。本发明按下述反应流程制备所述的化合物:
H。、、CHO+ ，訓
一+ Ahcoch3
步骤2
步骤1 H3C0C0^^^CHr:(p—C00H -I T "HC0CH3
上述步骤1: 3，4-二羟基苯甲醛、无水醋酐、无水醋酸钠、iV-乙酰甘氨酸一 起加入反应瓶中，加热至100°C反应2小时，倒入冷水中(Harington， C. R.; Randall, S.S.历oc;zem.J 1931,25， 1028-1031.)，或，3，4-二羟基苯甲醛与无水醋酐、无水 醋酸钠先在室温下反应3小时，向反应液中加入W-乙酰甘氨酸，加热至100°C 反应2小时，再倒入冷水中；
步骤2:步骤1所得产物在9。/。盐酸中60。C反应3小时至24小时，反应温 度为60。C 90。C，得产物(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羟基苯基)丙烯酸。
本发明的进一步目的是提供合成的(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羟基苯基)丙烯 酸对缺血缺氧心肌的保护作用。
按常规方法通过体外培养原代心肌细胞，建立心肌细胞缺氧模型，实验分为 正常对照组不给于药物干预，不缺氧缺糖；模型组不给于药物干预，缺氧缺 糖5h;用药组分别给予药物10_8mol/L、 10_7mol/L、 10—6mol/L，缺氧缺糖， 检测(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4二羟基苯基)丙烯酸对缺氧心肌细胞的保护作用；
通过急性和慢性大鼠心肌梗死模型，检测(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羟基苯基) 丙烯酸对缺氧心肌的保护作用，
体内和体外的药理实验结果表明，本发明合成的化合物对缺血心肌具有保护 作用，可降低心肌细胞LDH漏出率，升高细胞内SOD活性，降低细胞内脂质过 氧化产物MDA的产生，并能够影响bax、 bcl-2基因及蛋白的表达，具有抗凋亡 作用。本发明化合物可制备治疗缺血性心脏病的药物。
图1是(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羟基苯基)丙烯酸的单晶结构图。
4图2是丹参素衍生物对缺氧心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率的影响。 图3是丹参素衍生物对缺氧心肌细胞内超氧化物岐化酶(SOD)活性的影 响。
图4是丹参素衍生物对缺氧心肌细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含 量的影响。
图5是丹参素衍生物对缺氧心肌细胞内抗凋亡蛋白bcl-2 mRNA表达的影 响。
图6是丹参素衍生物对缺氧心肌细胞内促抗凋亡蛋白bax mRNA表达的影 响。
图7是丹参素衍生物对缺氧心肌细胞内凋亡蛋白caspase-3 mRNA表达的影 响。
具体实施例方式
本发明通过下列各实施例更具体描述了本发明的化合物及其合成方法。
实施例1按下述反应流程，制备(2)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羟基苯基)丙烯酸
<formula>formula see original document page 5</formula>
在250 mL茄形瓶中加入3，4-二羟基苯甲醛10.8 g， 0.078 mol与无水醋酐30 mL， 32.4 g, 0.319 mol无水醋酸钠6.4 g， 0.078 mol，室温下反应3小时，以石油醚 /乙酸乙酉旨(P7F = 2:1)为展开剂，TLC显示原料点(R^ 0.3)消失，出现新点(Rf-0.4)。继续向反应液中加入W-乙酰甘氨酸(9.2 g， 0.0789mol)，加热至100°C反应2 小时，TLC显示产物点的Rf值仍为0.4，停止反应，将反应液趁热倒入400 mL 冷水中，过夜，有黄色固体析出，将固体过滤后溶于乙酸乙酯重结晶，得到中间 体(l)黄色固体(Z)-2-乙酰氨基-3-(3,4-二乙酰氧基苯基)丙烯酸12.08 g，收率48%，mp 183-185 。C(文献值186-187 °C) (Wong, H.1992, 793-797). ^ NMR (400 MHz CDC13) 3 2.08 (s, 3H， 2-NHCOCH3), 2.28 (2s, 6H, 3，-CH3COO， 4，-CH3COO)， 7.06 (s, 1H, 3-H)， 7.14 (m, 3H， 2，-H， 5，-H， 6，-H)， 8.01 (s， 1H， 2-NHCOCH3);
在250mL茄形瓶中加入中间体(l)(2g，0.012mo1)， 9。/。盐酸50mL，加热至 60°C，原料未全溶，反应3小时，反应液中有粉红色固体析出，以乙酸乙酯/乙 酸()W)-8:1为展开剂，TLC显示紫外灯下原料点(R产0,6滩失，出现新点(R产 0.5),浸磷钼酸后新点能烤出蓝色，原料点不能烤出蓝色，停止反应，冷却至室 温，过滤得红色固体(2)1.278，收率86%。红色固体为本化合物，在水中反复重 结晶得无色片状晶体。X线单晶衍射确证结构，，mp 229-230 °C. & NMR (400 MHz， CD3OD) <5 2.13(s, 3H， 2-OCOCH3)， 6.77 (d， 1H, /= 8.21 Hz， 5，邻，6.96 (d, 1H, J= 8.41 Hz， 2'-H), 7.16 (d, 1H， ■/= 1,95 Hz， 6'-H)， 7.38 (s, 1H， 3-H). 13C而R (100 MHz, CD3OD) 5 22.58， 116.28， 117.55， 123.50， 124.89， 126.60， 137.09， 146.35, 148.81,168.68,173.46. MS (ESI) m/z: 238 (M,.
实施例2 (Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羟基苯基)丙烯酸单晶的培养及晶体结构 的测定
取所制得的化合物(2)，溶于水，室温下静置数天，析出无色片状晶体，选 取大小为0.421 mm x 0.347 mm x 0.250 mm的化合物单晶，在Bruker Smart CCD 单晶衍射仪上，釆用石墨单色化的Mo尺a (义=0.071073 nm)辐射源，在20°C以 化2P扫描方式收集数据，确证其分子结构(图l)。
分子式CuH10O6.分子量238.19.晶体属单斜晶系.空间群为户2(l)/c.晶 胞参数a = 1.05986 (13) nm， 6 = 0.93423 (11) nm,c= 1.19601 (15) nm. 7= 1.0751 (2)nm3.数据收集的0范围从2.12到26.50。.Z-4.Dc^l.472g/cm3.F(000)-496. 优化方法foil-matrix least-squares on F2. Goodness-of陽fit on F2: 1.075.最终偏离因 子R为[/> 2o"C0]: 0.0610， 0.1776. R(all data): 0.0700， 0.1858. Largest diff. peak and hole: 0.695 and -524 e/nm3。
实施例3 (Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羟基苯基)丙烯酸对缺氧心肌细胞的保护
实验
按常规方法，通过原代培养新生大鼠心肌细胞，建立心肌细胞缺氧模型。实验分为正常对照组不给于药物干预，不缺氧缺糖；模型组不给于药物干预， 缺氧缺糖5h:用药组分别给予药物10—8mol/L、 10—7mol/L、 l(T6mol/L,缺氧 缺糖。结果显示，本发明中的化合物可降低缺氧心肌细胞LDH漏出率，正常对 照组细胞内LDH为100%,各用药组与缺氧组细胞内LDH与正常对照组的差值 为LDH漏出率。与缺氧组比较，本化合物能降低细胞内LDH漏出率(图2); 可提高细胞内超氧化物岐化酶(SOD)活性，与缺氧组比较，化合物2能升高细 胞内SOD活性(图3);可抑制细胞内脂质过氧化产物(MDA)的产生，与缺氧 组比较，本化合物能降低细胞内MDA的含量(图4);可促进抗凋亡基因bcl-2 的表达。与缺氧组比较，本化合物可升高细胞内抗调亡基因bcl-2 mRNA的表达 (图5);可抑制促凋亡基因bax的表达，与缺氧组比较，本化合物可降低细胞 内促调亡基因baxmRNA的表达(图6);可抑制凋亡基因caspase-3的表达，与 缺氧组比较，本化合物可降低细胞内调亡基因caspase-3 mRNA的表达(图7)。
实施例4 (Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羟基苯基)丙烯酸对急性心肌梗死和慢性心衰 的保护实验
成年健康SD大鼠，预给药1周，麻醉后开胸，结扎左冠状动脉前降支，制 备心肌梗死模型，术后继续给药两天，处死，取血浆及心肌组织，检测血浆中心 激酶如乳酸脱氢酶、肌酸激酶的活性，心肌组织匀浆，分别检测梗死面积、炎性 因子、抗氧化、抗凋亡等蛋白的基因及蛋白表达水平；
成年健康SD大鼠，制备心肌梗死模型，术后两天存活的大鼠，随机分组， 连续给药6周，处死，取血浆及心肌组织，检测血浆中心激酶如乳酸脱氢酶、肌 酸激酶的活性，心肌组织匀浆，分别检测炎性因子、抗氧化、抗凋亡等蛋白的基 因及蛋白表达水平；
结果表明，(Z)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羟基苯基)丙烯酸能够减小梗死面积，降 低血清中心激酶活性，并具有抗炎、抗氧化、抗凋亡等作用，证实本发明化合物 对急性心肌梗死和慢性心衰有保护作用。
权利要求
1、式(I)结构的化合物，
2、 权利要求1所述的式(I )结构的化合物的合成方法，其特征是，从3,4-二 羟基苯甲醛出发，与无水醋酐、无水醋酸钠和JV-乙酰甘氨酸加入反应瓶中， 加热至100。C反应2小时，倒入冷水中，或3,4-二羟基苯甲醛与无水醋酐、无 水醋酸钠先在室温下反应3小时，向反应液中加入iV-乙酰甘氨酸，加热至100eC 反应2小时，倒入冷水中，然后在9%盐酸中60°(2水解3小时至24小时，反 应温度为60°C至90°C，得产物。
3、 根据权利要求2的方法，其特征是所述的合成方法按下述反应流程，<image>image see original document page 2</image>
4、式(I )结构的化合物在制备治疗缺血性心脏病药物中的用途。
全文摘要
本发明属药物合成领域，具体涉及式(I)结构的化合物(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羟基苯基)丙烯酸及其合成方法和在药学上的应用。本发明从3，4-二羟基苯甲醛出发，与无水醋酐、无水醋酸钠和N-乙酰甘氨酸加热反应后，在9％盐酸中水解，反应温度为60℃至90℃，得产物。本发明化合物通过体内体外的药理实验，结果表明，该类化合物均具有较好的保护缺氧心肌细胞的作用，可制备治疗缺血性心脏病的药物。
文档编号C07C69/00GK101607897SQ20081003916
公开日2009年12月23日 申请日期2008年6月18日 优先权日2008年6月18日
发明者朱依谆, 洋 王, 董村南 申请人:复旦大学