专利名称：重组制备的人类因子viii和ix的制作方法
技术领域：
本发明涉及重组制备的具有类人糖基化模式(pattern)的人类因子VIII和/或 因子IX糖蛋白。
背景技术：
在动物界和植物界以及微生物界中有丰富的糖蛋白。糖蛋白中的糖部分已经显示 出具有多种功能，如就细胞与细胞识别、细胞发信号、蛋白质结构、蛋白质保护、蛋白质稳定 和蛋白质与蛋白质相互作用而言具有重要作用。大多数糖蛋白的糖链通过与天冬酰胺残基 的游离氨基键合的N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc) (N-连接的糖)或通过与丝氨酸或苏氨酸残 基的羟基键合的N-乙酰半乳糖胺(GalNAc) (0-连接的糖)与蛋白质连接。在每个位置上 的糖部分通常由若干个形成复杂结构的单糖单元构成。大多数糖蛋白在一个分子中含有若 干不同的糖链。天冬酰胺连接的糖的结构具有三种类型，高甘露糖型、复合型和杂合型。所 有这些类型具有共同的五糖核心，Man α 1-6 (Man α 1-3)Man β 1_4G1cNAc3 l_4GlcNAc。在高 甘露糖型结构中，其他甘露糖单元与这一核心连接，在复合型结构中，通常发现岩藻糖、半 乳糖、N-乙酰葡萄糖胺和唾液酸。可能从共同核心伸出两个或多个单糖单元的触角。杂合 型糖链含有高甘露糖型和复合型二者的触角。血友病是一组遗传性遗传病症，其降低人体控制血液凝结或凝固的能力。在其最 普通的形式血友病A中，凝血因子VIII是缺乏的。在血友病B中，因子IX是缺乏的。血友 病A在每5，000-10, 000个男婴中出现约1例，而血友病B在约20，000-34, 000个中出现约 1例。在血液凝固中因子VIII蛋白质是重要的协同因子，其中因子DCa将因子X转变为其 激活的形式。可以分别使用因子VIII和因子IX的血浆源性浓缩物或使用重组制备的因子 VIII和因子IX来治疗因子VIII和因子IX的缺乏。使用因子VIII或因子IX浓缩物的治 疗已经使血友病患者过上正常生活。然而，一定百分率的血友病A患者产生抗输入的因子 VIII产品的抑制抗体，造成治疗效果受损。近年来，产生于仓鼠细胞系的重组产品变得更为 常用。然而，一些报道可能暗示这些产品导致比血浆源性产品更高的抑制因子形成发生率 (Ettingshausen 禾口 Kreuz，2006 ；Hay,2006)。因子VIII的新生形式是约300kDa的单链，所述单链由描述为A1-A2-B-A3-C1-C2 的结构域组成(Gitschier 等，1984 ；Toole 等，1984 ；Vehar 等，1984 ；Wood 等，1984)。在 分泌到血液中之前蛋白质经历处理，产生由A1-A2结构域和B结构域的主要部分组成的约 200kDa的重链和由A3-C1-C2结构域组成的80kDa的轻链(在此称为全长因子VIII)。已 经证明B结构域对因子VIII的凝固活性而言是非必要的(Andersson等，1986 ；Brinkhous 等，1985 ；Pittman等，1993)。因此，有可能在治疗血友病A的治疗用途中使用B结构域剔 除的因子 VIII (Courter 和 Bedrosian，2001)。在血液循环中完整的因子VIII以与高分子量蛋白质冯维勒布兰德因子(von Willebrand factor, vffF)的紧复合体存在。vWF不是酶并因此不具有催化活性。其主要功 能是结合其他蛋白质特别是因子VIII，并且其对于与伤口部位的血小板附着是重要的。vWF是由多种单体组成的总分子量最多20，OOOkDa的大蛋白质。作为在血液循环中因子VIII 的载体蛋白质，vWF保护其不发生蛋白质水解降解并因此提高因子VIII的体内留存。此外， 已经建议vWF与因子VIII的结合具有防止免疫系统识别因子VIII的保护作用并由此导致 发展抗因子VIII抑制抗体的降低的风险(Gensana等，2001 ；Kallas和Talps印，2001)。全长因子VIII是具有25个N-链接糖基化潜在位点的高度糖基化蛋白质，所述潜 在位点中的大部分位于B结构域中。这些位点中仅有6个位于A和C结构域内。此前公布 的数据表明在因子VIII A和C结构域中的潜在位点中的4个是被糖基化的。这些位点是重 链中的 Asn 41 和 Asn 239 以及轻链中的 Asn 1810和 Asn 2118 (Lenting等，1998 ;Sandberg 等，2001)。在全长重组因子VIII中发现13个0-链接糖基化位点，它们中的大部分位于B 结构域中(Lenting等，1998)。据报道，B结构域剔除的因子VIII，ReFacto 具有2个用 0-链接糖链取代的位点(Sandberg等，2001)。通常在鼠科细胞系中表达重组的人类蛋白质。这意味着，虽然人类基因构建已 经被用于表达，但是蛋白质具有鼠科糖基化模式。一个这样的实例是抗原性糖基非支化 的Gala l-3Gal，其存在于从这些细胞系制备的重组蛋白质中(Galili等，1985 ； Hokke等， 1995)。然而，这种糖基并不存在于自然人类糖蛋白中。另一个实例是存在多种类型唾液 酸的组合。已经报道了源自鼠科细胞系的重组蛋白质除了主要形式的唾液酸、N-乙酰神 经氨酸(Neu5Ac)之外还含有一些百分含量的抗原性唾液酸、N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc) (Hokke等，1990)。由于编码酶CMP-N-乙酰基神经氨酸羟化酶的基因中的突变的原因， Neu5Gc通常不存在于自然人类蛋白质中，而是存在于所有其他哺乳动物糖蛋白中(Chou 等，2002)。然而，已经报道了 Neu5Gc存在于快速生长的细胞如人类癌细胞中以及存在于人 类胚胎细胞中(Kawashima 等，1993 ；Marquina 等，1996 ；Tangvoranuntakul 等，2003)。已经表明多数人类具有针对Gal α l-3Gal抗原决定部位和Neu5Gc的循环抗体。目前，用于治疗用途的重组人类因子VIII产品全部源自鼠科细胞系，这意味着它 们具有鼠科糖基化模式。因此抗原性糖基，非支化的Gala l_3Gal可以存在于从这些细胞 系制备的因子VIII中(Hironaka等，1993)。然而，这种糖基不存在于血浆源性人类因子 VIII中。另一个实例是抗原性唾液酸N-羟乙酰神经氨酸存在于得自鼠科细胞系的因子 VIII 中。现有技术中已经公开了在人类细胞系中制备重组因子VIII的方法。 US-A-2006/099685涉及一种在人类胚胎视网膜细胞中制备重组因子VIII蛋白质的方法， 所述方法关注所述细胞表达至少一种腺病毒的ElA蛋白质的重要性。据说根据这一方法制 备的重组蛋白质具有与分离的人类副本(counterpart)不同的人类糖基化模式。W0-A-2007/003582提供了一种在无血清和无蛋白质条件下在人类细胞系中转染 和制备人类重组蛋白质特别是血蛋白质的方法，使用携带编码所关注蛋白质的基因的特殊 载体稳定地转染所述人类重组蛋白质。US-A-2003/0077752涉及具有人类因子VIII活性的糖基化蛋白质。这种产品的 糖基化模式含有α，6)-链接的唾液酸和与核心β甘露糖链接的截开型N-乙酰葡萄糖胺。ΕΡ-Α-0774261公开了因子VIII和vWf的复合体以及它们的治疗价值。B. Mei ^t Molecular Biotechnology Volume 34, 2006, 165-178 中；V. Picanco-Castro 等 ^t Genetics and Molecular Research 7(2) :314-325(2008) 中；Μ·-H.Rodriguez, British Journal of Haematology,127,568-575 ；G.-Ch.Gil, Glycobiology vol. 18 no. 7pp. 526-539 以及 W0-A-2008/092643 公开了重组因子 IX或因子 VIII在人类细胞系中的制备。可以期望使用具有人类糖基化模式的重组人类因子VIII产品和重组人类因子IX 产品从而在用于治疗时将重组蛋白质的免疫原性最小化。
发明内容
本发明涉及具有类人糖基化模式的重组人类因子VIII或IX蛋白质。这种蛋白质 没有唾液酸、N-羟乙酰神经氨酸和/或糖基Gal α -3GaL·与在非哺乳动物细胞系中制备的 相应的重组蛋白质相比，这种蛋白质还显示与冯维勒布兰德因子更好的结合。当用于治疗 时，人类糖基化模式可能具有对蛋白质的有益影响，因为其可能改善功能性质和/或降低 免疫原性。本发明还涉及具有人类糖基化模式的重组人类因子VIII蛋白质，其中与在非哺 乳动物细胞系中制备的相应的重组蛋白质相比所述蛋白质显示与冯维勒布兰德因子更好 的结合。通过以下说明书和所附包括其全部内容的权利要求书，进一步的实施方案是清楚 的。
图1是示出1 IU FVIII :C/mL的三批次的人类细胞系rhFVIII和鼠科细胞系 rhFVIII X和鼠科细胞系rhFVIII Y穿过vWF表面两分钟注射的传感图的示意图。所有注 射重复三次。为清楚起见，仅示出每种FVIII分子的一次注射。将所有响应归一化为在注 射终点具有最高响应的FVIII分子的响应。图2是示出在注射1 IU/mL不同rhFVIII产品终止10秒之后用标准偏差归一化的 响应的示意图。人类细胞系rhFVIII线条代表三个人类细胞系rhFVIII批次的平均响应。 将所有响应归一化为在注射终止10秒之后具有最高响应的FVIII分子的响应。在描述本发明之前，应当理解，本文所用术语仅用于描述具体实施方案的目的并 且不用于限定，因为本发明的范围仅由所附权利要求书及其等同物来限定。必须注意，当在本说明书和所附权利要求书中使用时，除非上下文明确指出，否则 单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数对象。另外，术语“大约”用于表示在合适的情况下给定值的+/-2%的偏差，优选为 +/-5 %，并且最优选数值的+/-10 %。在本发明的上下文中，术语“没有”是指不具有具体特征或特性以及不具有 不可用标准液相色谱法检测的具体特征或特性，所述标准液相色谱法例如但不限于 HPAEC-PAD (使用脉冲电流检测的高效阴离子交换色谱法)。在本发明的上下文中，术语“唾液酸”涉及9碳羧基化糖家族的任何成员。唾 液酸族最常见成员是N-乙酰神经氨酸O-酮-5-乙酰氨基-3，5-二脱氧-D-甘 油-D-galactononulopyranos-l-onic acid) (2-keto-5-acetamido-3,5-dideoxy-D-glycero-D-galactononulopyranos-l-onic acid)(通常缩写为 Neu5Ac、NeuAc 或 NANA)。所述族 的第二成员是N-羟乙酰基-神经氨酸(Neu5Gc或NeuGc)，其中NeuAc的N-乙酰基被羟基 化。在本发明的上下文中，术语“亲和力”涉及某些原子或分子具有聚集或结合趋势的 现象。例如，通常使用平衡解离常数(Kd)描述配体与蛋白质之间的亲和力，即配体与具体 蛋白质结合的有多紧密。Kd具有摩尔单位(M)，其等于具体蛋白质上的结合位点被占据一 半的配体浓度，即配体结合的蛋白质的浓度等于没有配体结合的蛋白质的浓度时的配体浓 度。Kd越小配体结合的越紧密，或者配体与蛋白质之间的亲和力越高。例如，与具有微摩尔 (μΜ)的Kd的配体相比，具有纳摩尔(HM)Kd的配体与具体蛋白质结合的更紧密。在本发明的上下文中，术语“结合能力，，涉及重组人类因子VIII能够与冯维勒布 兰德因子(vWF)结合的程度，即其涉及在具有与vWF结合能力的产品中因子VIII分子的数 量。可以通过本领域技术人员已知的方法评价结合能力。在本发明的上下文中，术语“无限增殖化的人类细胞系”涉及不是直接从组织获取 的初级细胞的人类细胞。具体而言，其涉及永久性建立的细胞培养物，所述细胞培养物给予 新鲜培养基和空间时会无限增殖，并因此已经突破了海弗利克(Hayflick)极限(即在由于 端粒达到临界长度的原因而停止分裂之前细胞分裂的倍数)。
具体实施例方式本发明提供一种新型重组人类因子VIII和/或IX糖蛋白。本发明的重组制备的 因子VIII和/或IX蛋白质在人类细胞系中制备，这意味着所述蛋白质将具有类人糖基化 模式。因此，本领域技术人员能够预见人类因子VIII和/或IX显示人类糖基化模式。然而，出乎意料地发现本发明的重组制备的因子VIII和/或IX蛋白质没有抗原 性唾液酸N-羟乙酰神经氨酸和/或抗原性糖基Gal α -3GaL·由于已经发现人类癌细胞或 快速生长的人类胎儿细胞表达N-羟乙酰神经氨酸，预计所述重组制备的因子VIII和/或 IX蛋白质能够具有N-羟乙酰神经氨酸，因为它们在人类无限增殖化的胎儿细胞系中制备。 预计这一特征和/或缺少抗原性糖基Gal α -3Gal以及重组因子VIII和/或因子IX蛋白 质的整个人类糖基化模式具有对产品有益的影响，因为其降低免疫原性并且还改善蛋白质 的功能性质。重组因子VIII的一个这种性质是更好地与冯维勒布兰德因子(vWF)结合。在一个实施方案中，本发明涉及一种具有人类糖基化模式并且没有抗原性N-羟 乙酰神经氨酸和/或Gal α l-3Gal的重组因子VIII和/或IX蛋白质。在另一个实施方案中，本发明涉及一种没有抗原性N-羟乙酰神经氨酸和/或 Gal α l-3Gal的重组因子VIII和/或IX蛋白质，与在非人类哺乳动物细胞例如但不限于鼠 科细胞，如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞和仓鼠崽肾(BHK)细胞中制备的重组因子VIII蛋白质 相比，所述蛋白质显示更好地与vWF结合。更好的结合涉及比在非人类哺乳动物细胞中制 备的重组因子VIII更高的与人类vWF亲和力。在一个具体实施方案中，与vWF的亲和力比 在非人类哺乳动物细胞中制备的重组因子VIII与vWF的亲和力高至少大约10-60%，优选 高大约 20%、30%、40%、50% 或 60%。亲和力还可以通过平衡解离常数(Kd)来评价。因此，在本发明的又一实施方案中， 重组蛋白质与vWF之间的亲和力具有比在非人类哺乳动物细胞例如但是不限于鼠科细胞，如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞和仓鼠崽肾(BHK)细胞中制备的因子VIII更低的KD。另外，与vWF更好地结合还涉及结合能力。因此，本发明还涉及一种重组制备的因 子VIII糖蛋白，其具有比在非人类哺乳动物细胞例如但是不限于鼠科细胞，如中国仓鼠卵 巢(CHO)细胞和仓鼠崽肾(BHK)细胞中制备的重组因子VIII更高的与VWF的结合能力。在 一个具体实施方案中，当在相同实验中检测时，与vWF的结合能力比在非人类哺乳动物细 胞中制备的重组因子VIII与vWF的结合能力高至少大约10-60%，优选高大约20%、30%、 40%、50%或 60%。在一个实施方案中，根据本发明的没有抗原性唾液酸N-羟乙酰神经氨酸和/或抗 原性糖基Gala-3Gal的重组因子VIII蛋白质是自然因子VIII的剔除衍生物，其部分或整 体缺少自然因子VIII的B结构域。在一个实施方案中，剔除的B结构域被连接肽代替，所 述连接肽包括10至25个优选14至20个氨基酸残基。对于关于B结构域剔除衍生物和连 接肽的更多细节，参见W0-A-01/70968和W0-A-2007/003582，本文包括它们的全部内容。因此，本发明涉及一种重组因子VIII糖蛋白，其具有类人糖基化模式并且具有比 在非人类哺乳动物细胞例如但是不限于鼠科细胞，如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞和仓鼠崽肾 (BHK)细胞中制备的重组因子VIII更好的与vWF的结合。与vWF更好的结合涉及如上定义 的与vWF的亲和力和结合能力。在一个实施方案中，具有类人糖基化模式和比在非人类哺乳动物细胞中制备的重 组因子VIII更好的与人vWF的结合的重组蛋白质是自然因子VIII的剔除衍生物，其部分 或整体缺少自然因子VIII的B结构域。在一个实施方案中，剔除的B结构域被连接肽代替， 所述连接肽包括10至25个，优选14至20个氨基酸残基。对于关于B结构域剔除衍生物 和连接肽的更多细节，参见W0-A-01/70968和W0-A-2007/003582，本文包括它们的全部内 容。如上定义的重组人类因子VIII和/或IX糖蛋白优选在人类细胞系中制备，所述 人类细胞系优选为无限增殖化的人类细胞系。这种细胞系的非限定性的实例为肾脏、膀胱、 肝脏、肺、心肌、平滑肌、卵巢、视网膜、神经和胃肠细胞系。在一个具体实施方案中，在无限增殖化的人类胚胎肾细胞系(HEK)中制备本 发明的蛋白质。这些细胞系的非限定性实例是HEK293(ATCC CRL-1573 ；DSM ACC 305 ； ECACC ref :85120602),HEK293T(ATCC CRL 11268 ；DSM ACC 2494)和 HEK293F(Invitrogen R79007)。在一个具体实施方案中，所述人类细胞系是HEK293Fanvitrogen R79007)。在又一个实施方案中，与在非人类细胞系例如但是不限于鼠科细胞，如中国仓鼠 卵巢(CHO)细胞和仓鼠崽肾(BHK)细胞中制备的人重组因子VIII或IX蛋白质相比，本发 明涉及具有更低免疫原性的如上所定义的重组蛋白质。本发明还涉及一种药物组合物，其包含与药学可接受赋形剂混合的如上定义的本 发明的蛋白质。所述药物组合物包含治疗有效剂量的重组因子VIII或IX蛋白质。剂量和 治疗期取决于因子VIII和/或因子IX缺失的严重程度、流血的位置和程度以及患者的临 床病情。个体患者可以随他们对因子VIII和因子IX的反应而变化，实现不同水平的体内 回收率和显示不同的半衰期。所施用的剂量应当由本领域技术人员根据患者的临床反应渐 渐增加。在抑制剂的存在下，可能要求更高的剂量或适当的特殊治疗。所施用的因子VIII 或因子IX的数量单位用国际单位(IU)表示，其与因子VIII或IX产品的当前WHO标准有关。因子VIII在血浆中的活性表示为百分比(相对于正常人类血浆)或国际单位(相对 于血浆中因子VIII的国际标准)。一个国际单位(IU)的因子VIII活性大约相当于ImL正常人类血浆中因子VIII 活性的量。因子VIII的所需剂量的计算基于每kg体重的IIU因子VIII使血浆因子VIII 活性提高大约2IU/dL的经验发现。在血友病A的治疗中要施用的剂量和施用的频率依赖于个体患者的临床效果。通 常的预防剂量为每2-3天20-40IU/kg体重。在一个实施方案中，本发明涉及治疗与因子VIII和/或因子IX有关的病症如血 友病A和血友病B的方法，其中如上定义的重组蛋白质与药学可接受赋形剂一起以治疗可 接受量施用。药学可接受赋形剂是本领域技术人员熟知的。本发明还涉及如上定义的重组蛋白质在治疗与因子VIII和/或因子IX有关的病 症如血友病A和血友病B中的用途。根据本发明的重组蛋白质可以通过本治疗领域的标准 方法例如但不限于注射和输液，经皮下或静脉来施用。在另一个实施方案中，本发明涉及如上定义的重组蛋白质在制造用于治疗与因子 VIII和/或因子IX有关的病症如血友病A和血友病B的药物中的用途。所述药物可以通 过本治疗领域的标准方法例如但不限于注射和输液，经皮下或静脉来施用。在又一个实施方案中，本发明涉及如上定义的蛋白质与冯维勒布兰德因子之间的 复合体，其中所述蛋白质是重组因子VIII。所述复合体具有本发明蛋白质与VWF之间改善 的结合亲和力，导致重组因子VIII在体内延长的存留。下面将在以下非限定性实施例中进一步描述本发明。实施例1根据EP-A-I 739 179 ( SchrSder等，2007b ； SchrSder等，2007a)中描述的方 法在人类细胞系HEK293F中制备人类B结构域剔除的因子VIII蛋白质，人类细胞系重组人 类因子VIII (人类细胞系rhFVIII)。提纯方法由5个色谱步骤组成并产生高纯因子VIII 蛋白质(Winge 等，2008)。使用0. IM盐酸将其中已经加10 μ g尤罗索尼克酸(Ketodeoxynonulosonic acid) (KDN ；内标)的提纯的因子VIII蛋白质GOO-eOOyg)的唾液酸酸水解(80°C下1小时)。 使用Dowex阳离子交换色谱提纯产物，并将所得溶液冻干，重新混悬于水中并用HPAEC-PAD 分析。将含有Neu5Ac和NeuGc各5 μ g以及10 μ g KDN的标准混合物和具有10 μ gKDN的 试剂空白水解并与样品平行分析。表1和表2表示人类细胞系rhFVIII的两个样品A和B的Neu5Ac和NeuGc的分 析结果。其表明检测不到唾液酸类型NeuGc。仅发现Neu5Ac。从rhFVIII由酸释放的N-乙酰基神经氨酸(Neu5Ac)和N-羟乙酰神经氨酸 (NeuGc)的 HPAEC-PAD 定量
权利要求
1.一种具有类人糖基化模式的重组人类因子VIII或IX蛋白质，但是所述蛋白质没有 N-羟乙酰神经氨酸和/或糖基Gal α -3GaL·
2.如权利要求1所述的重组蛋白质，其中所述蛋白质是因子VIII并且是自然因子 VIII的剔除衍生物，所述剔除衍生物部分或整体缺少自然因子VIII的B结构域。
3.如权利要求2所述的重组蛋白质，其中部分或整体剔除的B结构域被包括10至25 个，优选14至20个氨基酸残基的连接肽代替。
4.如权利要求1至3中任一项所述的重组蛋白质，其中所述蛋白质是重组因子VIII并 且与在非人类哺乳动物细胞特别是鼠科细胞中制备的重组因子VIII相比具有更高的与冯 维勒布兰德因子的亲和力。
5.如权利要求1至3中任一项所述的重组蛋白质，其中所述蛋白质是重组因子VIII并 且与在非人类哺乳动物细胞特别是鼠科细胞中制备的重组因子VIII相比具有更高的与冯 维勒布兰德因子的结合能力。
6.如权利要求1所述的重组蛋白质，其中所述蛋白质是重组因子VIII并且与在非人类 哺乳动物细胞特别是鼠科细胞中制备的重组因子VIII相比具有更高的与冯维勒布兰德因 子的亲和力。
7.如权利要求6所述的重组蛋白质，其中所述蛋白质是重组因子VIII并且与在非人类 哺乳动物细胞特别是鼠科细胞中制备的重组因子VIII相比具有更高的与冯维勒布兰德因 子的结合能力。
8.如权利要求6和/或7中任一项所述的重组蛋白质，其中所述蛋白质是因子VIII并 且是自然因子VIII的剔除衍生物，所述剔除衍生物部分或整体缺少自然因子VIII的B结 构域。
9.如权利要求8所述的重组蛋白质，其中部分或整体剔除的B结构域被包括10至25 个，优选14至20个氨基酸残基的连接肽代替。
10.如前述权利要求中任一项所述的重组蛋白质，其中在人类细胞系特别是选自肾脏、 膀胱、肝脏、肺、心肌、平滑肌、卵巢、视网膜、神经和胃肠细胞系的无限增殖化细胞系中制备 所述蛋白质。
11.如权利要求10所述的重组蛋白质，其中所述人类细胞系是人类胚胎肾细胞系 (HEK)，特别是选自 HEK 293 (ATCC CRL-1573 ；DSM ACC 305 ；ECACC ref :85120602)和 293F(Invitrogen R79007)的人类胚胎肾细胞系。
12.如前述权利要求中任一项所述的重组蛋白质，所述蛋白质可以通过在选自HEK 293 (ATCC CRL-1573 ；DSM ACC 305 ；ECACC ref :85120602)和 293F (Invitrogen R79007)的 人类胚胎细胞系(HEK)中制备蛋白质获得。
13.如权利要求1至12中任一项所述的重组蛋白质在治疗与因子VIII和/或因子IX 有关的病症中的用途。
14.包含治疗有效量的如权利要求1至12中任一项所述的蛋白质和药学可接受赋形剂 的药物组合物。
15.如权利要求1至12中任一项所述的重组因子VIII与冯维勒布兰德因子的复合体。
全文摘要
本发明提供一种具有人类糖基化模式的重组人类因子VIII或IX蛋白质，但是所述蛋白质没有N-羟乙酰神经氨酸和/或糖基Galα-3Gal。
文档编号C07K14/755GK102119172SQ200980131411
公开日2011年7月6日 申请日期2009年8月21日 优先权日2008年8月21日
发明者伊丽莎白·卡萨德蒙特, 卡罗拉·施罗德, 彼得·斯滕伦德, 海伦娜·桑德伯格, 马亚·蒂迈尔 申请人:奥克塔法马股份有限公司