专利名称：一种从山荷叶中提取鬼臼毒素的方法
技术领域：
本发明涉及一种从山荷叶中提取鬼白毒素的方法，尤其是一种采用甲醇提取、乙 酸乙酯提取、活性炭脱色、重结晶的提纯鬼白毒素的工艺。
背景技术：
鬼臼毒素5R-5，8，8a，9-四氢-9-羟-5-(3，4，5_三甲氧苯基)呋喃(3' ,4' :6， 7)萘并-[2，3-d]-l，3-间二氧杂环烯-6(5aH)_酮。易溶于氯仿、丙酮、乙酸乙酯和苯，可溶 于于乙醇，乙醚，不溶于水。鬼臼毒素针对尖锐湿疣、多发性浅表性上皮瘤病(如多发性浅 表性或浸润性基底细胞上皮瘤，鳞状细胞上皮瘤和基底鳞状细胞上皮瘤)，前上皮瘤性角化 病，脂溢性角化、日光性角化和射线角化病，幼年喉头乳头瘤、疣(寻常疣、丝状疣)。鬼臼毒 素能有效抑制疱疹病毒，抑制细胞中期的有丝分裂，用于毒性性病。山荷叶为小檗科山荷叶属植物山荷叶(南方山荷叶)Diphylleia sinensis Li的 根状茎。主要含鬼白毒素类木脂素和黄酮类等。其中鬼白毒素含量7. 5%左右。现有提取鬼臼毒素的工艺有专利(申请号200410052833. 9) “一种从桃儿七中制备鬼白毒素的改进工艺”，该 专利是以桃儿七为原料，粉碎，体积分数为90%乙醇溶液，在70°C回流提取3次，合并提取 液，减压浓缩，得棕红色浆状物；在棕红色浆状物，加入石油醚，搅拌使其充分萃取，静置分 层，弃去下层棕红色液体，将上层淡黄色液体静置结晶，离心过滤，得白色至淡黄色针状晶 体，此即为鬼白毒素粗品，继而用柱层析分离与纯化，得到鬼白毒素精品。专利(申请号200910047696. 2) “一种从桃儿七中制备高纯度鬼白毒素的方法”， 该专利分为原料用醇类提取得浸膏再经萃取得鬼白毒素粗品和鬼白毒素粗品高压柱层析 两部分组成，具体步骤为将桃儿七根茎经超微粉碎后，在超声波条件下用醇类溶剂加热提 取三次，合并三次提取液，合并提取液浓缩醇类溶剂，得到比重为1.0-1.2的红褐色浸膏； 再加入1-2倍浸膏体积量的水得到鬼白毒素醇水相；鬼白毒素醇水相用等体积的二氯甲烷 萃取三次，合并三次的二氯甲烷相，浓缩得到纯度为40% -50%的淡黄色鬼白毒素粗品；淡 黄色鬼白毒素粗品用溶解，上样至硅胶为300-400目的高压柱，用丙酮+ 二氯甲烷溶剂的混 合洗脱液洗脱，收集产品段洗脱液，浓缩过滤后，烘干即得到鬼白毒素精品。专利(申请号200710018473. 4) “一种鬼白毒素提取分离新工艺”该专利以醇为 溶剂回流提取鬼白毒素植物细胞中的鬼白毒素，得鬼白毒素醇浸膏，然后以苯为溶剂对鬼 臼毒素醇浸膏进行回流提取，回流液减压浓缩后放置过夜，析出黄色粉末状晶体，倾出母液 并继续放置，得淡黄色针状晶体，采用苯_乙醇对淡黄色针状晶体进行重结晶，得无色针状 晶体鬼白毒素_苯的溶剂加合物，将鬼白毒素-苯的溶剂加合物加热分解，发生脱溶剂反应 生成白色粉末鬼白毒素。如上所述，现有提取鬼白毒素工艺存在有机试剂用量大且有毒，操作繁复，目标成 分损失大的问题。
发明内容
本发明要解决的技术问题提供一种从山荷叶中提取鬼白毒素的方法，该工艺成本 低，处理量大。本发明的目的是通过以下技术方案实现的一种从山荷叶中提取鬼白毒素的方法，其特征在于包含以下步骤1)提取将山荷叶粉碎至20-80目，加入6-9倍75-85%甲醇溶液，超声提取2-3 次，每次提取1-2小时，合并提取液浓缩得浸膏，再用3-5倍乙酸乙酯超声提取2-3次，每次 提取1-2小时，过滤，滤液浓缩至原体积的1/10-1/5，放置结晶，过滤后得粗品；2)纯化上述粗品用无水甲醇溶解，加适量活性炭回流脱色，过滤，加入1-3倍量 有机溶剂，离心分离，有机层浓缩，放置结晶；3)重结晶将上述结晶加入适量无水甲醇回流至完全溶解，浓缩，放冷结晶，重复 3-5次，干燥即得鬼白毒素产品。所述步骤2)中的活性炭用量为药材的0.3-1%。所述步骤2)中的有机溶剂为氯仿溶液。乙酸乙酯相对甲醇醇对鬼臼毒素有更好的溶解性，用乙酸乙酯从甲醇浸膏中提取 鬼臼毒素能除去多种杂质；全过程所用溶剂种类较少，易于回收。所以本发明生产工艺简单，成本低，鬼白毒素纯度达86%以上，产量大，周期短，易 于实现工业化。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1 山荷叶粉碎至20目，取Ikg装入烧瓶中，加入6倍量85%甲醇溶液，超声提取3次， 每次提取1小时，合并提取液浓缩得浸膏，浸膏再用4倍量乙酸乙酯超声提取2次，每次提 取1. 5小时，抽滤，滤液浓缩至原体积的1/6，放置结晶，过滤后得粗品，上述粗品中用300ml 无水甲醇溶解，加入3g活性炭，回流lh，过滤，滤液加入2L氯仿，离心分离，有机层浓缩，放 置结晶，将上述结晶加入200ml无水甲醇回流溶解，浓缩，放冷结晶，重复3次，滤出结晶，真 空干燥得鬼臼毒素38g，含量91.2%。实施例2 山荷叶粉碎至40目，取Ikg装入烧瓶中，加入8倍量80%甲醇溶液，超声提取2次， 每次提取2小时，合并提取液浓缩得浸膏，浸膏再用3倍乙酸乙酯超声提取3次，每次提取 2小时，过滤，滤液浓缩至原体积的1/5，放置结晶，过滤后得粗品；上述粗品中用300ml无水 甲醇溶解，加入5g活性炭，回流lh，过滤，滤液加入3L氯仿，离心分离，有机层浓缩，放置结 晶，将上述结晶加入180ml无水甲醇回流溶解，浓缩，放冷结晶，重复4次，滤出结晶，真空干 燥得鬼白毒素28g，含量89. 6%。实施例3 山荷叶粉碎至80目，取2kg装入烧瓶中，加入7倍量70%甲醇溶液，超声提取3 次，每次提取2小时，合并提取液浓缩得浸膏，浸膏再用5倍乙酸乙酯超声提取2次，每次提取2小时，过滤，滤液浓缩至原体积的1/8，放置结晶，过滤后得粗品，上述粗品中用900ml无 水甲醇溶解，加入IOg活性炭，回流lh，过滤，滤液加入4. 5L氯仿，离心分离，有机层浓缩，放 置结晶，将上述结晶加入400ml无水甲醇回流溶解，浓缩，放冷结晶，重复5次，滤出结晶，真 空干燥得鬼白毒素62g，含量88. 4%。实施例4 山荷叶粉碎至60目，取2kg装入烧瓶中，加入9倍量75%甲醇溶液，超声提取3次， 每次提取1. 5小时，合并提取液浓缩得浸膏，浸膏再用4倍乙酸乙酯超声提取3次，每次提 取1小时，过滤，滤液浓缩至原体积的1/10，放置结晶，过滤后得粗品，上述粗品中用800ml 无水甲醇溶解，加入8g活性炭，回流lh，过滤，滤液加入6L氯仿，离心分离，有机层浓缩，放 置结晶，将上述结晶加入500ml无水甲醇回流溶解，浓缩，放冷结晶，重复4次，滤出结晶，真 空干燥得鬼白毒素73g，含量86. 2%。实施例5 山荷叶粉碎至50目，取3kg装入烧瓶中，加入9倍量85%甲醇溶液，超声提取2 次，每次提取2小时，合并提取液浓缩得浸膏，浸膏再用5倍乙酸乙酯超声提取2次，每次提 取1. 5小时，过滤，滤液浓缩至原体积的1/10，放置结晶，过滤后得粗品，上述粗品中用2. 5L 无水甲醇溶解，加入12g活性炭，回流lh，过滤，滤液加入12L氯仿，离心分离，有机层浓缩， 放置结晶，将上述结晶加入IL无水甲醇回流溶解，浓缩，放冷结晶，重复5次，滤出结晶，真 空干燥得鬼白毒素88g，含量93. 8 %。
权利要求
一种从山荷叶中提取鬼臼毒素的方法，其特征在于包含以下步骤1)提取将山荷叶粉碎至20 80目，加入6 9倍75 85％甲醇溶液，超声提取2 3次，每次提取1 2小时，合并提取液浓缩得浸膏，再用3 5倍乙酸乙酯超声提取2 3次，每次提取1 2小时，过滤，滤液浓缩至原体积的1/10 1/5，放置结晶，过滤后得粗品；2)纯化上述粗品用无水甲醇溶解，加适量活性炭回流脱色，过滤，加入1 3倍量有机溶剂，离心分离，有机层浓缩，放置结晶；3)重结晶将上述结晶加入适量无水甲醇回流至完全溶解，浓缩，放冷结晶，重复3 5次，干燥即得鬼臼毒素产品。
2.如权利要求1所述从山荷叶中提取鬼臼毒素的方法，其特征在于所述步骤2)中的活 性炭用量为药材的0. 3-1%。
3.如权利要求1所述从山荷叶中提取鬼臼毒素的方法，其特征在于所述步骤2)中的有 机溶剂为氯仿溶液。
全文摘要
本发明涉及一种从山荷叶中提取鬼臼毒素的方法，方法是以山荷叶为原料，75-85％甲醇超声提取，减压浓缩得浸膏，再用乙酸乙酯超声提取，提取液浓缩，放置结晶，结晶用无水乙醇溶解，加活性炭回流脱色，过滤，有机溶剂萃取，浓缩，结晶，无水甲醇重结晶干燥即得产品。本发明工艺操作简单、成本低。
文档编号C07D493/04GK101974006SQ20101051089
公开日2011年2月16日 申请日期2010年10月19日 优先权日2010年10月19日
发明者万冬梅, 刘东锋, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司