专利名称：一种应用膜分离技术精制三七总氨酸的方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及一种应用微滤膜和纳滤膜精制三七总氨酸的方法。
背景技术：
三七，Panax notoginseng(Burk. )F. H. Chen，又名参三七、田七、山漆、金不换，五
加科人参属植物，性温，味甘、微苦。功能主治散瘀止血，消肿定痛。用于各种内、外出血， 胸腹刺痛，跌扑肿痛。《本草纲目》记载三七“颇似人参之味”，“止血散血定痛”能治一切血症，历版中国药典中也将三七的功能主治界定为止血。现代药理研究表明，三七中的非蛋白氨基酸具有非常好的止血效果，是三七的主要止血成分。三七总氨酸，主要成分为三七素(田七氨酸)分子式，C5H8N2O5 ；分子量，176. 13 ； 其半水合物为无色结晶(50%乙醇)，易溶于水，不溶于甲醇、乙醇、丙醇、丙酮等有机溶剂。 张勇等研究发现三七静脉注射具有明显的预防性和治疗性的止血作用，其主要止血机理是缩短全血凝血时间、促进血液凝固、减少血浆TAP水平并降低纤维蛋白溶解活性。三七作为强效止血药物现已受到广泛重视，有着广阔的研究前景。现有三七素主要通过合成和提取两个方面制得。三七素的提取主要是通过先醇提，残渣水提，提取液浓缩后再经正丁醇萃取，萃余层上kphadex LH-20和CM Sephadex C-25树脂制得，该方法制得三七素含量高，但是制备量小，且用到的kphadex LH_2和CM Sephadex C_25价格较为昂贵，成本较高，不适宜大量制备。现有专利“从三七中提取三七素的方法”(专利号200610027962. 1)，该专利采用的方法是先醇提，残渣接着用水浸提，提取液醇沉后用正丁醇萃取，萃余液上阳离子树脂，洗脱液用丙酮沉淀，最后重结晶得到纯度较高的三七素，该方法溶剂用量大。
发明内容
1、发明目的本发明的目的在于提供一种适用于工业化提取三七总氨酸的方法。2、技术方案—种应用膜分离技术精制三七总氨酸的方法，其特征在于包括以下步骤1)提取将三七叶粉碎，加5 12倍量水提取1 3次，合并提取液；2)除杂搅拌上述提取液，在快速搅拌下缓慢加入絮凝剂溶液，混合均勻后慢速搅拌，静置2 8h，离心或过滤将沉淀分离，得澄清液；3)膜分离将上述澄清液加入微滤装置中微滤，微滤液再加入纳滤装置中纳滤， 收集透过液；4)重结晶上述透过液回收溶剂至小体积，加入乙醇沉淀，滤出沉淀物用50 70%乙醇溶解结晶2 4次，干燥即得产品。步骤1)中的提取方式可选用回流、冷浸、超声提取中的一种。步骤2)中的絮凝剂为CTS中药絮凝剂，用量是药液的0. 1 0. 8%o ；絮凝剂溶液的制备方法为，先将絮凝剂加水溶解，稀释为1 2%絮凝剂溶液。步骤幻中的微滤膜选用无机陶瓷膜，材质为氧化铝、氧化锆、氧化锑或氧化钛，截留粒子范围100 200nm，滤过压力为200 500kPa。步骤3)中的纳滤膜选用有机复合膜，材质为聚酯类、聚乙烯类或聚酰胺类，截留分子量为200 400，滤过压力为500 800kPa。步骤4)中的结晶条件为50 70%乙醇回流溶解，溶液回收至原体积的1/3 1/10，静置结晶。本发明优势在于以下几个方面1.本工艺采用膜-膜分离，操作简单，提取率高，去除了大部分杂质；2.采用无机陶瓷膜分离效率高，可低温操作，氨基酸无损失，制得产品质量好；3.采用纳滤膜截留杂质，截留三七皂苷类、黄酮类杂质，纳滤透过液中得到小分子的氨基酸，操作简单，无损耗。 综上所述，本发明具有条件温和、氨基酸损失少、工序少，制备量大、节约能源等优点，适于工业化放大。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1 将三七叶粉碎，称取lKg，加入12L水冷浸提取2次，过滤，合并提取液，取2. 5gCTS 中药絮凝剂，加250ml水稀释，提取液在快速搅拌作用下加入CTS稀释液，混合均勻后慢速搅拌，静置池，过滤除去沉淀，滤液加入氧化铝陶瓷膜中微滤，截留量为200nm，滤过压力为 200kPa，收集微滤液加入分子截留量400的聚酯类复合纳滤膜中纳滤，滤过压力为500kPa， 收集透过液，回收溶剂至小体积，加入乙醇沉淀，滤出沉淀物用50%的乙醇溶液加热溶解， 浓缩至1/3体积，静置结晶2次，干燥得到白色固体8. lg，含三七素72. 2%。实施例2 将三七叶粉碎，称取lKg，加入5L水回流提取2次，过滤，合并提取液，取6gCTS中药絮凝剂，加300ml水稀释，提取液在快速搅拌作用下加入CTS稀释液，混合均勻后慢速搅拌，静置5h，离心除去沉淀，离心液加入氧化钛陶瓷膜中微滤，截留量为lOOnm，滤过压力为500kPa，收集微滤液加入分子截留量300的聚乙烯类复合纳滤膜中纳滤，滤过压力为 600kPa，收集透过液，回收溶剂至小体积，加入乙醇沉淀，滤出沉淀物用60%的乙醇溶液加热溶解，浓缩至1/4体积，静置结晶3次，干燥得到白色固体7. 3g，含三七素74. 9%。实施例3 将三七叶粉碎，称取lKg，加入6L水超声提取2次，过滤，合并提取液，取4gCTS 中药絮凝剂，加300ml水稀释，提取液在快速搅拌作用下加入CTS稀释液，混合均勻后慢速搅拌，静置6h，过滤除去沉淀，滤液加入氧化锆陶瓷膜中微滤，截留量为200nm，滤过压力为300kPa，收集微滤液加入分子截留量200的聚酰胺类复合纳滤膜中纳滤，滤过压力为 800kPa，收集透过液，回收溶剂至小体积，加入乙醇沉淀，滤出沉淀物用65%的乙醇溶液加热溶解，浓缩至1/5体积，静置结晶2次，干燥得到白色固体8. 7g，含三七素68. 4%。
实施例4 将三七叶粉碎，称取^(g，加入40L水回流提取2次，过滤，合并提取液，取15gCTS 中药絮凝剂，加IL水稀释，提取液在快速搅拌作用下加入CTS稀释液，混合均勻后慢速搅拌，静置4h，离心除去沉淀，离心液加入氧化铝陶瓷膜中微滤，截留量为300nm，滤过压力为 250kPa，收集微滤液加入分子截留量300的聚酯类复合纳滤膜中纳滤，滤过压力为650kPa， 收集透过液，回收溶剂至小体积，加入乙醇沉淀，滤出沉淀物用70%的乙醇溶液加热溶解， 浓缩至1/10体积，静置结晶4次，干燥得到白色固体38. 2g，含三七素69. 2%。实施例5:将三七叶粉碎，称取^(g，加入30L水超声提取3次，过滤，合并提取液，取20gCTS 中药絮凝剂，加3L水稀释，提取液在快速搅拌作用下加入CTS稀释液，混合均勻后慢速搅拌，静置5h，过滤除去沉淀，滤液加入氧化锑陶瓷膜中微滤，截留量为400nm，滤过压力为 350kPa，收集微滤液加入分子截留量400的聚酯类复合纳滤膜中纳滤，滤过压力为700kPa， 收集透过液，回收溶剂至小体积，加入乙醇沉淀，滤出沉淀物用55%的乙醇溶液加热溶解， 浓缩至1/8体积，静置结晶2次，干燥得到白色固体42. lg，含三七素73. 8%。实施例6 将三七叶粉碎，称取10Kg，加入50L水回流提取2次，过滤，合并提取液，取45gCTS 中药絮凝剂，加8L水稀释，提取液在快速搅拌作用下加入CTS稀释液，混合均勻后慢速搅拌，静置6h，离心除去沉淀，离心液加入氧化钛陶瓷膜中微滤，截留量为300nm，滤过压力为 400kPa，收集微滤液加入分子截留量300的聚酯类复合纳滤膜中纳滤，滤过压力为650kPa， 收集透过液，回收溶剂至小体积，加入乙醇沉淀，滤出沉淀物用70%的乙醇溶液加热溶解， 浓缩至1/7体积，静置结晶3次，干燥得到白色固体71. 7g，含三七素75. 3%。
权利要求
1.一种应用膜分离技术精制三七总氨酸的方法，其特征在于包含以下步骤1)提取将三七叶粉碎，加5 12倍量水提取1 3次，合并提取液；2)除杂搅拌上述提取液，在快速搅拌下缓慢加入絮凝剂溶液，混合均勻后慢速搅拌， 静置2 8h，离心或过滤将沉淀分离，得澄清液；3)膜分离将上述澄清液加入微滤装置中微滤，微滤液再加入纳滤装置中纳滤，收集透过液；4)重结晶上述透过液回收溶剂至小体积，加入乙醇沉淀，滤出沉淀物用50 70%乙醇溶解结晶2 4次，干燥即得产品。
2.如权利要求1所述的一种应用膜分离技术精制三七总氨酸的方法，其特征在于所述步骤1)中的提取方式可选用回流、冷浸、超声提取中的一种。
3.如权利要求1所述的一种应用膜分离技术精制三七总氨酸的方法，其特征在于所述步骤2)中的絮凝剂为CTS中药絮凝剂，用量是药液的0. 1 0. 8%o ；絮凝剂溶液的制备方法为先将絮凝剂加水溶解，稀释为1 2%絮凝剂溶液。
4.如权利要求1所述的一种应用膜分离技术精制三七总氨酸的方法，其特征在于所述步骤幻中的微滤膜选用无机陶瓷膜，材质为氧化铝、氧化锆、氧化锑或氧化钛，截留粒子范围100 200nm，滤过压力为200 500kPa。
5.如权利要求1所述的一种应用膜分离技术精制三七总氨酸的方法，其特征在于所述步骤幻中的纳滤膜选用有机复合膜，材质为聚酯类、聚乙烯类或聚酰胺类，截留分子量为 200 400，滤过压力为500 800kPa。
6.如权利要求1所述的一种应用膜分离技术精制三七总氨酸的方法，其特征在于所述步骤4)中的结晶条件为50 70%乙醇回流溶解，溶液回收至原体积的1/3 1/10，静置结晶。
全文摘要
本发明涉及一种应用膜分离技术精制三七总氨酸的方法，尤其是涉及一种用微滤膜和纳滤膜精制三七总氨酸的方法；方法步骤包括将三七叶粉碎，加水提取1～3次，合并提取液，在搅拌作用下加入絮凝剂，除去沉淀，澄清液加入至微滤装置中微滤，微滤液再加入纳滤装置中纳滤，透过液回收溶剂至小体积，加入乙醇沉淀，沉淀物再用50～70％乙醇回流溶解结晶2～4次，干燥即得产品，本发明操作简单、氨基酸无损失，工艺易放大。
文档编号C07C233/56GK102180808SQ201110029149
公开日2011年9月14日 申请日期2011年1月24日 优先权日2011年1月24日
发明者刘东锋, 吴艳波, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司