专利名称：美汉草中乙基-α-D-葡萄糖苷的提取分离工艺的制作方法
技术领域：
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及美汉草中乙基-a-D-葡萄糖苷的提取分离工艺。
背景技术：
美汉草为唇形科(Labiatae)龙头草属(Meehania)植物芝麻花Meehania urticifolia(Miq. )Makino的干燥地上部分,别名荨麻叶龙头草,芝麻花(辽宁)、美汉花， 异名水升麻(四川)，为多年生草本植物，分布于通化、浑江、柳河、集安、抚松、靖宇、蚊河、 舒兰、安图、敦化、长白朝鲜族自治区、通化县等地，朝鲜、日本也有分布。美汉草味辛、苦、性微寒，全草入药，可作为民间药，具有清热解表，利水消肿等功效。用于感冒发热，泻痢腹痛， 肝炎，胆囊炎，小便不利，蛇咬伤等症。在民间作美汉草药用，全草可入药，作为寒药，具有发表清热，利湿解毒等功效，其天然资源极为丰富，且蕴含量大。有关美汉草化学成分的研究资料较少。目前，从植物美汉草的花瓣中鉴定出含有花青素。从植物美汉草中分离得到迷迭香酸、紫草酸B、精脒生物碱的糖苷类。
发明内容
I、美汉草中乙基-Ci-D-葡萄糖苷的提取分离工艺，其特征在于该工艺包括以下过程步骤(I):称取美汉草干燥粗粉2. 25kg，加入22. 5kg_23. Okg的50%乙醇浸泡过夜，然后超声提取30min-35min，超声温度为30°C -32°C，超声功率为80W，超声提取三次，合并提取液并减压浓缩，浓缩液置于4°C冰箱中48h-60h，抽滤，得到除去部分色素沉淀的浓缩液；步骤(2):将步骤(I)中的浓缩液分别用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇等溶剂各萃取三次，每个萃取部分浓缩至稠膏状浸膏，回收溶剂，由此得到正丁醇提取物28g ；步骤(3):将步骤⑵中正丁醇提取物28g溶于IOOml无水乙醇中，拌以28gl00 200目硅胶，挥干溶剂，选用280gl00 200目硅胶用氯仿拌匀，湿法装柱，干法上样；步骤(4):采用不同梯度氯仿-甲醇=50 I 氯仿-甲醇=I 3对步骤(3) 中的正丁醇提取物进行洗脱层析，以每50ml洗脱液收集一瓶，用薄层色谱TLC检测，合并相同组分，浓缩至小体积；步骤(5):在分离到洗脱液氯仿-甲醇=15 I处时，出现白色沉淀，此沉淀再经甲醇反复结晶得到单体化合物24mg ；步骤(6):结合光谱分析鉴定其结构为乙基-α-D-葡萄糖苷。根据本发明，本发明中的“ ％ ”是重量百分比。
具体实施例方式本发明所述的美汉草中乙基-a-D-葡萄糖苷的提取分离工艺包括以下实施例，下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例I :I、美汉草中乙基-Ci-D-葡萄糖苷的提取分离工艺，其特征在于该工艺包括以下过程步骤(I):称取美汉草干燥粗粉2. 25kg，加入22. 5kg的50 %乙醇浸泡过夜，然后超声提取30min，超声温度为30°C，超声功率为80W，超声提取三次，合并提取液并减压浓缩，浓缩液置于4°C冰箱中48h，抽滤，得到除去部分色素沉淀的浓缩液；步骤(2):将步骤(I)中的浓缩液分别用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇等溶剂各萃取三次，每个萃取部分浓缩至稠膏状浸膏，回收溶剂，由此得到正丁醇提取物28g ；步骤(3):将步骤⑵中正丁醇提取物28g溶于IOOml无水乙醇中，拌以28gl00 200目硅胶，挥干溶剂，选用280gl00 200目硅胶用氯仿拌匀，湿法装柱，干法上样；步骤(4):采用不同梯度氯仿-甲醇=50 I 氯仿-甲醇=I 3对步骤(3) 中的正丁醇提取物进行洗脱层析，以每50ml洗脱液收集一瓶，用薄层色谱TLC检测，合并相同组分，浓缩至小体积；步骤(5):在分离到洗脱液氯仿-甲醇=15 I处时，出现白色沉淀，此沉淀再经甲醇反复结晶得到单体化合物24mg ；步骤(6):结合光谱分析鉴定其结构为乙基-α-D-葡萄糖苷。实施例2:I、美汉草中乙基-Ci-D-葡萄糖苷的提取分离工艺，其特征在于该工艺包括以下过程步骤(I):称取美汉草干燥粗粉2. 25kg，加入23. Okg的50 %乙醇浸泡过夜，然后超声提取35min，超声温度为32°C，超声功率为80W，超声提取三次，合并提取液并减压浓缩，浓缩液置于4°C冰箱中60h，抽滤，得到除去部分色素沉淀的浓缩液；步骤(2):将步骤(I)中的浓缩液分别用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇等溶剂各萃取三次，每个萃取部分浓缩至稠膏状浸膏，回收溶剂，由此得到正丁醇提取物28g ；步骤⑶将步骤⑵中正丁醇提取物28g溶于IOOml无水乙醇中，拌以28gl00 200目硅胶，挥干溶剂，选用280gl00 200目硅胶用氯仿拌匀，湿法装柱，干法上样；步骤(4):采用不同梯度氯仿-甲醇=50 I 氯仿-甲醇=I 3对步骤(3) 中的正丁醇提取物进行洗脱层析，以每50ml洗脱液收集一瓶，用薄层色谱TLC检测，合并相同组分，浓缩至小体积；步骤(5):在分离到洗脱液氯仿-甲醇=15 I处时，出现白色沉淀，此沉淀再经甲醇反复结晶得到单体化合物24mg ；步骤(6):结合光谱分析鉴定其结构为乙基-α-D-葡萄糖苷。化合物的结构鉴定白色针状结晶，mp :150 152°C，易溶于DMS0，甲醇，乙醇及丙酮，微溶于乙酸乙酯，难溶于氯仿、乙醚、苯等亲脂性有机溶剂。Molish反应阳性。薄层层板将样品溶于甲醇，硅胶板为固定相，以氯仿甲醇甲酸=7 I I为流动相，展开后，在可见光与紫外光下观察无荧光现象，用碘蒸气熏，显示为单一黄色斑点，以10%浓硫酸乙醇溶液显色后， 展开的薄层板上显示为单一黄色清晰斑点。酸水解后，检出有葡萄糖(Rf = O. 16)。ESI-MS显示分子量为 208，分子式为 C8H16O60 1H-NMR(600MHz, CDCl3)谱中，I. 15 (3H, t, J = 7. 5Hz) 是乙基上的C-CH3化学信号。3. 40 (2H, d，J = 7. 5Hz)是乙氧基化学位移信号。4. 45 (1H， d,J = 5. OHz)是葡萄糖的端基氢质子的信号且表明为α构型[50]。13C-NMR(150MHz,CDCl3) 谱中，15.02(s)为乙基端基碳原子的化学位移信号，98. 68(s)是葡萄糖的端基碳原子的化学位移信号，62. 28 (s)是葡萄糖的6位碳原子信号。 1H-NMlUeOOMHz, CDCl3) δ 4. 45 (1Η, d, J = 5. OHz, H-l), 4. 37 (1H, dd, J = 5. OHz, H-2)，4. 29 (1H, dd, J = 6. OHz, H_3)，3. 53 (1H, H_4)，3. 48 (1H, H_5)，3. 69 (1H, dd, J = 6. OHz, H-6)，3. 57 (1H, dd, J = 6. 0，3. 5Hz, H_7)，3. 40 (2H, d, J = 7. 5Hz, H_8)，I. 15 (3H, t, J = 7. 5Hz, H-9) o 13C-NMR (150MHz, CDCl3) δ :98. 68 (C_l)，71. 12 (C_2)，69. 60 (C_3)， 68. 83 (C-4)，68. 35 (C_5)，62. 28 (C_6)，55. 13 (C_7)，15. 02 (C_8)。与文献进行对照，鉴定化合物为乙基-a-D-葡萄糖苷。
权利要求
1.美汉草中乙基-a-D-葡萄糖苷的提取分离工艺，其特征在于该工艺包括以下过程 步骤(I):称取美汉草干燥粗粉2. 25kg，加入22. 5kg-23. Okg的50%乙醇浸泡过夜，然后超声提取30min-35min，超声温度为30°C -32°C，超声功率为80W，超声提取三次，合并提取液并减压浓缩，浓缩液置于4°C冰箱中48h-60h，抽滤，得到除去部分色素沉淀的浓缩液； 步骤(2):将步骤(I)中的浓缩液分别用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇等溶剂各萃取三次，每个萃取部分浓缩至稠膏状浸膏，回收溶剂，由此得到正丁醇提取物28g ；步骤⑶将步骤⑵中正丁醇提取物28g溶于IOOml无水乙醇中，拌以28gl00 200 目硅胶，挥干溶剂，选用280gl00 200目硅胶用氯仿拌匀，湿法装柱，干法上样；步骤⑷采用不同梯度氯仿-甲醇=50 I 氯仿-甲醇=I 3对步骤(3)中的正丁醇提取物进行洗脱层析，以每50ml洗脱液收集一瓶，用薄层色谱TLC检测，合并相同组分，浓缩至小体积；步骤(5):在分离到洗脱液氯仿-甲醇=15 I处时，出现白色沉淀，此沉淀再经甲醇反复结晶得到单体化合物24mg ；步骤(6):结合光谱分析鉴定其结构为乙基-α-D-葡萄糖苷。
全文摘要
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及美汉草中乙基-α-D-葡萄糖苷的提取分离工艺。称取美汉草干燥粗粉加入50％乙醇浸泡过夜，然后超声提取，合并提取液并减压浓缩，将浓缩液分别用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇等溶剂各萃取，由此得到正丁醇提取物；选用硅胶柱层析，采用不同梯度氯仿-甲醇对正丁醇提取物进行洗脱，分离得到白色沉淀，此沉淀再经甲醇反复结晶得到单体化合物；结合光谱分析鉴定其结构为乙基-α-D-葡萄糖苷。本发明的目的是为满足生产和科研上的需求量，提高收率，降低成本。
文档编号C07H1/08GK102584913SQ20121000990
公开日2012年7月18日 申请日期2012年1月1日 优先权日2012年1月1日
发明者侯欣池, 张崇禧, 张成城, 李小叶, 郑友兰 申请人:山东大学威海分校