专利名称：一种关附辛素的制备方法
技术领域：
本发明属于中药提取分离技术领域，涉及一种关附辛素的制备方法，特别涉及一种超临界CO2萃取和制备液相制备关附辛素的方法。
背景技术：
关白附为毛茛科乌头属植物黄花乌头iAconi-tum coreanum ( Levi) Rapaics)的块根，味辛，甘，热，有毒，归肝，胃经。关白附为常用中药，具有祛风、燥湿、化痰、止痛等功效，主治中风痰壅，口眼歪斜，癫痫，偏正头痛，风痰眩晕，破伤风，小儿惊风，风湿痹痛，疮疡疥癣，皮肤湿痒等症。现代药理研究表明，关白附具有抗心律失常，抗炎镇痛，对血液系统的一系列作用。其主要活性成分为二萜生物碱，迄今已分离得到其中28个二萜生物碱，其中包括关附甲素、关附壬素、关附辛素等。关附辛素为水溶性型生物碱，又名atisine chloride,能抑制骨骼肌系统和呼吸系统，具高毒性，对小鼠的LD50为9. Omg-kg,且其在关白附药材中含量较高，是药材质量控制的指标性成分之一。本发明首次使用超临界流体萃取和制备高效液相结合的方法制备关附辛素，为关白附植物的研究提供有力的物质基础。
发明内容
本发明的目的在于提供一种超临界CO2和制备液相色谱结合提取翠雀属中关附辛素的方法。本发明是通过以下技术方案加以实现的，一种关附辛素的制备方法，其特征在于它是经CO2超临界流体萃取得二萜生物碱类化合物、氧化铝柱层析分离、再利用制备液相纯化得关附辛素产品。所述的一种关附辛素的制备方法，其特征在于包括以下步骤
(1)CO2超临界流体萃取
取关白附药材粉碎，加入质量浓度50-70%的乙醇作为夹带剂，装入萃取釜中温度保持在 38-60°C，压力为 20-45MPa，CO2 流速为 12_45kg/h，进行萃取 60_200min ；
(2)氧化铝柱层析分离
将步骤(2)中所得萃取物经氧化铝柱层析，依次用环己烷、环己烷-乙酸乙酯、甲醇梯度洗脱，经TLC监测，合并关附辛素流分，回收至干，得关附辛素粗品；
(3)制备液相纯化
将粗品用甲醇溶解，注入制备型高效液相色谱纯化，收集关附辛素成分峰，真空干燥得关附辛素。所述的制备液相的流动相为有机相-O. 2%醋酸盐缓冲体系，所述有机相为甲醇或乙腈，占流动相比例为25-50%，所述的醋酸盐缓冲体系为醋酸铵-醋酸缓冲体系。
本发明的优点在于本发明采用的工艺，萃取温度低，可避免成分热分解；具有制备量大、产品纯度高、简单易行等优点，可产业规模化。
具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明进行说明。实施例I :
取关白附药材1kg，粉碎，加入500ml质量浓度70%的乙醇作为夹带剂，装入萃取釜中温度保持在60°C，压力为45MPa，通入CO2流速为12kg/h，进行萃取200min，调节解析斧温度和压力，收集从解析釜出料口放出的萃取物。将萃取物与氧化铝搅拌均匀，依次用环己烷、环己烷-乙酸乙酯(1:1.5)、甲醇梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集合并关附辛素流分，回收试齐U，得到关附辛素粗品。取关附辛素粗品用甲醇溶解，注入制备型高效液相仪，以50%乙腈/甲醇-O. 2%醋酸铵缓冲液(醋酸调节pH为5. 5)为流动相，流速控制为20ml/min，得到纯度98. 9%的关附辛素7. 3g。实施例2:
取关白附药材1kg，粉碎，加入500ml质量浓度50%的乙醇作为夹带剂，装入萃取釜中温度保持在38°C，压力为20MPa，通入CO2流速为45kg/h，进行萃取60min，调节解析斧温度和压力，收集从解析釜出料口放出的萃取物。将萃取物与氧化铝搅拌均匀，依次用环己烷、环己烷-乙酸乙酯(1:1.5)、甲醇梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集合并关附辛素流分，回收试齐U，得到关附辛素粗品。取关附辛素粗品用甲醇溶解，注入制备型高效液相仪，以35%乙腈/甲醇-O. 2%醋酸铵缓冲液(醋酸调节pH为5.5)为流动相，流速控制为16ml/min，得到纯度98. 3%的关附辛素7. 6g。实施例3
取关白附药材10kg，粉碎，加入500ml质量浓度60%的乙醇作为夹带剂，装入萃取釜中温度保持在40°C，压力为35MPa，通入CO2流速为45kg/h，进行萃取lOOmin，调节解析斧温度和压力，收集从解析釜出料口放出的萃取物。将萃取物与氧化铝搅拌均匀，依次用环己烷、环己烷-乙酸乙酯(I: I. 5)、甲醇梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集合并关附辛素流分，回收试齐U，得到关附辛素粗品。取关附辛素粗品用甲醇溶解，注入制备型高效液相仪，以40%乙腈/甲醇-O. 2%醋酸铵缓冲液(醋酸调节pH为5. 5)为流动相，流速控制为20ml/min，得到纯度97. 3%的关附辛素68. 9g。
权利要求
1.一种关附辛素的制备方法，其特征在于它是经CO2超临界流体萃取得二萜生物碱类化合物、氧化铝柱层析分离、再利用制备型液相纯化得关附辛素产品。
2.根据权利要求I所述的一种关附辛素的制备方法，其特征在于包括以下步骤 (1)CO2超临界流体萃取 取关白附药材粉碎，加入质量浓度50-70%的乙醇作为夹带剂，装入萃取釜中温度保持在 38-60°C，压力为 20-45MPa，CO2 流速为 12_45kg/h，进行萃取 60_200min ； (2)氧化铝柱层析分离 将步骤(2)中所得萃取物经氧化铝柱层析，依次用环己烷、环己烷-乙酸乙酯、甲醇梯度洗脱，经TLC监测，合并关附辛素流分，回收至干，得关附辛素粗品； (3)制备液相纯化 将粗品用甲醇溶解，注入制备型高效液相色谱纯化，收集关附辛素成分峰，真空干燥得关附辛素。
3.根据权利要求I所述的一种关附辛素的制备方法，其特征在于所述的制备液相的流动相为有机相-0. 2%醋酸盐缓冲体系，所述有机相为甲醇或乙腈，占流动相比例为25-50%，所述的醋酸盐缓冲体系为醋酸铵-醋酸缓冲体系。
全文摘要
本发明公开了一种关附辛素的制备方法，它是经CO2超临界流体萃取得二萜生物碱类化合物、氧化铝柱层析分离、再利用制备液相纯化得关附辛素产品。本发明不仅可以连续提取出二萜生物碱类化合物，而且能够制备出高纯度的关附辛素产品，它既适合小型实验，也可以用于产业化生产。
文档编号C07D221/22GK102627606SQ201210124898
公开日2012年8月8日 申请日期2012年4月26日 优先权日2012年4月26日
发明者刘东锋, 吴艳波 申请人:南京泽朗医药科技有限公司