高半乳糖基化抗体的制作方法

高半乳糖基化抗体的制作方法【专利摘要】在一个方面中，公开内容涉及高半乳糖基化的抗体、这些抗体的生产方法和这些抗体的使用方法。【专利说明】高半乳糖基化抗体[0001]相关申请[0002]本申请依据35U.S.C.§119要求享有2011年8月10日提交的美国临时申请61/521，996和2011年12月6日提交的61/567，364的权益，将每篇的完整内容以引用方式并入本文中。发明领域[0003]本发明涉及高半乳糖基化抗体，其生产方法以及其使用方法。[0004]发明背景[0005]治疗性抗体正用于多种疾病(包括癌症)的治疗。然而，对具有改善特性的治疗性抗体存在需求。[0006]发明概述[0007]在一个方面中，公开内容提供了包含高半乳糖基化的抗体群的组合物。在一些实施方案中，抗体通过转基因产生。在一些实施方案中，高半乳糖基化抗体也是高岩藻糖基化的。在一些实施方案中，高半乳糖基化抗体显示出高补体依赖性细胞毒性(CDC)活性和高抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性两者。在一个方面中，本发明提供了用于生产高半乳糖基化的抗体群的方法。[0008]在一个方面中，公开内容提供了包含抗体群的组合物，其中所述抗体群是高半乳糖基化的。在一些实施方案中，群中的抗体在乳腺上皮细胞中通过转基因产生。在一些实施方案中，群中的抗体针对相同的抗原表位。在一些实施方案中，群中的抗体由相同的核酸序列编码。在一些实施方案中，群中的抗体的半乳糖基化水平为至少70%。在一些实施方案中，抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖的抗体。[0009]在一个方面中，公开内容提供了包含抗体群的组合物，其中群中的抗体的半乳糖基化水平为至少70%，其中抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖的抗体，并且其中群中的抗体由相同的核酸序列编码。[0010]在本文中提供的任一种组合物的一些实施方案中，群中的抗体的半乳糖基化水平为至少80%。在本文中提供的任一种组合物的一些实施方案中，群中的抗体的半乳糖基化水平为至少90%。在本文中提供的任一种组合物的一些实施方案中，群中的抗体的岩藻糖基化水平为至少80%。在本文中提供的任一种组合物的一些实施方案中，群中的抗体的岩藻糖基化水平为至少90%。[0011]在一个方面中，公开内容提供了包含抗体群的组合物，其中群中的抗体的半乳糖基化水平与群中的抗体的岩藻糖基化水平的比例介于0.8和1.2之间，其中抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖的抗体，并且其中群中的抗体由相同的核酸序列编码。[0012]在本文中提供的任一种组合物的一些实施方案中，抗体群包含含有双半乳糖基化N-聚糖的抗体。在本文中提供的任一种组合物的一些实施方案中，抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖和双半乳糖基化N-聚糖两者的抗体。在本文中提供的任一种组合物的一些实施方案中，群中至少35%的抗体包含双半乳糖基化N-聚糖，且群中至少5%的抗体包含单半乳糖基化N-聚糖。[0013]在本文中提供的任一种组合物的一些实施方案中，在乳腺上皮细胞中通过转基因生成群中的抗体。在本文中提供的任一种组合物的一些实施方案中，经工程化改造以表达抗体的非人哺乳动物的乳腺上皮细胞中通过转基因生成抗体群。在一些实施方案中，非人哺乳动物是山羊、绵羊、野牛、骆驼、牛、猪、兔、水牛、马、大鼠、小鼠或美洲驼。在一些实施方案中，非人哺乳动物是山羊。[0014]在本文中提供的任一种组合物的一些实施方案中，组合物进一步包含乳。[0015]在本文中提供的任一种组合物的一些实施方案中，相比于不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群，所述抗体群的抗体具有升高的补体依赖性细胞毒性(CDC)活性水平。在一些实施方案中，不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的抗体是在细胞培养物中产生的。在一些实施方案中，不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的抗体是低半乳糖抗体。在一些实施方案中，低半乳糖抗体是Rituxan。[0016]在本文中提供的任一种组合物的一些实施方案中，相比于不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群，所述抗体群的抗体具有升高的抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性水平。在一些实施方案中，不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的抗体是在细胞培养物中产生的。在一些实施方案中，不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的抗体是低半乳糖抗体。在一些实施方案中，低半乳糖抗体是Rituxan。[0017]在本文中提供的任一种组合物的一些实施方案中，群中的抗体是嵌合的、人源化的或完全人的抗体。在一些实施方案中，群中的抗体是全长抗体。在一些实施方案中，群中的抗体包含重链和轻链。在一些实施方案中，群中的抗体是抗⑶20抗体。在一些实施方案中，群中的抗体的轻链和重链由SEQIDNO:1和SEQIDNO:2中所列的核酸序列编码。[0018]在本文中提供的任一种组合物的一些实施方案中，组合物进一步包括药学可接受载体。[0019]在一个方面中，公开内容提供了一种方法，包括将本文中提供的任一种组合物给药于有此需要的受:试者。在一些实施方案中，受:试者患有癌症。在一些实施方案中，癌症是B细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，受试者患有免疫疾病。[0020]在一个方面中，公开内容提供了用于生产高半乳糖基化抗体群的方法，包括在乳腺上皮细胞中产生抗体群，使得生产高半乳糖基化抗体群。在一些实施方案中，所述方法进一步包括收集生产的抗体群。[0021]在一个方面中，本发明提供了用于生产高半乳糖基化抗体群的方法，包括收集经工程化改造以表达抗体的乳腺上皮细胞中产生的高半乳糖基化抗体群。[0022]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，所述方法进一步包括测定抗体群的⑶C活性。[0023]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，所述方法进一步包括对所述抗体群与不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群比较CDC活性。在一些实施方案中，不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的抗体是在细胞培养物中产生的。[0024]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，所述方法进一步包括测定抗体群的ADCC活性。[0025]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，所述方法进一步包括对所述抗体群与不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群比较ADCC活性。在一些实施方案中，不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的抗体是在细胞培养物中产生的。[0026]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，所述方法进一步包括测定抗体群的半乳糖基化水平。[0027]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，乳腺上皮细胞是在培养物中，并且用包括编码抗体的序列的核酸转染。[0028]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，所述乳腺上皮细胞在非人哺乳动物中，所述非人哺乳动物经工程化改造以在其乳腺中表达包含编码所述抗体的序列的核酸。[0029]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，乳腺上皮细胞是山羊、绵羊、野牛、骆驼、牛、猪、兔、水牛、马、大鼠、小鼠或美洲驼乳腺上皮细胞。在一些实施方案中，乳腺上皮细胞是山羊乳腺上皮细胞。[0030]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，群中的抗体的半乳糖基化水平为至少70%。在一些实施方案中，群中的抗体的半乳糖基化水平为至少80%。在一些实施方案中，群中的抗体的半乳糖基化水平为至少90%。[0031]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，群中的抗体的岩藻糖基化水平为至少80%。在一些实施方案中，群中的抗体的岩藻糖基化水平为至少90%。[0032]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，群中的抗体的半乳糖基化水平与群中的抗体的岩藻糖基化水平的比例介于0.8和1.2之间。[0033]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖的抗体。[0034]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，抗体群包含含有双半乳糖基化N-聚糖的抗体。[0035]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖和双半乳糖基化N-聚糖两者的抗体。[0036]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，群中至少35%的抗体包含双半乳糖基化N-聚糖，且群中至少5%的抗体包含单半乳糖基化N-聚糖。[0037]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，所述方法进一步包括纯化抗体群，使得群中抗体的半乳糖基化水平为至少70%。在一些实施方案中，所述方法进一步包括纯化抗体群，使得群中抗体的半乳糖基化水平为至少80%。在一些实施方案中，所述方法进一步包括纯化抗体群，使得群中抗体的半乳糖基化水平为至少90%。[0038]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，所述方法进一步包括纯化抗体群，使得群中抗体的岩藻糖基化水平为至少80%。在一些实施方案中，所述方法进一步包括纯化抗体群，使得群中抗体的岩藻糖基化水平为至少90%。[0039]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，所述方法进一步包括纯化抗体群，使得群中的抗体的半乳糖基化水平与群中的抗体的岩藻糖基化水平的比例介于0.8和1.2之间。[0040]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖的抗体。[0041]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，抗体群包含含有双半乳糖基化N-聚糖的抗体。[0042]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖和双半乳糖基化N-聚糖两者的抗体。[0043]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，群中至少35%的抗体包含双半乳糖基化N-聚糖，且群中至少5%的抗体包含单半乳糖基化N-聚糖。[0044]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，群中的抗体针对相同的抗原表位。[0045]在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，群中的抗体是抗CD20抗体。在一些实施方案中，群中的抗体的轻链和重链由SEQIDNO:1和SEQIDN0:2中所列的核酸序列编码。[0046]在一个方面中，公开内容提供了表达本文中提供的任一种抗体群的乳腺上皮细胞。[0047]在一个方面中，公开内容提供了包含本文中提供的任一种乳腺上皮细胞的转基因非人哺乳动物。[0048]本发明的每一个限定可以包括本发明的多个实施方案。因此，预期涉及任一个要素或要素组合的本发明的每一个限定可以包括在本发明的每个方面中。本发明在其应用上不限于以下描述中所列的或附图中说明的构造的详细内容和组件的重排。本发明能够存在其他实施方案并且可以以各种方式来实施或进行。此外，本文中所用的措辞和术语是用于描述的目的，并且不应当认为是限制。[0049]附图简述[0050]图1显示了Tg20的轻链(SEQIDNO:1;图1A)和重链(SEQIDNO:2;图1B)的序列。[0051]图2显示了用于产生转基因抗⑶20抗体(TG20)的分子策略。[0052]图3显示了Tg20、低岩藻糖参照抗体和MW标准品(Std)在非还原或还原条件下的SDS-PAGE;经考马斯蓝染色(左侧小图)和经银染色(右侧小图)；以kDa计的表观分子量。[0053]图4显示了经2-AB标记的从Tg20用PNG酶F释放的N-聚糖的NP-HPLC图谱(profile)ο[0054]图5显示了Tg20的尺寸排阻图谱。[0055]图6显示了全血测定法的实验条件。[0056]图7显示了用于产生TG20表达山羊的方法。[0057]图8显示了Tg20和Rituxan的功能性的比较。[0058]图9显示了用于Tg20和Rituxan(RTX)的ADCC/CDC16测定法的结果。[0059]图10显示了Tg20和RTX在猕猴中的药动学概况。[0060]图11显示了Tg20和RTX在猕猴中的药理学活性。[0061]图12A和12B显示了血液中残余淋巴B细胞(⑶45+/⑶3-/⑶4+)的百分比的单独动力学。[0062]图13显示了血液中残余淋巴B细胞(⑶45+/⑶3-/⑶4+)的均值百分比的动力学，针对所有研究动物。[0063]图14显示了血液中残余淋巴B细胞(⑶45+/⑶3-/⑶4+)的均值百分比的动力学，只针对恢复动物。[0064]图15显示了淋巴结中淋巴B细胞(⑶45+/⑶3-/⑶4+)的相对百分比的单独动力学。[0065]图16显示了淋巴结中淋巴B细胞(⑶45+/⑶3-/⑶4+)的均值相对百分比的动力学，针对所有研究动物。[0066]图17显示了与对照组均值相比较时，淋巴结中淋巴B细胞(⑶45+/⑶3-/⑶4+)的残余百分比的单独动力学。[0067]图18显示了与对照组均值相比较时，淋巴结中淋巴B细胞(⑶45+/⑶3-/⑶4+)的平均残余百分比的动力学，针对所有研究动物。[0068]发明详述[0069]在一个方面中，公开内容提供了高半乳糖基化抗体群的组合物。在一些实施方案中，通过转基因生产抗体。在一些实施方案中，高半乳糖基化抗体也是高岩藻糖基化的。在一些实施方案中，高半乳糖基化抗体显示出高补体依赖性细胞毒性(CDC)活性和高抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性两者。在一个方面中，公开内容提供了用于生产高半乳糖基化抗体群的方法。[0070]糖基化[0071]在一个方面中，公开内容提供了高半乳糖基化抗体群的组合物。在一些实施方案中，在乳腺上皮细胞中通过转基因生产高半乳糖基化抗体群。在一些实施方案中，抗体群中的抗体针对相同抗原表位。在一些实施方案中，抗体群中的抗体由相同的核酸序列编码。[0072]在一个方面中，公开内容提供了包含高半乳糖基化抗体群的组合物，其中抗体群包含单半乳糖基化N-聚糖。在一些实施方案中，通过转基因生产抗体群。在一些实施方案中，抗体群中的抗体由相同的核酸序列编码。[0073]抗体可以在Fe-Y糖基化位点(Fe区的Asn297)处被糖基化。在FeY糖基化位点处已经观察到多种糖基化模式，并且在该位点发现的寡糖包括半乳糖、N-乙酰葡糖胺(GlcNac)、甘露糖、唾液酸或N-乙酰神经氨酸(NeuAc)和岩藻糖。在这些位点发现的寡糖(N-聚糖)全部具有共同的核心结构，该结构由附接天冬酰胺的N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)组成，所述天冬酰胺与第二个GIcNAc和三个甘露糖附接。该核心可以携带多个不同的聚糖基序。血浆蛋白质的最常见类型的N-聚糖是复合型。在该N-聚糖型的生物合成途径中，几种GlcNAc转移酶将GlcNAc残基连接至聚糖核心的甘露糖,所述聚糖核心可以通过半乳糖、唾液酸和岩藻糖残基进一步延伸。N-聚糖的另一个基团是高甘露糖糖蛋白，其特征在于附接于第二个GIcNAc的多个(五个或更多个)甘露糖。还已经发现了混杂结构，其中双触角臂之一是取代的甘露糖，而另一条臂是复合的。通常在双-触角结构的“臂”中没有发现岩藻糖残基，而是附接于N-连接的GlcNAc。[0074]N-聚糖的生物合成不受模板调控，蛋白质就是如此，而是主要依赖于细胞中特定糖基转移酶的表达和活性。因此，糖蛋白，如抗体Fe结构域，通常作为在相同的蛋白质主链上携带不同聚糖的异质糖形群存在。[0075]可以通过本领域已知的许多方法来测定糖基化模式。例如，美国专利申请US2006/0057638和US2006/0127950中已经描述了分析蛋白质上的碳水化合物的方法。分析蛋白质上的碳水化合物的方法通过弓I用方式并入本文中。[0076]高半乳糖基化的抗体群是如下的抗体群，其中群中的抗体的半乳糖基化水平为至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，至少90%，直至100%半乳糖基化。在高半乳糖基化的抗体群的一些实施方案中，群中的抗体的半乳糖基化水平为至少70%。[0077]通过以下公式来测定本文中所用的半乳糖基化水平:[0078]￡(GeI的数S)*(7r相对面积jM.100Y(.4的数_)相对《I轵I[0079]其中:[0080]-η表示色谱图的分析的N-聚糖峰的数目，所述色谱例如正相高效液相色谱(NPHPLC)谱。[0081]-“Gal的数目”表示对应于峰的聚糖触角上的半乳糖基序的数目，和[0082]-“A的数目”对应于与峰对应的聚糖形式N-乙酰葡糖胺触角的数量，以及[0083]-“％相对面积”对应于相应峰下的面积％。[0084]因此，可以通过从抗体释放N-聚糖，在色谱图上解析N-聚糖，鉴定对应于特定峰的N-聚糖，测定峰强度，并将数据应用于以上提供的公式中，从而测定群中的抗体的半乳糖基化水平(还可以参见本文中提供的实验部分)。[0085]半乳糖基化的抗体包括具有至少一个半乳糖单糖的任何抗体。这样的抗体包括在“触角”的两条臂上具有复合聚糖基序的抗体和仅在一条臂上具有复合聚糖基序的抗体。包括至少一个半乳糖单糖的抗体包括具有如Gl(—个半乳糖)、GlF(—个半乳糖，一个岩藻糖)、G2(两个半乳糖)和G2F(两个半乳糖，一个岩藻糖)等N-聚糖的抗体。此外，包括至少一个半乳糖单糖的N-聚糖可以是唾液酸化的或不是唾液酸化的。[0086]在高半乳糖基化的抗体群的一些实施方案中，群包含含有单半乳糖基化N-聚糖的抗体，所述N-聚糖可以是或可以不是唾液酸化的，并且完全或部分对应于A2G1F形式。在高半乳糖基化抗体群的一些实施方案中，至少1%，至少5%，至少10%，至少15%，至少20%，至少25%，至少30%，至少40%，至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，至少90%，直至100%的抗体N-聚糖包含单半乳糖基化N-聚糖。在高半乳糖基化抗体群的一些实施方案中，至少5%的抗体包含单半乳糖基化N-聚糖。[0087]在高半乳糖基化抗体群的一些实施方案中，所述群包含含有单半乳糖基化N-聚糖的抗体，所述N-聚糖可以是或可以不是唾液酸化的，并且完全或部分对应于A2G1F形式，且包含含有双半乳糖基化N-聚糖的抗体，所述N-聚糖可以是或不是唾液酸化的，并且完全或部分对应于A2G2F形式。在高半乳糖基化抗体群的一些实施方案中，至少1%，至少5%，至少10%，至少15%，至少20%，至少25%，至少30%，至少40%，至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，至少90%，直至99%的抗体N-聚糖包含单半乳糖基化N-聚糖，并且至少1%，至少5%，至少10%，至少15%，至少20%，至少25%，至少30%，至少40%，至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，至少90%，直至99%的抗体N-聚糖包含双半乳糖基化N-聚糖。在高半乳糖基化的抗体N-聚糖群的一些实施方案中，至少5%的抗体N-聚糖包括单半乳糖基化N-聚糖，而至少35%抗体包括双半乳糖基化N-聚糖。[0088]在高半乳糖基化抗体群的一些实施方案中，所述群包含高岩藻糖基化的抗体。高岩藻糖基化的抗体群是如下的抗体群，其中群中的抗体N-聚糖的岩藻糖基化水平为至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，至少90%，直至100%的岩藻糖基化。在高半乳糖基化的抗体群的一些实施方案中，抗体N-聚糖的岩藻糖基化水平为至少80%。[0089]通过以下公式来测定本文中所用的岩藻糖基化水平:[0090]￡m藻_-1iaj.(%相对而积j[0091]其中:[0092]-η表示色谱图的分析N-聚糖峰的数目，如正相高效液相色谱(NPHPLC)0[0093]-“岩藻糖数目”表示对应于峰的聚糖上的岩藻糖基序的数目，和[0094]-“％相对面积”对应于含有岩藻糖基序的相应峰下的面积％。[0095]岩藻糖基化抗体包括在其N-聚糖上具有至少一个岩藻糖单糖的任何抗体。[0096]在一些实施方案中，本文中公开的抗体群涉及如下的群，其中群中抗体N-聚糖的半乳糖基化水平为至少50%，且群中抗体的岩藻糖基化水平为至少50%。在一些实施方案中，本文中公开的抗体群涉及如下的群，其中群中抗体N-聚糖的半乳糖基化水平为至少50%，且群中抗体的岩藻糖基化水平为至少60%，至少70%，至少80%，至少90%，直至100%。在一些实施方案中，本文中公开的抗体群涉及如下的群，其中群中抗体N-聚糖的半乳糖基化水平为至少60%，且群中抗体N-聚糖的岩藻糖基化水平为至少60%，至少70%，至少80%，至少90%，直至100%。在一些实施方案中，本文中公开的抗体群涉及如下的群，其中群中抗体N-聚糖的半乳糖基化水平为至少70%，且群中抗体N-聚糖的岩藻糖基化水平为至少60%，至少70%，至少80%，至少90%，直至100%。在一些实施方案中，本文中公开的抗体群涉及如下的群，其中群中抗体N-聚糖的半乳糖基化水平为至少80%，且群中抗体N-聚糖的岩藻糖基化水平为至少60%，至少70%，至少80%，至少90%，直至100%。在一些实施方案中，本文中公开的抗体群涉及如下的群，其中群中抗体N-聚糖的半乳糖基化水平为至少90%，且群中抗体N-聚糖的岩藻糖基化水平为至少60%，至少70%，至少80%，至少90%，直至100%。在一些实施方案中，本文中公开的抗体群涉及如下的群，其中群中抗体N-聚糖的半乳糖基化水平为高达100%，且群中抗体N-聚糖的岩藻糖基化水平为至少60%，至少70%，至少80%，至少90%，直至100%。[0097]在一个方面中，公开内容涉及包含抗体群的组合物，在所述抗体群中，Fc-Y糖基化位点处半乳糖基化的抗体N-聚糖的百分比与群中Fe-Y-糖基化位点处岩藻糖基化的抗体N-聚糖的百分比具有特定比例。在一些实施方案中，公开内容涉及包含抗体群的组合物，其中群中抗体N-聚糖的半乳糖基化水平与群中抗体N-聚糖的岩藻糖基化水平具有特定的比例。在一些实施方案中，所述抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖的抗体N-聚糖，所述单半乳糖基化N-聚糖可以是或可以不是唾液酸化的，并且完全或部分对应于A2G1F形式。在一些实施方案中，所述抗体群中的抗体针对相同抗原表位。在一些实施方案中，所述抗体群中的抗体由相同的核酸序列编码。在一些实施方案中，公开内容涉及包含抗体群的组合物，其中群中的抗体N-聚糖的半乳糖基化水平与群中抗体N-聚糖的岩藻糖基化水平的比例介于0.5和2之间，0.6和1.8之间，0.7和1.5之间，0.8和1.2之间，或0.9和1.1之间。在一些实施方案中，公开内容涉及包含抗体群的组合物，其中群中抗体N-聚糖的半乳糖基化水平与群中抗体N-聚糖的岩藻糖基化水平的比例介于0.8和1.2之间，例如为I。[0098]高半乳糖基化抗体的产生[0099]在一个方面中，公开内容提供了包含高半乳糖基化的抗体群的组合物。在一些实施方案中，高半乳糖基化的抗体群是通过转基因产生的。在一些实施方案中，所述抗体群在细胞培养物中产生。在一些实施方案中，对所述细胞培养物进行过修饰，以提高抗体半乳糖基化的量，例如，通过将半乳糖基转移酶加入细胞培养物中，或通过将导致半乳糖基转移酶产量升高的遗传物质加入细胞中实现。在一些实施方案中，在细胞培养物中生产所述抗体群，并且随后通过体外生化反应进行修饰，以附接(额外)半乳糖。[0100]在一些实施方案中，通过转基因生产高半乳糖基化的抗体群。在一些实施方案中，在乳腺上皮细胞中生产抗体群。在一些实施方案中，经工程化改造以表达抗体的非人哺乳动物的乳腺上皮细胞中产生抗体群。在一些实施方案中，非人哺乳动物是山羊、绵羊、野牛、骆驼、牛、猪、兔、水牛、马、大鼠、小鼠或美洲驼。在一些实施方案中，非人哺乳动物是山羊。在一些实施方案中，包含高半乳糖基化抗体群的组合物进一步包括乳。[0101]根据本文中公开的方法转基因产生的抗体群是高半乳糖基化且高岩藻糖基化的。本领域提供高甘露糖抗体/低岩藻糖抗体已经通过转基因产生(参见例如，W02007/048077)。[0102]CDC活性[0103]在一个方面中，包含高半乳糖基化的抗体群的组合物具有高补体依赖性细胞毒性(CDC)活性。在一个方面中，包含高半乳糖基化的抗体群的组合物具有高抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性。在一些实施方案中，包含高半乳糖基化的抗体群的组合物具有高补体依赖性细胞毒性(CDC)活性，并且具有高抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性。[0104]在一些实施方案中，高半乳糖基化的抗体群在与低半乳糖的抗体群相比时具有升高的补体依赖性细胞毒性(CDC)活性水平。在一些实施方案中，高半乳糖基化的抗体群和低半乳糖的抗体群针对相同的抗原表位。在一些实施方案中，高半乳糖基化的抗体群和低半乳糖的抗体群由相同核酸编码。[0105]如本文中所用的低半乳糖的抗体群指的是如下的抗体群，其中群中的抗体半乳糖基化水平低于50%，低于40%，低于30%，低于20%，低于10%，低至0%。[0106]在一些实施方案中，高半乳糖基化的抗体群的CDC活性在与低半乳糖的抗体群相比时，高至少1.1倍，高至少1.2倍，高至少1.3倍，高至少1.4倍，高至少1.5倍，高至少1.6倍，高至少1.7倍，高至少1.8倍，高至少1.9倍，高至少2倍，高至少3倍，高至少5倍，高至少10倍，直至高至少100倍或更高。在一些实施方案中，高半乳糖基化抗体群的⑶C活性在与低半乳糖的抗体群相比时高至少1.5倍。在一些实施方案中，高半乳糖基化抗体群的CDC活性在与低半乳糖抗体群相比时高至少3倍。[0107]在一些实施方案中，高半乳糖基化的抗体群是高岩藻糖基化的。在一些实施方案中，高半乳糖基化且高岩藻糖基化的抗体群在与低半乳糖且低岩藻糖的抗体群相比时具有升高的补体依赖性细胞毒性(CDC)活性水平。在一些实施方案中，高半乳糖基化且高岩藻糖基化的抗体群以及低半乳糖且低岩藻糖的抗体群针对相同的抗原表位。在一些实施方案中，高半乳糖基化且高岩藻糖基化的抗体群以及低半乳糖且低岩藻糖的抗体群由相同核酸编码。[0108]如本文中所用的低岩藻糖的抗体群指的是如下的抗体群，其中群中抗体的岩藻糖基化水平低于50%，低于40%，低于30%，低于20%，低于10%，低至0%。[0109]在一些实施方案中，高半乳糖基化且高岩藻糖基化的抗体群的CDC活性在与低半乳糖且低岩藻糖相比时高至少1.1倍，高至少1.2倍，高至少1.3倍，高至少1.4倍，高至少1.5倍，高至少1.6倍，高至少1.7倍，高至少1.8倍，高至少1.9倍，高至少2倍，高至少3倍，高至少5倍，高至少10倍，直至高至少100倍或更高。在一些实施方案中，高半乳糖基化且高岩藻糖基化的抗体群的CDC活性在与低半乳糖且低岩藻糖的抗体群相比时高至少1.5倍。在一些实施方案中，高半乳糖基化且高岩藻糖基化的抗体群的CDC活性在与低半乳糖和低岩藻糖的抗体群相比时高至少3倍。[0110]在一些实施方案中，高半乳糖基化并且在乳腺上皮细胞中产生的抗体群相比于不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群具有升高的补体依赖性细胞毒性(CDC)活性水平。在一些实施方案中，不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群是在细胞培养物中产生的。在一些实施方案中，细胞培养物中产生的抗体群是Rituxan。在一些实施方案中，在乳腺上皮细胞中产生的高半乳糖基化抗体群和不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群可以由相同核酸编码。[0111]在一些实施方案中，高半乳糖基化并且在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的CDC活性相比于不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群高至少1.1倍，高至少1.2倍，高至少1.3倍，高至少1.4倍，高至少1.5倍，高至少1.6倍，高至少1.7倍，高至少1.8倍，高至少1.9倍，高至少2倍，高至少3倍，高至少5倍，高至少10倍，直至高至少100倍或更高。在一些实施方案中，高半乳糖基化并且在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的CDC活性相比于不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群高至少1.5倍。在一些实施方案中，高半乳糖基化并且在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的CDC活性相比于不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群高至少3倍。[0112]在一个方面中，本文中公开的抗体群的组合物具有高(补体依赖性细胞毒性)CDC活性。抗体可以通过各种机制起到治疗剂作用，其中一种机制是通过CDC活性。结合靶细胞受体(如CD20)的一些治疗性抗体也可以结合补体途径的蛋白质。补体蛋白的结合导致补体级联(通过Cl-复合物激活)，其最终导致形成“膜攻击复合物”，其对与治疗性抗体结合的细胞引起细胞裂解和死亡(参见例如ReffM.E.Bloodl994，83:435)。认为至少部分通过诱导CDC活性发挥其治疗作用的治疗性抗体的一个实例是利妥昔单抗(Rituxan)，其可以结合⑶20(其在某些淋巴瘤细胞上过表达)。[0113]在一些实施方案中，具有升高的补体依赖性细胞毒性(CDC)活性水平的抗体群是与没有升高的补体依赖性细胞毒性(CDC)活性水平的抗体群相比诱导更大量细胞裂解的抗体群。用于测定CDC水平的方法是本领域已知的并且常常是基于测定细胞裂解的量。用于测定⑶C活性的商业试剂盒可以例如购自Genscript(Piscataway,NJ)。[0114]ADCC活性[0115]在一个方面中，包含高半乳糖基化抗体群的组合物具有高补体依赖性细胞毒性(CDC)活性。在一个方面中，包含高半乳糖基化抗体群的组合物具有高抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性。在一些实施方案中，包含高半乳糖基化抗体群的组合物具有高补体依赖性细胞毒性(CDC)活性并具有高抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性。[0116]在一些实施方案中，高半乳糖基化抗体群在与低半乳糖抗体群相比时具有升高的抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)水平。在一些实施方案中，高半乳糖基化抗体群的ADCC活性在与低半乳糖抗体群相比时高至少1.1倍，高至少1.2倍，高至少1.3倍，高至少1.4倍，高至少1.5倍，高至少1.6倍，高至少1.7倍，高至少1.8倍，高至少1.9倍，高至少2倍，高至少3倍，高至少5倍，高至少10倍，直至高至少100倍或更高。在一些实施方案中，高半乳糖基化抗体群的ADCC活性在与低半乳糖抗体群相比时高至少2倍。在一些实施方案中，高半乳糖基化抗体群的ADCC活性在与低半乳糖抗体群相比时高至少5倍。[0117]在一些实施方案中，高半乳糖基化并且在乳腺上皮细胞中产生的抗体群相比于不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群具有升高的抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性水平。在一些实施方案中，高半乳糖基化并且在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的ADCC活性相比于不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群高至少1.1倍，高至少1.2倍，高至少1.3倍，高至少1.4倍，高至少1.5倍，高至少1.6倍，高至少1.7倍，高至少1.8倍，高至少1.9倍，高至少2倍，高至少3倍，高至少5倍，高至少10倍，直至高至少100倍或更高。在一些实施方案中，高半乳糖基化并且在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的ADCC活性相比于不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群高至少2倍。在一些实施方案中，高半乳糖基化并且在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的⑶C活性相比于不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群高至少5倍。[0118]在一些实施方案中，高半乳糖基化并且在乳腺上皮细胞中产生的抗体群相比于不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群具有升高的抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性水平。在一些实施方案中，不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群是在细胞培养物中产生的。在一些实施方案中，细胞培养物中产生的抗体群是Rituxan。[0119]在一些实施方案中，高半乳糖基化的抗体群是高岩藻糖基化的。在一些实施方案中，高半乳糖基化且高岩藻糖基化的抗体群相对于低半乳糖且低岩藻糖的抗体群具有显著百分比的抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性。在一些实施方案中，高半乳糖基化且高岩藻糖基化抗体群的ADCC活性在与低半乳糖且低岩藻糖的抗体群相比时具有至少10%，至少20%，至少30%，至少40%，至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，至少90%，直至100%或更高。在一些实施方案中，高半乳糖基化且高岩藻糖基化的抗体群的ADCC活性在与低半乳糖且低岩藻糖抗体群相比时为至少40%。[0120]在一些实施方案中，高半乳糖基化并且在乳腺上皮细胞中产生的抗体群相对于不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群具有显著百分比的抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性。在一些实施方案中，在乳腺上皮细胞中产生的高半乳糖基化抗体群和不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群可以由相同核酸编码。在一些实施方案中，不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群在细胞培养物中产生。在一些实施方案中，高半乳糖基化并且在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的ADCC活性相比于不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群，为至少10%，至少20%，至少30%，至少40%，至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，至少90%，直至100%或更高。在一些实施方案中，高半乳糖基化并且在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的ADCC活性相比于不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群为至少40%。[0121]在一个方面中，本文中公开的抗体群的组合物具有高ADCC活性。抗体可以通过各种机制起治疗剂作用，所述机制之一是通过ADCC活性。结合靶细胞上的细胞受体(如CD20)并且包括Fe糖基化位点的治疗性抗体还可以结合Fe-受体(如⑶16),导致表达Fe受体的细胞锚定至靶细胞。抗体Fe区的结合亲和性通常依赖于Fe糖基化位点的糖基化性质。在多种免疫细胞上发现了Fe受体，所述免疫细胞包括天然杀伤细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和肥大细胞。结合Fe受体产生免疫细胞诱导性细胞因子(如IL-2)和吞噬作用，以杀灭靶细胞。在一些实施方案中，具有升高的抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性水平的抗体群是与没有升高的抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性水平的抗体群相比显示出对CD16表达细胞的结合增加的抗体群。在一些实施方案中，具有升高的抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性水平的抗体群是与没有升高的抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性水平的抗体群相比显示出诱导IL-2产生增加(例如，在天然杀伤细胞中)的细胞群。用于测定ADCC活性的商业试剂盒可以购自例如Genscript(Piscataway,NJ)和Promega(Madison,WI)。[0122]B-细胞消减[0123]在一个方面中，包含高半乳糖基化的抗体群的组合物具有高补体依赖性细胞毒性(CDC)活性。在一个方面中，包含高半乳糖基化的抗体群的组合物具有高抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性。在一些实施方案中，包含高半乳糖基化抗体群的组合物具有高补体依赖性细胞毒性(CDC)活性并且具有高抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性。在一些实施方案中，包含高半乳糖基化抗体群的组合物具有强烈的诱导B细胞消减的能力(例如，在血液样品或受试者中)。在一些实施方案中，高半乳糖基化并且具有强烈的诱导B细胞消减的能力的抗体群中的抗体是抗CD20抗体。[0124]抗体[0125]在一个方面中，公开内容提供了高半乳糖基化抗体群。在一些实施方案中，高半乳糖基化抗体群是通过转基因生产的。在一些实施方案中，群中的抗体是嵌合的、人源化的或完全人的抗体。在一些实施方案中，群中的抗体是全长抗体。在一些实施方案中，群中的抗体包含重链和轻链。[0126]在一些实施方案中，抗体群的抗体是抗CD20抗体。抗CD-20在本领域中有描述并且包括例如利妥昔单抗(利妥昔单抗)(Genentech)、奥法木单抗(ofatumumab)(GSK)和Ocrelizumab(Genentech)(参见例如Robak等，B1drugs2011,25:13-25)。在一些实施方案中，抗体群是抗CD20抗体的混合物。[0127]在一些实施方案中，抗体群的抗体是如下的抗体，其中群中的抗体的轻链和重链由SEQIDNO:1和SEQIDNO:2中所列的核酸序列编码。[0128]如本文中所用的“抗体群”指的是一批针对相同抗原的抗体(例如，抗CD20抗体)。在一些实施方案中，抗体群的抗体针对相同抗原表位(例如，结合CD20的特定氨基酸序列的抗CD20抗体)。针对相同表位的抗体群包含具有相同CDR但具有不同非CDR区的抗体群，并且包括其中一些抗体具有一个或多个突变的抗体群，所述突变没有改变与抗体针对的抗原表位结合的性质。在一些实施方案中，抗体群的抗体可以由相同核酸来编码。然而，应当认识到即使抗体群中的抗体由相同核酸编码，它们也不需要是相同的。例如，抗体可以具有不同的糖基化模式。[0129]在一些实施方案中，抗体群的抗体以相似的方式产生。例如，可以通过转基因产生抗体群。所述群可以源自转基因产生的抗体的一次收获物或多次收获物。多次收获物可以来自相同来源，例如，相同的转基因动物，或可以从不同来源组合，例如，不同的转基因动物。[0130]在一些实施方案中，抗体是转基因产生的抗体。如本文中所用的术语“转基因产生的抗体”指的是在转基因动物中产生的抗体，即在其基因组中具有编码待产生抗体的核酸序列的动物。在一些实施方案中，转基因抗体在转基因动物的一个或多个器官中表达。在一些实施方案中，转基因抗体在肝中表达。在一些实施方案中，转基因抗体在乳腺上皮细胞中表达。[0131]如本文中所用的“分离的抗体”指的是基本上没有其他具有不同抗原性特异性的抗体的抗体。然而，特异性结合抗原的表位、同种型或变体的分离抗体与其他相关抗原(例如来自其他物种的抗原)具有交叉反应性。此外，分离的抗体可以基本上没有其他细胞材料和/或化学物质。如本文中所用的，“特异性结合”指的是结合预定抗原的抗体。通常，抗体以一定的亲和力结合，该亲和力比其结合预定抗原以外的非特异性抗原或密切相关抗原的亲和性大至少两倍。因此，在一些实施方案中，本文中提供的抗原特异性结合靶抗原。[0132]如本文中所用的，术语“抗体”指的是包括通过二硫键互连的至少两个重(H)链和两个轻(L)链的糖蛋白，S卩，由通过不同基因编码的两个相同IgH链和两个相同L链组成的共价异四聚体。每个重链由重链可变区(本文中缩写为HCVR或Vh)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个域CH1、(^和^^组成。每个轻链由轻链可变区(在本文中缩写为LCVR和')和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个域CL组成。V1^P'区可以进一步细分成超变区，称为互补决定区(CDR)，其散布有更保守的区域，称为框架区(FR)。每个'由三个CR和四个FR组成，以以下顺序从氨基端至羧基端排列:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一种成分(Clq)。当两种蛋白质以化学计量学量表达并且以正确的构造自我装配时，可以完成成熟功能性抗体分子的形成。[0133]术语“抗体”还包括其抗原结合片段。如本文中所用的，抗体的“抗原结合片段”指的是抗体中保持特异性结合抗原的能力的一个或多个部分并且包括Fe糖基化位点。[0134]在一些实施方案中，抗体是同种型IgG、IgA或IgD。在进一步的实施方案中，抗体选自下组:IgGUIgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAUIgA2、IgAsec、IgD、IgE或具有IgGUIgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAUIgA2、IgAsec、IgD或IgE的免疫球蛋白恒定和/或可变域。在优选的实施方案中，抗体是IgGl型的。在其他实施方案中，抗体是双特异性或多特异性抗体。在再其他实施方案中，抗体是重组抗体、多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体或嵌合抗体，或这些的混合物。在一些实施方案中，嵌合抗体是非人(例如小鼠、大鼠或兔)抗体的部分与人抗体的部分的遗传工程化融合。在一些实施方案中，嵌合抗体可以含有大约33%非人蛋白质和67%人蛋白质。特别关于小鼠嵌合体，它们可以经研发用于降低由鼠抗体引发的HAMA应答，因为它们可以组合鼠抗体的特异性与人抗体的有效人免疫系统相互作用。[0135]在一些实施方案中，抗体是嵌合或人源化抗体。如本文中所用的，术语“嵌合抗体”指的是组合鼠可变或超变区与人恒定区或恒定和可变框架区的抗体。如本文中所用的，术语“人源化抗体”指的是只保留结合人框架区的来自亲本抗体的抗原结合CDR的抗体(参见ffaldmann,1991,Science252:1657)。预期这样的保留鼠抗体结合特异性的嵌合或人源化抗体在根据本发明体外给药用于诊断、预防或治疗应用时具有降低的免疫原性。人源化(也称为改造(reshaping)或CDR接枝)是用于降低来自异种来源(如小鼠)的单克隆抗体的免疫原性的建立技术。可以通过标准分子生物学技术产生人源化抗体。在一些实施方案中，这包括将啮齿类互补决定区(CDR)接枝至人框架中。然而，这种技术主要是一个重复过程并且在设计人源化抗体时多个要素起作用:CDR的长度、人框架和来自啮齿动物单抗的残基取代至人框架区中(回复突变)。[0136]治疗性小鼠单抗有时对于人使用不是理想的，因为HAMA(人抗小鼠抗体)应答中和抗体，并且将其从循环中快速清除，并且在最坏的情况中，诱导严重的变应性超敏反应。已经研发了几个策略来用人序列替代大多数鼠Ig序列，导致较少的副作用，同时保持功效。用于研发人治疗性单抗的一种策略是用人区域替代鼠重链(H)和轻链(L)恒定区(分别SCh和CJ，或一般为非人链，使得所得到的嵌合抗体主要由人IgG蛋白序列组成，除了会保持非人的抗原结合域外。该策略用于Riiuxan?(利妥昔单抗抗人⑶20,Genentech)的研发,其是美国批准的第一种单克隆抗体，用于治疗非霍奇金(non-Hodgkin)淋巴瘤。通过一些评估，提供具有人Ch和Q序列的治疗性单抗应当消除鼠抗体蛋白质的大约90%免疫原性。[0137]在某些实施方案中，抗体是人抗体。如本文中所用的，术语“人抗体”意图包括具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区的抗体。本发明的人抗体可以包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过随机或定点体外诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文中所用的术语“人抗体”并不意图包括其中源自另一种哺乳动物物种(如小鼠)种系的CDR序列已经接枝至人框架序列中的抗体(在本文中称为“人源化抗体”)。使用携带人免疫系统部分而不是小鼠系统部分的转基因小鼠来产生人抗体。[0138]也可以通过对转基因小鼠的人免疫球蛋白重链和轻链基因座的较大部分进行免疫来制备完全人单克隆抗体。参见例如美国专利5，591，669，5，598，369，5，545，806，5,545,807,6,150,584,以及其中引用的参考文献，将其内容通过提及并入本文中。这些动物在遗传上已经经过修饰，使得在内源性(例如鼠)抗体的产生中存在功能性删除。将动物进一步修饰，以含有整个或部分的人种系免疫球蛋白基因座，使得这些动物的免疫导致产生针对目标抗原的完全人抗体。这些小鼠(例如XenoMouse(Abgenix),HuMAb小鼠(Medarex/GenPharm))的免疫后,根据标准杂交瘤技术制备单克隆抗体。这些单克隆抗体具有人免疫球蛋白氨基酸序列，并且因此在给药于人时，将不会引发人抗小鼠抗体(HAMA)应答。人抗体，例如本文中提供的任一种抗体，可以是单克隆抗体、多克隆抗体或单克隆和多克隆抗体的混合物。[0139]高半乳糖基化抗体的来源[0140]在一个方面中，本发明提供了高半乳糖基化的抗体群。在一些实施方案中，高半乳糖基化抗体群是通过转基因产生的。[0141]在一些实施方案中，已经将哺乳动物乳腺上皮细胞工程化，以在转基因动物(如小鼠或山羊)乳中表达抗体。这种基因的表达例如在山羊β_酪蛋白调控元件的控制下。转基因动物可以通过共转染含有H和L链的分别的构建体或同时含有这两条链的一个构建体来产生。在某些实施方案中，这两个转基因整合至相同的染色体位点中，使得基因在一起传递给后代，并且联合地调控蛋白质表达。在一些实施方案中，对产生乳蛋白的单独乳导管上皮细胞优化表达。[0142]用于产生转基因动物的构建体[0143]在一些实施方案中，为了产生含有构建体(例如编码抗CD20抗体的构建体)的原代细胞系以用于通过核转移产生转基因山羊，可以将重链和轻链构建体转染至原代山羊皮肤上皮细胞中，将其克隆扩充，并且完全表征，以评估转基因拷贝数、转基因结构完整性和染色体整合位点。如本文中所用的，“核转移”指的是其中将来自供体细胞的核移植至去核卵母细胞中的克隆方法。[0144]目标蛋白(例如抗体)的编码序列可以如下获得，即筛选源自所选动物(如牛或小鼠)的基因组材料或逆翻译的信使RNA的文库，其获自序列数据库(如NCBI，Genbank)，或者获得抗体序列，等等。可以将所述序列克隆至合适的质粒载体中，并且在合适的宿主生物体(如大肠杆菌)中扩增。载体扩增后，可以切出DNA构建体，从载体的剩余部分中纯化出来，并引入可以用于产生转基因动物的表达载体中。转基因动物将具有整合至其基因组中的期望转基因蛋白质。[0145]载体扩增后，可以用合适的5’和3’控制序列切出DNA构建体，从载体的剩余部位中纯化出来，并且用于产生转基因动物，所述转基因动物已经将期望的非糖基化的相关转基因蛋白质整合至其基因组中。相反，使用一些载体，如酵母人工染色体(YAC)，不必从载体取出装配的构建体；在这样的情况中，可以将扩增的载体直接用于制备转基因动物。可以将编码序列可操作地连接控制序列，其能够使编码序列在转基因非人哺乳动物的乳中表达。[0146]适用于对转基因动物的乳引导生成的DNA序列可以携带源自天然衍生的乳蛋白的5’-启动子区。因此，该启动子在激素和组织特异性因子的控制下并且在泌乳性乳腺组织中活性最大。在一些实施方案中，启动子是山羊(caprine)β酪蛋白启动子。启动子可以可操作地连接指导蛋白质前导序列生成的DNA序列，所述蛋白质前导序列指导转基因蛋白通过乳腺上皮分泌至乳中。在一些实施方案中，可以添加3’-序列以提高mRNA的稳定性，所述3’-序列可以源自天然分泌的乳蛋白。[0147]如本文中使用的，“前导序列”或“信号序列”是编码蛋白质分泌信号的核酸序列，并且在与编码转基因蛋白质的下游核酸分子可操作连接时指导分泌。前导序列可以是天然的人前导序列，人工衍生的前导物，或者可以自与用于指导转基因编码序列转录的启动子相同的基因获得，或者从通常自细胞(诸如哺乳动物乳腺上皮细胞)分泌的另一种蛋白质获得。[0148]在一些实施方案中，启动子是乳特异性启动子。如本文中所用的，“乳特异性启动子”是天然指导将蛋白质分泌至乳中的细胞(例如乳腺上皮细胞)中基因表达的启动子，并且包括例如酪蛋白启动子，例如，α-酪蛋白启动子(例如，aS-1酪蛋白启动子和aS2-酪蛋白启动子)、酪蛋白启动子(例如山羊酪蛋白启动子(DiTull1，B10TECHN0L0GY10:74-77，1992)、Y-酪蛋白启动子、κ-酪蛋白启动子、乳清酸性蛋白(WAP)启动子(Gordon等，B10TECHN0L0GY5:1183-1187，1987)、β-乳球蛋白启动子(Clark等，B10TECHN0L0GY7:487-492,1989)和α-乳球蛋白启动子(Soulier等，FEBSLETTS.297:13,1992)。该限定中还包括在乳腺组织中特异性激活的启动子，如例如小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)的长末端重复(LTR)启动子。[0149]如本文中所用的，当编码序列和调控序列以如下的方式共价连接，使得将编码序列的表达或转录置于调控序列的影响或控制下时，则将它们称为是“可操作连接的”。为了使编码序列翻译成功能性蛋白质，可以将编码序列可操作地连接调控序列。如果诱导5’调控序列中的启动子导致编码序列的转录并且如果两个DNA序列之间的连接性质没有(I)导致移码突变的引入，(2)干扰启动子区指导编码序列转录的能力或(3)干扰相应RNA转录物翻译成蛋白质的能力，则将两个DNA序列称为可操作连接的。因此，如果启动子区能够实现所述DNA序列的转录，使得所得到的转录物可以翻译成期望的蛋白质或多肽，则启动子序列可操作地连接编码序列。[0150]如本文中所用的，“载体”可以是可以通过限制并连接插入期望序列的多种核酸中的任何一种，其用于在不同遗传环境之间运送或用于在宿主细胞中表达。尽管RNA载体也是可利用的，但载体通常由DNA组成。载体包括但不限于质粒和噬菌粒。克隆载体是如下的载体，其能够在宿主细胞中复制，并且还以一个或多个内切核酸酶限制性位点为特征，在所述内切核酸酶限制性位点处可以以可确定方式切割载体，并且可以使其连接至期望的DNA序列，使得新重组载体保持其在宿主细胞中复制的能力。在质粒的情况中，随着质粒在宿主细菌内在拷贝数上增加，期望序列的复制可以发生多次，或随着宿主通过有丝分裂而复制，每个宿主只发生一次。在噬菌体的情况中，复制可以在裂解期过程中主动发生或在溶原期过程中被动发生。表达载体是如下的载体，其可以通过限制和连接来接受期望的DNA序列的插入，使得其可操作地连接调控序列并且可以作为RNA转录物表达。载体可以进一步含有一个或多个适用于鉴定细胞的标记物序列，所述细胞已经或尚未用载体转化或转染。标记物包括例如编码提高或降低对抗生素或其他化合物的抗性或敏感性的蛋白质的基因，编码通过本领域已知的标准测定法可检测其活性的酶的基因(例如，β-半乳糖苷酶或碱性磷酸酶)和明显影响经转化或转染的细胞、宿主、菌落或噬斑表型的基因。优选的载体是能够自主复制并且表达与其可操作连接的DNA区段中存在的结构基因产物的那些载体。[0151]转基因动物[0152]在一个方面中，公开内容提供了表达本文中提供的任一种抗体群的乳腺上皮细胞。在一些实施方案中，公开内容提供了包括乳腺上皮细胞的转基因非人哺乳动物，所述乳腺上皮细胞表达本文中提供的任一种抗体群。[0153]在一个方面中，公开内容提供了一种用于生产转基因抗体及其变体和片段的方法，该方法包括在转基因非人哺乳动物的乳中表达由核酸构建体编码的转基因抗体。在一些实施方案中，用于生产本发明抗体的方法包括:[0154](a)用编码期望转基因抗体的转基因DNA构建体转染非人哺乳动物细胞；[0155](b)选择其中所述转基因DNA构建体已经插入细胞基因组中的细胞；并[0156](c)进行第一次核转移程序，以产生在期望的转基因抗体方面杂合的并且可以在其乳中表达该抗体的非人转基因哺乳动物。[0157]在一个方面中，本发明提供了以下的方法:[0158](a)提供经工程化改造以表达抗体的非人转基因哺乳动物，[0159](b)在非人转基因哺乳动物的乳中表达抗体；并[0160](C)分离乳中表达的抗体。[0161]这样的方法可以进一步包括诱导泌乳的步骤以及测定所获得抗体的CDC活性和/或ADCC活性的步骤。这样的方法可以进一步包括测定所获得抗体的半乳糖基化和或岩藻糖基化的量或水平的步骤。该方法还可以进一步包括其他分离和/或纯化步骤。该方法还可以包括对获得的抗体与不在乳腺上皮细胞中产生(例如在细胞培养物中产生)的抗体比较⑶C活性和/或ADCC活性的步骤。[0162]还可以根据本领域已知的方法(参见例如美国专利N0.5,945,577)产生能够表达重组抗体的转基因动物。适用于转基因表达的动物包括但不限于山羊、绵羊、野牛、骆驼、牛、猪、兔、水牛、马、大鼠、小鼠或美洲驼。合适的动物还可以包括牛(bovine)、山羊(caprine)、绵羊(ovine)和猪(porcine),其分别涉及牛、山羊、绵羊和猪(pig或swine)的各种物种。合适的动物还包括有蹄动物。如本文中所用的，“有蹄动物”是或指通常有蹄的食草四足哺乳动物，包括但不限于绵羊、猪、山羊、牛和马。在一个实施方案中，通过用含有重链和轻链的分别的构建体共转染原代细胞来产生动物。然后将这些细胞用于核转移。或者，如果使用微注射来产生转基因动物，可以注射构建体。[0163]克隆将导致转基因动物的多样性，即每个所述转基因动物能够产生目标抗体或其他基因构建体。生产方法包括使用克隆的动物和那些动物的后代。在一些实施方案中，克隆的动物是山羊、牛或小鼠。克隆还包括胎儿的核转移、核转移、组织和器官移植以及嵌合后代的创建。[0164]克隆方法的一个步骤包括将含有编码抗体的转基因的细胞的基因组转移至去核卵母细胞中。如本文中所用的，“转基因”指的是核酸分子中通过人工插入细胞或其祖先中，并且变成从所述细胞形成的动物的基因组的一部分的任何部分。这样的转基因可以包括对于转基因动物而言部分或完全外源(B卩外来)的基因，或可以表示与动物的内源基因具有同一性的基因。[0165]卵母细胞的合适的哺乳动物来源包括山羊、绵羊、牛、猪、兔、豚鼠、小鼠、仓鼠、大鼠、非人灵长类动物等。优选地，卵母细胞获自有蹄动物，并且最优选为山羊或牛。用于分离卵母细胞的方法是本领域公知的。实质上，所述方法包括从哺乳动物(例如山羊)的卵巢或生殖道分离卵母细胞。容易获得的有蹄动物卵母细胞来源来自激素诱导的雌性动物。对于成功使用技术，如遗传工程、核转移和克隆，优选地，可以将卵母细胞在体内成熟，之后可以使用这些细胞作为受体细胞用于核转移，并且之后它们通过精子细胞受精以形成胚胎。已经在体内成熟的中期II阶段卵母细胞已经成功用于核转移技术。实质上，在动情期开始后或注入人绒毛膜促性腺素(hCG)或相似激素后几小时，通过外科手术从非超排卵或超排卵动物收集成熟中期II卵母细胞。[0166]用于预测乳腺中表达的重组蛋白的量和质量的工具之一是通过诱导泌乳(EbertKM，1994)。诱导的泌乳允许从转基因生成的早期而不是从由怀孕引起的第一次自然泌乳(其至少要在一年后)起表达和分析蛋白质。可以通过激素或手动进行泌乳的诱导。[0167]在一些实施方案中，本文中提供的高半乳糖基化抗体的组合物进一步包括乳。在一些实施方案中，本文中提供的方法包括从转基因动物的乳中分离出抗体群的步骤。用于从转基因动物的乳中分离出抗体群的方法是本领域已知的，并且描述于例如Pollock等，JournalofImmunologicalMethods,第231卷，第1-2期，1999年12月10日，第147-157页。[0168]疾病的治疗[0169]在一个方面中，公开内容提供了将本文中提供的任一种组合物给药于有此需要的受试者(如受到疾病、外伤或中毒影响的受试者)的方法。[0170]在一些实施方案中，受试者患有癌症。在一些实施方案中，癌症是B细胞淋巴瘤。[0171]如本文中所用的“癌症”指的是细胞的不受控生长，其干扰身体器官和系统的正常功能发挥。从其最初位置转移并且根植于(seed)重要器官的癌症最终将通过受影响器官的功能恶化而导致受试者死亡。[0172]如本文中所用的癌症包括以下类型的癌症，B细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、蕈样肉芽肿病(mycosisfungoides)/塞扎里综合征(Sezarysyndrome)、组织细胞增多症X(hist1cytosisX)、慢性淋巴细胞性白血病(chroniclymphocyticleukaemia)、毛细胞白血病(hairycellleukaemia)、多发性骨髓瘤(multiplemyeloma)、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’smacroglobulinaemia)、冷球蛋白血症(cryoglobulinaemi)、重链病(heavychaindisease)、乳腺癌、胆管癌(biliarytractcancer);膀胱癌；脑癌，包括成胶质细胞瘤(gl1blastoma)和髓母细胞瘤(medul1blastoma);宫颈癌(cervicalcancer);绒毛膜癌(chor1carcinoma);结肠癌；子宫内膜癌(endometrialcancer);食管癌(esophagealcancer);胃癌；白血病；血液学新生物，包括急性淋巴细胞性白血病和骨髓性白血病(myelogenousleukemia);T细胞急性成淋巴细胞性白血病/淋巴瘤；毛细胞白血病(hairycellleukemia);慢性骨髓性白血病(chromicmyelogenousleukemia),多发性骨髓瘤；AIDS相关白血病和成年T细胞白血病淋巴瘤；上皮内新生物，包括鲍恩(Bowen)氏病和匹克(Pager)氏病；肝癌；肺癌；淋巴瘤，包括霍奇金氏病和淋巴细胞性淋巴瘤；成神经细胞瘤(neu1blastoma);口腔癌(oralcancer),包括鳞状细胞癌(quamouscellcarcinoma);卵巢癌,包括由上皮细胞、基质细胞、生殖细胞和间充质细胞引起的那些癌；胰腺癌；前列腺癌；直肠癌；肉瘤，包括平滑肌肉瘤(le1myosarcoma)、横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)、脂肪肉瘤(Iiposarcoma)^rF维肉瘤(fibrosarcoma)和骨肉瘤(osteosarcoma);皮肤癌，包括黑素瘤、卡波西(Kaposi)氏肉瘤、基底细胞癌(basocellularcancer)和鳞状细胞癌；睾丸癌，包括生殖细胞瘤(germinaltumor),如精原细胞瘤(seminoma)、非精原细胞瘤(畸胎瘤(teratoma)、绒毛膜癌)、基质肿瘤和生殖细胞瘤；甲状腺癌，包括甲状腺腺癌和髓样癌(medullarcarcinoma)；和肾癌，包括腺癌和维尔姆斯瘤(Wilmstumor)。其他癌症会是本领域普通技术人员已知的并且包括肥大细胞瘤(mastocytoma)、胸腺瘤(thymoma)、衆细胞瘤(plasmacytoma)和胶质瘤(gl1ma)。[0173]治疗方法还针对造血系统癌症(hemopoieticcancer),如白血病，其能够征服(outcompete)受试者中的正常造血区室，由此导致造血失败(在贫血症(anemia)、血小板减少(thrombocytopenia)和嗜中性白血球减少症(neutropenia)的形式中),最终导致死亡。[0174]治疗方法还针对对转移的抑制。转移是由癌细胞从原发性肿瘤散布至身体的其他部位引起的与原发性肿瘤位置截然不同的癌细胞区域。在诊断原发性肿瘤块时，可以对受试者监控转移的存在。除了监控特定症状外，最常见的是通过磁共振成像(MRI)扫描、计算机断层摄影法(computedtomography,CT)扫描、血液和血小板计数、肝功能研究、胸X-射线和骨扫描的单独或联合使用来检测转移。[0175]免疫疾病的治疗[0176]在一个方面中，公开内容提供了将本文中所述的任一种组合物给药于有此需要的受试者的方法。在一些实施方案中，受试者患有免疫疾病。[0177]本发明的组合物对于治疗免疫疾病也是有用的，所述免疫疾病包括但不限于成年呼吸窘迫综合征(adultrespiratorydistresssyndrome)、动脉硬化(arter1sclerosis)、哮喘(asthma)、动脉粥样硬化(atherosclerosis)、胆囊炎(cholecystitis)、硬化(cirrhosis)、克罗恩(Crohn)氏病、糖尿病、肺气肿、嗜伊红细胞增多症(hypereosinophilia)、炎症(inflammat1n)、肠易激综合征(irritablebowelsyndrome)、多发性硬化(multiplesclerosis)、重症肌无力(myastheniagravis)、心肌或心包炎症、骨关节炎、骨质疏松(osteoporosis)、胰腺炎、类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis)、硬皮病(scleroderma)、结肠炎(colitis)、系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus)、狼疮肾炎(lupusnephritis)、糖尿病、炎性肠病(inflammatoryboweldisease)、乳糜湾(celiacdisease)、自体免疫性甲状腺疾病(autoimmunethyroiddisease,)、艾迪生(Addison)氏病、舍格伦(Sjogren)氏综合征、西德纳姆氏舞蹈病(Sydenham’schorea)、高安氏动脉炎(Takayasu'sarteritis)、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener'sgranulomatosis)>自体免疫性胃炎、自体免疫性肝炎、皮肤自体免疫性疾病、自体免疫性扩张型心肌病、多发性硬化、心肌炎、重症肌无力、恶性贫血、多肌痛、银屑病、快速进行性肾小球肾炎(rapidlyprogressiveglomerulonephritis)、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、血管炎(vasculitis)、肌肉的自体免疫性疾病、睾丸的自体免疫性疾病、卵巢的自体免疫性疾病和眼的自体免疫性疾病。[0178]其他治疗剂[0179]在一个方面中，将本文中提供的抗体组合物与其他治疗剂一起给药。抗体组合物和其他治疗剂可以同时或依次给药。当同时给药其他治疗剂时，它们可以在同一制剂或分开制剂中给药，但同时给药。当其他治疗剂和抗体的给药在时间上分开时，则其他治疗剂彼此及与抗体是依次给药。这些化合物给药之间的时间间隔可以是几分钟或它可以更长。[0180]其他治疗剂包括例如但不限于抗癌疗法。抗癌剂法包括癌症药物、放射和外科手术程序。如本文中所用的，“癌症药物”指的是为了治疗癌症的目的而给药于受试者的药剂。[0181]如本文中所用的，“治疗癌症”包括预防癌症的形成、减轻癌症的症状和/或抑制已确定癌症的生长。在其他方面中，为了降低形成癌症的风险，将癌症药物给药于有风险形成癌症的受试者。本文中描述了各种类型的用于治疗癌症的药物。为了本说明书的目的，将癌症药物分为化疗剂、免疫治疗剂、癌症疫苗、激素治疗和生物反应修饰剂(b1logicalresponsemodifier)。[0182]化疗剂可以选自下组:甲氨喋呤(methotrexate)、长春新碱(vincristine)、阿霉素(adriamycin)、顺钼(cisplatin)、非含糖氯乙基亚硝基脲类(non-sugarcontainingchloroethylnitrosoureas)、5_氟尿卩密唳、丝裂霉素C、博来霉素、多柔比星(doxorubicin)、达卡巴嗪(dacarbazine)、泰素(taxol)、fragyline、葡甲胺(Meglamine)GLA、戍柔比星(valrubicin)、卡莫司汀(carmustaine)和聚苯丙生(poliferposan)、MMI270、BAY12-9566、RAS法尼基转移酶抑制剂(RASfamesyltransferaseinhibitor)、法尼基转移酶抑制剂(famesyltransferaseinhibitor)、MMP>MTA/LY231514、LY264618/洛美曲索(Lometexol)、Glamolec,C1-994、TNP-470、和美新(Hycamtin)/托泊替康(Topotecan)、PKC412、伐司朴达(Valspodar)/PSC833、Novantrcme/米托蒽醌(Mitroxantrone)、Metaret/苏拉明(Suramin)、巴马司他(Batimastat)、E7070、BCH_4556、CS-682、9-AC、AG3340、AG3433、Incel/VX-710、VX-853、ZDOlOUISI641、0DN698、TA2516/马米司他(Marmistat)、BB2516/Marmistat、CDP845、D2163、PD183805、DX8951f、LemonalDP2202、FK317、Picibanil/OK-432、AD32/戊柔比星、Metastron/锶衍生物、Temodal/替莫唑胺(Temozolomide)、Evacet/脂质体多柔比星(liposomaldoxorubicin)、Yewtaxan/帕利他塞(Paclitaxel)、泰素/帕利他塞、希罗达(Xeload)/卡培他滨(Capecitabine)、氟铁龙(Furtulon)/去氧氟尿苷(Doxifluridine)、Cyclopax/口服帕利他塞、口服类紫杉醇(Taxoid)、SPU-077/顺钼、HMR1275/Flavopiridol、CP-358(774)/EGFR、CP-609(754)/RAS癌基因抑制剂、BMS-182751/口服钼、UFT(替加氟(Tegafur)/尿嘧P定)、Ergamisol/左旋咪唑、恩尿啼唳(Eniluracil)/776C85/5FU增强剂、Campto/左旋咪唑、Camptosar/伊立替康(Irinotecan)、Tumodex/Ralitrexed、Leustatin/克拉屈滨(Cladribine)、Paxex/帕利他塞、Doxil/脂质体多柔比星、Caetyx/脂质体多柔比星、Fludara/氣达拉滨(Fludarabine)ΛPharmarubicin/表柔t匕星(Epirubicin)、DepoCyt、ZD1839、LU79553/双萘酰亚胺(Bis-Naphtalimide)、LU103793/多拉司他汀(Dolastain)、Caetyx/脂质体多柔比星、Gemzar/吉西他滨(Gemcitabine)、ZD0473/Anormed、YM116、碘粒子(1dineseeds)、CDK4和CDK2抑制剂、PARP抑制剂、D4809/Dexifosamide、Ifes/Mesnex/异环憐酸胺(Ifosamide)、Vumon/替尼泊苷(Teniposide)、Paraplatin/卡钼(Carboplatin)、Plantinol/顺钼、Vepeside/依托泊苷(Etoposide)、ZD9331、泰索帝/多西他塞(Docetaxel)、鸟^^票呤阿糖胞苷前药(prodrugofguaninearabinoside)、紫杉焼(Taxane)类似物、亚硝基脲类(nitrosoureas)、焼化剂类，如美法仑(melphelan)和环磷酉先胺(cyclophosphamide)、氨鲁米特(Aminoglutethimide)、天冬酸胺酶(Asparaginase)、白消安(Busulfan)、卡钼(Carboplatin)、氯丁酸氮芥(Chlorombucil)、盐酸阿糖胞苷(CytarabineHCI)、更生霉素(Dactinomycin)、盐酸柔红霉素(DaunorubicinHCl)、雌氮芥憐酸钠(Estramustinephosphatesodium)、依托泊苷(Etoposide)(VP16-213)、氟尿苷(Floxuridine)、氟尿啼卩定(5-FU)、氟他胺(Flutamide)、轻脲(Hydroxyurea)(轻基脲(hydroxycarbamide))、异环磷酰胺(Ifosfamide)、干扰素a-2a、a-2b、醋酸亮丙瑞林(Leuprolideacetate)(LHRH释放因子类似物)、洛莫司汀(Lomustine)(CCNU)、盐酸双氯乙基甲胺(MechlorethamineHCl)(氮芥)、巯基票呤(Mercaptopurine)、美司钠(Mesna)、米托坦(Mitotane)(0.p’-DDD)、盐酸米托蒽酉昆(MitoxantroneHCl)、奥曲肽(Octreotide)、普卡霉素(Plicamycin)、盐酸丙卡巴肼(ProcarbazineHCl)、链佐星(Streptozocin)、他莫昔芬(TamoxifenCitrate)、硫鸟_呤(Th1guanine)、塞替派(Th1tepa)、硫酸长春减(Vinblastinesulfate)、安R丫卩定(Amsacrine)(m-AMSA)、阿扎胞苷(Azacitidine)、促红细胞生成素(Erthropoietin)、六甲蜜胺(Hexamethylmelamine)(HMM)、白介素2、米托胍腙(Mitoguazone)(甲基-GAG;甲基乙二醒双丙咪腙(methylglyoxalbis-guanylhydrazone);MGBG)、喷司他丁(Pentostatin)(2’脱氧助间型霉素(2’deoxycoformycin))、司莫司汀(Semustine)(甲基-CCNU)、替尼泊苷(Teniposide)(VM-26)和硫酸长春地辛(Vindesinesulfate)，但不限于此。[0183]癌症疫苗可以选自下组:EGF、抗独特型癌症疫苗、Gp75抗原、GMK黑素瘤疫苗、MGV神经节苷脂偶联物疫苗(MGVgangl1sideconjugatevaccine)、Her2/neu、Ovarex、M-Vax>O-Vax>L-Vax>STn-KHLtheratope、BLP25(MUC-1)、脂质体独特型疫苗、Melacine、肽抗原疫苗、毒素/抗原疫苗、基于MVA的疫苗、PACIS,BCG疫苗、TA-HPV,TA-CIN、DISC病毒和ImmuCyst/TheraCys,但不限于此。[0184]在一些实施方案中，其他治疗剂是免疫治疗剂。免疫治疗剂包括但不限于Ributaxin、赫塞汀(Herceptin)、Quadramet>Panorex>IDEC-Y2B8、BEC2、C225、Oncolym、SMARTM195、ATRAGEN、Ovarex、Bexxar、LDP-03、1rt6、MDX-210、MDX-11、MDX-22、0V103、3622W94、抗VEGF、Zenapax,MDX-220、MDX-447、MEUMMUNE-2、MELIMMUNE-UCEACIDE、Pretarget、NovoMAb_G2、TNT、Gl1mab-H、GN1-250、EMD-72000、LymphoCide、CMA676、Monopharm-C、4B5、1regf.r3、1rc5、BABS,抗FLK-2、MDX-260、ANAAb、SMARTlDlOAb、SMARTABL364Ab和ImmuRAIT-CEA。[0185]药物组合物和治疗方法[0186]在一个方面中，公开内容提供了包括本文中所述的任一种高半乳糖基化抗体和药学可接受载体的组合物。[0187]在一个方面中，公开内容提供了将本文中所述的任一种组合物给药于有此需要的受试者的方法。在一些实施方案中，所述受试者患有癌症。在一些实施方案中，所述癌症是B细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，所述受试者患有免疫疾病。[0188]“受试者”应当指人或脊椎动物哺乳动物，包括但不限于犬、猫、马、牛、猪、绵羊、山羊或灵长类，例如猴。[0189]本文中提供的组合物在有效量中是有用的。术语有效量指的是对于实现期望的生物效果必需或足够的量。结合本文中提供的教导，通过在各种活性化合物和权重因子(如功效、相对生物利用率、患者体重、不利副作用的严重程度和优选的给药方式)中选择，可以计划有效的预防或治疗处理方案，其不会引起持续的毒性而对治疗特定的受试者仍然是有效的。对于任何特定应用的有效量可以根据如待治疗的疾病或病症、待给药的特定组合物、受试者体格或疾病或病症严重程度等因素而改变。本领域普通技术人员无需过度实验可以根据经验确定特定组合物的有效量。通常优选可以使用最大剂量，即，根据合理的医学判断的最高安全剂量。可以考虑每天多剂来获得合适的系统性化合物水平。例如，可以通过药物的患者峰或持续血浆水平的测量来确定合适的系统性水平。“剂量”和“剂”在本文中可互换使用。[0190]如本文中所用的术语“治疗”或“处理”包括防范性(例如预防性)和缓解性处理。[0191]具体地，确定治疗有效量取决于如药物的毒性和功效等因素。可以使用本领域公知的方法来测定毒性。可以利用相同的指导来测定功效。因此，药学有效量是临床医生认为毒物学可耐受的且仍然有效的量。例如，可以通过靶定组织的T-淋巴细胞细胞毒性的诱导或实质性诱导或靶定组织质量降低来测量功效。根据优选的实施方案，预期合适的剂量为约lmg/kg至10mg/kg。[0192]根据涉及将治疗有效量的本文中提供的抗体组合物给药于有此需要的受试者的实施方案，“治疗有效”表示抑制或逆转疾病状况(例如，降低或抑制癌症生长)需要的组合物量。一些方法涉及与已知癌症药物或疗法(例如化疗(优选使用本文中所列种类的化合物进行)或放疗)的联合治疗。患者可以是人或非人动物。在患有特征在于升高的促进癌症维持或增殖的受体水平的癌症时，患者通常需要治疗。[0193]通常，活性化合物的日口服剂量会为约0.01毫克/kg/天至1000毫克/kg/天。预期范围为0.5至50毫克/kg的口服剂量(在每天一次或多个给药中)将产生期望的结果。可以适当调节剂量，以获得期望的药物水平(局部或系统性的)，这取决于给药方式。例如，预期静脉内给药会是每天低一个数量级至几个数量级。在受试者在这样的剂量下应答不足的情况下，可以以患者耐受性容许的程度使用甚至更高的剂量(或通过不同的、更局限的投递途径产生的更高的有效剂量)。在一些实施方案中，考虑每天多剂，以获得合适的系统性抗体水平。[0194]在一些实施方案中，所提供的组合物用于体内应用。根据意图的体内给药方式，所用的组合物可以是固体、半固体或液体的剂型，如例如片剂、丸剂、粉剂、胶囊、凝胶、膏剂、液体、悬浮液等，优选，以适用于单次给药精确剂量量的单位剂型来给药组合物。根据期望的制剂，所述组合物还可以包括药学可接受载体或稀释剂，其定义为通常用于配制用于动物或人给药的药物组合物的水基载体。稀释剂选择为使得不影响目标人重组蛋白的生物活性。这样的稀释剂实例是蒸馏水、生理盐水、林格(Ringer)氏溶液、右旋糖溶液和汉克(Hank)氏溶液。可以使用相同的稀释剂来重建冻干的目标人重组蛋白。此外，药物组合物还可以包括其他医学药剂，药剂，载体，佐剂，无毒的、非治疗性的、非免疫原性的稳定剂等。这些稀释剂或载体的有效量是就成分的溶解性、生物活性等而言能有效获得药学可接受制剂的量。在一些实施方案中，本文中提供的组合物是无菌的。[0195]本文中的组合物可以通过口服、胃肠外或表面给药以及在其它情况中系统性形式来给药于人患者，用于抗黑素瘤、抗淋巴瘤、抗白血病和抗乳腺癌治疗。本发明的组合物还可以在治疗上用于一批自体免疫性疾病，如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化坐寸ο[0196]在体内治疗过程中的给药可以通过多种途径，包括胃肠外和口服，但优选胃肠外进行。可以使用囊内、静脉内、鞘内和腹膜内给药途径，通常优选静脉内。熟练技术人员认识到给药途径根据待治疗的疾病而改变。[0197]对于治疗中的使用，可以通过任何将组合物投递至期望表面的方式将有效量的组合物给药于受试者。可以通过熟练技术人员已知的任何方式来完成给药本发明的药物组合物。优选的给药途径包括但不限于口服、胃肠外、肌内、鼻内、舌下、气管内、吸入、眼、阴道和直肠。[0198]在期望将它们系统投递时，组合物可以配制为通过注射进行胃肠外给药，例如，通过推注或连续输注进行。注射用制剂可以以单位剂型呈现，例如，在安瓿或在多剂容器中，含有添加的防腐剂。组合物可以采用如油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳剂等形式，并且可以含有制剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。[0199]用于胃肠外给药的药物制剂包括水溶形式的活性化合物的水溶液。此外，可以将活性化合物的悬浮液制成合适的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油，如芝麻油，或合成的脂肪酸酯，如油酸乙酯或甘油三酯，或脂质体。含水注射悬浮液可以含有增加悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。任选，悬浮液还可以含有合适的稳定剂或增加化合物的溶解度的药剂，以允许制备高度浓缩的溶液。[0200]或者，组合物可以为粉末形式，在使用前用合适的载体(如无菌无热原水)重构。[0201]对于口服给药，药物组合物可以采用例如通过常规方法使用药学可接受赋形剂制得的片剂或胶囊的形式，所述赋形剂如粘合剂(例如，预糊化(pregelatinise)玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石或硅土(silica));崩解剂(例如，马铃薯淀粉或淀粉羟乙酸钠(sodiumstarchglycolate));或润湿剂(例如，月桂硫酸钠(sodiumlaurylsulphate))。可以通过本领域公知的方法来覆盖片剂。用于口服给药的液体制剂可以采用例如溶液、糖浆或悬浮液的形式，或它们可以作为干产品呈现，在使用前用水或其他合适载体构成。可以使用药学可接受添加剂通过常规方法来制备这些液体制剂，所述添加剂如悬浮剂(例如，山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化可食用脂肪)；乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯树胶)；非含水载体(例如，杏仁油、油性酯、乙醇或分馏植物油)；和防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)。制剂按照需要还可以含有缓冲剂盐、芳香剂、着色剂和甜味剂。[0202]可以合适地配置用于口服给药的制剂，以获得活性化合物的控制释放。对于含服给药，组合物可以采用以常规方式配制的片剂或锭剂形式。[0203]对于口服给药，例如，可以通过将活性抗体与本领域公知的药学可接受载体混合来容易地配制组合物。这样的载体能够使本发明的化合物配制成片剂、丸剂、糖锭剂(dragee)、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等，用于待治疗受试者的口服摄入。可以按照固体赋形剂来获得用于口服使用的药物制剂，任选研磨所得到的混合物，并且如果需要，在加入合适的助剂后，处理颗粒混合物，以获得片剂或糖锭剂核心。合适的赋形剂特别为填充剂，如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纤维素制剂，如例如玉米淀粉、小麦淀粉、稻淀粉、马铃薯淀粉、明胶、西黄蓍胶(tragacanth)、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入崩解剂，如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐，如海藻酸钠。任选，口服制剂还可以在盐水或缓冲剂(例如，EDTA)中配制，用于中和内部酸条件，或可以不用任何载体来给药。[0204]还特意考虑了组合物的口服剂型。可以对组合物的一种或多种成分进行化学修饰，使得抗体组合物的口服投递是有效的。通常，所考虑的化学修饰是将至少一个部分连接抗体，其中所述部分允许(a)抑制蛋白质水解；和6)从胃或肠吸收至血流中。还希望的是提高抗体的总体稳定性和提高在体内的循环时间。这样的部分的实例包括:聚乙二醇、乙二醇和丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖(dextran)、聚乙烯醇、聚乙烯批咯烧酮和聚脑氨酸。Abuchowski和Davis,1981,"SolublePolymer-EnzymeAdducts"见:EnzymesasDrugs,Hocenberg和Roberts编，Wiley-1nterscience,NewYork,NY,pp.367-383;Newmark,etal.,1982,J.App1.B1chem.4:185-189。可以使用的其他聚合物是聚-1，3-二氧戍烧(d1xolane)和聚-1，3，6-三氧戍烧(t1xocane)。如上所示，对于药物使用，优选聚乙二醇部分。[0205]对于组合物，释放位置可以是胃、小肠(十二指肠、空肠或回肠)或大肠。本领域技术人员可利用将不会在胃中溶解而将在十二指肠或肠中其他位置释放材料的制剂。优选，释放将避免胃环境的不利影响，通过保护抗体或通过超出胃环境，如在肠中释放生物活性材料实现。[0206]为了确保完全的胃抵抗力，需要至少在ρΗ5.0不能透过的涂层材料(coating)。用作肠溶衣的更常见惰性成分的实例是偏苯三酸醋酸纤维素(celluloseacetatetrimellitate,CAT)、轻丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(hydroxypropylmethylcelIulosephthalate,HPMCP)>HPMCP50、HPMCP55、聚乙烯邻苯二甲酸醋酸酯(polyvinylacetatephthalate,PVAP)>EudragitL30D、Aquateric、醋酸邻苯二甲酸纤维素(celluloseacetatephthalate,CAP)、EudragitL、EudragitS和虫胶(Shellac)。这些涂层材料可以用作混合膜。[0207]涂层材料或涂层材料混合物也可以用于片剂上，其不是打算用于针对胃提供保护。这可以包括糖涂层材料，或使得片剂更容易吞咽的涂层材料。胶囊可以由硬壳(如明胶)组成，用于投递干的治疗剂，即粉末；对于液体形式，可以使用软明胶壳。扁囊剂(cachet)的壳材料可以是厚淀粉或其他可食用纸。对于丸剂、锭剂、模制片或模印片(tablettriturate),可以使用润湿成块技术(moistmassingtechnique)。[0208]组合物可以以约Imm颗粒大小的颗粒或小球(pellet)形式作为细的多颗粒包括在制剂中。用于胶囊给药的材料的制剂也可以作为粉末、轻度压制栓(lightlycompressedplug)或甚至作为片剂。可以通过压制来制备治疗剂。[0209]着色剂和调味剂可以全部包括。例如，可以(如通过脂质体或微球体包囊)配制组合物，然后将其进一步包括在可食用产品内，所述可食用产品如含有着色剂和调味剂的冷藏饮料。[0210]可以用惰性材料稀释或增加治疗剂的体积。这些稀释剂可以包括碳水化合物，尤其是甘露糖醇、a-乳糖、无水乳糖、纤维素、蔗糖、改性葡聚糖和淀粉。特定的无机盐也可以用作填充剂，包括三磷酸I丐、碳酸镁和氯化钠。一些可购得的稀释剂是Fast-Flo、Emdex、STA-RxI500>Emcompress和Avicell。[0211]崩解剂可以包括在固体剂型的组合物制剂中。用作崩解剂的材料包括但不限于淀粉，包括基于淀粉的商业崩解剂。淀粉轻乙酸钠(sodiumstarchglycolate)、Amberlite、羧甲基纤维素钠、ultramylopectin、海藻酸钠、明胶、橙皮、酸性羧甲基纤维素、天然海绵和膨润土都可以使用。崩解剂的另一种形式是不溶性阳离子型交换树脂。粉末状树胶可以用作崩解剂和粘合剂，并且这些可以包括粉末状树胶，如琼脂、梧桐胶(Karaya)或西黄蓍胶。海藻酸及其钠盐也可以用作崩解剂。[0212]粘合剂可以用于将组合物保持在一起来形成硬片剂并且包括来自天然产物的材料，如阿拉伯胶(acacia)、西黄蓍胶、淀粉和明胶。其他包括甲基纤维素(MC)、乙基纤维素(EC)和羧甲基纤维素(CMC)0聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和羟丙基甲基纤维素(HPMC)都可以用于醇性溶液中，以将治疗剂造粒。[0213]抗摩擦剂(ant1-frict1nalagent)可以包括在组合物的制剂中，以防止配制处理过程中的粘着。润滑剂可以用作治疗剂和模壁之间的层，并且这些可以包括但不限于:硬脂酸，包括其镁和钙盐、聚四氟乙烯(PTFE)、液体石蜡、植物油和蜡。还可以使用可溶性润滑齐U，如月桂基硫酸钠、月桂基硫酸钠镁、各种分子量的聚乙二醇、Carbowax4000和6000。[0214]可以加入提高配制过程中药物流动特性和帮助压制过程中重排的助流齐Li。助流剂可以包括淀粉、滑石、热解娃土(pyrogenicsilica)和水合娃招化合物(siIicoaluminate)。[0215]为了帮助组合物溶解至含水环境中，可以加入表面活性剂作为润湿剂。表面活性剂可以包括阴离子型去污剂，如月桂基硫酸钠、丁二酸二辛酯磺酸钠(d1ctylsodiumsulfosuccinate)和二辛基横酸钠(d1ctylsodiumsulfonate)。可以使用阳离子型去污剂并且可以包括苯扎氯铵或节索氯铵(benzethomiumchloride)。可以包括在制剂中作为表面活性剂的一批潜在非离子型去污剂是聚桂醇400(lauromacrogol400)、聚氧乙烯40硬脂酸酯(polyoxyl40stearate),聚氧乙烯氢化蓖麻油(polyoxyethylenehydrogenatedcastoroil)10、50和60,甘油单硬酯酸酯,聚山梨酯40、60、65和80,鹿糖脂肪酸酯，甲基纤维素和羧甲基纤维素。这些表面活性剂可以单独或以不同比例作为混合物存在于制剂中。[0216]可以口服使用的药物制剂包括明胶制备的推入式(push-fit)胶囊，以及软的、由明胶和增塑剂(如甘油或山梨醇)制备的密封胶囊。推入式胶囊可以含有活性成分，其混有填充剂，如乳糖、粘合剂，如淀粉和/或润滑剂，如滑石或硬脂酸镁，以及任选的稳定剂。在软胶囊中，组合物可以溶解或悬浮于合适的液体中，如脂肪油、液体石蜡、或液体聚乙二醇中。另外，可以加入稳定剂。也可以使用为口服配制的微球体。这样的微球体在本领域已经被明确定义。所有口服给药的制剂都应当为适于这样给药的剂量。[0217]对于含服给药，组合物可以采用以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。[0218]对于吸入给药，组合物可以方便地以从压缩包装或喷雾器中呈递的气雾剂喷雾形式投递，其中使用合适的推进剂，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体。在压缩的气雾剂的情况中，剂量单位可以通过阀确定图提供投递计算量。例如用于吸入器或吹入器中的明胶的胶囊和药筒，可以配制成含有化合物和合适粉末基(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。[0219]本文中还考虑了肺投递。在吸入并穿过肺上皮衬层到血液中时，组合物被投递给哺乳动物的肺。吸入分子的其他报道包括Adjei等，1990,PharmaceuticalResearch,7:565-569;Aajei等，1990，Internat1nalJournalofPnarmaceutics,63:135-144(醋酸亮丙瑞林(leuprolideacetate))；Braquet等，I989，JournalofCard1vascularPharmacology,13(增补5):143-146(内皮缩血管妝-1);Hubbard等，1989，AnnalsofInternalMedicine,Vol.1ll,pp.206—212(a1-抗膜蛋白SI)；Smith等，1989,J.Clin.1nvest.84:1145-1146(a-1-蛋白酶)；0swein等，1990,^Aerosolizat1nofProteins",ProceedingsofSymposiumonRespiratoryDrugDeliveryII,Keystone,Colorado,March,(重组人生长激素)；Debs等，1988,J.1mmunol.140:3482-3488(干扰素_g和肿瘤坏死因子α)和Platz等，美国专利N0.5，284，656(粒细胞集落刺激因子)。用于全身作用的肺投递药物的方法和组合物描述于1995年9月19日公告的Wong等的美国专利N0.5，451，569中。[0220]考虑了一大批机械装置都可以用于实施本发明，所述装置设计用于肺投递治疗产品，包括但不限于喷雾器、定量剂量吸入器和粉末吸入器，所有都是本领域普通技术人员熟知的。[0221]适于组合物投递的可购得装置的一些特定实例是Ultravent喷雾器，由Mallinckrodt,Inc.,St.Louis,Missouri制造；AcornII喷雾器，由MarquestMedicalProducts,Englewood,Colorado制造；Ventolin定量剂量吸入器，由GlaxoInc.,ResearchTrianglePark,NorthCarolina制造；Spinhaler粉末吸入器，由FisonsCorp.,Bedford,Massachusetts制造。[0222]所有这样的装置都需要使用适于分散的制剂。通常，每种制剂对所用装置类型是特定的，并且除了治疗中可用的常见稀释剂、佐剂和/或载体之外，还可以涉及合适的推进剂材料的使用。此外，考虑使用脂质体，微囊或微球体，包合复合物(inclus1ncomplex),或其他类型的载体。依据化学修饰的类型或所用装置类型，化学修饰的抗体也可制备成不同的制剂。[0223]适于与喷射或超声喷雾器一起使用的制剂通常将包括溶于水的治疗剂，浓度为约0.1至25mg生物活性治疗剂/mL溶液。此制剂还可以包括缓冲剂和单糖(例如，用于抗体稳定和调节渗透压)。喷雾器制剂还可以含有表面活性剂，以减少或防止由溶液雾化形成气溶胶引起的表面诱导的治疗剂聚集。[0224]用于与定量剂量吸入器装置一起使用的制剂通常将包括含治疗剂的精细分开粉末，所述治疗剂在表面活性剂的帮助下悬浮于推进剂中。推进剂可以是任何常规的用于此目的的物质，如氯氟烃、氢氯氟烃、氢氟烃或烃，包括三氯氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯四氟乙烷和1，1，1，2-四氟乙烷，或其组合。合适的表面活性剂包括脱水山梨醇三油酸酯(sorbitantr1leate)和大豆卵磷脂。油酸也可以用作表面活性剂。[0225]从粉末吸入器装置分散的制剂将包括精细分开的含治疗剂的干粉，并且还可以包括膨胀剂(bulkingagent)，如乳糖、山梨糖醇、蔗糖或甘露糖醇，其量有助于粉末从装置中分散出来，例如制剂重量的50-90%。为了最有效递送给远端肺，治疗剂可以制成平均粒径小于1mm(或微米)的颗粒形式，最优选0.5至5mm。[0226]还考虑了本发明的药物组合物的经鼻投递。经鼻投递允许在将治疗产物施用于鼻子之后使本发明药用组合物直接传到血流中，而不必需将产物沉积在肺中。经鼻投递的制剂包括含有葡聚糖或环葡聚糖(cyclodextran)的那些。[0227]对于鼻给药，可用的装置是小的、硬的瓶，其连接有定量剂量喷雾器。在一个实施方案中，定量剂量是通过将本发明的药物组合物溶液吸取到确定体积的室内，该室具有适于雾化的孔和气雾剂制剂，其通过在将室中的液体压缩时形成喷雾进行。将所述室压缩以施用本发明的药物组合物。在特定的实施方案中，该室是活塞装置。这样的装置可市售购得。[0228]或者，可以使用具有孔或开口的塑料挤瓶，所述孔或开口尺寸为当挤压时通过形成喷雾而使气雾剂制剂雾化。开口通常在瓶子的顶部，并且顶部通常逐渐变细，以部分适合放入鼻腔，来有效地施用气雾剂制剂。优选，鼻吸入器提供定量的气雾剂制剂，用于施用测定剂量的药物。[0229]组合物还可以配制成直肠或阴道组合物，如栓剂或保留灌肠剂，例如，含有常规栓剂基料，如可可脂或其他甘油三酯。[0230]除了之前所述的制剂，组合物还可以配制成贮存制剂(cbpotpr印arat1n)。可以用合适的聚合或疏水性材料(例如，作为可接受油中的乳液)或离子交换树脂来配制这样的长效制剂，或作为略溶性衍生物，例如，作为略溶性盐来配制。[0231]药物组合物还可以包括合适的固体或凝胶相载体或赋形剂。这样的载体或赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物，如聚乙二醇。[0232]合适的液体或固体药物制剂形式是例如水性或盐水溶液(用于吸入、微囊化、包囊(encochleate)、覆盖在显微金颗粒上、包括在脂质体中、雾化)、气雾剂、丸剂,用于植入皮肤中、或干燥到刮蹭入皮肤中的尖锐物体上。药物组合物还可以包括颗粒、粉剂、片剂、包衣片剂、胶囊(微胶囊)、栓剂、糖衆、乳剂、悬浮液、霜剂(cream)、滴剂(drop)或延迟释放活性化合物的制剂，在这些制剂中，如上所述常规地使用赋性剂和添加剂和/或助剂，如崩解齐IJ、粘合剂、包衣剂、溶胀剂、润滑剂、调味剂、甜味剂或增溶剂。所述药物组合物适合用于多种药物传送系统。对于药物投递方法的简短评述，参见Langer,Science249:1527-1533,1990，将其按引用并入本文中。[0233]其他治疗剂可以本身(纯的)或以其药学可接受盐的形式来给药。当用于药物中时，盐应当是药学可接受的，但非药学可接受盐可以方便地用于制备其药学可接受盐。这样的盐包括但不限于，从以下酸制得的那些:盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、醋酸、水杨酸、对甲苯磺酸、酒石酸、柠檬酸、甲烷磺酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。此外，这样的盐可以作为碱金属或碱土金属盐来制备，如羧酸根的钠、钾或钙盐。[0234]合适的缓冲剂包括:醋酸和盐(l-2%w/v);柠檬酸和盐(l-3%w/v);硼酸和盐(0.5-2.5%w/v);以及磷酸和盐(0.8-2%w/v)。合适的防腐剂包括苯扎氯铵(0.003-0.03%w/V);氯丁醇(chlorobutanol)(0.3-0.9%w/v);对轻基苯酸酯类(parabens)(0.01-0.25%w/V)和硫柳汞(0.004-0.02%w/v)o[0235]本发明的药物组合物包含含有在药学可接受载体中的有效量的抗体和任选地治疗剂。术语药上可接的载体意思是一种或多种相容的固体或液体填充剂、稀释剂或包囊物质，其适用于给药于人或其他脊椎动物。术语载体表示有机或无机成分(天然或合成的)，活性成分与其组合，以促进应用。药物组合物的成分还能够与本发明的化合物混合，并且彼此混合，以使得不存在会实质性损害期望药物功效的相互作用的方式来混合。[0236]可以在颗粒中提供特意包括但不限于抗体的组合物。本文中所用的颗粒是指纳米颗粒或微粒(或在一些情况下更大)，其可以全部或部分由抗体组成。所述颗粒可以在围绕有涂层材料，包括不限于肠溶衣的核心中含有所述治疗剂。所述治疗剂也可以分散在整个的颗粒中。治疗剂也可被吸附至颗粒中。颗粒可以具有任何级别的释放动力学，包括零级释放、一级释放、二级释放、延迟释放、持续释放、立即释放及其任意组合等等。除了治疗剂以外，颗粒可以包括任何常规用于药学和医学中的那些材料，包括但不限于可蚀性(erodible)、非可蚀性、生物可降解性、或非生物可降解性材料或其组合。颗粒可以是含有溶液或半固体状态抗体的微囊。颗粒实质上可以是任何形状。[0237]非生物可降解性和生物可降解性聚合材料都可以用于制备投递治疗剂的颗粒。这样的聚合物可以是天然的或是合成的聚合物。聚合物的选择是基于释放所期望的时段。特别感兴趣的生物粘性聚合物包括生物可蚀性水凝胶，其描述于H.S.Sawhney,C.P.Pathak和J.A.Hubell，Macromolecules,(1993)26:581-587，将其教导并入本文中。这些包括聚透明质酸(polyhyaluronicacids)、酪蛋白、明胶、明胶蛋白(glutin)、聚酐、聚丙烯酸、海藻酸盐、壳聚糖(chitosan)、聚(甲基丙烯酸甲酯)(poly(methylmethacrylates))、聚(甲基丙烯酸乙酯)(poly(ethylmethacrylates))、聚(甲基丙烯酸丁酯)(poly(butylmethacrylate))、聚(甲基丙烯酸异丁酯)(poly(isobutylmethacrylate))>聚(甲基丙烯酸己酯)(poly(hexylmethacrylate))、聚(甲基丙烯酸异癸酯)(poly(isodecylmethacrylate))>聚(甲基丙烯酸月桂基酯)(poly(Iaurylmethacrylate))、聚(甲基丙烯酸苯酯)(poly(phenylmethacrylate))、聚(丙烯酸甲酯)(poly(methylacrylate))、聚(丙烯酸异丙基酯)(poly(isopropylacrylate))、聚(丙烯酸异丁基酯)(poly(isobutylacrylate))和聚(丙烯酸十八烧基酯)(poly(octadecylacrylate))。[0238]组合物可以包括在控制释放系统中。术语“控制释放”意图指的是任何含药制剂，其中药物从制剂中释放的方式和概况是受控制的。这涉及立即和非立即释放制剂，非立即释放制剂包括但不限于持续释放和延迟释放制剂。术语“持续释放”(也称“延长释放”)以其常规含义来使用，指的是能够在延长的时间段里逐渐释放药物，并且优选地，尽管不是必需地，导致药物在延长的时间段里基本保持恒定的药物血液水平的药物制剂。术语“延迟释放”以其常规含义来使用，指的是在施用制剂和自其释放药物之间有时间延迟的药物制剂。“延迟释放”可以或可以不包括在延长的时间段里逐渐释放药物，因而其可以是或不是“持续释放”。[0239]使用长期持续释放植入物可以特别适用于治疗慢性状况。在此所用的“长期释放”，指的是植入物被构造和安排成投递治疗水平的活性组分至少达7天，优选30-60天。长期持续释放植入物是本领域普通技术人员公知的，并且包括上述的一些释放系统。[0240]本文中还提供了含有抗体组合物的试剂盒。所述试剂盒包括抗体组合物，并且还可以含有一个或多个小瓶或容器。所述试剂盒还可以包括用于将成分给药于患有本文中所述疾病(如癌症)或具有这些疾病症状的受试者的说明书。[0241]在一些实施方案中，试剂盒包括药物制剂小瓶、药物制剂稀释剂小瓶和抗体。含有用于药物制剂的稀释剂的小瓶是任选的。稀释剂小瓶含有稀释剂，如生理盐水，用于稀释抗体的浓缩溶液或冻干粉。说明书可以包括混合特定量的稀释剂和特定量的浓缩药物制剂，以制备用于注射或输注的最终制剂的说明书。说明书可以包括关于用于注射器或其他给药装置的说明书。说明书20可以包括用于用有效量的抗体治疗患者的说明书。还将理解，无论容器是瓶、带隔膜的小瓶、带隔膜的安瓿瓶、输注袋等等，含制剂的容器可以含有标记，如常规记号，当制剂被高压灭菌或其他方式灭菌时所述标记改变颜色。[0242]通过以下实施例来进一步说明本发明，其决不应当解释为进一步限制。在整个本申请中引用的所有参考文献(包括文献参考、公告专利、公开的专利申请和共同悬而未决的专利申请)的全部内容特意以引用方式并入本文中，特别是对于以上提及的教导。然而，任选参考文献的引用不是用来承认参考文献是现有技术。实施例[0243]1.表达高半乳糖基化抗体的转基因山羊的产生[0244]⑶20抗体构建体的产生[0245]图1中提供了用于转基因CD20抗体(Tg20)的氨基酸序列:轻链是SEQIDNO:1,重链是SEQIDNO:2。将编码用于转基因⑶20抗体的氨基酸序列的核酸序列用于产生表达转基因CD20抗体(Tg20)的转基因山羊。将酪蛋白启动子与编码用于转基因CD20抗体的氨基酸序列的核酸序列可操作地连接，以促进核酸序列在山羊乳腺中的表达。[0246]使用以下添加/改变来合成编码抗CD20抗体的轻链和重链的核酸序列:[0247]I)添加侧翼XhoI位点，以促进亚克隆至表达载体BcSOO中。[0248]2)就在两个构建体上的启动物ATG上游添加Kozak共有序列(GCCACC)。[0249]3)在重链的终止密码子附近引入沉默突变以破坏潜在的剪接位点:GGGTAAATGA(SEQIDNO:3)至GGGAAAATGA(SEQIDNO:4)。[0250]将轻链和重链序列都亚克隆至表达载体Bc800的XhoI克隆位点中，所述载体在SuperCos主链中含有禽β球蛋白绝缘子序列，6.2kb的5’β酪蛋白启动子序列，XhoI克隆位点，7.1kb的3’β酪蛋白下游序列，另一个绝缘子序列，G418抗性标记物和最终的绝缘子序列。(参见图2)。通过氯化铯离心来制备质粒DNA。使用侧翼NotI位点来释放SuperCos主链，并且通过电泳通过琼脂糖凝胶与转基因片段分离。然后将所得到的纯化核酸片段用于体细胞核转移。将编码TG20的重链和轻链的cDNA片段插入乳腺特异性表达载体中，以获得2个转基因，将其共转染至雌山羊胎细胞中(LipofectAMINE，Gibco)。按照之前所述的进行核转移(Melican等，2005；Ther1genology63:1549)。[0251]皮肤成纤维细胞系的产生[0252]将来自新鲜山羊皮肤活检样品的成纤维细胞在体外在原代培养物中维持。简而言之，将皮肤样品在无Ca++和无Mg++的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中切碎，用EDTA中的稀胰蛋白酶收集，以回收单细胞悬浮液，并且在37°C培养。将汇合的细胞用胰蛋白酶处理并且传代培养。将等份的细胞在液氮中冷冻保存，供未来使用。[0253]转染细胞系的分析[0254]通过使用对转基因特异性的探针进行的Southern印迹分析来表征转染的细胞，以确定转基因拷贝数并鉴定潜在的重排。还通过FISH分析了每个细胞系，以证实单个整合并确定染色体位置。进行细胞遗传分析，以证实细胞系的核型。PCR、southern印迹和FISH分析证实了重链和轻链Ig链转基因两者的存在。[0255]FISH[0256]对于分裂间期FISH，将来自每个扩大菌落的几百个细胞固定在滤器上并且与经洋地黄毒苷(digoxigenin)标记的扩增转基因特异性探针杂交。对于中期FISH，将细胞在LabTekChamber载玻片(Nunc,Rochester,NY)上培养,并且用5_溴_2’脱氧尿卩密唳(BrdU)脉冲，以允许进行复制显带(replicat1nbanding)。使用偶联有FITC的抗洋地黄毒苷检测探针结合，并且用4’，6_二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)复染。使用ZeissAx1skop显微镜(ZeissImaging,Thornwood,NY)、Hamamatsu数石马相机(Hamamatsu,Bridgewater,NJ)和ImagePro-Plus软件(MediaCybernetics,SilverSprings,MD)来捕获图像。[0257]细胞遗传分析[0258]对供体转染的成纤维细胞系进行了细胞遗传分析。通过切口平移，用洋地黄毒苷-dUTP标记转基因探针。用缀合有FITC的抗洋地黄毒苷或用缀合有辣根过氧化物酶的抗洋地黄毒苷，接着用缀合有FITC的Tyramide检测探针对变性染色体的结合。用DAPI显现染色体显带模式。山羊具有60条染色体，所有都是具近端着丝点的(在一端而不是在中间或靠近中间具有着丝点)。对中期扩散(metaphasespread)检查大体异常(grossabnormality)的证据，如染色体丢失、复制或大体重排(grossrearrangement)。[0259]表达⑶20抗体的转基因动物的产生[0260]将用于⑶20抗体的转基因构建体用于产生转基因山羊。通过引入1:1的重链和轻链构建体混合物来生成产生成熟抗体的转基因山羊。[0261]使用本领域常规的核转移技术产生具有预定遗传学的转基因山羊。通过标准转染，将上述转基因构建体引入皮肤成纤维细胞系中。针对转基因拷贝数、完整性和整合位点，在体外筛选重组原代细胞系，之后将它们用于生成转基因动物。[0262]在USDA登记的、FDA和EMA检查的机构饲养山羊。使用从血液和组织样品分离的基因组DNA进行了后代的转基因分析(FISH、PCR和Southern印迹)。使用从血液和组织样品分离的基因组DNA进行后代转基因分析(FISH、PCR和Southern印迹)(参见图7)。[0263]抗体的纯化[0264]从转基因山羊的乳中收集抗体。山羊乳来自激素诱导的转基因山羊的泌乳(参见例如Ebert等，1994，B1techl2:699-712)。通过离心，将乳澄清以除去大部分酪蛋白和脂肪。然后通过蛋白A色谱,接着通过QSepharoseFastFlow上的阴离子交换色谱来纯化抗体。将最终产物配制在朽1檬酸钠/氯化钠+聚山梨酯80(polysorbate80)中。[0265]2.转基因产生的抗体的分析[0266]A.材料和方法[0267]糖基化序型分析(profiling)[0268]使用ProzymeN-去糖基化试剂盒(SanLeandro,CA,USA),根据制造商的程序,进行了抗体样品的N-去糖基化。简而言之，将300μg干燥的抗体样品在135μL10-mM含水Tris-HCl缓冲液pH8.0中恢复，并且加入4.5μL10%(ν/ν)β-巯基乙醇水溶液，以减少抗体二硫桥键。通过加入7.5mU肽酰-N-糖苷酶(PNG酶)F，接着在37°C孵育过夜来进行N-去糖基化。[0269]在这个阶段，在缓慢水解成还原性聚糖之前，许多N-聚糖作为葡基胺(glycosylamine)释放出来。通过将5%(ν/ν)终浓度的冰醋酸加入经PNG酶F-消化的抗体样品中，接着在室温孵育一小时来进行还原性聚糖的完全再生。通过固相提取(SPE)Jf新鲜再生的还原性N-聚糖混合物纯化至50-mgHypersepHypercarb多孔石墨化碳(PGC)柱(ThermofischerScientific,Bremen,德国)上(Packer等，1998)。用ImL甲醇和2XImL0.1%(ν/ν)三氟乙酸水溶液(TFA)依次洗涤PGCSPE柱。将寡糖溶解于200μL0.1%(v/v)TFA水溶液中，施加于柱上并且用2XlmL0.1%(v/v)TFA水溶液洗涤。通过施加含有0.1%(v/v)TFA的2X400μL25%(ν/ν)乙腈水溶液来进行聚糖的洗脱，并将洗脱液真空干燥。[0270]通过含有0.35Μ2-氨基苯甲酰胺(2_ΑΒ)和IM氰基硼氢化钠(sodiumcyanoborohydride)的DMSO中的10μL33%(ν/ν)醋酸，通过回收干燥的聚糖，用2-ΑΒ将PGC纯化的聚糖还原氨基化，并且将反应在37°C保持16小时。将2-AB-标记的N-聚糖纯化至50-mgOasis聚合HLBSPE柱上,用于亲水性相互作用色谱(HILIC)模式中(Waters,Milfors，MA，USA)。用lmL20%(ν/ν)乙腈水溶液依次润湿HILICSPE柱，并用2XlmL乙腈平衡，然后将溶解于乙腈中的2-AB衍生物装载于SPE柱上。用2XImL乙腈洗涤柱后，接着通过施加2X500μL20%(ν/ν)乙腈水溶液来进行2-ΑΒ衍生物的洗脱。将l_mL洗脱液真空浓缩至50μL。[0271]使用含有3μηι填充微粒(packingparticule)的150x4.6mmIDTSK-凝胶酰胺-80HILICHPLC柱(T0S0HB1science,KingofPrussia,PA,USA)，通过正相高效液相色谱(NP-HPLC)来最终对纯化的2-AB衍生物确定序型(Guile等，1996)。流动相由调节为PH4.4的50-mM甲酸铵水溶液(A)和乙腈(B)的混合物组成。运行流速和温度分别为ImL/min和30°C。使用80%(ν/ν)乙腈水溶液将5μL纯化的2-ΑΒ衍生物稀释40倍，并且将50μL新鲜振荡的有机混合物注入用80%(ν/ν)Β平衡的HILIC柱中。一旦注入样品，如下进行N-聚糖的分离:15min内从80%至70%(v/v)B；150min内从70%至55%(v/v)B；5min内从55%至10%(ν/ν)B;10min过程中10%(ν/ν)B;lmin内从10%至80%(v/v);45分钟过程中80%(ν/ν)B(再次平衡)。用330mm的激发波长和420nm的发射波长通过荧光检测(FD)进行突光衍生物的检测。[0272]参考文献:GuileGR,RuddPM,WingDR,PrimeSB,DwekRA.Arapidhigh-resolut1nhigh-performanceliquidchromatographicmethodforseparatingglycanmixturesandanalyzingoligosaccharideprofiles.AnalB1chem.1996Sep5;240(2):210-26;PackerNH,LawsonMA,JardineDR,RedmondJff.Ageneralapproachtodesaltingoligosaccharidesreleasedfromglycoproteins.GlycoconjJ.1998Aug;15(8):737-47。[0273]与人CD16a的结合[0274]在Biacore系统(X100,GEHealthcare)上使用表面等离子共振(SPR)进行了与人⑶16a的结合。在该测定法中，使用2183RU水平的胺化学，将⑶16a固定于SPR芯片上。将待测试的抗体在PBS缓冲液中稀释成不同浓度(50、100和200nM)，并且在相同缓冲液的情况中依次在固定化CD16a上注射。在芯片上，将一个流动池用作对照，以减去由非特异性相互作用产生的背景。在每次注射之间，用3.75nMNaOH溶液进行芯片的再生。[0275]CD16测定法[0276]简而言之，NK效应细胞已经被永生化转基因细胞性细胞(表达人⑶16a的Jurkat细胞)替代，以允许实验的高再现性。将Jurkat⑶16a细胞、WIL2-S细胞和PMA(佛波醇-醋酸肉豆蘧酸酯(Phorbol-MyristateAcetate))分别用作效应细胞、祀细胞和非特异性激活齐U，并且用一定剂量范围的待测试抗体孵育。孵育后，Jurkat细胞激活导致了IL-2细胞因子释放，通过特异性ELISA来定量(VivierE等，Int.1mmunol.1992,4(11):1313-1323)。上清液细胞培养物中的IL-2量与要作为测试的免疫复合物的WIL2-S/抗体结合并激活CD16a的能力直接相关。[0277]ADCC测定法[0278]通过乳酸脱氢酶释放测定法来实现用于测试待测试抗体的药理活性的ADCC(抗体依赖性细胞性细胞毒性)。使用NK细胞分离试剂盒和AutoMacs自动装置(Miltenyib1tec),使用免疫磁性细胞分选，来纯化用作效应细胞的来自健康供体的人NK细胞。将维持于含有10%FCS的IMDM(PAAThecellculturecompany,Lesmureaux,法国)中的培养物中的伯基特(Burkitt)氏淋巴瘤Raji细胞系(ATCCCCL86)用作靶细胞。在微板中不同浓度抗体的存在下，以效应物/靶物比例R=10/l共同孵育细胞，并且在含有5%C02的潮湿气氛中，在37°C孵育4小时。在测试中包括阴性对照孔，其包括仅含有靶细胞的孔和另一仅含有效应细胞的孔，以实现区分自发效应细胞死亡对效应细胞介导的靶细胞死亡。还运行了“抗体对照”孔(其通过共同孵育靶细胞和抗体来制备)以测试在效应细胞不存在下抗体对靶细胞的内在细胞毒性特性。最后，通过在抗体不存在下共同孵育靶细胞和效应细胞来制备对照孔，以评价潜在的抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性。离心后，使用细胞毒性检测试剂盒(RocheAppliedScience,德国)来测试上清液的LDH释放。[0279]融化后，洗涤PBMC并且悬浮于补充了10%FCS的RPMI中。在4°C将MEC-1或SUDHL-8细胞系与20微克/ml的人单抗一起孵育30分钟。洗涤后，用羧基荧光素双乙酸酯琥珀酰亚胺酯(CFSE)将细胞系标记10分钟。将标记的靶细胞悬浮于RPMI1640(+10%FCS)中，并且以不同的效应物/靶物(E/T)比例与PBMC混合。将细胞在37°C孵育4小时，并在用PI染色后通过FC分析。使用来自Miltenyi的试剂盒从来自CLL病人或健康志愿者的PBMC富集人B-CLL或人淋巴B细胞。[0280]根据式[(抗体+靶物+NK)-(抗体+革巴物)]/[100_(抗体+革巴物)]_[(NK+靶物)_(抗体+靶物)]/[100-(抗体+靶物)]，计算每个抗体浓度的ADCC活性(％)。使用Prism软件(GraphpasSoftwareInc.，LaJolla,CA,USA)获取实验值并且与S形剂量应答曲线拟合，并且测定E(最大细胞毒性)和EC5tl(为了获得50%￡^±需要的抗体浓度)。[0281]CDC测定法[0282]在人血清的存在下，将待测试的抗体以一个浓度与表达⑶20抗原的WIL2-S细胞混合。在每个测试中，独立制备八个样品。在37°C用10微克/mL的人单抗和不同浓度的Clq掺入人Clq消减的血清中的细胞10分钟。通过插入DNA染料碘化丙啶(PI)，通过荧光来确定细胞死亡。荧光水平与细胞培养基中的活细胞数量成比例(O’Brien，J.等(2000)Eur.J.B1chem.267,5421-5426)。[0283]猕猴药动学研究[0284]称猴(Macacafascicularis)重量范围为3.1至4.4kg。在给药开始前，将所有动物称重并且使用计算机化随机化程序分配给处理组。IV施用定量给药制剂。在给药开始之前采集两次血样(包括备用动物)，第二次取样在给药前I至4天之间收集，然后在第I天(给药后4小时)，并且在第2至8天、第15、22、29、36、43、50、57、64、71、78、85和92天收集。在第92天将动物实施安乐死。使用认证的分析方法来分析血样。使用针对细胞表面标记物的特异性抗体，通过流式细胞术定量淋巴细胞群。通过切除活检收集淋巴结(LN)，使用针对细胞表面标记物的特异性抗体，通过流式细胞术，作为CD45+淋巴细胞的相对比例来定量淋巴细胞群。使用WinNonlin药动学软件(PharsightCorp.,MountainView,加利福尼亚)来估算药动学参数。将非隔室(non-compartmental)方法用于参数估计(参见图10和图11)。[0285]全血实验[0286]根据图6，进行该测试以评价Tg20通过所有自然免疫现象(特别是⑶C和ADCCHS导人供体的全血中淋巴B细胞消减的能力。[0287]通过静脉内途径给药两个不同剂量时，针对猕猴中不同的抗-CD20抗体:RTX和TG20，监测抗体在B细胞消减(在外周血中和一些淋巴器官中)中的活性和药动学特征。[0288]研究设计如下:[0289]-剂量水平:0.03mg/kg/天(低)和0.3mg/kg/天(高)[0290]-三只动物/剂量/抗体[0291]血液表型确定[0292]在给药开始之前采集两次血样(包括备用动物)，第二次采样在给药前I至4天之间，然后在第I天(给药后4小时)，并且在第2至8天、第15、22、29、36、43、50、57、64、71、78、85和92天采样。在第2至92天过程中，在大致相同的时间采集血样。从股静脉采集ImL体积的血液至含有K2EDTA作为抗凝剂的试管中，用于淋巴细胞子集的分析。第22天后的预定终止时没有从动物采集血样。将样品温和混合并且保持在环境条件下直至转移至测试机构的免疫学实验室用于处理。[0293]使用认证的分析方法来分析血样。使用针对细胞表面标记物的特异性抗体，通过流式细胞术，将下表中鉴定的淋巴细胞群进行定量(相对百分比和绝对数量)。使用以下抗体组处理样品:CD45/CD3/CD8/CD4、CD45/CD3/CD8/CD16和CD45/CD3/CD20/CD40，直至第22天。然后从第29天至第92天，只评价了淋巴B细胞抗体组(⑶45/⑶3/⑶20/⑶40)。使用BDTruCount试管，针对每个抗体组试管测定了总淋巴细胞数，并且报告为每个样品的平均⑶45+淋巴细胞/μL全血。没有使用同种型对照，并且将DPBS试管用作负对照。[0294]淋巴结免疫表型确定[0295]在第8天时，通过切除活检从动物收集右腹股沟淋巴结(LN)，并且在第22天通过切除活检收集左腹股沟淋巴结。在第92天(验尸时)通过完全去除收集右腋下淋巴结。在预定外科手术之前，使动物禁食过夜。在外科手术之前至少30分钟，给每只动物皮下给予卡洛芬(Carprofen)(4mg/kg)。在外科手术之前和2天后，每只动物接受了肌内注射DuploeillilV?(lmL)。用肌内注射氯胺酮(ketamine)、赛拉嗪(xylazine)和格隆溴铵(glycopyrrolate)使每只动物预麻醉，以在术前准备之前获得充分镇静。动物经受了气管插管，并且此后按照SOP预麻醉和麻醉(SOPPre-anesthesiaandAnesthesia),使用异氟烷和氧气维持麻醉。使用脉搏氧饱和度仪(pulseoximeter)来监控心率和02饱和度。在外科手术之前，将温和的眼润滑剂给予每只眼睛。一旦动物充分麻醉，修剪右或左腹股沟区域，并且按照SOP关于手术部位准备进行准备。在右或左腹股沟区域形成大约2-3cm的切口。小心地解剖周围的组织，以观察右或左腹股沟淋巴结。使用剪刀和镊子，收集淋巴结。在伤口闭合之前，给予1mL温盐水的盐水冲洗。收集后，使用可吸收缝合线闭合皮下组织和皮肤。将淋巴结在环境室温下保持在大约5mL测定培养基(含有5%(v/v)FBS的RPM1-1640)中并且转移至免疫学实验室，直至处理/分析。使用针对细胞表面标记物的特异性抗体，通过流式细胞术，作为CD45+淋巴细胞的相对百分比来定量以上文本表中鉴定的群。使用以下抗体组来处理样品:⑶45/⑶3/⑶8/⑶4、⑶45/⑶3/⑶8/⑶16和⑶45/⑶3/⑶20/⑶40。没有使用同种型对照，并且将DPBS试管用作阴性对照。[0296]B:结果[0297]SDSPAGE:[0298]在非还原条件下进行了SDS-PAGE分析，并且在考马斯蓝染色后(参见图3)，对Tg20和低岩藻糖参照抗体(对应于完整抗体)都显示出168kDa的主条带。对参照抗体检测到了高分子量(HMW)条带，而对Tg20没有观察到它。银染后，对Tg20也检测了该HMW条带以及几个通常对参照抗体检测到的其他次要条带。这些次要条带可以对应于抗体的部分还原形式:针对HC-HC-LC的147kDa，针对HC-HC的IlOkDa和针对HC-LC的71kDa。168kDa的主条带估计为95%的总蛋白含量，而产物相关杂质的其他条带仅占5%，表明Tg20的低水平降解。在还原条件下进行的SDS-PAGE分析(参见图3)显示出54和28kDa处的两条主条带，分别对应于抗体的重链和轻链。这两个抗体呈现出相同的表观分子量。[0299]糖基化序型分析[0300]图4显示了通过PNG酶F处理从Tg20释放的2_AB衍生的N-聚糖的荧光测定检测获得的NP-HPLC序型。在47.49,59.35和78.38检测的主峰分别对应于A2G1F、A2G2F和A2G2FNeuGcl0还检测了多种较低丰度的峰。表I中呈现了检测形式的相对摩尔比(参见以下)。[0301]在该实验中，唾液酸化结构的水平估算为43%。对于复合结构，高甘露糖-杂合结构的水平估算为15%对85%。整体的半乳糖基化水平为91%，而岩藻糖基化水平估算为92%。[0302]表1:从TG20释放并通过NP-HPLC-FD分析的主要N-聚糖的相对摩尔比[0303]名称RT面积相对面积GOF-Gn32?33725250?3GO33?212674407?GOB36?341050070GOF39?24045579?θMan54025501400?4A2G142?2104687708A2G14^521027802Man4AlGl45?03754610?3A2G1F47?510693605T~9A2G1F49Γ01621545~L2Man4AlGlFδ?Γδ31492702A2G253Γθ32355482ΛMan5AlGl55?7102631908A2G2F59?45119267137Γ9Man5AlGlF62?01949522~Man4AlGlFNeuGcl~TL!7515884δΓθA2G2FNeuAcl73?851742883?8Man5AlGlNeuGcl76?540471053?0A2G2FNeuGcl78?43633746726.9【权利要求】1.一种组合物，其包含:抗体群，其中所述抗体群是高半乳糖基化的。2.权利要求1的组合物，其中所述群中的抗体是在乳腺上皮细胞中通过转基因产生的。3.权利要求1或2的组合物，其中所述群中的抗体针对相同的抗原表位。4.权利要求1-3中任一项的组合物，其中所述群中的抗体由相同的核酸序列编码。5.权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述群中的抗体的半乳糖基化水平为至少70%。6.权利要求1-5中任一项的组合物，其中所述抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖的抗体。7.一种组合物，其包含:抗体群，其中所述群中的抗体的半乳糖基化水平为至少70%，其中所述抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖的抗体，和其中所述群中的抗体由相同的核酸序列编码。8.权利要求1-7中任一项的组合物，其中所述群中的抗体的半乳糖基化水平为至少80%。9.权利要求8的组合物，其中所述群中的抗体的半乳糖基化水平为至少90%。10.权利要求1-9中任一项的组合物，其中所述群中的抗体的岩藻糖基化水平为至少80%。11.权利要求10的组合物，其中所述群中的抗体的岩藻糖基化水平为至少90%。12.—种组合物，其包含:抗体群；其中所述群中的抗体的半乳糖基化水平与所述群中的抗体的岩藻糖基化水平的比例介于0.8和1.2之间，其中所述抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖的抗体，且其中所述群中的抗体由相同的核酸序列编码。13.权利要求1-12中任一项的组合物，其中所述抗体群包含含有双半乳糖基化N-聚糖的抗体。14.权利要求1-13中任一项的组合物，其中所述抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖和双半乳糖基化N-聚糖两者的抗体。15.权利要求1-14中任一项的组合物，其中所述群中至少35%的抗体包含双半乳糖基化N-聚糖，且所述群中至少5%的抗体包含单半乳糖基化N-聚糖。16.权利要求7-15中任一项的组合物，其中所述群中的抗体是在乳腺上皮细胞中通过转基因产生的。17.权利要求1-16中任一项的组合物，其中所述抗体群是经工程化改造以表达所述抗体的非人哺乳动物的乳腺上皮细胞中通过转基因产生的。18.权利要求17的组合物，其中所述非人哺乳动物是山羊、绵羊、野牛、骆驼、牛、猪、兔、水牛、马、大鼠、小鼠或美洲驼。19.权利要求17的组合物，其中所述非人哺乳动物是山羊。20.权利要求1-19中任一项的组合物，其中所述组合物进一步包括乳。21.权利要求1-20中任一项的组合物，其中所述抗体群的抗体相比于不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群具有升高的补体依赖性细胞毒性(CDC)活性水平。22.权利要求21的组合物，其中所述不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的抗体在细胞培养物中产生。23.权利要求21或22的组合物，其中所述不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的抗体是低半乳糖抗体。24.权利要求23的组合物，其中所述低半乳糖抗体是Rituxan。25.权利要求1-24中任一项的组合物，其中所述抗体群的抗体相比于不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群具有升高的抗体依赖性细胞性细胞毒性(ADCC)活性水平。26.权利要求25的组合物，其中所述不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的抗体在细胞培养物中产生。27.权利要求25或26的组合物，其中所述不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的抗体是低半乳糖抗体。28.权利要求27的组合物，其中所述低半乳糖抗体是Rituxan。29.权利要求1-28中任一项的组合物，其中所述群中的抗体是嵌合的、人源化的或完全人的抗体。30.权利要求1-29中任一项的组合物，其中所述群中的抗体是全长抗体。31.权利要求1-30中任一项的组合物，其中所述群中的抗体包含重链和轻链。32.权利要求1-31中任一项的组合物，其中所述群中的抗体是抗-⑶20抗体。33.权利要求32的组合物，其中所述群中的抗体的轻链和重链由SEQIDNO:1和SEQIDNO:2中所示的核酸序列编码。34.权利要求1-33中任一项的组合物，其中所述组合物进一步包括药学可接受载体。35.一种方法,其包括:将权利要求1-34中任一项的组合物给药于有此需要的受试者。36.权利要求35的方法，其中所述受试者患有癌症。37.权利要求36的方法，其中所述癌症是B-细胞淋巴瘤。38.权利要求35的方法，其中所述受试者患有免疫病症。39.一种用于生产高半乳糖基化抗体群的方法，其包括:在乳腺上皮细胞中产生所述抗体群，使得生产高半乳糖基化抗体群。40.权利要求39的方法，其中该方法进一步包括收集所生产的所述抗体群。41.一种用于生产高半乳糖基化抗体群的方法，其包括:收集经工程化改造以表达抗体的乳腺上皮细胞中产生的高半乳糖基化抗体群。42.权利要求39-41中任一项的方法，其中该方法进一步包括测定所述抗体群的CDC活性。43.权利要求39-42中任一项的方法，其中该方法进一步包括对所述抗体群与不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群比较⑶C活性。44.权利要求43的方法，其中所述不在乳腺上皮细胞中产生的抗体群的抗体在细胞培养物中产生。45.权利要求39-44中任一项的方法，其中该方法进一步包括测定所述抗体群的半乳糖基化水平。46.权利要求39-45中任一项的方法，其中所述乳腺上皮细胞在培养物中并且用包含编码所述抗体的序列的核酸转染。47.权利要求39-46中任一项的方法，其中所述乳腺上皮细胞在非人哺乳动物中，所述非人哺乳动物经工程化改造以在其乳腺中表达包含编码所述抗体的序列的核酸。48.权利要求39-47中任一项的方法，其中所述乳腺上皮细胞是山羊、绵羊、水牛、骆驼、牛、猪、兔、水牛、马、大鼠、小鼠或美洲驼乳腺上皮细胞。49.权利要求48的方法，其中所述乳腺上皮细胞是山羊乳腺上皮细胞。50.权利要求39-49中任一项的方法，其中所述群中的抗体的半乳糖基化水平为至少70%。51.权利要求50的方法，其中所述群中的抗体的半乳糖基化水平为至少80%。52.权利要求51的方法，其中所述群中的抗体的半乳糖基化水平为至少90%。53.权利要求39-52中任一项的方法，其中所述群中的抗体的岩藻糖基化水平为至少80%。54.权利要求53的方法，其中所述群中的抗体的岩藻糖基化水平为至少90%。55.权利要求39-54中任一项的方法，其中所述群中的抗体的半乳糖基化水平与所述群中的抗体的岩藻糖基化水平的比例介于0.8和1.2之间。56.权利要求39-55中任一项的方法，其中所述抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖的抗体。57.权利要求39-56中任一项的方法，其中所述抗体群包含含有双半乳糖基化N-聚糖的抗体。58.权利要求39-57中任一项的方法，其中所述抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖和双半乳糖基化N-聚糖两者的抗体。59.权利要求39-58中任一项的方法，其中所述群中至少35%的抗体包含双半乳糖基化N-聚糖，且所述群中至少5%的抗体包含单半乳糖基化N-聚糖。60.权利要求39-49中任一项的方法，其进一步包括纯化所述抗体群，使得所述群中的抗体的半乳糖基化水平为至少70%。61.权利要求60的方法，其进一步包括纯化所述抗体群，使得所述群中的抗体的半乳糖基化水平为至少80%。62.权利要求61的方法，其进一步包括纯化所述抗体群，使得所述群中的抗体的半乳糖基化水平为至少90%。63.权利要求39-49和60-62中任一项的方法，其进一步包括纯化所述抗体群，使得所述群中的抗体的岩藻糖基化水平为至少80%。64.权利要求63的方法，其进一步包括纯化所述抗体群，使得所述群中的抗体的岩藻糖基化水平为至少90%。65.权利要求39-49中任一项的方法，其进一步包括纯化所述抗体群，使得所述群中的抗体的半乳糖基化水平与所述群中的抗体的岩藻糖基化水平的比例介于0.8和1.2之间。66.权利要求60-65中任一项的方法，其中所述抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖的抗体。67.权利要求60-66中任一项的方法，其中所述抗体群包含含有双半乳糖基化N-聚糖的抗体。68.权利要求60-67中任一项的方法，其中所述抗体群包含含有单半乳糖基化N-聚糖和双半乳糖基化N-聚糖两者的抗体。69.权利要求60-68中任一项的方法，其中所述群中至少35%的抗体包含双半乳糖基化N-聚糖，且所述群中至少5%的抗体包含单半乳糖基化N-聚糖。70.权利要求39-69中任一项的方法，其中所述群中的抗体针对相同抗原表位。71.权利要求39-70中任一项的方法，其中所述群中的抗体是抗-⑶20抗体。72.权利要求71的方法，其中所述群中的抗体的轻链和重链由SEQIDNO:1和SEQIDNO:2中所示的核酸序列编码。73.表达权利要求1-33中任一项的抗体群的乳腺上皮细胞。74.包含权利要求73的乳腺上皮细胞的转基因非人哺乳动物。【文档编号】C07K16/04GK104168913SQ201280049783【公开日】2014年11月26日申请日期:2012年8月10日优先权日:2011年8月10日【发明者】V.法伊德,G.切夫雷克斯申请人:法国化学与生物科技实验室