细胞培养物得到的α1 蛋白酶抑制剂的纯化的制作方法
【专利摘要】本文描述了用于纯化重组的，细胞培养物得到的α1蛋白酶抑制剂以及除去与recA1PI蛋白一起共同纯化的带颜色的物质的方法。还描述了用于还原细胞培养物得到的α1-蛋白酶抑制剂中的铁的方法。
【专利说明】细胞培养物得到的α1蛋白酶抑制剂的纯化
【技术领域】
[0001]本文描述了用于纯化人类重组细胞培养物得到的α I蛋白酶抑制剂(recAlPI)并且除去与recAlPI蛋白一起共同纯化的带颜色的物质的方法。
【背景技术】
[0002]α 1-蛋白酶抑制剂(本文中缩写为AlPl ;也称为α-l蛋白酶抑制剂，α_1ΡΙ，A1PI, α-1ΡΙ, αιΡΙ，α-1胰蛋白酶抑制剂，α I抗胰蛋白酶，α-1抗胰蛋白酶，α ΙΑΤ,ΑΙΑ,和ΑΙΑΤ,ΑΑΤ等等)，是人体中主要的丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)。AlPI表达为418个氨基酸蛋白，其中残基1-24是信号肽。该成熟蛋白质，由残基25-418组成，是具有约51kD分子量的单链糖蛋白。参见图1。尽管AlPI并不包含任何二硫键，但该蛋白是高度结构化的，其中80%的氨基酸存在于八个明确定义的α-螺旋和三个大β-折叠中。在Asn70，Asnl07，和Asn271(按照在全长蛋白中编号)中发现三个天冬酰胺连接的糖类。这导致多种AlPI同种型，具有在4.0至5.0范围内的等电点。该聚糖单糖包括N-乙酰基葡糖胺，甘露糖，半乳糖，岩藻糖，和唾液酸。
[0003]AlPI的正常血浆浓度在1.3至3.5mg/mL范围内。AlPI的功能是保护细胞避免引起凝血和炎症的蛋白酶作用。AlPI抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、各种形式的弹性蛋白酶、皮肤胶原酶、血管紧张肽原酶、尿激酶、和多形核的淋巴细胞的蛋白酶等。AlPI用作这些蛋白酶的假底物，通过切割残基Met358-Ser359之间的键以形成AlP1-蛋白酶复合物，这些蛋白酶攻击AlPI分子的反应中 心环(残基Gly368-Lys392)。由血液循环快速地除去该复合物。AlPI的一种内源性作用是调节中性白细胞弹性蛋白酶的活性，该酶分解外源蛋白并且伤害肺中存在的天然组织。在缺乏足够量的AlPl的情况下，弹性蛋白酶分解肺组织，随着时间的推移这将导致慢性肺组织损害和肺气肿。
[0004]通常从血浆中纯化AlPI。参见，例如U.S.专利号6，284，874 ;6，462，180 ；6，093，804 ;7，879，800 ；以及 W01998/000154 ；W02002/048176 ;TO2010/009388。另外，可以从各种来源表达和纯化重组AlPI(recAlPI)。参见，例如，US专利号4，931,373和 5，134，119 ；U.S.专利申请
【发明者】戴维·奥恩比, 托马斯·P·齐默尔曼, 珍妮弗·A·亨特, 查尔斯·米勒, 森蒂尔·兰加纳森, 托尼·德苏尔斯 申请人:基立福有限公司