一种新型卵黄抗体及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种新型卵黄抗体及其制备方法属于业兽用生物制品领域，本发明旨在提供一种能有效防控禽流感的新型卵黄抗体以及精制生产工艺和用途。本发明采用提取纯化方法，能最大限度将卵黄抗体从杂蛋白中分离出来，且纯化浓缩过程不会对卵黄抗体产生破坏作用，不影响产品生物洁性：其方法包括：蛋鸡的免疫、卵黄抗体的提取、卵黄抗体的纯化和卵黄抗体的干燥。所提供卵黄抗体主要用于检测、预防和治疗多类禽流感病毒感染，以及因为毒株变异而引起的禽流感免疫失败。
【专利说明】一种新型卵黄抗体及其制备方法【技术领域】
[0001]本发明属于动保行业兽用生物制品领域，所提供卵黄抗体主要用于检测、预防和治疗多类禽流感病毒感染，以及因为毒株变异而引起的禽流感免疫失败。
[0002]禽流感是"禽流行性感冒"的简称，是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病，又称"真性鸡瘟"或"欧洲鸡瘟"。临床主要表现为急性高致死性，产蛋量下降，轻度呼吸系统疾病等。禽流感是全世界范围内的禽类传染病，因对养禽业造成的毁灭性经济损失，而被视为严重威胁家禽养殖业的头号传染病，100多年来人类尚未发现有效的预防和治疗方法。禽流感还是一种禽畜和人共感病，对人类健康存在巨大威胁。
[0003]从2003年12月开始，由H5N1禽流感病毒引起的高致病性禽流感突袭亚洲，在不到2个月的时间内，席卷了韩国、日本、越南、泰国、柬埔寨、老挝、中国和印度尼西亚等8个东亚和南亚国家。此次禽流感流行的规模之大、地理分布范围之广、破坏程度之深在人类养禽业历史上均是史无前例的。当前，禽流感在世界局部地区仍然活跃，疫情范围里继续扩大之势。据不完全统计，从2003年到现在，仅亚洲各国死亡或淘汰的禽只总数大约，15亿只，全球已有超过1000人感染禽流感，因患禽流感死亡的人数已接近700人。
[0004]当前，已开发出多种治疗禽流感的药物，并制定出许多可行防控方案，且取得显著效果。但禽流感病毒在传染过程中，不断发生变异，使许多之前的有效防控方案失效。本发明所提供的卵黄抗体含多种抗体， 对多种禽流感毒株所引起的感染有效，可降低因为毒株变异而导致防控失败的机率。
[0005]当前卵黄抗体提取纯化方法有乙二醇提取法、氯仿提取法、盐析法等，这些方法收率低、杂蛋白多、产品活性低。
【发明内容】
[0006]本发明旨在提供一种能有效防控禽流感的新型卵黄抗体以及精制生产工艺和用途。本发明采用提取纯化方法，能最大限度将卵黄抗体从杂蛋白中分离出来，且纯化浓缩过程不会对卵黄抗体产生破坏作用，不影响产品生物活性。
[0007]一种新型卵黄抗体及其制备方法，其生产过程如下:
1、挑选高品质蛋鸡鸡茵进行净化饲养，为生产免疫蛋做准备；
2、产蛋期开始后，给蛋鸡按一定程序人工免疫特定抗原因或H7、H9型禽流感弱化疫
苗；
3、收集免疫鸡蛋并保存，为提取卵黄抗体做准备；
4、收集蛋黄按1:10的比例加入蒸馏水并搅拌30分钟，配成均匀蛋黄液。调节蛋黄液PH值到5.5, IO0C静置14小时，回收上清液；
5、将含卵黄抗体的蛋黄土清液进行双效超滤浓缩，收集卵黄抗体浓缩将回收的卵黄土清液通过0.45 μ m和0.22 μ m的串联过滤系统过滤，再将过滤液以4.5L/min的流速经过截留分子量分别150KD和220KD的双效超滤系统进行浓缩，待浓缩液体积为I/ 20时回收浓缩液；6、将卵黄浓缩液进行冷冻干燥，制成冻干粉将回收的卵黄土清液通过0.45 μ m和0.22 μ m的串联过滤系统过滤，再将过滤液以4.5L/min的流速经过截留分子量分别为150KD和220KD的双效超滤系统进行浓缩，待浓缩液体积为I/ 20时回收浓缩液；
7、利用卵黄抗体冻干粉配制临床适用的卵黄抗体制品检测卵黄浓缩液中抗体含量，分别按5.5%,30%的含量加入普朗尼克、可溶性淀粉，混合均匀后无菌分装到灭菌西林瓶，-400C冷冻干燥，制成卵黄抗体冻干粉制剂。
[0008]本方法利用蛋白质的等电点特性，通过沉阵法将卵黄抗体与杂蛋白有效分离，且在纯化浓缩过程中不破坏卵黄抗体的空间结构，充分保护了卵黄抗体的生物活性。所生产的卵黄抗体纯度高、活性强。
[0009]本发明所提供的卵黄抗体含多种抗体，用于检测、预防和治疗多类禽流感病毒感染，以及由毒株变异而引起的禽流感免疫失败。
实施例[0010]1:蛋鸡的免疫
选择健康蛋鸡，在170日龄时进行首免H5、H7、H9型禽流感弱化疫苗，接种方式为胸肌多点注射。并分别在首免14天和28天时进行强化免疫。强化免疫后7天开始检测免疫鸡蛋中卵黄抗体水平，合格后开始收集免疫鸡蛋。
[0011]2:卵黄抗体的提取
使用蛋黄筛将蛋黄从免疫鸡蛋中分离，按1:10的比例加入蒸馏水并搅拌30分钟，配成均匀蛋黄液。调节蛋黄液PH值到5.0，8 OC静置12小时，回收上清液。
[0012]3:卵黄抗体的纯化
将回收的卵黄上清液通过0.45 μ m和0.22 μ m的串联过滤系统过滤，再将过滤液以4.5L/min的流速经过截留分子量分别为150KD和220KD的双效超滤系统进行浓缩，待浓缩液体积为I/ 20时回收浓缩液。
[0013]4:卵黄抗体的干燥
检测卵黄浓缩液中抗体含量，分别按5.5%,30%的含量加入普朗尼克、可溶性淀粉，混合均匀后无菌分装到灭菌西林瓶，-40°C冷冻干燥，制成卵黄抗体冻干粉制剂。
[0014]以上实施例仅为了对本发明作进一步的说明，而本发明的范围不受所举实施例的局限。
[0015]部分实验结果报告:一种新型卵黄抗体精制工艺及其用途的试验报告选用临床诊断为温和性禽流感的病鸡5500只，随机挑选40只最为空白对照，其余平均分为A、B两组。网上平养，保持干净，及时通风，做好记录。饲料参考NRC肉鸡饲养标准，配制基础日粮，自由采食，自由饮水，统一管理。A组添加本卵黄抗体冻干粉制剂，按1:100的比例兑水饮用组为黄瓦多糖注射液(抗病毒I号注射液)，按每50ml兑水Ikg自由饮用；C组为空白对照组。
【权利要求】
1.一种新型卵黄抗体及其制备方法，其生产过程如下: (1)、挑选高品质蛋鸡鸡茵进行净化饲养，为生产免疫蛋做准备； (2)、产蛋期开始后，给蛋鸡按一定程序人工免疫特定抗原因或H7、H9型禽流感弱化苗； (3)、收集免疫鸡蛋并保存，为提取卵黄抗体做准备 (4)、收集蛋黄按1:10的比例加入蒸馏水并搅拌20分钟，配成均匀蛋黄液，调节蛋黄液PH值到5.5，10°C静置14小时，回收上清液； (5)、将含卵黄抗体的蛋黄土清液进行双效超滤浓缩，收集卵黄抗体浓缩将回收的卵黄土清液通过0.45μπι和0.22 μ m的串联过滤系统过滤，再将过滤液以4.5L/min的流速经过截留分子量分别为150KD和220KD的双效超滤系统进行浓缩，待浓缩液体积为I/20时回收浓缩液； (6)、将卵黄浓缩液进行冷冻干燥，制成冻干粉将回收的卵黄土清液通过0.45 μ m和0.22μπι的串联过滤系统过滤，再将过滤液4.5L/min的流速经过截留分子量分别为150KD和220KD的双效超滤系统进行浓缩，待浓缩液体积为I/ 20时回收浓缩液； (7)、利用卵黄抗体冻干粉配制临床适用的卵黄抗体制品。
2.根据权利要求1所述一种新型卵黄抗体，可将卵黄抗体制成粉剂、溶液剂、喷雾剂、注射液、注射用冻干粉等临床适用剂型。
【文档编号】C07K16/02GK103613665SQ201310584165
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年11月20日 优先权日:2013年11月20日
【发明者】不公告发明人 申请人:青岛农业大学