异细交链孢菌酮酸人工抗原和抗体及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种异细交链孢菌酮酸人工抗原和抗体及其制备方法与应用，属于食品安全领域。所述异细交链孢菌酮酸人工抗原的分子结构如下所示：或所述异细交链孢菌酮酸人工抗原是通过戊二醛法与载体蛋白偶联或活泼酯法与载体蛋白偶联制备得到的。利用本发明上述人工抗原制备得到的抗体的效价可达到1：32000，最低检测限为0.01ng/mL，半抑制浓度为0.77ng/mL，产生的抗体的特异性高、灵敏度高、准确度高，为建立快速、准确、灵敏的异细交链孢菌酮酸免疫检测方法奠定了基础。
【专利说明】异细交链孢菌酮酸人工抗原和抗体及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及食品安全领域。更具体地，涉及一种异细交链孢菌酮酸人工抗原和抗体及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002]异细交链孢菌酮酸(Iso-tenuazonic acid, ITeA,化学名，3_乙酰基_4羟基_5_异丁基吡咯啉-2-酮)，是链格孢菌产生的次级代谢物中的毒素之一，与细交链孢菌酮酸(tenuzonicacid, TeA)同属于四价酸类化合物。作为细交链孢菌酮酸的同分异构体,它具有与TeA相似的毒性且能被链格孢菌同时分泌，已有文献报道该毒素具有抗肿瘤性、微弱的抗病毒活性以及广谱、快速、高效的除草性等生物活性。近年来各国对该毒素的进一步生物学和毒理学研究发现该毒素污染农作物(如番茄、苹果、谷物等)的情况相当普遍，但由于人们平均每日的摄入量很低，未能引起足够重视。虽然食用含小量毒素的食品不会引起急性中毒，但是长期食用有可能引起慢性中毒。目前从食物里能同时检出两种甚至两种以上的链格孢菌产生链格孢霉毒素，越来越多的证据表明这些毒素之间有协同作用。
[0003]目前，国内外尚未制定异细交链孢菌酮酸毒素在农作物中的限量标准，少数几篇文章报道利用传统的仪器方法对该毒素进行检测，但仪器由于价格贵需专人操作等缺点不适合大规模筛选，因此，非常有必要发明一种针对异细交链孢菌酮酸的快速、简便的检测方法。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是克服现有检测异细交链孢菌酮酸的技术不足，提供一种异细交链孢菌酮酸人工抗原和抗体及其制备方法与应用。
[0005]本发明的目的是 提供一种异细交链孢菌酮酸人工抗原和抗体。
[0006]本发明另一个目的是提供所述异细交链孢菌酮酸人工抗原和抗体在检测异细交链孢菌酮酸方面的应用。
[0007]本发明上述目的通过以下技术方案实现:
本发明提供了一种异细交链孢菌酮酸半抗原，具有如式I所示的结构:
【权利要求】
1.一种异细交链孢菌酮酸半抗原，其特征在于，具有如式I所示的结构:
2.一种异细交链孢菌酮酸人工抗原，其特征在于，具有如式II所示的结构:
3.—种权利要求2所述异细交链孢菌酮酸人工抗原的制备方法，其特征在于，制备方法是将ITeAH作为半抗原与载体蛋白通过戊二醛法偶联或将ITeAHGA作为半抗原与载体蛋白通过活泼酯法偶联制备得到。
4.根据权利要求3所述异细交链孢菌酮酸人工抗原的制备方法，其特征在于，所述戊二醛法包括如下步骤: 51.将半抗原ITeAH和载体蛋白质按摩尔比60~80:1混合，溶于PBS溶液中； 52.向SI的混合溶液中逐滴加入体积浓度为25%的戊二醛溶液，室温搅拌反应3~4h，O~4°C下用生理盐水透析2~3d,得到异细交链孢菌酮酸人工抗原； 所述活泼酯法包括如下步骤: 51.将ITeAHGA溶于二甲基甲酰胺中，搅拌加入二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，其中，ITeAHGA、二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺三者的摩尔比为1:1.5~4:L 5 ~4 ; 52.在O~4°C下磁力搅拌反应过夜，离心，取上清夜为A液； 53.称取载体蛋白溶于PBS溶液中，搅拌溶解为B液； 54.在4°C磁力搅拌下，A液逐渐滴入B液中，4°C下反应12h，4°C下用生理盐水透析2~3d，得到异细交链孢菌酮酸人工抗原；其中，A液中的ITeAHGA与B液中的载体蛋白的摩尔比为60~80:lo
5.根据权利要求3或4所述异细交链孢菌酮酸人工抗原的制备方法，其特征在于，所述载体蛋白为钥孔血蓝蛋白、牛血清白蛋白质、人血清蛋白质或卵清蛋白； 所述PBS溶液的pH值为8.0。
6.根据权利要求3或4所述异细交链孢菌酮酸人工抗原的制备方法，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白质或卵清蛋白。
7.一种由权利要求2所述异细交链孢菌酮酸人工抗原免疫动物所制备得到的异细交链孢菌酮酸抗体。
8.根据权利要求7所述异细交链孢菌酮酸抗体，其特征在于，所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。
9.权利要求2所述异细交链孢菌酮酸人工抗原在检测异细交链孢菌酮酸中的应用。
10.权利要求7所述异细交链孢菌酮酸抗体在检测异细交链孢菌酮酸方面的应用。
【文档编号】C07D207/38GK103787946SQ201310747570
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2013年12月31日 优先权日:2013年12月31日
【发明者】王弘, 孙远明, 王雅丽, 沈玉栋, 肖治理, 杨星星, 杨金易, 徐振林, 雷红涛 申请人:华南农业大学