带电荷营养性蛋白质和方法

带电荷营养性蛋白质和方法
【专利摘要】本发明提供带电荷营养性蛋白质。在一些实施方案中，所述营养性蛋白质在pH7下具有水溶解度为至少12.5g/L。在一些实施方案中，所述营养性蛋白质在pH7下具有水溶解度为至少50g/L。在一些实施方案中，所述营养性蛋白质在pH7下具有水溶解度为至少100g/L。在一些实施方案中，所述营养性蛋白质包含一定水平的以下至少一者：a)所述营养性蛋白质中存在的支链氨基酸残基与总氨基酸残基的比率等于或大于基准蛋白质中存在的支链氨基酸残基与总氨基酸残基的比率；b)所述营养性蛋白质中存在的亮氨酸残基与总氨基酸残基的比率等于或大于基准蛋白质中存在的亮氨酸残基与总氨基酸残基的比率；和c)所述营养性蛋白质中存在的必需氨基酸残基与总氨基酸残基的比率等于或大于基准蛋白质中存在的必需氨基酸残基与总氨基酸残基的比率。也尤其提供编码所述蛋白质的核酸、制备所述蛋白质的重组微生物、使用重组微生物制备所述蛋白质的方法、包含所述蛋白质的组合物和使用所述蛋白质的方法。
【专利说明】带电荷营养性蛋白质和方法
[0001] 相关申请的引用：
[0002] 本申请要求2012年3月26日提交的美国临时专利申请号61/615, 816的优先权， 所述专利申请据此以引用的方式整体并入本文。
[0003] 序列表：
[0004] 本申请含有已通过EFS-Web以ASCII格式提交且据此以引用的方式整体并入本文 的序列表。2013年3月12日创建的所述ASCII拷贝名为1005. 004-PCT_SL. txt且大小为 1，194, 666 字节。
[0005] 引言：
[0006] 膳食蛋白质是为人类健康和生长所必需之营养物。世界卫生组织推荐当处于能量 平衡和重量稳定时，膳食蛋白质应占能量摄取量的约10至15%。各个国家的平均每日蛋白 质摄取量指示这些推荐与全世界消耗的蛋白质的量一致。当以能量平衡消耗时，平均20至 30 %的能量来自蛋白质的餐食代表高蛋白质膳食。
[0007] 身体不能合成为健康和生长所必需的某些氨基酸，且代之以必须自食物获得它 们。称为"必需氨基酸"的这些氨基酸是组氨酸（H)、异亮氨酸（I)、亮氨酸（L)、赖氨酸（K)、 甲硫氨酸（M)、苯丙氨酸（F)、苏氨酸（T)、色氨酸（W)和缬氨酸（V)。提供所有必需氨基酸 的膳食蛋白质称为"高品质"蛋白质。如肉、鱼、家禽、蛋和乳制品的动物性食物通常被认为 是提供必需氨基酸的良好平衡的高品质蛋白质来源。酪蛋白（一种通常见于哺乳动物奶 中，占牛奶中的蛋白质的80%的蛋白质）和乳清（在奶已凝固和应变之后剩余的呈液体状 态的蛋白质）是高品质膳食蛋白质的主要来源。不提供必需氨基酸的良好平衡的食物称为 "低品质"蛋白质。大多数水果和蔬菜是蛋白质的不良来源。包括菜豆、豌豆、小扁豆、坚果 和谷粒（如小麦）的一些植物性食物是蛋白质的较好来源。大豆，作为一种由黄豆制得的 植物性蛋白质，被一些人视为商品质蛋白质。
[0008] 对消耗大量蛋白质在人中的急性效应的研究已显示在膳食中包括以及在一些情 况下增加蛋白质含量可具有有益作用。举例来说，研究已显示摄取蛋白质可在人受试者中 诱导餐后饱腹感（包括通过抑制饥饿感），诱导产热以及降低血糖反应。
[0009] 对1?蛋白质勝食有关重量减轻的研究已显不蛋白质正面影响能量消耗和瘦体重。 进一步研究已显示就含有的能量的至少5%来自蛋白质的膳食而言，过度进食会产生显著 较小重量增加，且高蛋白质膳食降低能量摄取。
[0010] 临床研究提供证据表明蛋白质阻止归因于衰老或卧床休息的肌肉损失。具体来 说，研究已显示补充蛋白质增加长期卧床休息期间的肌肉分数合成率（FSR)，维持长期卧床 休息期间的腿部质量和强度，增加瘦体重，改进步态和平衡的功能性量度，且可充当用于由 于不活动或长期卧床休息而处于肌肉减少症的风险下的个体的可行性介入手段。
[0011] 在运动员中进行的关于增加肌肉蛋白质合成代谢的研究已显示在运动之后提供 的蛋白质促进肌肉肥大的程度大于由单独运动达成的肌肉肥大。也已显示在运动之后提供 的蛋白质支持蛋白质合成而不使蛋白质分解有任何增加，从而导致净正性蛋白质平衡和肌 肉质量增大。尽管肌肉蛋白质合成似乎以剂量-反应方式对补充必需氨基酸起反应，但并 非所有蛋白质在构建肌肉方面都等同。举例来说，在用阻力训练支持肌肉质量增大方面，奶 蛋白似乎优于大豆，而两者均优于单独碳水化合物。氨基酸亮氨酸是刺激肌肉蛋白质合成 的重要因素。
[0012] 通常见于食物中的全部蛋白质未必以高效方式提供满足如人的哺乳动物的氨基 酸需求的氨基酸组成。结果是为达到各必需氨基酸的最小需求，在膳食中消耗的总蛋白质 的量必须大于如果膳食蛋白质的品质较高所将需要的量。通过增加膳食中的蛋白质品质， 有可能相较于包括品质较低的蛋白质的膳食，降低必须消耗的蛋白质总量。
[0013] 一般来说，在哺乳动物膳食中，具有较高蛋白质品质的蛋白质被视为比不具有较 高蛋白质品质的其它蛋白质更有益。所述蛋白质例如适用作哺乳动物膳食的组分。在某些 情况下，所述蛋白质尤其促进维持肌肉质量、健康身体质量指数和血糖平衡。因此，对具有 商蛋白质品质的蛋白质的来源存在需要。
[0014] 在传统上，氨基酸的合乎需要混合物（如包含必需氨基酸的混合物）已通过水解 必需氨基酸的水平相对较高的蛋白质（如乳清蛋白质）和/或通过在任选也包括如乳清的 水解蛋白质的混合物中组合游离氨基酸来提供。这个类型的混合物可具有苦味且可被视为 不适合某些用途或不合乎某些用途需要。因此，所述混合物有时包括调味剂来掩蔽游离氨 基酸和/或水解蛋白质的味道。在一些情况下，发现其中一定比例的氨基酸内含物是由多 肽或蛋白质提供的组合物具有的味道好于较高比例的总氨基酸是以游离氨基酸和/或某 些水解蛋白质形式提供的组合物。然而，所述组合物的可用性已受到限制，因为营养性制剂 在传统上已由自天然食物产品分离的蛋白质（如自奶分离的乳清或自大豆分离的大豆蛋 白质）制得。那些蛋白质的氨基酸分布未必满足哺乳动物的氨基酸需求。此外，商品蛋白 质通常由蛋白质和/或蛋白质水解物的混合物组成，所述混合物在它们的蛋白质组成方面 可变化，由此导致关于它们的营养价值的不可预测性。此外，所述高品质蛋白质的来源的数 目有限已意味着仅某些氨基酸组合可以蛋白质形式以大规模用于摄取。
[0015] 为供应如酿蛋白和乳清、蛋及肉的商品质动物蛋白质来源、以及如大?的植物蛋 白质所需的农业方法也需要大量能量输入且具有潜在有害环境影响。因此，将在某些情况 下适用的是具有供应供哺乳动物消耗的蛋白质的替代性来源和方法。
[0016] 在理论上，可在实验室环境下设计和产生包含所需氨基酸混合物的合成多肽序 列。然而，这个方法可产生各种顾虑，且因此并非始终适用。首先，熟练技术人员了解的是 获得所述合成序列的高产生水平可极具挑战性。其次，即使所述合成蛋白质被合成，它用于 营养性产品中的适合性也将是不确定的。举例来说，所述非天然存在的多肽可为过敏原或 毒素。因此，在一些实施方案中，本公开提供天然蛋白质或多肽序列或其变体。
[0017] 可增强营养性蛋白质的效用的一个特征是它的溶解度。溶解度较高的营养性蛋白 质可展现合乎需要的特征，如增加的稳定性、抗聚集性和合乎需要的味道分布。举例来说， 展现溶解度增强的营养性蛋白质可被配制成呈相对较低体积的溶液形式的包括高浓度营 养性蛋白质的饮料或液体制剂，由此递送每单位体积较大剂量的蛋白质营养物。可溶性营 养性蛋白质可适用于其中使用者（例如，运动员）想要在身体活动之前、期间或之后摄取营 养性蛋白质的运动饮料或恢复饮料中。展现溶解度增强的营养性蛋白质也可特别适用于其 中受试者（例如，患者或年长人士）需要蛋白质营养物，但不能消耗固体食物或大体积的液 体的临床环境中。
[0018] 本公开提供主要由不仅仅依赖于传统农业来产生的氨基酸的适用组合组成的蛋 白质。举例来说，
【发明者】已发现且本公开提供主要由氨基酸的组合组成的天然存在的多肽 序列，其含有适用水平的以下至少一者：支链氨基酸与总氨基酸的比率、氨基酸亮氨酸与总 氨基酸的比率、和必需氨基酸与总氨基酸的比率。本公开也提供包含多肽序列的营养性蛋 白质。在一些实施方案中，营养性蛋白质包含以下至少一者：支链氨基酸残基与总氨基酸残 基的比率为至少24% ;Leu残基与总氨基酸残基的比率为至少11% ;和必需氨基酸残基与 总氨基酸残基的比率为至少49%。
[0019] 本公开也尤其提供编码蛋白质的核酸、制备蛋白质的重组微生物、使用重组微生 物制备蛋白质的方法、包含蛋白质的组合物和使用蛋白质的方法。
[0020] 概述：
[0021] 在第一方面，本公开提供包含第一多肽序列的分离的营养性蛋白质，其中所述第 一多肽序列在PH 7下具有水溶解度为至少12. 5g/L。在一些实施方案中，第一多肽序列在 pH 7下具有水溶解度为至少50g/L。在一些实施方案中，第一多肽序列在pH 7下具有水 溶解度为至少l〇〇g/L。在一些实施方案中，第一多肽序列包含：a.支链氨基酸残基与总氨 基酸残基的比率为至少8% ;b. Leu残基与总氨基酸残基的比率为至少4% ;和c.必需氨 基酸残基与总氨基酸残基的比率为至少19%。在一些实施方案中，第一多肽序列进一步包 含各必需氨基酸的至少一者。在一些实施方案中，第一多肽序列包含以下至少一者：a.支 链氨基酸残基与总氨基酸残基的比率为至少24% ;b. Leu残基与总氨基酸残基的比率为至 少11%;和c.必需氨基酸残基与总氨基酸残基的比率为至少49%。在一些实施方案中， 第一多肽序列包含与天然存在的营养性蛋白质的至少50个氨基酸的至少70%同源性。在 一些实施方案中，第一多肽序列包含与天然存在的营养性蛋白质的至少50个氨基酸的至 少95%同源性。在一些实施方案中，第一多肽序列包含与天然存在的营养性蛋白质的至 少70%同源性。在一些实施方案中，第一多肽序列包含与天然存在的营养性蛋白质的至少 95%同源性。
[0022] 在一些实施方案中，第一多肽序列由天然存在的营养性蛋白质组成。在一些实施 方案中，第一多肽序列不是天然存在的营养性蛋白质。
[0023] 在一些实施方案中，第一多肽序列不是过敏原。在一些实施方案中，第一多肽序列 与已知过敏原具有小于50%整体同源性。
[0024] 在一些实施方案中，第一多肽序列不是毒素。在一些实施方案中，第一多肽序列与 已知毒素具有小于50%整体同源性。
[0025] 在一些实施方案中，第一多肽序列具有模拟胃消化半衰期为小于60分钟。在一些 实施方案中，第一多肽序列具有模拟胃消化半衰期为小于30分钟。在一些实施方案中，第 一多肽序列具有模拟胃消化半衰期为小于10分钟。在一些实施方案中，第一多肽序列在模 拟胃液中完全消化。在一些实施方案中，第一多肽序列包含至少一个选自胃蛋白酶识别位 点、胰蛋白酶识别位点和胰凝乳蛋白酶识别位点的蛋白酶识别位点。在一些实施方案中，第 一多肽序列不包含半胱氨酸残基。在一些实施方案中，第一多肽序列不包含二硫键。在一 些实施方案中，第一多肽序列不包含N连接的糖基化。在一些实施方案中，第一多肽序列不 包含〇连接的糖基化。
[0026] 在一些实施方案中，第一多肽序列对聚集具有抗性。在一些实施方案中，第一多 肽序列在pH 7下是阴离子型的。在一些实施方案中，第一多肽序列具有计算溶合计分 (calculated solvation score)为-20或更低。在一些实施方案中，第一多肽序列具有计 算溶合计分为-30或更低。在一些实施方案中，第一多肽序列具有计算聚集计分为0. 75或 更低。在一些实施方案中，第一多肽序列具有计算聚集计分0.5或更低。在一些实施方案 中，第一多肽序列具有计算聚集计分0. 3或更低。在一些实施方案中，第一多肽序列包含 选自以下的氨基酸序列：i.选自SEQ ID NO: 1至SEQ ID N0:490的氨基酸序列；ii.选自 SEQ ID NO: 1至SEQ ID N0:490的氨基酸序列的修饰的衍生物；和iii.选自SEQ ID NO: 1 至SEQ ID N0:490的氨基酸序列的突变蛋白。在一些实施方案中，第一多肽序列由选自以 下的氨基酸序列组成：i.选自SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO:490的氨基酸序列，ii.选自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的氨基酸序列的修饰的衍生物，和iii.选自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的氨基酸序列的突变蛋白。在一些实施方案中，第一多肽序列与至少一个选自 SEQ ID N0:1 至 SEQ ID N0:490 的参照氨基酸序列至少 40%、45%、50%、55%、60%、65%、 70 %,75 %,80 %,85 %,86 %,87 %,88 %,89 %,90 %,91 %,92 %,93 %,94 %,95 %,96 %, 97%、98%、99%或 99. 5% 同源。
[0027] 在另一方面，本公开提供包含第一多肽序列的分离的营养性蛋白质，其中所述分 离的营养性蛋白质在PH 7下具有水溶解度为至少12. 5g/L。在一些实施方案中，分离的营 养性蛋白质在pH 7下具有水溶解度为至少50g/L。在一些实施方案中，分离的营养性蛋白 质在pH 7下具有水溶解度为至少100g/L。在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质包含： a. 支链氨基酸残基与总氨基酸残基的比率为至少8% ;b. Leu残基与总氨基酸残基的比率 为至少4%;和c.必需氨基酸残基与总氨基酸残基的比率为至少19%。在一些实施方案 中，分离的营养性蛋白质进一步包含各必需氨基酸的至少一者。在一些实施方案中，分离的 营养性蛋白质包含以下至少一者：a.支链氨基酸残基与总氨基酸残基的比率为至少24% ; b. Leu残基与总氣基酸残基的比率为至少11 %;和c.必需氣基酸残基与总氣基酸残基的比 率为至少49%。在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质包含与天然存在的营养性蛋白质 的至少50个氨基酸的至少70%同源性。在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质包含与天 然存在的营养性蛋白质的至少50个氨基酸的至少95%同源性。在一些实施方案中，分离的 营养性蛋白质包含与天然存在的营养性蛋白质的至少70%同源性。在一些实施方案中，分 离的营养性蛋白质包含与天然存在的营养性蛋白质的至少95%同源性。
[0028] 在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质由天然存在的营养性蛋白质组成。在一 些实施方案中，分离的营养性蛋白质不是天然存在的营养性蛋白质。
[0029] 在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质不是过敏原。在一些实施方案中，分离的 营养性蛋白质与已知过敏原具有小于50%整体同源性。
[0030] 在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质不是毒素。在一些实施方案中，分离的营 养性蛋白质与已知毒素具有小于50%整体同源性。
[0031] 在一些实施方案中，营养性蛋白质具有模拟胃消化半衰期为小于60分钟。在一些 实施方案中，营养性蛋白质具有模拟胃消化半衰期为小于30分钟。在一些实施方案中，分 离的营养性蛋白质具有模拟胃消化半衰期为小于10分钟。在一些实施方案中，分离的营养 性蛋白质在模拟胃液中完全消化。在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质包含至少一个 选自胃蛋白酶识别位点、胰蛋白酶识别位点和胰凝乳蛋白酶识别位点的蛋白酶识别位点。 在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质不包含半胱氨酸残基。在一些实施方案中，分离的 营养性蛋白质不包含二硫键。在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质不包含N连接的糖 基化。在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质不包含O连接的糖基化。
[0032] 在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质对聚集具有抗性。在一些实施方案中，分 离的营养性蛋白质在PH 7下是阴离子型的。在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质具有 计算溶合计分为-20或更低。在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质具有计算溶合计分 为-30或更低。在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质具有计算聚集计分为0. 75或更低。 在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质具有计算聚集计分为〇. 5或更低。在一些实施方 案中，分离的营养性蛋白质具有计算聚集计分为〇. 3或更低。
[0033] 在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质包含选自以下的氨基酸序列：i.选自 SEQ ID NO: 1 至SEQ ID NO:490 的氨基酸序列；ii.选自 SEQ ID NO: 1 至SEQ ID NO:490 的氨 基酸序列的修饰的衍生物；和iii.选自SEQ ID NO: 1至SEQ ID N0:490的氨基酸序列的突 变蛋白。在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质由选自以下的氨基酸序列组成：i.选自 SEQ ID NO: 1 至 SEQ ID NO:490 的氨基酸序列，ii.选自 SEQ ID NO: 1 至 SEQ ID NO:490 的 氨基酸序列的修饰的衍生物，和iii.选自SEQ ID NO: 1至SEQ ID N0:490的氨基酸序列的 突变蛋白。在一些实施方案中，分离的营养性蛋白质与至少一个选自SEQ ID NO: 1至SEQ ID N0:490 的参照氨基酸序列至少 40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、 86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 99. 5% 同源。
[0034] 在一些实施方案中，本公开的分离的营养性蛋白质进一步包含用于亲和纯化的多 肽标签。在一些实施方案中，用于亲和纯化的标签是聚组氨酸标签。
[0035] 在另一方面，本公开提供包含编码本公开的营养性蛋白质的核酸序列的分离的核 酸。在一些实施方案中，分离的核酸选自基因组DNA、cDNA、正义RNA和反义RNA。在一些实 施方案中，分离的核酸是基因组DNA。在一些实施方案中，分离的核酸是cDNA。在一些实施 方案中，分离的核酸进一步包含可操作地连接于编码营养性蛋白质的核酸序列的表达控制 序列。在一些实施方案中，提供载体
[0036] 在另一方面，本公开提供一种包含编码本公开的营养性蛋白质的核酸序列的载 体。在一些实施方案中，载体进一步包含可操作地连接于编码营养性蛋白质的核酸序列的 表达控制序列。
[0037] 在另一方面，本公开提供包含本公开的核酸和本公开的载体的至少一者的重组微 生物。在一些实施方案中，重组微生物是原核生物。在一些实施方案中，原核生物是异养性 的。在一些实施方案中，原核生物是自养性的。在一些实施方案中，原核生物是细菌。
[0038] 在另一方面，本公开提供制备本公开的营养性蛋白质的方法，所述方法包括在足 以由重组微生物产生所述营养性蛋白质的条件下培养本公开的重组微生物。在一些实施方 案中，方法进一步包括自培养物分离营养性蛋白质。
[0039] 在另一方面，本公开提供包含本公开的分离的营养性蛋白质和至少一种第二组分 的营养性组合物。在一些实施方案中，至少一种第二组分选自蛋白质、多肽、肽、游离氨基 酸、碳水化合物、脂质、矿物质或矿物质来源、维生素、补充剂、生物体、医药和赋形剂。在一 些实施方案中，至少一种第二组分是蛋白质。在一些实施方案中，至少一种第二组分是营养 性蛋白质。在一些实施方案中，至少一种第二组分是选自必需氨基酸、非必需氨基酸、支链 氨基酸、非标准氨基酸和修饰的氨基酸的游离氨基酸。在一些实施方案中，至少一种第二组 分是选自必需氨基酸的游离氨基酸。在一些实施方案中，至少一种第二组分是选自支链氨 基酸的游离氨基酸。在一些实施方案中，至少一种第二组分是Leu。在一些实施方案中，至 少一种第二组分是脂质。在一些实施方案中，脂质选自脂肪、油、甘油三酯、胆固醇、磷脂和 脂肪酸。在一些实施方案中，至少一种第二组分选自矿物质和维生素。在一些实施方案中， 至少一种第二组分是补充剂。在一些实施方案中，至少一种第二组分是生物体。在一些实 施方案中，至少一种第二组分是医药。在一些实施方案中，至少一种第二组分是赋形剂。在 一些实施方案中，至少一种赋形剂选自缓冲剂、防腐剂、稳定剂、粘合剂、压实剂、润滑剂、分 散增强剂、崩解剂、调味剂、甜味剂、着色剂。在一些实施方案中，将营养性组合物配制成液 体溶液、浆液、混悬液、凝胶剂、糊剂、粉末或固体。
[0040] 在另一方面，本公开提供制备本公开的营养性组合物的方法，其包括提供本公开 的营养性蛋白质以及组合所述营养性蛋白质与至少一种第二组分。
[0041] 在另一方面，本公开提供维持或增加受试者的肌肉质量、肌肉强度和功能性表现 的至少一者的方法，所述方法包括向所述受试者提供足量的本公开的营养性蛋白质、本公 开的营养性组合物或通过本公开的方法制备的营养性组合物。在一些实施方案中，受试者 处于以下至少一种状态下：年长、患有医学上危急疾病、以及罹患蛋白质-能量营养不良 症。在一些实施方案中，本公开的营养性蛋白质、本公开的营养性组合物或通过本公开的方 法制备的营养性组合物是由受试者与进行运动配合加以消耗。在一些实施方案中，受试者 是肥胖的。在一些实施方案中，本公开的营养性蛋白质、本公开的营养性组合物或通过本公 开的方法制备的营养性组合物是由受试者通过经口、肠或胃肠外途径加以消耗。
[0042] 在另一方面，本公开提供维持或达成受试者的合乎需要的身体质量指数的方法， 所述方法包括向所述受试者提供足量的本公开的营养性蛋白质、本公开的营养性组合物或 通过本公开的方法制备的营养性组合物。在一些实施方案中，受试者处于以下至少一种状 态下：年长、患有医学上危急疾病、以及罹患蛋白质-能量营养不良症。在一些实施方案中， 本公开的营养性蛋白质、本公开的营养性组合物或通过本公开的方法制备的营养性组合物 是由受试者与进行运动配合加以消耗。在一些实施方案中，受试者是肥胖的。在一些实施 方案中，本公开的营养性蛋白质、本公开的营养性组合物或通过本公开的方法制备的营养 性组合物是由受试者通过经口、肠或胃肠外途径加以消耗。
[0043] 在另一方面，本公开提供向患有蛋白质-能量营养不良症的受试者提供蛋白质的 方法，所述方法包括向所述受试者提供足量的本公开的营养性蛋白质、本公开的营养性组 合物或通过本公开的方法制备的营养性组合物。在一些实施方案中，本公开的营养性蛋白 质、本公开的营养性组合物或通过本公开的方法制备的营养性组合物是由受试者与进行运 动配合加以消耗。在一些实施方案中，受试者是肥胖的。在一些实施方案中，本公开的营养 性蛋白质、本公开的营养性组合物或通过本公开的方法制备的营养性组合物是由受试者通 过经口、肠或胃肠外途径加以消耗。
[0044] 在另一方面，本公开提供增加受试者的产热的方法，所述方法包括向所述受试者 提供足量的本公开的营养性蛋白质、本公开的营养性组合物或通过本公开的方法制备的营 养性组合物。在一些实施方案中，受试者是肥胖的。在一些实施方案中，本公开的营养性蛋 白质、本公开的营养性组合物或通过本公开的方法制备的营养性组合物是由受试者与进行 运动配合加以消耗。在一些实施方案中，受试者是肥胖的。在一些实施方案中，本公开的营 养性蛋白质、本公开的营养性组合物或通过本公开的方法制备的营养性组合物是由受试者 通过经口、肠或胃肠外途径加以消耗。
[0045] 在另一方面，本公开提供诱导受试者的饱足反应和饱腹感反应的至少一者的方 法，所述方法包括向所述受试者提供足量的本公开的营养性蛋白质、本公开的营养性组合 物或通过本公开的方法制备的营养性组合物。在一些实施方案中，受试者是肥胖的。在一 些实施方案中，本公开的营养性蛋白质、本公开的营养性组合物或通过本公开的方法制备 的营养性组合物是由受试者与进行运动配合加以消耗。在一些实施方案中，受试者是肥胖 的。在一些实施方案中，本公开的营养性蛋白质、本公开的营养性组合物或通过本公开的方 法制备的营养性组合物是由受试者通过经口、肠或胃肠外途径加以消耗。
[0046] 在另一方面，本公开提供治疗受试者的恶病质、肌肉减少症和虚弱的至少一者的 方法，所述方法包括向所述受试者提供足量的本公开的营养性蛋白质、本公开的营养性组 合物或通过本公开的方法制备的营养性组合物。在一些实施方案中，受试者是肥胖的。在 一些实施方案中，本公开的营养性蛋白质、本公开的营养性组合物或通过本公开的方法制 备的营养性组合物是由受试者通过经口、肠或胃肠外途径加以消耗。
[0047] 附图简述：
[0048] 图1显示二维直方图，其指示随溶合计分（y轴）和聚集计分（X轴）而变的蛋白 质在大肠杆菌表达筛选中表达的相对可能性（在对数尺度上）。
[0049] 图2显示二维直方图，其指示随溶合计分（y轴）和聚集计分（X轴）而变的蛋白 质在大肠杆菌表达筛选中可溶性表达的相对可能性（在对数尺度上）。
[0050] 详述：
[0051] 除非本文另外定义，否则与本公开关联使用的科学和技术术语将具有由本领域普 通技术人员通常所理解的含义。此外，除非另外为上下文所需，否则单数术语将包括复数且 复数术语将包括单数。通常，与本文所述的生物化学、酶学、分子和细胞生物学、微生物学、 遗传学、及蛋白质和核酸化学、以及杂交关联使用的命名法以及本文所述的生物化学、酶 学、分子和细胞生物学、微生物学、遗传学、及蛋白质和核酸化学、以及杂交的技术是本领域 中熟知且通常使用的命名法以及技术。本文引用的某些参考文献和其它文件以引用的方式 明确并入本文。另外，本文引用的所有UniProt/SwissProt记录都据此以引用的方式并入 本文。在起冲突的情况下，以包括定义的本说明书为准。材料、方法和实施例仅具有说明性 而非意图具有限制性。
[0052] 除非另外指示，否则本公开的方法和技术通常是根据本领域中熟知及如本说明 书整篇引用和论述的各种一般性和更特定参考文献中所述的常规方法来执行。参见例如 Sambrook 等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第 3 版，Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (2001) ；Ausubel 等,Current Protocols in Molecular Biology，Greene Publishing Associates (1992 及截至 2002 的补编）； Taylor 和 Drickamer, Introduction to Glycobiology, Oxford Univ.Press (2003)； Worthington Enzyme Manual,Worthington Biochemical Corp., Freehold, N. J.； Handbook of Biochemistry: Section A Proteins,第 I 卷,CRC Press (1976)； Handbook of Biochemistry: Section A Proteins,第 II 卷,CRC Press (1976)； Essentials of Glycobiology, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1999)。可适 用于蓝细菌的许多分子生物学和遗传技术描述于Heidorn等，"Synthetic Biology in Cyanobacteria:Engineering and Analyzing Novel Functions, "Methods in Enzymology,第497卷，第24章（2011)中，其据此以引用的方式并入本文。
[0053] 本公开涉及在因特网上公开的针对某些蛋白质和基因序列的序列数据库条目 (例如，UniProt/SwissProt记录）以及因特网上的其它信息。熟练技术人员了解的是因特 网上的信息（包括序列数据库条目）时时更新，且例如用于指代特定序列的参考编号可变 化。当提及序列信息的公开数据库或因特网上的其它信息时，应了解的是可发生所述变化 且因特网上的信息的特定实施方案可时有时无。因为熟练技术人员可通过在因特网上搜索 来得到等效信息，所以提及因特网网页地址或序列数据库条目证实所论述信息的可用性和 公开传播性。
[0054] 在公开和描述本发明蛋白质、组合物、方法和其它实施方案之前，应了解的是本文 使用的术语是仅出于描述特定实施方案的目的且不意图具有限制性。必须注意的是，除非 上下文另外明确规定，否则如说明书和随附权利要求中所用，单数形式"一"和"所述"包括 复数个指示物。
[0055] 如本文所用的术语"包含"与"包括"或"含有"同义，且是包括性的或开放的，且不 排除其它未叙述成员、要素或方法步骤。
[0056] 本公开提及氨基酸。氨基酸的全称可与各自的标准三字母和单字母缩写互换使 用。为避免疑问，这些氨基酸是：丙氨酸（Ala、A)、精氨酸（Arg、R)、天冬酰胺（Asn、N)、天冬 氨酸仏邓、0)、半胱氨酸化5^、〇、谷氨酸（6111、幻、谷氨酰胺（6111、0)、甘氨酸（61 7、6)、组 氨酸（His、H)、异亮氨酸（lie、I)、亮氨酸（Leu、L)、赖氨酸（Lys、K)、甲硫氨酸（Met、M)、苯 丙氨酸（Phe、F)、脯氨酸（Pro、P)、丝氨酸（Ser、S)、苏氨酸（Thr、T)、色氨酸（Trp、W)、酪氨 酸（Tyr、Y)、纟颜氨酸（Val、V)。
[0057] 如本文所用，术语"体外"是指事件发生在人工环境中，例如在试管或反应容器中、 在细胞培养物中、在皮氏培养皿（Petri dish)中等，而非在生物体（例如，动物、植物或微 生物）内。
[0058] 如本文所用，术语"体内"是指事件发生在生物体（例如，动物、植物或微生物）内。
[0059] 如本文所用，术语"分离的"是指物质或实体已（1)与它在最初产生时（无论在自 然界中或在实验环境中）与之相伴的至少一些组分分离，和/或（2)通过人手产生、制备和 /或制造。分离的物质和/或实体可与至少约10%、约20%、约30%、约40%、约50%、约 60%、约70%、约80%、约90%、或更多它们最初与之相伴的其它组分分离。在一些实施方 案中，分离的试剂的纯度大于约80 %、约85 %、约90 %、约91 %、约92 %、约93 %、约94%、 约95 %、约96 %、约97 %、约98 %、约99 %或大于约99 %。如本文所用，如果物质大致上不 含其它组分，那么它是"纯的"。
[0060] 如本文所用，"支链氨基酸"是选自亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸的氨基酸。
[0061] 如本文所用，"必需氨基酸"是选自组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、 苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸和缬氨酸的氨基酸。
[0062] 如本文所用的术语"肽"是指短多肽，例如通常含有小于约50个氨基酸且更通常 小于约30个氨基酸的多肽。如本文所用的所述术语涵盖模拟结构功能以及因此生物功能 的类似物和模拟物。
[0063] 术语"多肽"涵盖天然存在的蛋白质与非天然存在的蛋白质两者及其片段、突变 体、衍生物和类似物。多肽可为单体或聚合物。此外，多肽可包含各自具有一种或多种不同 活性的许多不同结构域。为避免疑问，"多肽"可具有大于两个氨基酸的任何长度。
[0064] 术语"分离的蛋白质"或"分离的多肽"是就它的起源或来源而言，（1)不与在它的 天然状态下伴随它的天然相伴组分相伴，（2)以不见于自然界中的纯度存在，其中纯度可关 于其它细胞物质的存在加以断定（例如，不含来自相同物种的其它蛋白质），（3)由来自不 同物种的细胞表达，或（4)不存在于自然界中（例如，它是见于自然界中的多肽的片段或它 包括不见于自然界中的氨基酸类似物或衍生物或除标准肽键以外的键联）的蛋白质或多 肽。因此，化学合成或在不同于它所天然源于的细胞的细胞系统中合成的多肽将与它的天 然相伴组分"分离"。也可通过使用本领域中熟知的蛋白质纯化技术进行分离来致使多肽或 蛋白质大致上不含天然相伴组分。如因此所定义，"分离"未必需要如此描述的蛋白质、多 肽、肽或寡肽已自于其中合成它的细胞物理移除。
[0065] 如本文所用的术语"多肽片段"是指相较于全长多肽（如天然存在的蛋白质），具 有缺失（例如氨基末端和/或羧基末端缺失）的多肽。在一实施方案中，多肽片段是连续 序列，其中所述片段的氨基酸序列与天然存在的序列中的相应位置一致。片段的长度通常 是至少5、6、7、8、9或10个氨基酸、或至少12、14、16或18个氨基酸、或至少20个氨基酸、 或至少25、30、35、40或45个氨基酸、或至少50或60个氨基酸、或至少70个氨基酸、或至 少100个氨基酸。
[0066] 术语"融合蛋白"是指包含偶联于异源氨基酸序列的多肽或片段的多肽。融合蛋白 是适用的，因为它们可被构建来含有两个或更多个可来自两种或更多种不同蛋白质的所需 功能性元件。融合蛋白包含至少10个来自目标多肽的连续氨基酸、或至少20或30个氨基 酸、或至少40、50或60个氨基酸、或至少75、100或125个氨基酸。融合蛋白内包括的异源 多肽的长度通常是至少6个氨基酸、或至少8个氨基酸、或至少15、20或25个氨基酸。包 括较大多肽（如IgG Fc区域）以及甚至整个蛋白质（如含有绿色荧光蛋白（"GFP"）发色 团的蛋白质）的融合物具有特定效用。融合蛋白可通过与编码不同蛋白质或肽的核酸序列 同框构建编码多肽或其片段的核酸序列，且接着表达融合蛋白来重组产生。或者，可通过使 多肽或其片段交联于另一蛋白质来化学产生融合蛋白。
[0067] 如本文所用，如果编码蛋白质的核酸序列与编码第二蛋白质的核酸序列具有类似 序列，那么所述蛋白质与所述第二蛋白质具有"同源性"或与所述第二蛋白质"同源"。或者， 如果两个蛋白质具有类似氨基酸序列，那么某一蛋白质与第二蛋白质具有同源性。（因此， 术语"同源蛋白质"被定义来指两个蛋白质具有类似氨基酸序列。）如本文所用，氨基酸序 列的两个区域之间的同源性（尤其关于预测的结构类似性）解释为暗示在功能方面的类似 性。
[0068] 当"同源"关于蛋白质或肽使用时，应认识到不相同的残基位置常因保守性氨基酸 取代而不同。"保守性氨基酸取代"是其中某一氨基酸残基被具有类似化学性质（例如，电 荷或疏水性）侧链（R基团）的另一氨基酸残基取代的取代。一般来说，保守性氨基酸取代 将不实质上改变蛋白质的功能性质。在两个或更多个氨基酸序列因保守性取代而不同于 彼此的情况下，序列同一性百分比或同源性程度可向上调整以校正取代的保守性性质。用 于进行这个调整的手段为本领域技术人员所熟知。参见例如Pearson, 1994, Methods Mol. Biol. 24:307-31 和 25:365-89。
[0069] 以下六组各自含有是彼此的保守性取代的氨基酸：1)丝氨酸、苏氨酸；2)天冬氨 酸、谷氨酸；3)天冬酰胺、谷氨酰胺；4)精氨酸、赖氨酸；5)异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、丙 氨酸、缬氨酸；和6)苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸。
[0070] 也称为序列同一性百分比的多肽的序列同源性通常是使用序列分析软件测 量。参见例如威斯康星大学生物技术中心的遗传学计算机组（GCG)的序列分析软件包 (910University Avenue, Madison, Wis. 53705)。蛋白质分析软件使用对各种取代、缺失和 其它修饰（包括保守性氨基酸取代）指定的同源性量度匹配类似序列。举例来说，GCG含 有可以缺省参数用于确定密切相关多肽（如来自生物体的不同物种的同源多肽）之间或野 生型蛋白质与其突变蛋白之间的序列同源性或序列同一性的程序，如"Gap"和"Bestfit"。 参见例如GCG6. 1版。
[0071] 当将特定多肽序列与含有来自不同生物体的许多序列的数据库比较时，一示 例性算法是计算机程序 BLAST(Altschul 等，J. Mol. Biol. 215:403-410(1990) ;Gish 和 States, Nature Genet. 3:266-272 (1993) ;Madden 等，Meth. Enzymol. 266:131-141 (1996); Altschul 等，Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (1997) ;Zhang 和 Madden, Genome Res.7:649-656 (1997)),尤其 blastp 或 tblastn(Altschul 等，Nucleic Acids Res.25:3389-3402(1997))。
[0072] 用于BLASTp的示例性参数是：期望值：10(缺省值）；过滤：seg(缺省值）；打开 缺口的代价：11 (缺省值）；延伸缺口的代价：1 (缺省值）；最大比对：100 (缺省值）；字长： 11(缺省值）；描述数目：100(缺省值）；罚分矩阵：BL0WSUM62。针对同源性比较的多肽序 列的长度将通常是至少约16个氨基酸残基、或至少约20个残基、或至少约24个残基、或 至少约28个残基、或大于约35个残基。当搜索含有来自许多不同生物体的序列的数据库 时，可适用的是比较氨基酸序列。使用氨基酸序列进行的数据库搜索可通过本领域中已知 的除blastp以外的算法来测量。举例来说，可使用GCG 6. 1版中的程序FASTA比较多肽序 列。FASTA提供在查询序列与搜索序列之间最佳重叠的区域的比对和序列同一性百分比。 Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98(1990)。举例来说，如以引用的方式并入本文的GCG 6. 1版中所提供，可使用FASTA以它的缺省参数（字长2和PAM250计分矩阵）确定氨基酸 序列之间的序列同一性百分比。
[0073] 在一些实施方案中，如果聚合分子（例如多肽序列或核酸序列）的序列至少25%、 至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、 至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一，那么它 们被视为彼此"同源"。在一些实施方案中，如果聚合分子的序列至少25%、至少30%、至 少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少 75 %、至少80 %、至少85 %、至少90 %、至少95 %或至少99 %类似，那么它们被视为彼此"同 源"。术语"同源"必须是指至少两个序列（核苷酸序列或氨基酸序列）之间的比较。在一 些实施方案中，如果两个核苷酸序列编码的多肽就至少一个具有至少约20个氨基酸的链 段而言是至少约50%同一、至少约60%同一、至少约70%同一、至少约80%同一或至少约 90%同一，那么所述两个核苷酸序列被视为同源。在一些实施方案中，同源核苷酸序列的特 征在于能够编码具有至少4-5个独特指定的氨基酸的链段。这些氨基酸相对于彼此的同一 性与大致间隔两者均必须为将核苷酸序列考虑为同源时所考虑。在长度小于60个核苷酸 的核苷酸序列的一些实施方案中，同源性通过能够编码具有至少4-5个独特指定的氨基酸 的链段来确定。在一些实施方案中，如果蛋白质就至少一个具有至少约20个氨基酸的链 段而言是至少约50%同一、至少约60%同一、至少约70%同一、至少约80%同一或至少约 90%同一，那么两个蛋白质序列被视为同源。
[0074] 如本文所用，"修饰的衍生物"是指在一级结构序列方面与参照多肽序列大致上 同源，但包括例如体内或体外化学和生物化学修饰或并有不见于参照多肽中的氨基酸的 多肽或其片段。所述修饰包括例如乙酰化、羧化、磷酸化、糖基化、泛素化、标记（例如用 放射性核素标记）和各种酶修饰，如将易于为本领域技术人员所了解。多种用于标记多 肽的方法和适用于所述目的的取代基或标记在本领域中是熟知的，且包括放射性同位素 (如 125I、32P、35S和3H)、结合标记的抗配体（例如，抗体）的配体、荧光团、化学发光剂、酶 和可充当标记的配体的特异性结合对成员的抗配体。对标记的选择取决于所需灵敏性、与 引物缀合的简易性、稳定性要求和可用仪器。用于标记多肽的方法在本领域中是熟知的。 参见例如 Ausubel 等，Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992 及截至 2002 的补编）。
[0075] 如本文所用，"多肽突变体"或"突变蛋白"是指相较于参照蛋白质或多肽（如天然 或野生型蛋白质）的氨基酸序列，序列含有一个或多个氨基酸的插入、重复、缺失、重排或 取代的多肽。突变蛋白可具有一个或多个氨基酸点取代，其中在某一位置处的单一氨基酸 已变为另一氨基酸；一个或多个插入和/或缺失，其中一个或多个氨基酸分别被插入在参 照蛋白质的序列中或在参照蛋白质的序列中缺失；和/或氨基酸序列在氨基或羧基末端的 任一者或两者处的截短。突变蛋白相较于参照蛋白质可具有相同或不同生物活性。
[0076] 在一些实施方案中，突变蛋白与它的对应参照蛋白质具有例如至少85%总体序列 同源性。在一些实施方案中，突变蛋白与野生型蛋白质具有至少90%总体序列同源性。在 其它实施方案中，突变蛋白展现至少95 %序列同一性、或98 %或99 %或99. 5 %或99. 9 %总 体序列同一性。
[0077] 如本文所用，"用于亲和纯化的多肽标签"是具有可用于分离或纯化融合于第一 "标签"多肽的目标第二蛋白质或多肽序列的结合配偶体的任何多肽。若干实例在本领域中 是熟知的且包括His-6标签、FLAG表位、c-myc表位、Str印-TAGII、生物素标签、谷胱甘肽 5_转移酶（GST)、几丁质结合蛋白（CBP)、麦芽糖结合蛋白（MBP)或金属亲和标签。
[0078] 如本文所用，"重组"是指例如基因或蛋白质的生物分子（1)已自它的天然存在的 环境移除，（2)不与在自然界中发现所述基因所处的多核苷酸的全部或一部分相伴，（3)可 操作地连接于它在自然界中不与之连接的多核苷酸，或（4)不存在于自然界中。术语"重 组"可关于克隆的DNA分离物、化学合成的多核苷酸类似物或由异源系统生物合成的多核苷 酸类似物、以及由所述核酸编码的蛋白质和/或mRNA加以使用。因此，举例来说，例如如果 由微生物合成的蛋白质是自由细胞中存在的重组基因合成的mRNA合成，那么它是重组的。
[0079] 术语"多核苷酸"、"核酸分子"、"核酸"或"核酸序列"是指长度是至少10个碱基 的聚合形式的核苷酸。所述术语包括DNA分子（例如，cDNA或基因组或合成DNA)和RNA 分子（例如，mRNA或合成RNA)、以及DNA或RNA的含有非天然核苷酸类似物、非天然核苷 间键或两者的类似物。核酸可呈任何拓扑构象。举例来说，核酸可为单链、双链、三链、四链 体、部分双链、分支式、发夹式、环状或呈挂锁（padlocked)构象。核酸（也称为多核苷酸） 可包括RNA、cDNA、基因组DNA以及以上各者的合成形式和混合聚合物的正义链与反义链两 者。它们可被化学或生物化学修饰或可含有非天然或衍生核苷酸碱基，如将易于为本领域 技术人员所了解。所述修饰包括例如标记、甲基化、用类似物取代一个或多个天然存在的核 苷酸、核苷酸间修饰（如不带电荷键联（例如甲基膦酸酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸 酯等）、带电荷键联（例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等））、悬垂部分（例如，多肽）、嵌入剂 (例如，吖啶、补骨脂素（psoralen)等）、螯合剂、烷基化剂和修饰的键联（例如，α端基异 构核酸等）。也包括在合成分子能够通过氢键结和其它化学相互作用结合指定序列方面模 拟多核苷酸的所述合成分子。所述分子在本领域中是已知的且包括例如在分子骨架中，肽 键被替代成磷酸酯键联的分子。其它修饰可包括例如核糖环含有桥接部分或其它结构（如 见于"锁定"核酸中的修饰）的类似物。
[0080] "合成" RNA、DNA或混合聚合物是在细胞外部产生的RNA、DNA或混合聚合物，例如 化学合成的RNA、DNA或混合聚合物。
[0081] 如本文所用的术语"核酸片段"是指相较于全长参照核苷酸序列，具有缺失（例如 5'末端或3'末端缺失）的核酸序列。在一实施方案中，核酸片段是连续序列，其中所述片 段的核苷酸序列与天然存在的序列中的相应位置一致。在一些实施方案中，片段的长度是 至少 10、15、20 或 25 个核苷酸、或至少 20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140 或150个核苷酸。在一些实施方案中，核酸序列的片段是开放阅读框序列的片段。在一些 实施方案中，所述片段编码由开放阅读框核苷酸序列编码的蛋白质的多肽片段（如本文所 定义）。
[0082] 如本文所用，如果邻近于生物体的基因组中的内源性核酸序列（或那个序列编码 的蛋白质产物）放置异源序列，以使这个内源性核酸序列的表达被改变，那么所述内源性 核酸序列在本文中被视为"重组的"。在这个情形下，异源序列是不天然邻近于内源性核酸 序列的序列，无论所述异源序列是否本身是内源性的（源于相同宿主细胞或其子代）或外 源性的（源于不同宿主细胞或其子代）。举例来说，启动子序列可取代（例如，通过同源重 组）宿主细胞的基因组中的基因的天然启动子，以使这个基因具有改变的表达样式。这个 基因现将变为"重组的"，因为它与天然侧接它的至少一些序列分离。
[0083] 如果核酸含有不天然存在于基因组中的相应核酸中的任何修饰，那么它也被视为 "重组的"。举例来说，如果内源性编码序列含有例如通过人为干预来人工引入的插入、缺失 或点突变，那么它被视为"重组的"。"重组核酸"也包括在异源位点处整合至宿主细胞染色 体中的核酸和以游离体形式存在的核酸构建体。
[0084] 如本文所用，短语参照核酸序列的"简并变体"涵盖可根据标准遗传密码翻译以提 供与自所述参照核酸序列翻译的氨基酸序列一致的氨基酸序列的核酸序列。术语"简并寡 核苷酸"或"简并引物"用于表示能够与在序列方面未必一致，但在一个或多个特定区段内 彼此同源的靶标核酸序列杂交的寡核苷酸。
[0085] 术语"序列同一性百分比"或"同一"在核酸序列的情形下是指当比对以达成最 大对应时，两个序列中的残基是相同的。序列同一性比较的长度可为历经至少约9个核苷 酸、通常至少约20个核苷酸、更通常至少约24个核苷酸、通常至少约28个核苷酸、更通常 至少约32个、且甚至更通常至少约36个或更多个核苷酸的链段。存在本领域中已知的 可用于测量核苷酸序列同一性的许多不同算法。举例来说，可使用威斯康星程序包10.0 版（Genetics Computer Group (GCG) ,Madison, Wis)中的程序 FASTA、Gap 或 Bestfit 比 较多核苷酸序列。FASTA提供在查询序列与搜索序列之间最佳重叠的区域的比对和序列 同一性百分比。Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98 (1990)。举例来说，如以引用的方 式并入本文的GCG 6. 1版中所提供，可使用FASTA以它的缺省参数（字长6和用于计分矩 阵的NOPAM因子）或使用Gap以它的缺省参数确定核酸序列之间的序列同一性百分比。 或者，可使用计算机程序 BLAST (Altschul 等，J. Mol. Biol. 215:403-410(1990) ;Gish 和 States, Nature Genet. 3:266-272 (1993) ;Madden 等，Meth. Enzymol. 266:131-141 (1996); Altschul 等，Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (1997) ;Zhang 和 Madden, Genome Res.7:649-656 (1997)),尤其 blastp 或 tblastn(Altschul 等，Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (1997))比较序列。
[0086] 术语"实质性同源性"或"实质性类似性"在关于核酸或其片段时指示当在适当核 苷酸插入或缺失下与另一核酸（或它的互补链）最优比对时，在至少约76%、80%、85%、或 至少约90 %、或至少约95 %、96 %、97 %、98 %或99 %的核苷酸碱基中存在核苷酸序列同一 性，如通过序列同一性的任何熟知算法，如如上所论述的FASTA、BLAST或Gap所测量。
[0087] 或者，当核酸或其片段与另一核酸、另一核酸的一条链、或其互补链在严格杂交条 件下杂交时，存在实质性同源性或类似性。"严格杂交条件"和"严格洗涤条件"在核酸杂交 实验的情形下取决于许多不同物理参数。核酸杂交将受如以下的条件影响：盐浓度、温度、 溶剂、杂交物质的碱基组成、互补区域的长度和杂交核酸之间的核苷酸碱基错配数目，如将 易于为本领域技术人员所了解。本领域普通技术人员了解如何改变这些参数来达成特定杂 交严格性。
[0088] 一般来说，特定DNA杂交物的"严格杂交"是在约25°C下在低于热熔点（Tm)下在 一组特定条件下进行。特定DNA杂交物的"严格洗涤"是在温度约5°C下在低于Tm下在一 组特定条件下进行。Tm是50%靶标序列与完全匹配探针杂交所处的温度。参见Sambrook 等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)，第9. 51页。出于本文目的，溶液相杂交的"严格 条件"被定义为在65°C下在6xSSC(其中20xSSC含有3. OM NaCl和0. 3M柠檬酸钠）、1 % SDS中进行水性杂交（即不含甲酰胺）8-12小时，随后在65°C下在0. 2xSSC、0. 1%SDS中进 行2次20分钟洗涤。熟练工作者应了解的是在65°C下杂交将取决于许多因素而在不同速 率下发生，所述因素包括杂交的序列的长度和同一性百分比。
[0089] 如本文所用，"表达控制序列"是指为实现它们所可操作地连接的编码序列的表达 所必需的多核苷酸序列。表达控制序列是控制核酸序列的转录、转录后事件和翻译的序列。 表达控制序列包括适当转录启始、终止、启动子和增强子序列；高效RNA加工信号，如剪接 和聚腺苷酸化信号；使细胞质mRNA稳定的序列；增强翻译效率的序列（例如，核糖体结合 位点）；增强蛋白质稳定性的序列；和当需要时，增强蛋白质分泌的序列。所述控制序列的 性质视宿主生物体而不同；在原核生物中，所述控制序列通常包括启动子、核糖体结合位点 和转录终止序列。术语"控制序列"意图至少涵盖其存在为表达所必需的任何组分，且也可 涵盖其存在是有利的其它组分，例如前导序列和融合配偶体序列。
[0090] 如本文所用，"可操作地连接的"表达控制序列是指以下连接：表达控制序列与目 标基因邻接以控制所述目标基因，以及表达控制序列反式作用或在一定距离下控制所述目 标基因的作用。
[0091] 如本文所用，"载体"意图指代能够转运它已连接的另一核酸的核酸分子。一种载 体类型是"质粒"，其通常是指可向其中连接其它DNA区段的环状双链DNA环，但也包括线性 双链分子，如通过聚合酶链式反应（PCR)由扩增或由用限制酶处理环状质粒产生的线性双 链分子。其它载体包括粘粒、细菌人工染色体（BAC)和酵母人工染色体（YAC)。另一载体类 型是病毒载体，其中可将其它DNA区段连接至病毒基因组中（以下更详细论述）。某些载体 能够在它们所引入的宿主细胞中自主复制（例如，具有在宿主细胞中起作用的复制起点的 载体）。其它载体可在引入宿主细胞中后整合至所述宿主细胞的基因组中，且由此与宿主基 因组一起复制。此外，某些载体能够指导它们所可操作地连接的基因的表达。所述载体在 本文中称为"重组表达载体"（或简称为"表达载体"）。
[0092] 如本文所用的术语"重组宿主细胞"（或简称为"重组细胞"或"宿主细胞"）意图 指代已引入有如重组载体的重组核酸的细胞。在一些情况下，用词"细胞"由指定细胞类型 的名称替代。举例来说，"重组微生物"是为微生物宿主细胞的重组宿主细胞。应了解的是 所述术语意图不仅指代特定受试细胞，而且指代所述细胞的子代。因为某些修饰可由于突 变或环境影响而发生在继代中，所以所述子代可能实际上不与亲本细胞一致，但仍然包括 在如本文所用的术语"重组宿主细胞"、"重组细胞"和"宿主细胞"的范围内。重组宿主细 胞可为生长在培养物中的分离的细胞或细胞系或可为存在于活组织或生物体中的细胞。 [0093] 如本文所用，术语"异养性"是指生物体不能固定碳且使用有机碳来生长。
[0094] 如本文所用，术语"自养性"是指生物体使用来自光（通过光合作用）或无机化学 反应（化学合成）的能量自简单无机分子产生复杂有机化合物（如碳水化合物、脂肪和蛋 白质）。
[0095] 如本文所用，"肌肉质量"是指受试者的身体中的肌肉重量。肌肉质量包括骨骼肌、 平滑肌（如心脏和消化道肌肉）和这些肌肉中含有的水。特定肌肉的肌肉质量可使用双能 X射线吸光测定法（DEXA) (Padden-Jones等，2004)来测定。总瘦体重（减去脂肪）、总身 体质量和骨矿物质含量也可通过DEXA来测量。在一些实施方案中，受试者的特定肌肉的肌 肉质量的变化是例如通过DEXA来测定，且所述变化用作所述受试者的肌肉质量的总变化 的代表。因此，举例来说，如果受试者消耗如本文公开的营养性蛋白质且历经一段时期经历 特定肌肉或肌肉群中的肌肉质量增加，那么可推断所述受试者已经历肌肉质量增加。
[0096] 如本文所用，"肌肉强度"是指在单次最大出力下，肌肉可产生的力的量。存在两种 类型的肌肉强度，即静态强度和动态强度。静态强度是指肌肉的等长收缩，其中肌肉产生力 量，而肌肉长度保持恒定和/或此时不存在关节运动。实例包括固持或携带物件或相对于 墙壁推进。动态强度是指肌肉产生导致运动的力量。动态强度可为等张收缩，其中肌肉在 恒定负荷或等动力收缩下缩短，其中肌肉在恒定速度下收缩且缩短。动态强度也可包括等 惯性强度。
[0097] 除非指定，否则"肌肉强度"是指最大动态肌肉强度。最大强度称为"最大重复一 次"（IRM)。这是可在不失败或损伤下完全移动（提升、推进或牵拉）最大负荷（以千克 计）一次的测量结果。这个值可直接测量，但这样做需要增加重量直至受试者未能将活动 进行完毕。或者，IRM是通过使用小于受试者可移动的最大量的负荷，对受试者可达成的最 大运动重复次数进行计数来估计。常在临床试验中测量腿部伸展和腿部弯曲（Borsheim 等，"Effect of amino acid supplementation on muscle mass, strength and physical function in elderly，" Clin Nutr 2008;27:189-195 ;Paddon_Jones，等，"Essential amino acid and carbohydrate supplementation ameliorates muscle protein loss in humans during 28days bed rest，"J Clin Endocrinol Metab 2004;89:4351-4358)。
[0098] 如本文所用，"功能性表现"是指模拟每日活动的功能性测试。"功能性表现"是 通过任何适合接受测试来测量，所述测试包括定时举步测试（自4英寸台阶尽可能快地 上下举步5次）、定时平台传送测试（在平台上尽可能快地自立位变为仰卧位且此后再次 向上变为立位，重复一次）、和身体表现连串测试（静态平衡测试、坐椅测试和行走测试） (Borsheim等，"Effect of amino acid supplementation on muscle mass, strength and physical function in elderly， "Clin Nutr 2008;27:189-195)。
[0099] 如本文所用，"身体质量指数"或"BMI"或"克托莱指数（Quetelet index)"是以 千克计的受试者的重量除以以米计的受试者的身高的平方（kg/m2)。
[0100] 对于成人，常使用BMI来评估个体的体重偏离具有他的或她的身高的人士的正常 或合乎需要体重的程度。重量过度或不足可部分地用身体脂肪来解释，但如肌肉发达性的 其它因素也显著影响BMI。世界卫生组织将BMI小于18. 5视为重量不足且可指示营养不良、 饮食病症或其它健康问题，而BMI大于25被视为超重且高于30被视为肥胖。（世界卫生组 织。BMI 分类。2012 年 3 月 19 日访问 http://apps.who. int/bmi/index.jsp ? introPage =intro_3.html.)如本文所用，"合乎需要的身体质量指数"是身体质量指数自约18.5至 约25。因此，如果受试者的BMI低于约18. 5,那么所述受试者的BMI增加是所述受试者的 BMI的合乎需要增加。如果相反，受试者的BMI高于约25,那么所述受试者的BMI降低是所 述受试者的BMI的合乎需要增加。
[0101] 如本文所用，"年长"哺乳动物是经历身体质量指数和肌肉质量的至少一者的年龄 相关变化（例如，年龄相关肌肉减少症）的哺乳动物。在一些实施方案中，"年长"人是至少 50岁、至少60岁、至少65岁、至少70岁、至少75岁、至少80岁、至少85岁、至少90岁、至 少95岁或至少100岁。在一些实施方案中，年长动物、哺乳动物或人是已经历肌肉质量自 峰值寿命肌肉质量损失至少5 %、至少10 %、至少15 %、至少20 %、至少25 %、至少30 %、至 少35 %、至少40 %、至少45 %、至少50 %、至少55 %或至少60 %的人。因为已知身体质量 指数和肌肉质量的至少一者的年龄相关变化与年龄增加相关，所以在一些实施方案中，仅 基于年龄鉴定或确定年长哺乳动物。因此，在一些实施方案中，"年长"人是通过他们的年 龄是至少60岁、至少65岁、至少70岁、至少75岁、至少80岁、至少85岁、至少90岁、至少 95岁或至少100岁的事实，而不依靠身体质量指数和肌肉质量的至少一者的测量结果来简 单地鉴定或确定。
[0102] 如本文所用，如果患者由于医学疾病而经历身体质量指数和肌肉质量的至少一者 的变化（例如，肌肉减少症），那么所述患者患有"医学上危急疾病"。在一些实施方案中，患 者持续他们醒来时间的至少25%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、 至少95%或100%被限制卧床。在一些实施方案中，患者是无意识的。在一些实施方案中， 患者已如这个段落中所述被限制卧床至少1天、2天、3天、4天、5天、10天、2周、3周、4周、 5周、10周或更长。
[0103] 如本文所用，"蛋白质-能量营养不良症"是指一种形式的营养不良，其中存在蛋白 质摄取不充分。类型包括夸休可尔症（Kwashiorkor)(突出性蛋白质营养不良）、消瘦（缺 乏卡路里与蛋白质营养物两者）和消瘦性夸休可尔症（存在显著蛋白质缺乏和显著卡路里 不足征象，有时称为最重度形式的营养不良）。
[0104] 如本文所用，"恶病质"是指导致损耗和重量减轻的多层面临床综合征。它是一种 复杂病状，其中蛋白质分解代谢超过蛋白质合成代谢，此使得肌肉损耗成为所述病状的主 要特征。除蛋白质代谢的代谢紊乱之外，它的特征也在于厌食和发炎。这些紊乱加上蛋白 质代谢受损在不同程度上对营养物疗法起反应。
[0105] 如本文所用，"产热"是哺乳动物中的热产生过程。产热伴随有能量消耗增加。产 热具体来说是在食物组分（如蛋白质）代谢之后燃烧能量。这也可称为食物的热效应。由 个体消耗的总能量等于静息能量消耗（在空腹状态下在静息时消耗来支撑基础代谢的能 量）、食物的热效应和与身体活动相关的能量消耗的总和。静息能量消耗占人中总能量消 耗的约65-75%。肌肉质量的量和活性是静息能量消耗的一种影响因素。足以支撑肌肉的 蛋白质消耗也影响静息能量消耗。蛋白质的摄取倾向于增加餐后能量消耗；这是食物的热 效应。食物的热效应占人中总能量消耗的约10%。尽管这是总能量消耗的较小比例，但这 个值的较小增加可影响体重。蛋白质具有的热效应高于脂肪或碳水化合物；这个效应连同 蛋白质的其它代谢影响一起使得蛋白质成为适用于重量控制、糖尿病管理和其它情况的基 质。
[0106] 如本文所用，"饱足"是当进食时变饱或对进食的需求降低的行为。这会停止或减 少进食。
[0107] 如本文所用，"饱腹感"是餐后保持饱满的行为，其表示为餐后不进食的时期。
[0108] 如本文所用，最广泛而言，"运动"是增强或维持身体康健以及总体健康和安康的 任何身体活动。运动是出于各种原因来进行，包括强化肌肉和心血管系统、磨练运动技能、 减轻或维持重量以及出于享乐的目的。
[0109] 如本文所用，"足量"是本文公开的蛋白质或多肽足以产生所需作用的量。举例来 说，如果需要肌肉质量增加，那么足量是历经一段时期导致肌肉质量增加的量。足量蛋白质 或多肽片段可直接（即通过向受试者施用所述蛋白质或多肽片段）提供，或它可作为包含 所述蛋白质或多肽片段的组合物的一部分提供。在本文中其它地方论述施用模式。
[0110] 如本文所用，术语"哺乳动物"是指分类类别哺乳纲的任何成员，包括胎盘哺乳动 物和有袋哺乳动物。因此，"哺乳动物"包括人、灵长类动物、家畜和实验室哺乳动物。示例 性哺乳动物包括啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、狗、猫、绵羊、马、山羊、美洲驼、牛、灵长类动物、 猪和任何其它哺乳动物。在一些实施方案中，哺乳动物是转基因哺乳动物、遗传工程化哺乳 动物和克隆哺乳动物中的至少一者。
[0111] A.营养性蛋白质
[0112] 出于本公开的目的，"营养性蛋白质"是含有合乎需要量的必需氨基酸的蛋白质。 在一些实施方案中，以重量计，营养性蛋白质包含至少30%必需氨基酸。在一些实施方案 中，以重量计，营养性蛋白质包含至少40%必需氨基酸。在一些实施方案中，以重量计，营养 性蛋白质包含至少50%必需氨基酸。在一些实施方案中，营养性蛋白质包含以下或由以下 组成：天然存在于可食用物质中的蛋白质或蛋白质的片段。"可食用物质"以它的最广泛意 义涵盖已知由至少一种类型的哺乳动物进食而无有害作用的任何物质。有害作用包括有毒 作用和毒性作用。在一些实施方案中，可食用物质是已知由人进食而无有害作用的物质。一 些可食用物质是处于有限地理位置的仅一小组某一类型的哺乳动物的膳食的不常见但已 知的组分，而其它可食用物质是遍及世界上大部分区域的膳食主要成分。在其它实施方案 中，可食用物质是不知先前由任何哺乳动物进食，但在测试后被证明可食用的物质。可食用 物质包括但不限于特伦纳棉（Gossypium turneri)、白黄侧耳（Pleurotus cornucopiae)、 大豆（Glycine max)、水稻（Oryza sativa)、大眼金枪鱼（Thunnus obesus)、荀片冷杉 (Abies bracteata)、红腹刺鼠 （Acomys ignitus)、叶轴香豌豆（Lathyrus aphaca)、印度野 牛（Bos gaurus)、黑耳岩玲（Raphicerus melanotis)、格陵兰海豹（Phoca groenlandica)、中华舞（Acipenser sinensis)、马来灵猫（Viverra tangalunga)、漏斗状 侧耳（Pleurotus sajor-caju)、苦养麦（Fagopyrum tataricum)、美国五针松（Pinus strobus)、大花牵牛（Ipomoea nil)、东北红豆杉（Taxus cuspidata)、械叶小牵牛 (Ipomoea wrightii)、砂海螂（Mya arenaria)、美味称猴桃（Actinidia deliciosa)、戈氏 瞪玲（Gazella granti)、欧洲山杨（Populus tremula)、西洋李（Prunus domestica)、银区鸟 (Larus argentatus)、毛野豌豆（Vicia villosa)、乳斑棘鱗鱼（Sargocentron punctatissimum)、叉枝妮子草（Silene Iatifolia)、霍氏海豚（Lagenodelphis hosei)、大 西洋浪始（Spisula solidissima)、暗长毛朦（Crossarchus obscurus)、赤豆（Phaseolus angularis) Λ Lathyrus vestitus、细鱗大麻哈鱼（Oncorhynchus gorbuscha)、密西西t匕短 吻鳄（Alligator mississippiensis)、哈列朋松（Pinus halepensis)、海区鸟（Larus canus)、宪菁甘蓝（Brassica napus)、麦瓶草（Silene cucubalus)、带纹海豹（Phoca fasciata)、印度瞪玲（Gazella bennettii)、火炬松（Pinus taeda)、加拿大红豆杉（Taxus canadensis)、鱗批泽米（Zamia furfuracea)、云南松（Pinus yunnanensis)、乔松（Pinus wallichiana)、石习桕（Asparagus officinalis)、风铃辣椒（Capsicum baccatum)、大盆地 刺果松（Pinus longaeva)、菜果紫杉（Taxus baccata)、西伯利亚红松（Pinus sibirica)、 甜禮（Citrus sinensis)、条纹金鱗鱼（Sargocentron xantherythrum)、美洲野牛（Bison bison)、汤姆森瞪玲（Gazella thomsonii)、救荒野豌豆（Vicia sativa)、加拿大黑雁 (Branta canadensis)、序菜(Apium graveolens)、检皮械(Acer campestre)、完宴 (Coriandrum sativum)、圆维麦瓶草（Silene conica)、莴苣（Lactuca sativa)、黄灯笼辣 椒（Capsicum chinense)、白桧（Abies veitchii)、家山羊（Capra hircus)、斯氏瞪玲 (Gazella spekei)、大麻哈鱼（Oncorhynchus keta)、小心叶薯（Ipomoea obscura)、菜瓜 (Cucumis melo var.conomon)、环斑海豹（Phoca hispida)、火狐（Vulpes vulpes)、羽叶鸟 萝（Ipomoea quamoclit)、多毛番煎（Solanum habrochaites)、杨属的种（Populus sp·)、 刚松（Pinus rigida)、提琴叶栎（Quercus lyrata)、多花菜豆（Phaseolus coccineus)、红 嘴区鸟（Larus ridibundus)、尖吻棘鱗鱼（Sargocentron spiniferum)、金枪鱼（Thunnus thynnus)、北极狐（Vulpes lagopus)、大额印度野牛（Bos gaurus frontalis)、意大利槭 (Acer opalus)、鸡爪械（Acer palmatum)、石栎（Quercus ilex)、中欧山松（Pinus mugo)、 赤颈鹤（Grus antigone)、山地松（Pinus uncinata)、乌梅（Prunus mume)、大鱗大马哈鱼 (Oncorhynchus tschawytscha)、鹅喉玲（Gazella subgutturosa)、耳廓狐（Vulpes zerda)、大果松（Pinus coulteri)、海岛棉（Gossypium barbadense)、欧亚械（Acer pseudoplatanus)、红大麻哈鱼（Oncorhynchus nerka)、须野猪（Sus barbatus)、养麦袓先 亚种（Fagopyrum esculentum subsp.Ancestrale)、朿丨描菜蓟（Cynara cardunculus)、绿豆 (Phaseolus aureus)、黑杨（Populus nigra)、施温迪茫棉（Gossypium schwendimanii)、野 生马铃薯（Solanum chacoense)、赤栎（Quercus rubra)、黄瓜（Cucumis sativus)、普通斑 马（Equus burchelli)、银士麻哈鱼（Oncorhynchus kisutch)、福射松（Pinus radiata)、 港海豹（Phoca vitulina richardsi)、黑颈鹤（Grus nigricollis)、大冷杉（Abies grandis)、孟苏大麻哈鱼（Oncorhynchus masou)、菠菜（Spinacia oleracea)、智利番煎 (Solanum chilense)、旋角玲（Addax nasomaculatus)、甘薯（Ipomoea batatas)、格列威斑 马（Equus grevyi)、库页冷杉（Abies sachalinensis)、意大利石松（Pinus pinea)、康氏 蹄幅（Hipposideros commersoni)、走莖番红花（Crocus nudiflorus)、柚（Citrus maxima)、美洲舞（Acipenser transmontanus)、拟似棉（Gossypium gossypioides)、廣香猫 (Viverra zibetha)、西里栎（Quercus cerris)、斑头雁（Anser indicus)、狐尾松（Pinus balfouriana)、黄雪轮（Silene otites)、大麻哈鱼属的种（Oncorhynchus sp.)、大斑灵猫 (Viverra megaspila)、野耗牛（Bos mutus grunniens)、湿地松（Pinus elliottii)、土库 曼野马户（Equus hemionus kulan)、羱羊（Capra ibex ibex)、大蒜（Allium sativum)、萝卜 (Raphanus sativus)、萌芽松（Pinus echinata)、野黑樓（Prunus serotina)、白纹觸 (Sargocentron diadema)、匙叶麦瓶草（Silene gallica)、甘蓝（Brassica oleracea)、古月 萝卜（Daucus carota)、虫工蹲（Oncorhynchus mykiss)、芥蓝（Brassica oleracea var. alboglabra)、陆地棉（Gossypium hirsutum)、欧洲冷杉（Abies alba)、柑桔（Citrus reticulata)、菊苣（Cichorium intybus)、柬埔寨野牛（Bos sauveli)、马马它（Lama glama)、玉米（Zea mays)、石菖薄（Acorus gramineus)、赤狐（Vulpes macrotis)、盘羊蒙 古亚种（Ovis ammon darwini)、沙氏石玲（Raphicerus sharpei)、扭叶松（Pinus contorta)、瘤牛（Bos indicus)、西伯利亚北山羊（Capra sibirica)、西黄松（Pinus ponderosa)、苦杏仁（Prunus dulcis)、马铃薯（Solanum sogarandinum)、蕹菜（Ipomoea aquatica)、白 _ 斑纹海豚（Lagenorhynchus albirostris)、加拿大盘羊（Ovis canadensis)、欧洲甜樓桃（Prunus avium)、鹿瞪玲（Gazella dama)、长鳍金枪鱼（Thunnus alalunga)、白花妮子草（Silene pratensis)、瑞士松（Pinus cembra)、番红花（Crocus sativus)、西瓜（Citrullus lanatus)、红额瞪玲（Gazella rufifrons)、亚洲芥（Brassica tournefortii)、擒角山羊（Capra falconeri)、民都洛水牛（Bubalus mindorensis)、长叶 松（Pinus palustris)、月桂樓（Prunus laurocerasus)、白枕鹤（Grus vipio)、牵牛花 (Ipomoea purpurea)、平滑叶松（Pinus leiophylla)、暗色斑纹海豚（Lagenorhynchus obscurus)、小岩玲(Raphicerus campestris)、大白菜(Brassica rapa subsp. Pekinensis)、Acmella radicans、三裂叶薯（Ipomoea triloba)、展叶松（Pinus patula)、 舌甘瓜（Cucumis melo)、矮松(Pinus virginiana)、番煎（Solanum lycopersicum)、赤松 (Pinus densiflora)、大叶松（Pinus engelmannii)、欧洲白栎（Quercus robur)、刺毛月光 花（Ipomoea setosa)、红平燕（Pleurotus djamor)、晃蹄幅（Hipposideros diadema)、绵 羊（Ovis aries)、长棘鱗鱼（Sargocentron microstoma)、花莖甘蓝（Brassica oleracea var.italica)、东高力卩索羱羊（Capra cylindricornis)、杂交白杨（Populus kitakamiensis)、编织葱(Allium textile)、香豆(Vicia faba)、养麦(Fagopyrum esculentum)、草原野牛(Bison priscus)、栓皮栎(Quercus suber)、Lagophylla ramosissima、马达力口斯力口地结(Acrantophis madagascariensis)、西伯利亚鱼寻（Acipenser baerii)、樓桃辣椒（Capsicum annuum)、小麦（Triticum aestivum)、爪蟾（Xenopus Iaevis)、西伯利亚海豹（Phoca sibirica)、纳氏舞（Acipenser naccarii)、中华称猴桃 (Actinidia chinensis)、白大角羊（Ovis dalli)、马铃薯（Solanum tuberosum)、菲律宾水 牛（Bubalus carabanensis)、粗梓樣（Citrus jambhiri)、欧洲野牛（Bison bonasus)、非 洲野驴（Equus asinus)、低地倭水牛（Bubalus depressicornis)、刺序侧耳（Pleurotus eryngii)、矮煎（Solanum demissum)、赤羊（Ovis vignei)、野生玉米（Zea mays subsp. Parviglumis)、丹吉尔山黧豆（Lathyrus tingitanus)、百岁兰（Welwitschia mirabilis)、 澳洲鹤（Grus rubicunda)、禮红鸟萝（Ipomoea coccinea)、洋葱（Allium cepa)、索曼莫格 齐瞪玲（Gazella soe_erringii)、宪菁（Brassica rapa)、痩马它（Lama vicugna)、秘鲁番 煎（Solanum peruvianum)、北欧爪蟾（Xenopus borealis)、高加索山羊（Capra caucasica)、黄鳍鲔(Thunnus albacares)、山斑马(Equus zebra)、原鸡(Gallus gal Ius)、野生墨西哥土豆（Solanum bulbocastanum)、台湾叶鼻幅（Hipposideros terasensis)、白腰斑纹海豚（Lagenorhynchus acutus)、河马（Hippopotamus amphibius)、 红松（Pinus koraiensis)、蒙皮利埃械（Acer monspessulanum)、三角叶杨（Populus deltoides)、毛果杨（Populus trichocarpa)、俄罗斯舞（Acipenser guldenstadti)、黑松 (Pinus thunbergii)、结球甘蓝（Brassica oleracea var.capitata)、柯氏渊杜父鱼 (Abyssocottus korotneffi)、居维叶瞪玲（Gazella cuvieri)、日光冷杉（Abies homolepis)、辽东冷杉（Abies holophylla)、山瞪玲（Gazella gazella)、五针松（Pinus parviflora)、习习衣甘蓝（Brassica oleracea var. acephala)、西葫芦（Cucurbita pepo)、 华山松（Pinus armandii)、大白叶冷杉（Abies mariesii)、太平洋黑鲔（Thunnus thynnus orientalis)、温州蜜柑（Citrus unshiu)、契斯曼尼番煎（Solanum cheesmanii)、太平洋短 吻海豚（Lagenorhynchus obiiquidens)、挪威械（Acer platanoides)、梓樣（Citrus limon)、杜氏納（Acrantophis dumerili)、科民煎(Solanum commersonii)、木本棉 (Gossypium arboreum)、桃（Primus persica)、糖皮侧耳（Pleurotus ostreatus)、日本冷 杉（Abies firma)、细角玲（Gazella Ieptoceros)、盐湖鲑鱼（Salmo salar)、美洲海螯虫下 (Homarus americanus)、紫果冷杉（Abies magnifica)、爪卩圭野牛（Bos javanicus)、环斑海 豹（Phoca Iargha)、卷毛野猪（Sus cebifrons)、煎子（Solanum melongena)、海豹（Phoca vitulina)、欧洲赤松（Pinus sylvestris)、佛州泽米（Zamia floridana)、沙狐（Vulpes corsac)、MM· (Allium porrum)、里海海豹（Phoca caspica)、南非狐（Vulpes chama)、中 国红豆杉（Taxus chinensis)、花椰菜（Brassica oleracea var. botrytis)、灰雁（Anser anser anser)、金甲豆（Phaseolus Iunatus)、油菜（Brassica campestris)、糖械（Acer saccharum)、偃松（Pinus pumi la)、潘那利番煎（Solanum pennel Ii i)、可食松（Pinus edulis)、南方牵牛（Ipomoea cordatotriloba)、银白杨（Populus alba)、克拉克大麻哈鱼 (Oncorhynchus clarki)、无梗花栎（Quercus petraea)、多抚野猪（Sus verrucosus)、野生 蒙古野马（Equus caballus przewalskii)、胡杨（Populus euphratica)、热带爪蟾 (Xenopus tropicalis)、短叶紫杉（Taxus 13代￥丨：[>011&)、原5它（1^111& guanicoe)、北美短叶 松（Pinus banksiana)、龙葵（Solanum nigrum)、印尼野猪（Sus celebensis)、芥菜 (Brassica juncea)、大西洋斑纹海豚（Lagenorhynchus cruciger)、颤杨（Populus tremuloides)、刺针松（Pinus pungens)、西里伯斯野水牛（Bubalus quarlesi)、Quercus gamelliflora、欧洲盘羊（Ovis orientalis musimon)、印度水牛（Bubalus bubalis)、琉球 松（Pinus Iuchuensis)、菲律宾野猪（Sus philippensis)、菜豆（Phaseolus vulgaris)、 海蹲（Salmo trutta)、波斯舞（Acipenser persicus)、野生种马铃薯（Solanum brevidens)、多脂松（Pinus resinosa)、黑马玲（Hippotragus niger)、努比亚羱羊（Capra nubiana)、Asparagus scaber、方宠转牵牛（Ipomoea platensis)、野猪（Sus scrofa)、野山羊 (Capra aegagrus)、山黧豆（Lathyrus sativus)、赤鳍棘鱗鱼（Sargocentron tiere)、大西 洋庸蝶（Hippoglossus hippoglossus)、美国菖蒲(Acorus americanus)、马(Equus caballus)、欧洲牛（Bos taurus)、山芥（Barbarea vulgaris)、小羊马它（Lama guanicoe pacos)、海岸松（Pinus pinaster)、普通章鱼（Octopus vulgaris)、星花煎（Solanum crispum)、褐马玲（Hippotragus equinus)、普通斑马达马亚种（Equus burchellii antiquorum)、亚氏长毛朦（Crossarchus alexandri)、月光花（Ipomoea alba)、一粒小麦 (Triticum monococcum)、长叶杨(Populus jackii)、皮氏斑纹海豚（Lagenorhynchus australis)、多卡瞪玲（Gazella dorcas)、胭脂虫栎（Quercus coccifera)、雪雁（Anser caerulescens)、白菖蒲（Acorus calamus)、西藏长叶松（Pinus roxburghii)、油松（Pinus tabuliformis)、费切尔泽米（Zamia fischeri)、肉垂鹤（Grus carunculatus)、棘小鼠 (Acomys cahirinus)、网纹甜瓜（Cucumis melo var.reticulatus)、锡兰野鸡（Gallus lafayettei)、豌豆（Pisum sativum)、狭松（Pinus attenuata)、美国沙松（Pinus clausa)、沙特瞪玲（Gazella saudiya)、羱羊（Capra ibex)、三浅裂野牵牛（Ipomoea trifida)、繁茂大当草（Zea luxurians)、越南松（Pinus krempfii)、威氏刺毛鼠 （Acomys wilsoni)、绘叶石蛇床（Petroselinum crispum)、针栎（Quercus palustris)、提莫菲维小 麦（Triticum timopheevi)、火鸡（Meleagris gallopavo)、甘蓝（Brassica oleracea)、甘 蓝（Brassica oleracea)、舌甘菜（Beta vulgaris)、番煎（Solanum lycopersicum)、菜豆 (Phaseolus vulgaris)、剑鱼（Xiphias gladius)、美洲条纹狼鱼卢（Morone saxatilis)、大 口 黑鱼卢（Micropterus salmoides)、巨扇贝（Placopecten magellanicus)、黍鲱（Sprattus sprattus)、大西洋鲱（Clupea harengus)、欧洲銳（Engraulis encrasicolus)、舆瓜 (Cucurbita maxima)、双抱子蘑 ? (Agaricus bisporus)、香蕉(Musa acuminata x balbisiana)、苹果（Malus domestica)、鹰嘴豆（Cicer arietinum)、绿头鸭（Anas platyrhynchos)、大果酸果蔓（Vaccinium macrocarpum)、北美红木莓（Rubus idaeus x strigosus)、矮丛蓝莓（Vaccinium angustifolium)、草莓（Fragaria ananassa)、欧洲黑莓 (Rubus fruticosus)、舌甘瓜（Cucumis melo)、菠萝（Ananas comosus)、西葫芦（Cucurbita pepo)、南瓜(Cucurbita moschata)、家猪(Sus scrofa domesticus)、罗勒(Ocimum basilicum)、迷迭香（Rosmarinus officinalis)、茴香（Foeniculum vulgare)、波叶大黄 (Rheum rhabarbarum)、番木瓜（Carica papaya)、芒果（Mangifera indica)、美味称猴桃 (Actinidia deliciosa)、杏（Prunus armeniaca)、欧洲甜樓桃（Prunus avium)、椰子 (Cocos nucifera)、油撤揽（Olea europaea)、西洋梨（Pyrus communis)、无花果（Ficus carica)、鸡蛋果（Passiflora edulis)、水稻亚种粳稻（Oryza sativa subsp.Japonica)、 籼稻（Oryza sativa subsp. Indica)、鹤 _ (Coturnix coturnix)、酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)0
[0113] 在一些实施方案中，营养性蛋白质包含以下或由以下组成：天然存在于可食用物 质中的蛋白质或蛋白质的片段的衍生物或突变蛋白。所述营养性蛋白质可称为"工程化营 养性蛋白质"。在所述实施方案中，天然蛋白质或其片段是"参照"蛋白质或多肽且工程化营 养性蛋白质或其第一多肽序列相对于所述参照蛋白质或多肽的氨基酸序列包含至少一个 序列修饰。举例来说，在一些实施方案中，工程化营养性蛋白质或其第一多肽序列与至少一 个参照营养性蛋白质氨基酸序列至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 99. 5%同源。通常，工程化营养性蛋白质或其第一多肽序列中存在的支链氨基酸残基与总 氨基酸残基的比率、必需氨基酸残基与总氨基酸残基的比率、以及亮氨酸残基与总氨基酸 残基的比率的至少一者大于参照营养性蛋白质或多肽序列中存在的支链氨基酸残基与总 氨基酸残基的相应比率、必需氨基酸残基与总氨基酸残基的相应比率、以及亮氨酸残基与 总氨基酸残基的相应比率的至少一者。
[0114] 在一些实施方案中，营养性蛋白质是食物中的丰富蛋白质或其衍生物或突变蛋 白，或是食物中的丰富蛋白质或其衍生物或突变蛋白的片段。丰富蛋白质是相对于食物中 存在的其它蛋白质，以较高浓度存在于所述食物中的蛋白质。食物可为处于有限地理位置 的仅一小组某一类型的哺乳动物的膳食的已知组分，或为遍及世界上大部分区域的膳食主 要成分。在一些实施方案中，食物中的丰富蛋白质选自鸡蛋蛋白质，如卵清蛋白、卵铁传递 蛋白和卵类粘蛋白；肉蛋白质，如肌球蛋白、肌动蛋白、原肌凝蛋白、I父原蛋白和肌f丐蛋白； 谷类蛋白质，如酪蛋白、a 1酪蛋白、α 2酪蛋白、β酪蛋白、K酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳 白蛋白、大豆球蛋白、β -伴大豆球蛋白、谷蛋白、谷醇溶蛋白、麦醇溶蛋白、麦谷蛋白、白蛋 白、球蛋白；鸡肌肉蛋白质，如白蛋白、烯醇酶、肌酸激酶、磷酸甘油酸变位酶、磷酸丙糖异 构酶、载脂蛋白、卵铁传递蛋白、葡糖磷酸变位酶、磷酸甘油酸激酶、甘油-3-磷酸脱氢酶、 3_磷酸甘油醛脱氢酶、血红素、丝切蛋白、糖原磷酸化酶、果糖-1，6-二磷酸酶、肌动蛋白、 肌球蛋白、原肌球蛋白a链、酪蛋白激酶、糖原磷酸化酶、果糖-1，6-二磷酸酶、醛缩酶、微 管蛋白、波形蛋白、内质蛋白（endoplasmin)、乳酸脱氢酶、肌动蛋白解聚因子（destrin)、 转甲状腺素蛋白、双磷酸果糖醛缩酶、碳酸酐酶、醛脱氢酶、膜联蛋白、腺苷高半胱氨酸酶 (adenosyl homocysteinase);猪肉肌肉蛋白质，如肌动蛋白、肌球蛋白、烯醇酶、肌联蛋白 (titin)、丝切蛋白、磷酸甘油酸激酶、烯醇酶、丙酮酸脱氢酶、糖原磷酸化酶、磷酸丙糖异构 酶、肌激酶；和鱼蛋白质，如小白蛋白、丙酮酸脱氢酶、肌间线蛋白（desmin)和磷酸丙糖异 构酶。
[0115] 通常被认为是高品质氨基酸的良好来源的三种蛋白质天然来源是乳清蛋白质、蛋 蛋白质和大豆蛋白质。各来源包含多种蛋白质。表1呈现各氨基酸在蛋白质来源中的表示 为百分比的重量比例表示（g AA/g蛋白质）。
[0116] 表 1
[0117]
【权利要求】
1. 一种包含第一多肤序列的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列在抑7下 具有水溶解度为至少12. 5g/L。
2. 如权利要求1所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列在抑7下具有水 溶解度为至少50g/L。
3. 如权利要求1所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列在抑7下具有水 溶解度为至少lOOg/L。
4. 如权利要求1至3中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列包 含： a. 支链氨基酸残基与总氨基酸残基的比率为至少8% ; b. Leu残基与总氨基酸残基的比率为至少4% ;和 C.必需氨基酸残基与总氨基酸残基的比率为至少19%。
5. 如权利要求4所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列进一步包含各必 需氨基酸的至少一者。
6. 如权利要求1至5中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列包 含W下至少一者： a. 支链氨基酸残基与总氨基酸残基的比率为至少24% ; b. Leu残基与总氨基酸残基的比率为至少11% ;和 C.必需氨基酸残基与总氨基酸残基的比率为至少49%。
7. 如权利要求1至6中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列包 含与天然存在的营养性蛋白质的至少50个氨基酸的至少70%同源性。
8. 如权利要求1至6中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列包 含与天然存在的营养性蛋白质的至少50个氨基酸的至少95%同源性。
9. 如权利要求1至6中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列包 含与天然存在的营养性蛋白质的至少70%同源性。
10. 如权利要求1至6中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列包 含与天然存在的营养性蛋白质的至少95%同源性。
11. 如权利要求1至10中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 由天然存在的营养性蛋白质组成。
12. 如权利要求1至10中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 不是天然存在的营养性蛋白质。
13. 如权利要求1至12中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 不是过敏原。
14. 如权利要求13所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列与已知过敏原 具有小于50%整体同源性。
15. 如权利要求1至14中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 不是毒素。
16. 如权利要求15所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列与已知毒素具 有小于50 %整体同源性。
17. 如权利要求1至16中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 具有模拟胃消化半衰期为小于60分钟。
18. 如权利要求17所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列具有模拟胃消 化半衰期为小于30分钟。
19. 如权利要求18所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列具有模拟胃消 化半衰期为小于10分钟。
20. 如权利要求1至19中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 在模拟胃液中完全消化。
21. 如权利要求1至20中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 包含至少一个选自胃蛋白酶识别位点、膜蛋白酶识别位点和膜凝乳蛋白酶识别位点的蛋白 酶识别位点。
22. 如权利要求1至21中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 不包含半脫氨酸残基。
23. 如权利要求1至22中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 不包含二硫键。
24. 如权利要求1至23中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 不包含N连接的糖基化。
25. 如权利要求1至24中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 不包含0连接的糖基化。
26. 如权利要求1至25中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 对聚集具有抗性。
27. 如权利要求1至26中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 在抑7下是阴离子型的。
28. 如权利要求1至27中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 具有计算溶合计分为-20或更低。
29. 如权利要求28所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列具有计算溶合 计分为-30或更低。
30. 如权利要求1至29中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 具有计算聚集计分为0. 75或更低。
31. 如权利要求30所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列具有计算聚集 计分为0.5或更低。
32. 如权利要求31所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列具有计算聚集 计分为0.3或更低。
33. 如权利要求1至32中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 包含选自W下的氨基酸序列： i. 选自SEQ ID NO:l至SEQ ID N0:490的氨基酸序列； ii. 选自SEQ ID NO:l至SEQ ID N0:490的氨基酸序列的修饰的衍生物；和 iii. 选自SEQ ID NO:l至SEQ ID N0:490的氨基酸序列的突变蛋白。
34. 如权利要求1至33中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 由选自W下的氨基酸序列组成： i. 选自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的氨基酸序列， ii. 选自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的氨基酸序列的修饰的衍生物，和 iii. 选自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的氨基酸序列的突变蛋白。
35. 如权利要求1至34中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述第一多肤序列 与至少一个选自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的参照氨基酸序列至少40%、45%、50%、 55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 99. 5% 同源。
36. -种包含第一多肤序列的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性蛋白质在 pH 7下具有水溶解度为至少12. 5g/L。
37. 如权利要求36所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性蛋白质在抑7 下具有水溶解度为至少50g/L。
38. 如权利要求37所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性蛋白质在抑7 下具有水溶解度为至少lOOg/L。
39. 如权利要求36至38中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质包含： a. 支链氨基酸残基与总氨基酸残基的比率为至少8% ; b. Leu残基与总氨基酸残基的比率为至少4% ;和 C.必需氨基酸残基与总氨基酸残基的比率为至少19%。
40. 如权利要求39所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性蛋白质进一步 包含各必需氨基酸的至少一者。
41. 如权利要求36至40中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质包含W下至少一者： a. 支链氨基酸残基与总氨基酸残基的比率为至少24% ; b. Leu残基与总氨基酸残基的比率为至少11% ;和 C.必需氨基酸残基与总氨基酸残基的比率为至少49%。
42. 如权利要求36至41中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质包含与天然存在的营养性蛋白质的至少50个氨基酸的至少70%同源性。
43. 如权利要求36至41中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质包含与天然存在的营养性蛋白质的至少50个氨基酸的至少95%同源性。
44. 如权利要求36至41中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质包含与天然存在的营养性蛋白质的至少70%同源性。
45. 如权利要求36至41中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质包含与天然存在的营养性蛋白质的至少95%同源性。
46. 如权利要求36至41中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质由天然存在的营养性蛋白质组成。
47. 如权利要求36至41中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质不是天然存在的营养性蛋白质。
48. 如权利要求36至47中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质不是过敏原。
49. 如权利要求48所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性蛋白质与已知 过敏原具有小于50%整体同源性。
50. 如权利要求36至49中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质不是毒素。
51. 如权利要求50所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性蛋白质与已知 毒素具有小于50%整体同源性。
52. 如权利要求36至51中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述营养性蛋白质 具有模拟胃消化半衰期为小于60分钟。
53. 如权利要求52所述的分离的营养性蛋白质，其中所述营养性蛋白质具有模拟胃消 化半衰期为小于30分钟。
54. 如权利要求53所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性蛋白质具有模 拟胃消化半衰期为小于10分钟。
55. 如权利要求36至54中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质在模拟胃液中完全消化。
56. 如权利要求36至55中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质包含至少一个选自胃蛋白酶识别位点、膜蛋白酶识别位点和膜凝乳蛋白酶识别位点 的蛋白酶识别位点。
57. 如权利要求36至56中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质不包含半脫氨酸残基。
58. 如权利要求36至57中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质不包含-硫键。
59. 如权利要求36至58中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质不包含N连接的糖基化。
60. 如权利要求36至59中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质不包含0连接的糖基化。
61. 如权利要求36至60中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质对聚集具有抗性。
62. 如权利要求36至61中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质在抑7下是阴离子型的。
63. 如权利要求36至62中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质具有计算溶合计分为-20或更低。
64. 如权利要求63所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性蛋白质具有计 算溶合计分为-30或更低。
65. 如权利要求36至64中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质具有计算聚集计分为0. 75或更低。
66. 如权利要求65所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性蛋白质具有计 算聚集计分为0.5或更低。
67. 如权利要求66所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性蛋白质具有计 算聚集计分为0.3或更低。
68. 如权利要求36至67中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质包含选自W下的氨基酸序列： i. 选自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的氨基酸序列； ii. 选自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的氨基酸序列的修饰的衍生物；和 iii. 选自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的氨基酸序列的突变蛋白。
69. 如权利要求36至68中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质由选自W下的氨基酸序列组成： i. 选自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的氨基酸序列， ii. 选自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的氨基酸序列的修饰的衍生物，和 iii. 选自SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO:490的氨基酸序列的突变蛋白。
70. 如权利要求36至69中任一项所述的分离的营养性蛋白质，其中所述分离的营养性 蛋白质与至少一个选自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的参照氨基酸序列至少40%、45%、 50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或99.5%同源。
71. 如权利要求1至10、12至33、35至45、47至68和70中任一项所述的分离的营养 性蛋白质，其中所述分离的营养性蛋白质进一步包含用于亲和纯化的多肤标签。
72. 如权利要求71所述的分离的营养性蛋白质，其中用于亲和纯化的所述标签是聚组 氨酸标签。
73. -种分离的核酸，其包含编码如权利要求1至72中任一项所述的营养性蛋白质的 核酸序列。
74. 如权利要求73所述的分离的核酸，其中所述分离的核酸选自基因组DNA、cDNA、正 义RNA和反义RNA。
75. 如权利要求74所述的分离的核酸，其中所述分离的核酸是基因组DNA。
76. 如权利要求74所述的分离的核酸，其中所述分离的核酸是cDNA。
77. 如权利要求73至76中任一项所述的分离的核酸，其进一步包含可操作地连接于编 码所述营养性蛋白质的所述核酸序列的表达控制序列。
78. -种载体，其包含编码如权利要求1至72中任一项所述的营养性蛋白质的核酸序 列。
79. 如权利要求78所述的载体，其进一步包含可操作地连接于编码所述营养性蛋白质 的所述核酸序列的表达控制序列。
80. -种重组微生物，其包含如权利要求73至77中任一项所述的核酸和如权利要求 78和79中任一项所述的载体的至少一者。
81. 如权利要求80所述的重组微生物，其中所述重组微生物是原核生物。
82. 如权利要求81所述的重组原核生物，其中所述原核生物是异养性的。
83. 如权利要求81所述的重组原核生物，其中所述原核生物是自养性的。
84. 如权利要求81所述的重组原核生物，其中所述原核生物是细菌。
85. -种制备如权利要求1至72中任一项所述的营养性蛋白质的方法，所述方法包括 在足W由如权利要求80至84中任一项所述的重组微生物产生所述营养性蛋白质的条件下 培养所述重组微生物。
86. 如权利要求85所述的方法，其进一步包括自所述培养物分离所述营养性蛋白质。
87. -种营养性组合物，其包含如权利要求1至72中任一项所述的分离的营养性蛋白 质和至少一种第二组分。
88. 如权利要求87所述的营养性组合物，其中所述至少一种第二组分选自蛋白质、多 肤、肤、游离氨基酸、碳水化合物、脂质、矿物质或矿物质来源、维生素、补充剂、生物体、医药 和赋形剂。
89. 如权利要求88所述的营养性组合物，其中所述至少一种第二组分是蛋白质。
90. 如权利要求89所述的营养性组合物，其中所述至少一种第二组分是营养性蛋白 质。
91. 如权利要求88所述的营养性组合物，其中所述至少一种第二组分是选自必需氨基 酸、非必需氨基酸、支链氨基酸、非标准氨基酸和修饰的氨基酸的游离氨基酸。
92. 如权利要求91所述的营养性组合物，其中所述至少一种第二组分是选自必需氨基 酸的游离氨基酸。
93. 如权利要求91所述的营养性组合物，其中所述至少一种第二组分是选自支链氨基 酸的游离氨基酸。
94. 如权利要求91所述的营养性组合物，其中所述至少一种第二组分是Leu。
95. 如权利要求88所述的营养性组合物，其中所述至少一种第二组分是脂质。
96. 如权利要求95所述的营养性组合物，其中所述脂质选自脂肪、油、甘油H醋、胆固 醇、磯脂和脂肪酸。
97. 如权利要求88所述的营养性组合物，其中所述至少一种第二组分选自矿物质和维 生素。
98. 如权利要求88所述的营养性组合物，其中所述至少一种第二组分是补充剂。
99. 如权利要求88所述的营养性组合物，其中所述至少一种第二组分是生物体。
100. 如权利要求88所述的营养性组合物，其中所述至少一种第二组分是医药。
101. 如权利要求88所述的营养性组合物，其中所述至少一种第二组分是赋形剂。
102. 如权利要求101所述的营养性组合物，其中所述至少一种赋形剂选自缓冲剂、防 腐剂、稳定剂、粘合剂、压实剂、润滑剂、分散增强剂、崩解剂、调味剂、甜味剂、着色剂。
103. 如权利要求87至102中任一项所述的营养性组合物，其中所述营养性组合物被配 制成液体溶液、浆液、混息液、凝胶剂、糊剂、粉末或固体。
104. -种制备如权利要求87至103中任一项所述的营养性组合物的方法，其包括提供 如权利要求1至72中任一项所述的营养性蛋白质W及组合所述营养性蛋白质与所述至少 一种第二组分。
105. -种维持或增加受试者的肌肉质量、肌肉强度和功能性表现的至少一者的方法， 所述方法包括向所述受试者提供足量的如权利要求1至72中任一项所述的营养性蛋白质、 如权利要求87至103中任一项所述的营养性组合物或通过如权利要求104所述的方法制 备的营养性组合物。
106. -种维持或达成受试者的合乎需要的身体质量指数的方法，所述方法包括向所述 受试者提供足量的如权利要求1至72中任一项所述的营养性蛋白质、如权利要求87至103 中任一项所述的营养性组合物或通过如权利要求104所述的方法制备的营养性组合物。
107. 如权利要求105或106所述的方法，其中所述受试者处于W下至少一种状态下： 年长、患有医学上危急疾病、W及罹患蛋白质-能量营养不良症。
108. -种向患有蛋白质-能量营养不良症的受试者提供蛋白质的方法，所述方法包括 向所述受试者提供足量的如权利要求1至72中任一项所述的营养性蛋白质、如权利要求87 至103中任一项所述的营养性组合物或通过如权利要求104所述的方法制备的营养性组合 物。
109. -种增加受试者的产热的方法，所述方法包括向所述受试者提供足量的如权利要 求1至72中任一项所述的营养性蛋白质、如权利要求87至103中任一项所述的营养性组 合物或通过如权利要求104所述的方法制备的营养性组合物。
110. -种诱导受试者的饱足反应和饱腹感反应的至少一者的方法，所述方法包括向所 述受试者提供足量的如权利要求1至72中任一项所述的营养性蛋白质、如权利要求87至 103中任一项所述的营养性组合物或通过如权利要求104所述的方法制备的营养性组合 物。
111. 如权利要求109或110所述的方法，其中所述受试者是服胖的。
112. 如权利要求105至111中任一项所述的方法，其中如权利要求1至72中任一项所 述的营养性蛋白质、如权利要求87至103中任一项所述的营养性组合物或通过如权利要求 104所述的方法制备的营养性组合物是由所述受试者与进行运动配合加W消耗。
113. -种治疗受试者的恶病质、肌肉减少症和虚弱的至少一者的方法，所述方法包括 向所述受试者提供足量的如权利要求1至72中任一项所述的营养性蛋白质、如权利要求87 至103中任一项所述的营养性组合物或通过如权利要求104所述的方法制备的营养性组合 物。
114. 如权利要求105至113中任一项所述的方法，其中如权利要求1至72中任一项所 述的营养性蛋白质、如权利要求87至103中任一项所述的营养性组合物或通过如权利要求 104所述的方法制备的营养性组合物是由所述受试者通过经口、肠或胃肠外途径加W消耗。
【文档编号】C07K14/435GK104470946SQ201380027476
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2013年3月15日 优先权日:2012年3月26日
【发明者】D·A·贝利, B·A·伯希吉安, N·W·希尔弗, G·冯马尔特扎恩, R·奇拉库鲁, M·J·哈米尔 申请人:普罗努塔利亚公司