一种荧光素标记的唾液酸试剂及其制备方法与应用的制作方法
【专利摘要】一种荧光素标记的唾液酸试剂及其制备方法与应用，涉及唾液酸试剂。所述荧光素标记的唾液酸试剂的分子式为：C32H31N3O13S。在9位氨基唾液酸和异硫氰酸荧光素中加入N-N二甲基甲酰胺和碳酸钾，反应后，制得荧光素标记的唾液酸试剂；所述9位氨基唾液酸的分子式为：C11H20N2O8；所述异硫氰酸荧光素的分子式为：C21H11NO5S。所述荧光素标记的唾液酸试剂可在制备肿瘤术前诊断剂和肿瘤术中示踪剂中应用。所提供的荧光素标记的唾液酸试剂特异性高，可以特异性地进入肿瘤组织，因此具有较低的背景信号，且该试剂成功应用于检测肿瘤小病灶，从而为肿瘤的手术切除起到很好的辅助作用。
【专利说明】一种荧光素标记的唾液酸试剂及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及唾液酸试剂，尤其是涉及一种荧光素标记的唾液酸试剂及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002]随着全球经济的快速发展，癌症的发病率亦日益提高，发展行而有效的肿瘤示踪手段具有重要的临床意义。手术切除已被广泛应用于肿瘤的治疗，然而肉眼切除肿瘤病灶的能力是有限的，从而导致肿瘤复发。发展荧光材料以辅助手术切除，可以为医生提供肿瘤的准确位置[1]。将荧光手段应用于肿瘤手术已经有了一些临床证据，如使用异硫氰酸荧光素标记的叶酸来成像上皮性卵巢癌[4]。常规的小分子荧光染料可以与肿瘤靶向配体(如单克隆抗体、叶酸和环肽RGD等)连接[卜4]。此外，一种能够被肿瘤组织细胞共价标记的的荧光材料可以利于对肿瘤长期辨别。
[0003]N-乙酰神经氨酸N-acetylneuraminicacid系唾液酸(N-酰基神经氨酸)在自然界分布最广的，主要是动物细胞膜或分泌液的糖蛋白、糖脂质或细菌荚膜物质等的组成糖。细胞表面糖链末端的唾液酸参与了病原体相互作用及细胞黏附等[5’6]。已证实，细胞过表达唾液酸与肿瘤的转移能力有着很大的联系[7’8]。大量外源的N-乙酰甘露糖胺经生化工程的手段通过自身的生物合成途径引入到唾液酸蛋白质中已有报道[9~12]。然而，N-乙酰甘露糖胺用来标记的缺点是其缺乏细胞及组织的特异性[13~15]。与N-乙酰甘露糖胺相似，9位带有荧光基团的唾液酸或许能成为一种有效的试剂能共价标记在唾液酸蛋白质上[16~18]。迄今为止，还没有文献 报道应用唾液酸衍生物来示踪肿瘤[19]。
[0004]参考文献:
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【权利要求】
1.一种荧光素标记的唾液酸试剂，其特征在于其分子式为=C32H31N3O13S,结构式如下:
2.如权利要求1所述一种荧光素标记的唾液酸试剂的制备方法，其特征在于其具体步骤如下: 在9位氨基唾液酸和异硫氰酸荧光素中加入N-N 二甲基甲酰胺和碳酸钾，反应后，制得荧光素标记的唾液酸试剂；所述9位氨基唾液酸的分子式为=C11H2tlN2O8 ;所述异硫氰酸荧光素的分子式为:C21HnN05S。
3.如权利要求2所述一种荧光素标记的唾液酸试剂的制备方法，其特征在于所述9位氨基唾液酸的制备方法为: O唾液酸在含三氟乙酸的甲醇中反应至溶液澄清透明为止，得到唾液酸甲酯； 2)将唾液酸甲酯在含对甲苯磺酰氯的吡啶中搅拌生成9位对甲苯苯磺酸基唾液酸甲酷； 3)将甲苯苯磺酸基唾液酸甲酯在含叠氮化钠的二甲亚砜中反应生成9位叠氮唾液酸，9位叠氮唾液酸经钯-羰还原生成9位氨基唾液酸。
4.如权利要求3所述一种荧光素标记的唾液酸试剂的制备方法，其特征在于在步骤I)中，所述唾液酸、甲醇、三氟乙酸的配比为(0.1~100) g: (50~2000) mL: (I~200)mL，其中唾液酸以质量计算，甲醇和三氟乙酸以体积计算。
5.如权利要求3所述一种荧光素标记的唾液酸试剂的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述吡啶为干燥的吡啶；所述唾液酸甲酯与甲苯磺酰氯的质量比为1: (I~4)。
6.如权利要求3所述一种荧光素标记的唾液酸试剂的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述反应的温度为O~40°C，反应的时间为Ih~48h ;所述9位对甲苯苯磺酸基唾液酸甲酯和叠氮化钠的质量比可为1: (I~5);所述钯-羰还原所采用的钯-羰催化剂的用量按质量百分比可为9位叠氮唾液酸的5%~20%。
7.如权利要求2所述一种荧光素标记的唾液酸试剂的制备方法，其特征在于所述9位氨基唾液酸的制备路线如下:
8.如权利要求2所述一种荧光素标记的唾液酸试剂的制备方法，其特征在于所述9位氨基唾液酸和异硫氰酸荧光素投料的摩尔比为2: (I~4);所述9位氨基唾液酸与N-N二甲基甲酰胺的质量比可为1: (I~20);所述9位氨基唾液酸与碳酸钾的质量比可为1: 5~5:1 ;所述反应的温度可为O~60°C，反应的时间可为2~20h。
9.如权利要求1所述一种荧光素标记的唾液酸试剂，其特征在于其制备路线如下:
10.如权利要求1所述一种荧光素标记的唾液酸试剂在制备肿瘤术前诊断剂和肿瘤术中示踪剂中的应用；所述肿瘤可包括皮下肿瘤、肝脏内部肿瘤；所述肿瘤术前诊断剂是指荧光素标记的唾液酸试剂可以用来诊断患者是否患有癌症；所述肿瘤术中示踪剂是指在给患者手术时，荧光素标记的唾液酸试剂可作为一种指示剂，指示肿瘤的具体位置。
【文档编号】C07H1/00GK103819515SQ201410069518
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2014年2月27日 优先权日:2014年2月27日
【发明者】韩守法, 吴选俊, 田云鹏 申请人:厦门大学