一种印度苦木素x的提取纯化方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种印度苦木素X的提取纯化方法及其应用。本发明方法包括以下步骤：以印度苦木为原料，粉碎，用乙醇回流提取，提取液浓缩得浸膏，将浸膏用酸水溶液超声溶解，静置，取上清液，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取物，萃取物采用硅胶柱层析分离得到印度苦木素X。本发明方法质量可控、有效成分含量高、适合工业化生产。本发明所述印度苦木素X尤其适于在制备抗肿瘤药物中的应用，特别是在抑制中性白细胞粘附于由肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞药物中的应用。
【专利说明】一种印度苦木素X的提取纯化方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种化合物的提纯方法和其医药用途，具体涉及一种印度苦木素X的提取纯化方法和其在制备抗肿瘤药物中的应用。
【背景技术】
[0002]肿瘤是危害人类健康最严重的一类常见病、多发病，最常见的治疗方法是手术、化疗和放疗，而化疗因毒副作用大，影响患者生活质量。近年来，中医药治疗肿瘤称为独特疗法，中医认为瘀血阻滞、痰湿凝聚、热毒内蕴、正气亏虚是导致肿瘤的病机，根据肿瘤的病因病机、发生发展规律，中药抗癌治疗主要有扶正固本、清热解毒、活血化瘀、软坚散结四个基本法则。中药治疗肿瘤的机制主要是对肿瘤细胞的直接抑制和杀灭作用、抑制肿瘤血管生成、抑制端粒酶活性、诱导细胞分化、调节细胞信号传导、抗微管作用、免疫增强作用、逆转多药耐药作用等。中药应用历史悠久、价格低廉、药源广泛、疗效好、低毒性等优势，在肿瘤治疗中的前景也将越来越广。
[0003]印度苦木素X是从苦木科(Simarcubaceae)植物印度苦木Quassia indica(Gaertn.) Nooteboom中分离得到的一种苦木素,分子式为C2tlH26Oltl,分子量为426.42。药理研究表明，印度苦木素X具有抗肿瘤活性，浓度为lKg/ml时，抑制中性白细胞粘附于由肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞；另外，对KB细胞呈细胞毒活性，IC50为0.6(^g/ml。
[0004]目前，现有技术中少有含有印度苦木素X的抗肿瘤药物，该现状亟待解决。
【发明内容】
[0005]为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，提供一种印度苦木素X的提取纯化方法和其在制备抗肿瘤药物中的应用法和应用。
[0006]一种印度苦木素X的提取纯化方法，其特征在于，其包括以下步骤:
(O以印度苦木为原料，粉碎，用60-80%乙醇溶液回流提取2-3次，每次0.5-lh，提取液浓缩得浸膏；
(2)将浸膏用酸水溶液超声溶解，静置，取上清液，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取物；
(3)将萃取物用甲醇溶解，采用硅胶柱层析，乙酸乙酯-甲醇混合溶剂按体积比为1: 1-5洗脱，分段收集，薄层色谱跟踪检识，合并含有印度苦木素X的流分，减压浓缩，自然析晶，得到白色印度苦木素X结晶。
[0007]本发明中，步骤(1)所述乙醇溶液用量为药材重量的6-10倍。
[0008]本发明中，步骤(2)所述酸水溶液为0.5%乙酸水溶液,用量为量为浸膏重量的3-4倍。
[0009]本发明中，步骤(3 )所述硅胶为200-300目。
[0010]试验表明采用本发明方法提取纯化印度苦木素X，其纯度可达80%以上，产品收率与一般浸提法相比提高2-3倍。
[0011]本发明还涉及本发明的提取纯化方法所得到的植物提取物。
[0012]本发明进一步涉及所述的植物提取物在制备抑制中性白细胞粘附于由肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞药物中的应用。
[0013]本发明所述印度苦木素X的药理活性通过以下试验得到了验证。
[0014]试验用细胞株:
HeLa:人子宫颈癌细胞株；HEC_1:人子宫内膜癌细胞株；T_98和U251-SP:人脑神经胶质瘤细胞株；HLE:人肝癌细胞株和HMV-1:人黑色素瘤细胞株。
[0015]印度苦木素X抑制中性白细胞粘附于由肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞试验:
实验方法:四唑翁盐-中性白细胞粘附抑制实验法
在含有10%胎牛血清的D-MEM/hams培养基中，将被试细胞调成密度为2 X 16细胞/ml。将上述肿瘤细胞株悬液接种于96孔培养板，每孔50μ1，分别加入空白对照磷酸盐缓冲液(PBS0、溶剂对照0.1% 二甲基亚砜、阳性对照顺钼(DDP)以及不同浓度单体化合物各50μ1，每组设3个复孔。置于饱和湿度、37°C和5%C02培养箱中培养48小时，于培养结束前4小时，各培养孔加入5mg/ml四唑翁盐(MTT) 10μ1，培养结束后，弃去培养上清，悬浮细胞离心后弃去上清,没空加入反应停止液150μ1，静置I小时，用酶标仪测490nm0.D值，并计算中性白细胞粘附抑制率。
[0016]本发明化合物溶解于DMS0，添加后的最终浓度为在0.1%以下。以只添加DMSO的培养及作为对照。
[0017]实验结果:本发明化合物的中性白细胞粘附抑制率以相对于对照(添加DMS0)的结果如下表1表示。
[0018]表1印度苦木素X的中性白细胞粘附抑制率％
【权利要求】
1.一种印度苦木素X的提取纯化方法，其特征在于，其包括以下步骤: (O以印度苦木为原料，粉碎，用60-80%乙醇溶液回流提取2-3次，每次0.5-lh，提取液浓缩得浸膏； (2)将浸膏用酸水溶液超声溶解，静置，取上清液，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取物； (3)将萃取物用甲醇溶解，采用硅胶柱层析，乙酸乙酯-甲醇混合溶剂按体积比为1: 1-5洗脱，分段收集，薄层色谱跟踪检识，合并含有印度苦木素X的流分，减压浓缩，自然析晶，得到白色印度苦木素X结晶。
2.如权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于步骤(1)中所述乙醇溶液用量为药材重量的6-10倍。
3.如权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于步骤(2)中所述酸水溶液为0.5%乙酸水溶液，用量为量为浸膏重量的3-4倍。
4.如权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于步骤(3)中所述硅胶为200-300目。
5.一种如权利要求f 4任一项所述的提取纯化方法所得到的植物提取物。
6.如权利要 求5所述的植物提取物在制备抑制中性白细胞粘附于由肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞药物中的应用。
【文档编号】C07D493/10GK104072515SQ201410266367
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2014年6月16日 优先权日:2014年6月16日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司