苯妥因均相酶免疫检测试剂盒及其多克隆抗体的制备方法
【专利摘要】本发明的目的是提供一种高度特异性的苯妥因多克隆抗体及苯妥因均相酶免疫检测试剂盒的制备方法,包括苯妥因特异性多克隆抗体的制备，葡萄糖六磷酸脱氢酶标记的苯妥因偶联物的制备，定标液的制备。本发明的苯妥因多克隆抗体特异性强，效价高，在药物交叉反应试验中，对测试的31种常见药物和化合物几乎无任何交叉反应，适合临床检验苯妥因的血药浓度。本发明的苯妥因药物浓度均相酶免疫检验试剂盒灵敏度高，能够准确检测10g/mL的样本，苯妥因药物浓度的有效检测范围为5ng/mL-60μg/mL。本发明试剂盒的准确率高，回收率在90%以上，简便、快速、成本低、灵敏度高、可全自动化。
【专利说明】苯妥因均相酶免疫检测试剂盒及其多克隆抗体的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医学检验领域，具体涉及苯妥因均相酶免疫检测试剂盒及其多克隆抗 体的制备方法。
【背景技术】
[0002] 癫痫是一种常见的神经系统疾病，也是我国神经系统疾病中仅次于脑血管疾病 的第二大顽症。目前，抗癫痫类药物仍然是控制癫痫发作的主要手段。传统的抗癫痫类药 物苯妥因（结构式如下)治疗窗窄、个体差异大、疗效和毒性反应与血药浓度密切相关，临床 医生仅凭经验给药往往达不到有效血药浓度。因此，苯妥因血药浓度的监测对癫痫的诊断 和治疗具有重要的临床指导意义。
【权利要求】
1. 一种苯妥因免疫原，其通过苯妥因衍生物与载体偶联获得，其结构式如式I所示：
式I 式中，R为连接基团，载体为血清蛋白，血蓝蛋白或甲状腺球蛋白。
2. 根据权利要求1所述的苯妥因免疫原，其特征在于，R选自如下基团：-(CH2) n-C00-、-0-(CH2)n-C00-、-S-(CH2)n-C00-或-0-(CH2)n-NH-C00-等，n是 1 至 20 之间的整 数。
3. 根据权利要求2所述的苯妥因免疫原，其特征在于，R优选为-0-CH2-NH-C00-。
4. 一种抗苯妥因特异性多克隆抗体，其由权利要求1所述的苯妥因免疫原免疫宿主动 物后生产而得到的，具体步骤如下： 步骤a: 苯妥因衍生物的活化：将苯妥因衍生物置于容器中，并依次加入纯二甲基酰胺、无水乙 醇、10mMpH为5.0的磷酸钾缓冲液、1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基）碳二亚胺和N-羟基 硫代琥珀酰亚胺，搅拌溶解反应30分钟； 步骤b:抗原的偶联和纯化：将牛血清白蛋白、血蓝蛋白或甲状腺球蛋白溶解于 10mL0. 2MpH为8. 5的磷酸缓冲液中得到溶液A，将步骤a活化的苯妥因衍生物滴加到所 得的溶液A中，在2?8°C条件下搅拌12 -16小时，得到偶联的苯妥因抗原，将得到的偶联 的苯妥因抗原进行透析纯化，得到苯妥因免疫抗原； 步骤c:采用步骤b得到的苯妥因免疫抗原免疫动物，得到苯妥因特异性多克隆抗体。
5. -种苯妥因均相酶免疫检测试剂盒，所述苯妥因均相酶免疫检测试剂盒上设置有 R1试剂、R2试剂、定标液。
6. 根据权利要求5所述的免疫检测试剂盒，其特征在于， 所述R1试剂由以下组分组成：质量百分比为〇. 02-0. 1%的苯妥因特异性多克隆抗体， 55mM/L的Tris，质量体积百分比为0. 1%的牛血清白蛋白，145. 4mM/L的NaCl，3mM/L的 MgCl2, 2. 02g/L脱氢辅酶I和0. 86g/L葡萄糖-6-磷酸，余量为水，pH值为8. 0。
7. 所述R2试剂为质量体积比为0. 03-0. 25%的葡糖糖六磷酸脱氢酶苯妥因偶联物酶标 抗原的Tris缓冲液，所述Tris缓冲液pH为8. 2,所述Tris缓冲液中各组分浓度为120mM Tris、质量体积百分比为0. 1%的牛血清白蛋白、145. 4mMNaCl、3mMMgCl2 ; 定标液为含有不同浓度苯妥因的空白血清。
【文档编号】C07K14/795GK104402991SQ201410631056
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月12日 优先权日:2014年11月12日
【发明者】燕启江, 梁耀铭, 虞留明, 胡朝晖 申请人:重庆金域医学检验所有限公司