专利名称：一种虫草多糖的提取工艺的制作方法
(一)涉及领域本发明涉及虫草多糖的提取技术领域，具体地讲是利用虫草人工培养中产生的培养基下脚料提取虫草多糖的工艺。
背景技术：
众所周知，冬虫夏草具有保健和用药功能，但由于其严格的寄生性和特殊的生态地理环境，天然资源十分稀少，加上近年来生态环境的破坏，使冬虫夏草资源锐减，已濒临灭绝边缘，因此人们在冬虫夏草人工培育、人工菌丝体生产、成分、药理等方面进行了大量的研究工作，人工养殖虫草已经获得成功，并且已有以虫草实体为原料进行虫草多糖的提取工艺，但在虫草人工培养研究过程中发现，作为虫草人工养殖的下脚料的虫草培养基中含有大量的生物活性物质，包括虫草素、虫草酸、虫草多糖及多种氨基酸，经分析，虫草多糖的含量达到20％左右，而目前生产中的培养基多被弃去，既造成环境的污染，又产生巨大的资源浪费。
发明内容
本发明的目的旨在克服上述已有技术的不足，而提供一种以人工培养虫草的虫草培养基为原料进行虫草多糖的提取工艺，主要解决了目前人工培养虫草时的下脚料虫草培养基的浪费及对环境的污染的问题。
为了达到上述目的，本发明是这样实现的一种虫草多糖的提取工艺，其特殊之处在于它包括如下工艺步骤a，提取，虫草培养基加入4倍体积的水，在60度下搅拌提取6小时，离心(3000r/min，15min)得到上清液；培养基重复提取3次；b，浓缩，合并上述提取液，80度减压浓缩至原体积的三分之一；c，脱蛋白，将浓缩液中加入等体积的氯仿∶正丁醇(4∶1)，振摇后离心(3000r/min，15min)，弃去蛋白质沉淀；d，二次浓缩，将上清液80度减压浓缩至原体积的三分之一；e，乙醇沉淀，上述浓缩液搅拌下加入3倍体积的乙醇(95％)，静置4小时以上，离心(3000r/min，15min)收集沉淀；f，脱水干燥，用3倍体积的乙醇(95％)洗涤沉淀，离心(3000r/min，15min)，真空干燥得粉末状虫草多糖产品，为淡黄色。
为了进一步实现上述目的，本发明的一种虫草多糖的提取工艺，其所述工艺步骤还包括虫草多糖的分级，将上述虫草多糖溶解于蒸馏水中成10％溶液，加入95％乙醇至40％浓度，离心(3000r/min，15min)收集沉淀，乙醇洗涤，真空干燥得40％的组分产品；上清液继续加入95％乙醇至50％浓度，离心(3000r/min，15min)收集沉淀，乙醇洗涤，真空干燥得50％的组分产品；同法分别得60％、70％的组分产品。
虫草多糖是虫草中含量最高的生物活性物质，大量医学实验证实，虫草多糖对单核巨噬细胞系统有增强作用，对细胞免疫功能具有调节作用，能增强体液免疫功能，对内分泌有影响作用，并具有降血糖、抗肿瘤作用，并可作为抗辐射保护剂，可活化巨噬细胞刺激抗体产生，提高人体免疫能力。
本发明的虫草多糖试验结果分析1、虫草多糖提取率本发明的工艺提取的虫草多糖，产品提取率平均达到17.45％，回收率达到87.25％。
经过9次平行实验，结果见表1。
表1试验号 123456789培养基(g) 500 500 500 500 500 500 500 500 500水(ml) 2000 2000 2000 2000 2000 2000 2000 2000 2000提取液(ml) 3770 3810 3750 3900 3600 3870 3760 3690 3820浓缩体积(ml)1200 1200 1200 1200 1200 1200 1200 1200 1200氯仿正丁醇(ml)1200 1200 1200 1200 1200 1200 1200 1200 1200乙醇(ml)2100 2100 2100 2100 2100 2100 2100 2100 2100产品质量(g) 88.8787.4687.9487.4386.5186.3286.2087.8087.20提取率(％) 17.6917.4917.5917.4917.3017.2617.2417.5617.44平均(％) 17.45回收率(％) 87.252、多糖含量本发明提取的虫草多糖，产品多糖含量平均为84.5％。采用硫酸-苯酚法测定多糖含量，结果见表2。
表2试验号 1 2 3 4 5 6 7 8 9样品质量(g) 0.01090.01070.01070.01040.01060.01050.01090.01060.0106A490 0.668 0.684 0.687 0.683 0.685 0.681 0.684 0.685 0.685多糖含量(％) 84.5 84.3 84.7 84.6 84.5 84.1 84.1 84.6 84.7平均(％) 84.53、虫草多糖组分分级对乙醇分级组分的组成和分子量进行分析，结果表明，产品中主要为大分子量组分(40％)，与虫草子实体中提取的虫草多糖分析结果相同。
采用重量法测定组分组成，采用HPLC法进行分子量分析，结果见表3、4。
表3乙醇浓度溶液体积(ml)95％乙醇(ml) 样品重量(g) 产率40％ 200 142.9 17.2031 86.06％50％ 290 63.11.2085 6.042％60％ 350 97.20.3245 1.622％70％ 435 66.90.3196 1.598％样品的质量20g表4多糖分级别称重(g)三蒸水(ml) 分子量40％0.203120 21.97950％0.208520 13.31060％0.204520 88170％0.206420 877
本发明的一种虫草多糖的提取工艺，不仅可以将人工培养虫草的虫草培养基变废为宝，减少资源的浪费，提高经济效益，而且可以避免三废排放对环境的污染。
本发明的一种虫草多糖的提取工艺与已有技术相比具有突出的实质性特点和显著进步，1、本发明利用虫草人工培养中产生的培养基下脚料进行虫草多糖的提取，不同于现有的采用虫草子实体为原料的，既避免资源浪费，又可以保护环境，降低原料成本；2、现有的虫草多糖的提取工艺采用的料液比为1∶6，提取温度为90度，提取时间8小时，而本发明采用了较小的料液比(1∶4)、较低的提取温度(60度)、较短的提取时间(6小时)进行提取，节约时间和能耗、降低劳动强度，同时可以降低产品成本，并且较低的温度可以防止高温对多糖的破坏，提高了产品的回收率和含量；3、现有的以虫草子实体为原料进行虫草多糖提取工艺的脱蛋白步骤在乙醇沉淀之后，工艺中需要采用二次浓缩、二次乙醇沉淀，乙醇消耗量较大，本发明是将脱蛋白步骤提前至乙醇沉淀之前，即提取纯化一步完成，可以节省工序、减少乙醇的使用量，进一步降低了产品成本；4、现有的工艺提取虫草多糖的含量为60-80％左右，而本明的工艺提取的虫草多糖含量稳定在84％左右；5、现有的工艺是从价格较高的虫草子实体中提取虫草多糖，提取率在26％左右(虫草子实体多糖含量为30％左右)，回收率86.7％，本发明是从废弃的培养基下脚料中进行提取虫草多糖，回收率达到87％，效果相同，但经济效益显著。
具体实施例方式为了更好地理解与实施，下面结合实施例详细说明本发明一种虫草多糖的提取工艺。
实施例1，将虫草培养基中加入4倍体积的水，在60度下搅拌提取6小时，离心(3000r/min，10min)得到上清液；培养基重复提取3次，将提取液合并，80度减压浓缩至原体积的三分之一，将浓缩液中加入等体积的氯仿∶正丁醇(4∶1)，振摇后离心(3000r/min，10min)，弃去蛋白质沉淀，再进行二次浓缩，将上清液80度减压浓缩至原体积的三分之一，将上述浓缩液搅拌下加入3倍体积的95％乙醇，静置4小时以上，离心(3000r/min，10min)收集沉淀，，用3倍体积的乙醇洗涤沉淀，离心(3000r/min，10min)，真空干燥得粉末状虫草多糖产品，为淡黄色。
实施例2，实施例1的虫草多糖进行分级，将虫草多糖溶解于蒸馏水中成10％溶液，加入95％乙醇至40％浓度，离心(3000r/min，10min)收集沉淀，乙醇洗涤，真空干燥得40％的组分产品；上清液继续加入95％乙醇至50％浓度，离心收集沉淀，乙醇洗涤，真空干燥得50％的组分产品。
实施例3，同实施例2，分别得60％、70％的组分产品。
权利要求
1.一种虫草多糖的提取工艺，其特征在于它包括如下工艺步骤a，提取，虫草培养基加入4倍体积的水，在60度下搅拌提取6小时，离心得到上清液；培养基重复提取3次；b，浓缩，合并上述提取液，80度减压浓缩至原体积的三分之一；c，脱蛋白，将浓缩液中加入等体积的氯仿与正丁醇的混合液，振摇后离心，弃去蛋白质沉淀；d，二次浓缩，将上清液80度减压浓缩至原体积的三分之一；e，乙醇沉淀，上述浓缩液搅拌下加入3倍体积的乙醇，静置4小时以上，离心收集沉淀；f，脱水干燥，用3倍体积的乙醇洗涤沉淀，离心，真空干燥得粉末状虫草多糖产品，为淡黄色。
2.按权利要求1所述的一种虫草多糖的提取工艺，其特征在于所述工艺步骤还包括虫草多糖的分级，将上述虫草多糖溶解于蒸馏水中成10％溶液，加入95％乙醇至40％浓度，离心收集沉淀，乙醇洗涤，真空干燥得40％的组分产品；上清液继续加入95％乙醇至50％浓度，离心收集沉淀，乙醇洗涤，真空干燥得50％的组分产品；同法分别得60％、70％的组分产品。
3.按权利要求1或2所述的一种虫草多糖的提取工艺，其特征在于所述的离心条件为3000r/min，15min。
4.按权利要求1所述的一种虫草多糖的提取工艺，其特征在于所述的氯仿与正丁醇的混合液为氯仿∶正丁醇为4∶1。
5.按权利要求1所述的一种虫草多糖的提取工艺，其特征在于所述的乙醇为95％。
全文摘要
本发明公开了一种利用虫草人工培养中产生的培养基下脚料提取虫草多糖的工艺，包括提取、浓缩、脱蛋白、二次浓缩、乙醇沉淀、脱水干燥得虫草多糖，本发明不仅可以变废为宝，减少资源的浪费，提高经济效益，而且可以避免三废排放对环境的污染，具有积极的社会效益和巨大的经济效益。
文档编号C08B37/00GK1560085SQ20041002366
公开日2005年1月5日 申请日期2004年3月5日 优先权日2004年3月5日
发明者贺君, 王云慧, 杜昊, 贺 君 申请人:贺君, 贺 君