专利名称：一种羧甲基茯苓多糖的制备方法
技术领域：
本发明属于高分子多糖领域，特别涉及一种羧甲基茯苓多糖的制备方法。
背景技术：
茯茶，始载于《神农本草经》，被称为“四时神药”，其主要成分是β -茯苓聚糖和三萜类化合物，使用传统的煎煮方法，只能提取茯苓中不足2%的活性成分，生物利用率极低，且茯苓聚糖难溶于水，不易被人体吸收，故无生物活性。羧甲基茯苓多糖是茯苓的深加工产品，系由茯苓多糖经羧甲基化而半合成的一种水溶性多糖。现代药理学研究表明，羧甲基茯苓多糖具有抗肿瘤、调节机体免疫功能、保肝降酶、间接抗病毒、诱生和促诱生干扰素和白细胞调节素、减轻放射副反应及健胃安神等生理作用。
现有技术中，通常采用一步法制备羧甲基茯苓多糖，在申请号为200310111666.6的专利中公开了一种羧甲基茯苓多糖的生产工艺，采用如下过程
(1)采用水为反应介质，用氢氧化钠溶液从湿的茯苓粉中提取并碱化茯苓多糖做A液；
(2)用氢氧化钠溶液中和氯乙酸溶液做B液，将Α、Β液混合,另加适量的氢氧化钠溶液，控制反应条件，静置反应合成甲基茯苓多糖。发明人在实现本发明的过程中，发现以下问题
(I)在制备羧甲基茯苓多糖的过程中，茯苓粉的粒度大小是决定反应时间长短、反应收率的重要因素。茯苓粉越细，茯苓多糖的浸出率越高，产品的收率越高，质量也越好；但是如果茯苓粉颗粒过细，在实际工业生产中不易进行操作，且容易产生粉尘，潜在危害较大。因此，选择合适粒度大小的茯苓粉做为原料，是生产羧甲基茯苓多糖的关键问题，而现有技术中并不对茯苓粉颗粒的大小进行控制，将造成制备羧甲基茯苓多糖的低收率和低质量。(2)羧甲基茯苓多糖的制备以茯苓为原料，茯苓属于天然产物，因不同产地所处地理环境的不同，造成茯苓质量参差不齐，茯苓多糖的含量也高低不一。而茯苓多糖的含量也将直接影响羧甲基茯苓多糖的收率和产品质量，低浓度的茯苓多糖作为原料有可能造成制备羧甲基茯苓多糖的低收率和低质量。(3)同时，发明人在使用现有的羧甲基茯苓多糖的制备方法制备羧甲基茯苓多糖时，发现制备的羧甲基茯苓多糖成品中羧甲基茯苓多糖的含量只有60%，纯度较低。
发明内容
为了解决生产羧甲基茯苓多糖收率低和质量不好的问题，本发明实施例提供了一种羧甲基茯苓多糖的制备方法。所述技术方案如下
其中，本发明中制备羧甲基茯苓多糖的化学反应式为
(C6H10O5)n + nClCH2C00H + nNaOH — (C8H12O7)n + nNaCl + ηΗ20本发明实施例提供了一种制备羧甲基茯苓多糖的方法，所述方法包括
(I)将茯苓干粉溶于氢氧化钠溶液中，碱化反应得碱性茯苓多糖溶液，所述茯苓干粉为茯苓菌核经干燥、反复粉碎和过5 7号筛处理直到过筛率为90%得到，所述茯苓干粉的质量比所述氢氧化钠溶液的体积为1:10 15(其中，当所述茯苓干粉的质量的单位为kg时，所述氢氧化钠溶液的体积的单位为L ;当所述茯苓干粉的质量的单位为g时，所述氢氧化钠溶液的体积的单位为mL)，所述氢氧化钠溶液的摩尔浓度为O. 75 I. 25mol/L ；
(2)检测所述碱性茯苓多糖溶液中的茯苓多糖的质量是否大于所述茯苓干粉的质量的70%，如果是，则执行步骤(3)；
(3)将氯乙酸和氢氧化钠混合溶液加入到所述碱性茯苓多糖溶液中，羧甲基化反应得到羧甲基茯苓多糖混合液，所述氯乙酸和氢氧化钠混合溶液为I. O I. 5mol/L的氯乙酸溶液与2. O 3. OmoI/L的氢氧化钠溶液混合制得，所述氯乙酸溶液与所述氢氧化钠溶液的体积比为I I. 5:1，所述碱性茯苓多糖溶液与所述氯乙酸和氢氧化钠混合溶液的体积比为1:1 3，所述羧甲基化反应的反应温度为60 69°C ； (4)将所述羧甲基茯苓多糖混合液分离提纯后得到羧甲基茯苓多糖成品。其中，在步骤(I)中，所述碱化反应的反应温度为25 30°C,所述碱化反应的反应时间为I 3小时。优选地，在步骤(I)中，所述茯苓干粉的质量比所述氢氧化钠溶液的体积为1:12 14，所述氢氧化钠溶液的摩尔浓度为I. O I. 2mol/L。其中，在步骤(2)中，所述羧甲基化反应的反应时间为4 10小时。优选地，在步骤(2)中，所述羧甲基化反应的反应时间为6 8小时。优选地，在步骤(2)中，所述氯乙酸和氢氧化钠混合溶液为I. 2 I. 4mol/L的氯乙酸溶液与2. 4 2. 7mol/L的氢氧化钠溶液混合制得，所述氯乙酸溶液与所述氢氧化钠溶液的体积比为I. 2 1.4:1。优选地，在步骤(2)中，所述碱性茯苓多糖溶液与所述氯乙酸和氢氧化钠混合溶液的体积比为1:1. 5 2. 5。优选地，在步骤(2)中，所述羧甲基化反应的反应温度为63 67V。其中，所述将所述羧甲基茯苓多糖混合液分离提纯后得到羧甲基茯苓多糖成品，具体包括
A、将所述羧甲基茯苓多糖混合液的温度降至40°C以下后，加入双氧水溶液脱色反应2 24小时，所述双氧水溶液的体积为所述羧甲基茯苓多糖混合液的体积的2 5% ；
B、在脱色完成后，用盐酸溶液将脱色反应产物的pH值调至pH5 7，固液分离后向滤液中加入乙醇，使所述滤液和乙醇的混合液中乙醇的体积百分含量为65 70%，醇析2 5小时；
C、醇析完成后进行固液分离，所得的固体用体积百分含量75 80%的乙醇水溶液洗涤2 3次，经离心、干燥、粉碎，即得所述羧甲基茯苓多糖成品。其中，在步骤C中，所述干燥、粉碎过程，具体包括
真空条件下60 65°C干燥12 15小时后，粉碎、过5 7号筛即得所述羧甲基茯苓多糖成品。优选地，所述脱色反应的反应时间为8 12小时，所述醇析的时间为2. 5 4小时。进一步地，所述方法还包括将所述羧甲基茯苓多糖成品制成羧甲基茯苓多糖胶囊或制成羧甲基茯苓多糖口服液。
其中，检测碱性茯苓多糖溶液中茯苓多糖的质量占茯苓干粉的质量的百分含量和检测羧甲基茯苓多糖成品中的羧甲基茯苓多糖含量方法如下
(I)标准曲线的制备
a、葡萄糖标准液的配制精密称取105°C干燥的标准葡萄糖lOOmg，置IOOmL容量瓶中，加水溶解定容后备用。b、苯酹液的制备取苯酹IOOg,加招片O. Ig和碳酸氢钠O. 05g,蒸懼,收集182°C馏分。称取IOg馏分，加蒸馏水190g，置棕色瓶中备用。C、标准曲线的绘制精密吸取前述制备好的葡萄糖标准溶液25. OmL于50mL容量瓶中用蒸馏水定容得到标准品液，再精密取此标准品液O μ L、20 μ L、40 μ L、60 μ L、80 μ L、100 μ L、120 μ L、140 μ L、160 μ L分别置于9个具塞试管中。每个具塞试管中加蒸馏水至体积2. OmL,再加前述制备好的苯酹液I. OmL摇勻,迅速滴加浓硫酸5. OmL,室温放置5min,沸水浴加热20min，迅速冷至室温。另取蒸馏水2. OmL,加相同量的苯酚液和硫酸，同法操作作 为空白对照。据分光光度法(中国药典2010年版一部附录VB)试验，于490nm波长处测定吸收度，以吸收度A为纵坐标，葡萄糖含量G为横坐标，绘制标准曲线或计算回归方程。(2)检测碱性茯苓多糖溶液中茯苓多糖的质量
准确量取ImL碱性茯苓多糖溶液，置于IOOmL容量瓶中，加水定容，精密吸取lmL，以少量稀盐酸中和至PH值为7，置于50mL容量瓶中，加水定容，得碱性茯苓多糖溶液样品。将样品过滤，精密量取滤液2. 0ml，加与步骤(I)中相同量的苯酚液与硫酸，相同的实验条件，按标准曲线方法进行测定，另按相同的方法设置平行组，根据标准回归曲线或回归方程计算茯苓多糖含量。(3)检测羧甲基茯苓多糖成品中的羧甲基茯苓多糖含量
a、精密称取70°C干燥3h的羧甲基茯苓多糖粉末(制备的羧甲基茯苓多糖成品过5号筛)lOOmg，加蒸馏水溶解后置于IOOOmL容量瓶中，加蒸馏水定容，精密吸取25. OmL后在于另一个IOOOmL容量瓶中用蒸馏水定容即得到样品液，备用。b、将步骤a中得到的样品液过滤取滤液，精密量取2. OmL滤液，加与步骤(I)中相同量的苯酚液和硫酸，同法操作作为实验组，另按相同的方法设置平行组，按标准曲线方法进行测定，根据标准曲线或回归方程计算羧甲基茯苓多糖样品浓度G。C、羧甲基茯苓多糖含量(％)=GN/WX100%，其中，G表示样品液的葡萄糖浓度(mg/mL), N表示样品液的稀释因素，W表示样品重量(mg)。本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是本发明实施例通过在碱化反应前控制茯苓干粉颗粒的大小提高茯苓多糖的浸出率，同时在羧甲基化反应前控制碱性茯苓多糖溶液中茯苓多糖的含量，并结合最优的制备条件，最终提高羧甲基茯苓多糖的产品质量。综上，本发明实施例中通过在羧甲基茯苓多糖制备过程中严格控制茯苓干粉颗粒的大小和碱性茯苓多糖溶液中茯苓多糖的含量从而提高羧甲基茯苓多糖的收率和产品质量。
具体实施例方式为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施方式作进一步地详细描述。
实施例I
本发明实施例提供了一种羧甲基茯苓多糖的制备方法，具体制备过程如下
101、将茯苓块去皮(即茯苓菌核)、干燥、反复粉碎和过5号筛(180±7.6μπι，80目)处理直到过筛率为90%得到茯苓干粉，即在过5号筛时，将不能过筛的再进行粉碎后，又进行过5号筛，直到过筛的茯苓干粉的质量大于被处理的茯苓菌核质量的90%时停止处理即得到茯苓干粉。称取Ikg茯苓干粉投入反应釜内，配制I. 25mol/L的氢氧化钠溶液10L，投入该反应釜内，在30°C搅拌碱化反应lh， 得碱性茯苓多糖溶液。102、按照前述的检测茯苓多糖的方法，检测步骤101得到的碱性茯苓多糖溶液中的茯苓多糖的质量。在本发明实施例中检测得到茯苓多糖的质量是茯苓干粉的质量的70. 9%，大于70%，则执行步骤103。103、配制I. 5mol/L氯乙酸溶液5L，3. OmoI/L氢氧化钠溶液5L，将两者混匀后，泵入步骤101中的反应釜，升温至60°C，保温反应IOh后降温，待温度降为40°C时，加入400ml双氧水溶液(体积浓度为30%的商品双氧水溶液),氧化脱色24h，再滴加盐酸,调节pH值至5，过滤，向滤液中加入乙醇调节乙醇含量到65%(滤液和乙醇的混合液中乙醇的体积百分含量为65%)，醇析5h，离心得滤饼，用少量体积百分含量为80%的乙醇水溶液洗涤滤饼2次，再离心得滤饼，将滤饼在真空条件下60°C干燥15小时后，粉碎、过5号筛得羧甲基茯苓多糖成品，将该羧甲基茯苓多糖成品制成羧甲基茯苓多糖胶囊。本发明实施例得到的羧甲基茯苓多糖成品性状为白色粉末，无臭，有引湿性，按前述方法测得的羧甲基茯苓多糖成品中羧甲基茯苓多糖含量为82. 4%。
实施例2
本发明实施例提供了一种羧甲基茯苓多糖的制备方法，具体制备过程如下
201、将茯苓块去皮(即茯苓菌核)、干燥、反复粉碎和过5号筛(180±7. 6 μ m，80目)处理直到过筛率为90%得到茯苓干粉，称取Ikg茯苓干粉投入反应釜内，配制O. 75mol/L的氢氧化钠溶液10L，投入该反应釜内，在25°C搅拌碱化反应lh，得碱性茯苓多糖溶液。202、按照前述的检测茯苓多糖的方法，检测步骤201得到的碱性茯苓多糖溶液中的茯苓多糖的质量。在本发明实施例中检测得到茯苓多糖的质量是茯苓干粉的质量的65. 3%，小于70%，则判定此批茯苓原料不合格，重新选择茯苓原料。
实施例3
本发明实施例提供了一种羧甲基茯苓多糖的制备方法，具体制备过程如下
301、将获茶块去皮(即获茶菌核)、干燥、反复粉碎和过6号筛(150±6. 6 μ m, 100目)处理直到过筛率为92%得到茯苓干粉，称取Ikg茯苓干粉投入反应釜内，配制O. 75mol/L的氢氧化钠溶液15L，投入该反应釜内，在25°C搅拌碱化反应3h，得碱性茯苓多糖溶液。302、按照前述的检测茯苓多糖的方法，检测步骤301得到的碱性茯苓多糖溶液中的茯苓多糖的质量。在本发明实施例中检测得到茯苓多糖的质量是茯苓干粉的质量的
72.3%，大于70%，则执行步骤303。303、配制I. OmoI/L氯乙酸溶液27L，2. OmoI/L氢氧化钠溶液18L，将两者混匀后，泵入步骤301中的反应釜，升温至69°C，保温反应4h后降温，待温度降为40°C时，加入3L双氧水溶液(体积浓度为30%的商品双氧水溶液),氧化脱色2h，再滴加盐酸,调节pH值至7，过滤，向滤液中加入乙醇调节乙醇含量到70% (滤液和乙醇的混合液中乙醇的体积百分含量为70%)，醇析2h，离心得滤饼，用少量体积百分含量为75%的乙醇水溶液洗涤滤饼3次，再离心得滤饼，将滤饼在真空条件下65°C干燥12小时后，粉碎、过6号筛得羧甲基茯苓多糖成品，将该羧甲基茯苓多糖成品制成羧甲基茯苓多糖口服液。本发明实施例得到的羧甲基茯苓多糖成品性状为白色粉末，无臭，有引湿性，按前述方法测得的羧甲基茯苓多糖成品中羧甲基茯苓多糖含量为83. 6%。
实施例4
本发明实施例提供了一种羧甲基茯苓多糖的制备方法，具体制备过程如下
401、将茯苓块去皮(即茯苓菌核)、干燥、反复粉碎、过7号筛(125±5. 8 μ m，120目)处·理直到过筛率为94%得到茯苓干粉，称取Ikg茯苓干粉投入反应釜内，配制I. 2mol/L的氢氧化钠溶液12L，投入该反应釜内，在28°C搅拌碱化反应2h，得碱性茯苓多糖溶液。402、按照前述的检测茯苓多糖的方法，检测步骤401得到的碱性茯苓多糖溶液中的茯苓多糖的质量。在本发明实施例中检测得到茯苓多糖的质量是茯苓干粉的质量的74. 7%，大于70%，则执行步骤403。403、配制1.4mol/L氯乙酸溶液17. 5L，2. 4mol/L氢氧化钠溶液12. 5L，将两者混匀后，泵入步骤401中的反应釜，升温至63°C，保温反应8h后降温，待温度将为40°C，加入
I.2L双氧水溶液(体积浓度为30%的商品双氧水溶液),氧化脱色12h，再滴加盐酸，调节pH值至6，过滤，向滤液中加入乙醇调节乙醇含量到68% (滤液和乙醇的混合液中乙醇的体积百分含量为68%)，醇析2. 5h,离心得滤饼，用少量体积百分含量为76%的乙醇水溶液洗涤滤饼3次，再离心得滤饼，将滤饼在真空条件下63°C干燥14小时后，粉碎、过7号筛得羧甲基茯苓多糖成品，将该羧甲基茯苓多糖成品制成羧甲基茯苓多糖口服液。本发明实施例得到的羧甲基茯苓多糖成品性状为白色粉末，无臭，有引湿性，按前述方法测得的羧甲基茯苓多糖成品中羧甲基茯苓多糖含量为84. 1%。
实施例5
本发明实施例提供了一种羧甲基茯苓多糖的制备方法，具体制备过程如下
501、将获茶块去皮(即获茶菌核)、干燥、反复粉碎和过6号筛(150±6. 6 μ m, 100目)处理直到过筛率为90%得到茯苓干粉，称取Ikg茯苓干粉投入反应釜内，配制I. Omol/L的氢氧化钠溶液14L，投入该反应釜内，在27°C搅拌碱化反应2. 5h，得碱性茯苓多糖溶液。502、按照前述的检测茯苓多糖的方法，检测步骤501得到的碱性茯苓多糖溶液中的茯苓多糖的质量。在本发明实施例中检测得到茯苓多糖的质量是茯苓干粉的质量的
73.9%，大于70%，则执行步骤503。503、配制1.2mol/L氯乙酸溶液11. 5L，2. 7mol/L氢氧化钠溶液9. 5L，将两者混匀后，泵入步骤501中的反应釜，升温至67°C，保温反应6h后降温，待温度将为40°C，加入
I.4L双氧水溶液(体积浓度为30%的商品双氧水溶液),氧化脱色8h，再滴加盐酸，调节pH值至5. 5，过滤，向滤液中加入乙醇调节乙醇含量到68% (滤液和乙醇的混合液中乙醇的体积百分含量为68%)，醇析4h，离心得滤饼，用少量体积百分含量为77%的乙醇水溶液洗涤滤饼3次，再离心得滤饼，将滤饼在真空条件下62°C干燥15小时后，粉碎、过5号筛得羧甲基茯苓多糖成品，将该羧甲基茯苓多糖成品制成羧甲基茯苓多糖胶囊。本发明实施例得到的羧甲基茯苓多糖成品性状为白色粉末，无臭，有引湿性，按前述方法测得的羧甲基茯苓多糖成品中羧甲基茯苓多糖含量为84. 3%。
实施例6
本发明实施例提供了一种羧甲基茯苓多糖的制备方法，具体制备过程如下
601、将茯苓块去皮(即茯苓菌核)、干燥、反复粉碎和过7号筛(125 ±5.8 μ m，120目)处理直到过筛率为99%得到茯苓干粉，称取Ikg茯苓干粉投入反应釜内，配制I. lmol/L的氢氧化钠溶液13L，投入该反应釜内，在28°C搅拌碱化反应I. 5h，得碱性茯苓多糖溶液。
602、按照前述的检测茯苓多糖的方法，检测步骤501得到的碱性茯苓多糖溶液中的茯苓多糖的质量。在本发明实施例中检测得到茯苓多糖的质量是茯苓干粉的质量的
74.8%，大于70%，则执行步骤603。603、配制I. 3mol/L氯乙酸溶液15L，2. 5mol/L氢氧化钠溶液11L，将两者混匀后，泵入步骤601中的反应釜，升温至65°C，保温反应7h后降温，待温度将为40°C，加入1040mL双氧水溶液(体积浓度为30%的商品双氧水溶液),氧化脱色9h，再滴加盐酸，调节pH值至
6.5，过滤，向滤液中加入乙醇调节乙醇含量到69% (滤液和乙醇的混合液中乙醇的体积百分含量为69%)，醇析3h，离心得滤饼，用少量体积百分含量为78%的乙醇水溶液洗涤滤饼2次，离心得滤饼，将滤饼在真空条件下64°C干燥13小时后，粉碎、过5号筛得羧甲基茯苓多糖成品。本发明实施例得到的羧甲基茯苓多糖成品性状为白色粉末，无臭，有引湿性，按前述方法测得的羧甲基茯苓多糖成品中羧甲基茯苓多糖含量为86. 2%。
对比例I
本对比例为实施例2与实施例6的对比实施例，具体过程如下
701、将茯苓块去皮(即茯苓菌核)、干燥、反复粉碎和过5号筛(180±7.6μπι，80目)处理直到过筛率为90%得到茯苓干粉，称取Ikg茯苓干粉投入反应釜内，配制O. 75mol/L的氢氧化钠溶液10L，投入该反应釜内，在25°C搅拌碱化反应lh，得碱性茯苓多糖溶液。702、配制1.3mol/L氯乙酸溶液11. 5L，2. 5mol/L氢氧化钠溶液8. 5L，将两者混匀后，泵入步骤701中的反应釜，升温至65°C，保温反应7h后降温，待温度将为40°C，加入800mL双氧水溶液(体积浓度为30%的商品双氧水溶液),氧化脱色9h，再滴加盐酸,调节pH值至6. 5，过滤，向滤液中加入乙醇调节乙醇含量到69% (滤液和乙醇的混合液中乙醇的体积百分含量为69%)，醇析3h，离心得滤饼，用少量体积百分含量为78%的乙醇水溶液洗涤滤饼2次，离心得滤饼，将滤饼在真空条件下64°C干燥13小时后，粉碎、过5号筛得羧甲基茯苓多糖成品。本发明实施例得到的羧甲基茯苓多糖成品性状为白色粉末，无臭，有引湿性，按前述方法测得的羧甲基茯苓多糖成品中羧甲基茯苓多糖含量为74. 3%。
对比例2本对比例为实施例6的对比实施例，具体过程如下
801、将茯苓块去皮(即茯苓菌核)、干燥、粉碎得到茯苓干粉，称取Ikg茯苓干粉投入反应釜内，配制I. lmol/L的氢氧化钠溶液13L，投入该反应釜内，在28°C搅拌碱化反应I. 5h，得碱性茯苓多糖溶液。802、按照前述的检测茯苓多糖的方法，检测步骤801得到的碱性茯苓多糖溶液中的茯苓多糖的质量。在本发明实施例中检测得到茯苓多糖的质量是茯苓干粉的质量的70. 2%，大于70%，则执行步骤803。803、配制I. 3mol/L氯乙酸溶液15L，2. 5mol/L氢氧化钠溶液11L，将两者混匀后，泵入步骤801中的反应釜，升温至65°C，保温反应7h后降温，待温度将为40°C，加入1040mL双氧水溶液(体积浓度为30%的商品双氧水溶液),氧化脱色9h，再滴加盐酸，调节pH值至
6.5，过滤，向滤液中加入乙醇调节乙醇含量到69% (滤液和乙醇的混合液中乙醇的体积百分含量为69%)，醇析3h，离心得滤饼，用少量体积百分含量为78%的乙醇水溶液洗涤滤饼2·次，离心得滤饼，将滤饼在真空条件下64°C干燥13小时后，粉碎、过5号筛得羧甲基茯苓多糖成品。本发明实施例得到的羧甲基茯苓多糖成品性状为白色粉末，无臭，有引湿性，按前述方法测得的羧甲基茯苓多糖成品中羧甲基茯苓多糖含量为78. 4%。从对比例I和对比例2中可以得出如果不控制碱性茯苓多糖溶液中茯苓多糖的含量和茯苓干粉颗粒的大小，最终得到的羧甲基茯苓多糖成品中羧甲基茯苓多糖的含量较本发明实施例有明显降低。同时，从本发明实施例1、3 6中羧甲基茯苓多糖成品中羧甲基茯苓多糖的含量都大于80%，较现有的羧甲基茯苓多糖制备方法生产的羧甲基茯苓多糖成品纯度要高出不少。本发明实施例通过在碱化反应前控制茯苓干粉颗粒的大小提高茯苓多糖的浸出率，同时在羧甲基化反应前控制碱性茯苓多糖溶液中茯苓多糖的含量，并结合最优的制备条件，最终提高羧甲基茯苓多糖的产品质量。综上，本发明实施例中通过在羧甲基茯苓多糖制备过程中严格控制茯苓干粉颗粒的大小和碱性茯苓多糖溶液中茯苓多糖的含量从而提高羧甲基茯苓多糖的收率和产品质量。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种羧甲基茯苓多糖的制备方法，其特征在于，所述方法包括 (1)将茯苓干粉溶于氢氧化钠溶液中，碱化反应得碱性茯苓多糖溶液，所述茯苓干粉为茯苓菌核经干燥、反复粉碎和过5 7号筛处理直到过筛率为90%得到，所述茯苓干粉的质量比所述氢氧化钠溶液的体积为I : 10 15，所述氢氧化钠溶液的摩尔浓度为O. 75 I.25mol/L ； (2)检测所述碱性茯苓多糖溶液中的茯苓多糖的质量是否大于所述茯苓干粉的质量的70%，如果是，则执行步骤(3)； (3)将氯乙酸和氢氧化钠混合溶液加入到所述碱性茯苓多糖溶液中，羧甲基化反应得到羧甲基茯苓多糖混合液，所述氯乙酸和氢氧化钠混合溶液为I. O I. 5mol/L的氯乙酸溶液与2. O 3. OmoI/L的氢氧化钠溶液混合制得，所述氯乙酸溶液与所述氢氧化钠溶液的体积比为I I. 5 : 1，所述碱性茯苓多糖溶液与所述氯乙酸和氢氧化钠混合溶液的体积比为I : I 3，所述羧甲基化反应的反应温度为60 69°C ； (4)将所述羧甲基茯苓多糖混合液分离提纯后得到羧甲基茯苓多糖成品。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，在步骤(I)中，所述碱化反应的反应温度为25 30°C，所述碱化反应的反应时间为I 3小时。
3.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，在步骤(I)中，所述茯苓干粉的质量比所述氢氧化钠溶液的体积为I : 12 14，所述氢氧化钠溶液的摩尔浓度为I. O I. 2mol/L。
4.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述羧甲基化反应的反应时间为4 10小时。
5.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述羧甲基化反应的反应时间为6 8小时。
6.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述氯乙酸和氢氧化钠混合溶液为I. 2 I. 4mol/L的氯乙酸溶液与2. 4 2. 7mol/L的氢氧化钠溶液混合制得，所述氯乙酸溶液与所述氢氧化钠溶液的体积比为I. 2 I. 4 I。
7.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述碱性茯苓多糖溶液与所述氯乙酸和氢氧化钠混合溶液的体积比为I : I. 5 2. 5。
8.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述羧甲基化反应的反应温度为63 67°C。
9.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，所述将所述羧甲基茯苓多糖混合液分离提纯后得到羧甲基茯苓多糖成品，具体包括 A、将所述羧甲基茯苓多糖混合液的温度降至40°C以下后，加入双氧水溶液脱色反应2 24小时，所述双氧水溶液的体积为所述羧甲基茯苓多糖混合液的体积的2 5% ; B、在脱色完成后，用盐酸溶液将脱色反应产物的pH值调至pH5 7，固液分离后向滤液中加入乙醇，使所述滤液和乙醇的混合液中乙醇的体积百分含量为65 70%，醇析2 5小时； C、醇析完成后进行固液分离，所得的固体用体积百分含量75 80%的乙醇水溶液洗涤2 3次，经离心、干燥、粉碎，即得所述羧甲基茯苓多糖成品。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，在步骤C中，所述干燥、粉碎过程，具体包括真空条件下60 65°C干燥12 15小时后，粉碎、过5 7号筛即得所述羧甲基茯苓多糖成品。
11.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述脱色反应的反应时间为8 12小时，所述醇析的时间为2. 5 4小时。
全文摘要
本发明公开了一种羧甲基茯苓多糖的制备方法，属于高分子多糖领域。该方法包括(1)将茯苓干粉溶于氢氧化钠溶液中，碱化反应得碱性茯苓多糖溶液，茯苓干粉为茯苓菌核经干燥、反复粉碎和过5～7号筛处理直到过筛率为90%得到；(2)检测碱性茯苓多糖溶液中的茯苓多糖的质量是否大于茯苓干粉的质量的70%，如果是，则执行步骤(3)；(3)将氯乙酸和氢氧化钠混合溶液加入到碱性茯苓多糖溶液中，羧甲基化反应得到羧甲基茯苓多糖混合液；(4)将所述混合液分离提纯后得到羧甲基茯苓多糖成品。本发明通过在羧甲基茯苓多糖制备过程中严格控制茯苓干粉颗粒的大小和碱性茯苓多糖溶液中茯苓多糖的含量从而提高羧甲基茯苓多糖的收率和产品质量。
文档编号C08B37/00GK102898533SQ201210375000
公开日2013年1月30日 申请日期2012年10月8日 优先权日2012年10月8日
发明者冯菊红, 刘明良, 邱敏芳, 丁志华, 胡立志, 刘展良 申请人:湖北省宏源药业有限公司