重组肉毒梭菌神经毒素的制造的制作方法

文档序号:11141489阅读:来源:国知局

技术特征:

1.用于产生可溶性双链BoNT/A蛋白的方法,所述方法包括:

a)提供可溶性单链BoNT/A蛋白;

b)在溶液中使所述BoNT/A蛋白与内切蛋白酶Lys-C(Lys-C)接触;并且

c)通过使含有可溶性BoNT/A蛋白和Lys-C的溶液与疏水表面接触,从Lys-C分离可溶性BoNT/A蛋白,其中可溶性BoNT/A蛋白偏好地与疏水表面结合。

2.根据权利要求1所述的方法,其中(i)通过在表达系统中表达编码所述单链BoNT/A蛋白的核酸在宿主细胞中;或(ii)在体外表达系统中产生可溶性单链BoNT/A蛋白。

3.根据权利要求2所述的方法,其中宿主细胞是细菌宿主细胞并且表达系统是细菌表达系统。

4.根据权利要求3所述的方法,其中细菌表达系统是大肠杆菌表达系统并且宿主细胞是大肠杆菌细胞。

5.根据权利要求2至4中任一项所述的方法,其中所述可溶性单链BoNT/A蛋白在所述宿主细胞的细胞质中表达。

6.根据权利要求2至5中任一项所述的方法,其中所述可溶性单链BoNT/A蛋白以至少5mg/L的水平表达。

7.根据权利要求2至6中任一项所述的方法,包括溶解细菌或大肠杆菌宿主细胞以提供含有所述可溶性单链BoNT/A蛋白的细菌或大肠杆菌宿主细胞匀浆。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法,其中疏水表面是附着有由芳基或烷基组成的配体的惰性基质。

9.根据权利要求8所述的方法,其中配体选自丁基、苯基或辛基配体。

10.根据权利要求9所述的方法,其中使用高性能疏水表面。

11.通过根据权利要求1至10中任一项所述的方法可获得的活性双链BoNT/A蛋白。

12.组合物,包含根据权利要求11所述的活性双链BoNT/A蛋白;其中所述组合物基本上不含内切蛋白酶Lys-C。

13.根据权利要求12所述的组合物,其中所述组合物包含少于5%的单链BoNT/A或少于2%的单链BoNT/A。

14.根据权利要求12或13所述的组合物,其中所述组合物含有少于400pg内切蛋白酶Lys-C(Lys-C)每100ng BoNT/A蛋白、或少于300pg Lys-C每100ng BoNT/A蛋白、或少于200pg Lys-C每100ng BoNT/A蛋白、或少于100pg Lys-C每100ng BoNT/A蛋白、或少于50pg Lys-C每100ng BoNT/A蛋白、或少于20pg Lys-C每100ng BoNT/A蛋白、或少于15pg Lys-C每100ng BoNT/A蛋白、或少于10pg Lys-C每100ng BoNT/A蛋白。

15.液态药物组合物,包含:

根据权利要求11所述的活性双链BoNT/A蛋白;

是表面活性剂的非蛋白质稳定剂;和

水;

其中所述液态药物组合物不包含蛋白质稳定剂;并且

其中所述液态药物组合物基本上不含内切蛋白酶Lys-C(Lys-C)。

16.根据权利要求15所述的液态药物组合物,其中所述液态药物组合物含有少于400pg Lys-C每100ng BoNT/A蛋白、或少于300pg Lys-C每100ng BoNT/A蛋白、或少于200pg Lys-C每100ng BoNT/A蛋白、或少于100pg Lys-C每100ng BoNT/A蛋白、或少于50pg Lys-C每100ng BoNT/A蛋白、或少于20pg Lys-C每100ng BoNT/A蛋白、或少于15pg Lys-C每100ng BoNT/A蛋白、或少于10pg Lys-C每100ng BoNT/A蛋白。

17.根据权利要求15或16所述的液态药物组合物,其中所述液态药物组合物还包含:

氯化钠,

维持pH在5.5和7.5之间的缓冲剂,和

二糖;

其中水是无菌水。

18.根据权利要求11所述的活性双链BoNT/A蛋白、或根据权利要求12至14中任一项所述的组合物,或根据权利要求15至17中任一项所述的液态药物组合物,其用于治疗。

19.根据权利要求11所述的活性双链BoNT/A蛋白、或根据权利要求12至14中任一项所述的组合物,或根据权利要求15至17中任一项所述的液态药物组合物用于制造药物的用途。

20.治疗方法,包括向有需要的患者施用根据权利要求11所述的活性双链BoNT/A蛋白、或根据权利要求12至14中任一项所述的组合物,或根据权利要求15至17中任一项所述的液态药物组合物。

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