食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品分析技术领域，具体涉及一种食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法。
【背景技术】
[0002] 世界卫生组织将食源性疾病分为5种类型：食物中毒、细菌性肠道感染症、病毒性 肠道感染症、食源性寄生虫病、人畜共患感染症。食源性病原微生物与这5种类型的食源性 疾病均有关联。按照其生物学特性的不同，引起食物中毒的微生物通常分为两大类：第一类 为感染型，如沙门氏菌、空肠弯曲菌、致病性大肠杆菌；另一类为毒素型，如蜡样芽孢杆菌、 金黄色葡萄球菌、肉毒梭菌等。感染型微生物可以在人类肠道中增殖，毒素型微生物则是产 生芽孢或毒素，即使通过加热杀菌也不能消除其危害。
[0003] 目前食品微生物卫生检测涉及的致病菌主要包括沙门氏菌、志贺氏菌、致泻大肠 埃希式菌、副溶血性弧菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌、溶血链球 菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌、蜡样芽孢杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌等。食品中这些致病 性微生物的检测，多数主要还是依靠传统的培养方法来确定，这些方法最大的问题是耗时 长，不能满足快速检测的要求，无法做出快速判断和选择。
[0004] 蜡样芽孢杆菌属于人兽共患病原菌之一，目前蜡样芽孢杆菌的检测方法主要是平 板计数法，中国使用的国标法检测主要分为两步，第一步是菌落的平板计数，仅培养就需要 12~20h，第二步是可疑菌落的证实试验，包括培养、形态观察、染色镜检、生化试验、与类 似菌的鉴别等步骤，按照国标法完成蜡样芽孢杆菌整个检测程序至少需要3~5d，检测时 间非常长，方法也比较复杂。很难满足食品安全快速检测的要求。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种食品中蜡样芽孢杆菌的检测方 法，该方法检测时间在5h以内，检出限为50~106cfu/mL。
[0006] 食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法，包括以下步骤：
[0007] 步骤1，取食品样品，加入磷酸盐缓冲液，70°C水浴加热20min，冷却后离心，沉淀 加至萌发液中，得芽孢悬液；
[0008] 步骤2,取步骤1所得芽孢悬液，加入发酵液，在37°C、150rpm条件下培养3h ;
[0009] 步骤3,将步骤2所得菌液用蛋白胨溶液稀释，稀释液过滤浓缩，浓缩液经X-Gluc 染色后用微生物快速检测仪中进行检测。
[0010] 作为上述发明的进一步改进，步骤1中食品样品的用量为1〇~20g，磷酸盐缓冲液 的用量为50~100mL。
[0011] 作为上述发明的进一步改进，步骤1所用的磷酸盐缓冲液pH为6. 8。
[0012] 作为上述发明的进一步改进，步骤1中萌发液由以下组分组成：lwt% L-丙氨酸， 2. 5wt%氯化镁，2wt%硫酸锌，I. 5wt%甘露醇，I. 4wt%葡萄糖苷。
[0013] 作为上述发明的进一步改进，步骤2中芽孢悬液和发酵液的体积比为I :100~ 150〇
[0014] 作为上述发明的进一步改进，步骤2中发酵液的配方为：葡萄糖0.5g，蛋白胨lg， 酵母粉〇. 5g，NaCl 0. 5g，KH2PO4 0. lg，微量元素溶液lmL，蒸馏水IOOmL，其中，微量元素： CaCl2 2g/L，MnSO4 · 4H20 0· lg/L，FeSO4 · 7H20 0· 6g/L，ZnSO4 · 7H20 0· 5g/L，CoCl2 · 6H20 2g/L，CuSO4 2g/L，MgSO4 · 7H20 0· 5g/L。
[0015] 作为上述发明的进一步改进，步骤3中过滤浓缩的过滤器孔径为0. 45 μ m。
[0016] 本发明提供的检测方法与国标检测方法之间无显著差异，检测时间在5h以内，检 出限为50~106cfu/mL。
【具体实施方式】
[0017] 实施例1
[0018] 食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法，包括以下步骤：
[0019] 步骤1，取食品样品，加入磷酸盐缓冲液，70°C水浴加热20min，冷却后离心，沉淀 加至萌发液中，得芽孢悬液；
[0020] 步骤2,取步骤1所得芽孢悬液，加入发酵液，在37°C、150rpm条件下培养3h ;
[0021] 步骤3,将步骤2所得菌液用蛋白胨溶液稀释，稀释液过滤浓缩，浓缩液经X-Gluc 染色后用微生物快速检测仪中进行检测。
[0022] 步骤1中食品样品的用量为10g，磷酸盐缓冲液的用量为50mL。
[0023] 步骤1所用的磷酸盐缓冲液pH为6. 8。
[0024] 步骤1中萌发液由以下组分组成：lwt%L-丙氨酸，2. 5wt%氯化镁，2wt%硫酸锌， I. 5wt%甘露醇，I. 4wt%葡萄糖苷。
[0025] 步骤2中芽孢悬液和发酵液的体积比为1 :100。
[0026] 步骤2中发酵液的配方为：葡萄糖0. 5g，蛋白胨lg，酵母粉0. 5g，NaCl 0. 5g， KH2PO4O. lg，微量元素溶液lmL，蒸馏水100mL，其中，微量元素：CaCl2 2g/L，MnSO4 · 4H20 0· lg/L，FeSO4 · 7H20 0· 6g/L，ZnSO4 · 7H20 0· 5g/L，CoCl2 · 6H20 2g/L，CuSO4 2g/L， MgSO4 · 7H20 0. 5g/L〇
[0027] 步骤3中过滤浓缩的过滤器孔径为0. 45 μ m。
[0028] 实施例2
[0029] 食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法，包括以下步骤：
[0030] 步骤1，取食品样品，加入磷酸盐缓冲液，70°C水浴加热20min，冷却后离心，沉淀 加至萌发液中，得芽孢悬液；
[0031] 步骤2,取步骤1所得芽孢悬液，加入发酵液，在37°C、150rpm条件下培养3h ;
[0032] 步骤3,将步骤2所得菌液用蛋白胨溶液稀释，稀释液过滤浓缩，浓缩液经X-Gluc 染色后用微生物快速检测仪中进行检测。
[0033] 步骤1中食品样品的用量为14g，磷酸盐缓冲液的用量为60mL。
[0034] 步骤1所用的磷酸盐缓冲液pH为6. 8。
[0035] 步骤1中萌发液由以下组分组成：Iwt % L-丙氨酸，2. 5wt %氯化镁，2wt %硫酸锌， I. 5wt%甘露醇，I. 4wt%葡萄糖苷。
[0036] 步骤2中芽孢悬液和发酵液的体积比为1 :115。
[0037] 步骤2中发酵液的配方为：葡萄糖0. 5g，蛋白胨lg，酵母粉0. 5g，NaCl 0. 5g， KH2PO4O. lg，微量元素溶液lmL，蒸馏水100mL，其中，微量元素：CaCl2 2g/L，MnSO4 · 4H20 0· lg/L，FeSO4 · 7H20 0· 6g/L，ZnSO4 · 7H20 0· 5g/L，CoCl2 · 6H20 2g/L，CuSO4 2g/L， MgSO4 · 7H20 0. 5g/L〇
[0038] 步骤3中过滤浓缩的过滤器孔径为0. 45 μ m。
[0039] 实施例3
[0040] 食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法，包括以下步骤：
[0041] 步骤1，取食品样品，加入磷酸盐缓冲液，70°C水浴加热20min，冷却后离心，沉淀 加至萌发液中，得芽孢悬液；
[0042] 步骤2,取步骤1所得芽孢悬液，加入发酵液，在37°C、150rpm条件下培养3h ;
[0043] 步骤3,将步骤2所得菌液用蛋白胨溶液稀释，稀释液过滤浓缩，浓缩液经X-Gluc 染色后用微生物快速检测仪中进行检测。
[0044] 步骤1中食品样品的用量为18g，磷酸盐缓冲液的用量为70mL。
[0045] 步骤1所用的磷酸盐缓冲液pH为6. 8。
[0046] 步骤1中萌发液由以下组分组成：Iwt % L-丙氨酸，2. 5wt %氯化镁，2wt %硫酸锌， I. 5wt%甘露醇，I. 4wt%葡萄糖苷。
[0047] 步骤2中芽孢悬液和发酵液的体积比为1 :120。
[0048] 步骤2中发酵液的配方为：葡萄糖0· 5g，蛋白胨lg，酵母粉0· 5g，NaCl 0· 5g， KH2PO4O. lg，微量元素溶液lmL，蒸馏水100mL，其中，微量元素：CaCl2 2g/L，MnSO4 · 4H20 0· lg/L，FeSO4 · 7H20 0· 6g/L，ZnSO4 · 7H20 0· 5g/L，CoCl2 · 6H20 2g/L，CuSO4 2g/L， MgSO4 · 7H20 0. 5g/L〇
[0049] 步骤3中过滤浓缩的过滤器孔径为0. 45 μ m。
[0050] 实施例4
[0051] 食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法，包括以下步骤：
[0052] 步骤1，取食品样品，加入磷酸盐缓冲液，70°C水浴加热20min，冷却后离心，沉淀 加至萌发液中，得芽孢悬液；
[0053] 步骤2,取步骤1所得芽孢悬液，加入发酵液，在37°C、150rpm条件下培养3h ;
[0054] 步骤3,将步骤2所得菌液用蛋白胨溶液稀释，稀释液过滤浓缩，浓缩液经X-Gluc 染色后用微生物快速检测仪中进行检测。
[0055] 步骤1中食品样品的用量为20g，磷酸盐缓冲液的用量为100mL。
[0056] 步骤1所用的磷酸盐缓冲液pH为6. 8。
[0057] 步骤1中萌发液由以下组分组成丙氨酸，2. 5wt%氯化镁，2wt%硫酸锌， I. 5wt%甘露醇，I. 4wt%葡萄糖苷。
[0058] 步骤2中芽孢悬液和发酵液的体积比为1 :150。
[0059] 步骤2中发酵液的配方为：葡萄糖0. 5g，蛋白胨lg，酵母粉0. 5g，NaCl 0. 5g， KH2PO4O. lg，微量元素溶液lmL，蒸馏水100mL，其中，微量元素：CaCl2 2g/L，MnSO4 · 4H20 0· lg/L，FeSO4 · 7H20 0· 6g/L，ZnSO4 · 7H20 0· 5g/L，CoCl2 · 6H20 2g/L，CuSO4 2g/L， MgSO4 · 7H20 0. 5g/L〇
[0060] 步骤3中过滤浓缩的过滤器孔径为0. 45 μ m。
[0061] 将实施例1至4所得结果与国标GB4789. 14所得结果进行比较，结果如下：
[0062]
[0063] 由上表可知，本发明提供的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法与国标GB4789. 14 的检测方法不存在显著差异。
【主权项】
1. 食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法，其特征在于：包括以下步骤： 步骤1，取食品样品，加入磷酸盐缓冲液，70°C水浴加热20min，冷却后离心，沉淀加至 萌发液中，得芽孢悬液； 步骤2,取步骤1所得芽孢悬液，加入发酵液，37°C、150rpm培养3h; 步骤3,将步骤2所得菌液用蛋白胨溶液稀释，稀释液过滤浓缩，浓缩液经X-Gluc染色 后用微生物快速检测仪中进行检测。2. 根据权利要求1所述的食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法，其特征在于：步骤1中食 品样品的用量为10~20g，磷酸盐缓冲液的用量为50~100mL。3. 根据权利要求1所述的食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法，其特征在于：步骤1所用 的磷酸盐缓冲液pH为6. 8。4. 根据权利要求1所述的食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法，其特征在于：步骤1中萌 发液由以下组分组成：lwt%L-丙氨酸，2. 5wt%氯化镁，2wt%硫酸锌，I. 5wt%甘露醇，I. 4wt% 葡萄糖苷。5. 根据权利要求1所述的食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法，其特征在于：步骤2中芽 孢悬液和发酵液的体积比为1 :100~150。6. 根据权利要求1所述的食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法，其特征在于：步骤2中发 酵液的配方为：葡萄糖0. 5g，蛋白胨lg，酵母粉0. 5g，NaCl0. 5g，KH2PO4 0.lg，微量元素溶 液lmL，蒸馏水 100mL，其中，微量元素：CaCl2 2g/L，MnS04.4H20 0.1g/L，FeS04.7H20 0.6g/L， ZnS04.7H20 0? 5g/L，CoCl2 ? 6H20 2g/L，CuSO4 2g/L，MgSO4 ? 7H20 0? 5g/L。7. 根据权利要求I所述的食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法，其特征在于：步骤3中过 滤浓缩的过滤器孔径为0. 45Mm。
【专利摘要】本发明提供了一种食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法，先取食品样品，加入磷酸盐缓冲液，70℃水浴加热20min，冷却后离心，沉淀加至萌发液中，得芽孢悬液；再取所得芽孢悬液，加入发酵液，在37℃、150rpm条件下培养3h；然后将所得菌液用蛋白胨溶液稀释，稀释液过滤浓缩，浓缩液经X-Gluc染色后用微生物快速检测仪中进行检测。本发明提供的检测方法与国标检测方法之间无显著差异，检测时间在5h以内，检出限为50～106cfu/mL。
【IPC分类】C12R1/085, C12Q1/04
【公开号】CN104928345
【申请号】CN201510368782
【发明人】熊开胜, 张海防, 谢建庭
【申请人】苏州东辰林达检测技术有限公司
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年6月29日