本发明涉及结合至nr1h4受体(fxr)并用作fxr的激动剂或者调节剂的化合物。本发明还涉及通过用所述化合物结合所述核受体的所述化合物用于治疗和/或预防疾病和/或病症的用途。
多细胞生物依赖于细胞和体室之间的信息传递的先进机制。传播的信息可能非常复杂，并且可能导致细胞分化、增殖或繁殖中涉及的遗传程序的改变。信号或激素通常是低分子量分子，如肽、脂肪酸或胆固醇衍生物。
这些信号中的许多通过最终改变特定基因的转录来产生它们的作用。介导细胞对各种信号的反应的一个研究良好的蛋白质组是被称为核受体的转录因子家族，以下通常称为“nr”。该组的成员包括类固醇激素、维生素d、蜕皮激素、顺式和反式视黄酸、甲状腺激素、胆汁酸、胆固醇衍生物、脂肪酸(和其它过氧化物酶体增殖物)的受体，以及所谓的孤儿受体(这种蛋白质在结构上类似于该组的其它成员，但是已知其没有配体)。孤儿受体可能指示细胞中未知的信号传导途径，或者可能是没有配体活化而起作用的核受体。一些这些孤儿受体的转录激活可在不存在外源配体的情况下发生和/或通过源自细胞表面的信号转导途径发生(d.j.mangelsdorf等人，cell1995,83,835；r.m.evans,mol.endocrinol.2005,19,1429)。
一般来说，在nr中定义三个功能域。氨基末端结构域被认为具有一些调控功能。之后是dna结合域，以下称为“dbd”，其通常包含两个锌指元件，并识别在响应基因启动子内的特定激素应答元件(此后称为“hre”)。“dbd”中的特定氨基酸残基已显示赋予dna序列结合特异性(m.schena和k.r.yamamoto,science1988,241,965)。以下称为“lbd”的配体结合域位于已知nr的羧基末端区域。
在没有激素的情况下，lbd似乎干扰dbd与其hre的相互作用。激素结合似乎导致nr中的构象变化，从而打开这种干扰(a.m.brzozowski等人，nature1997,389,753)。没有lbd的nr组成性激活转录但处于低水平。
已提出辅激活因子或转录激活因子除了影响目标细胞的染色质结构之外，还在序列特异性转录因子(基础转录机制)之间建立联系。数种蛋白质如src-1、actr和grip1以配体增强的方式与nr相互作用(d.m.heery等人，nature1997,387,733；t.heinzel等人，nature1997,387,43；k.w.nettles和g.l.greene,annu.rev.physiol.2005,67,309)。
核受体调节剂如类固醇激素通过结合至细胞内受体并形成核受体-配体复合物影响特异性细胞的生长和功能。核受体-激素复合物然后与特定基因的调控区域中的hre相互作用并改变特异性基因表达(a.aranda和a.pascual,physiol.rev.2001,81,1269)。
类法尼醇x受体α(farnesoidxreceptoralpha，以下在涉及人受体时通常也称为nr1h4)为原型2型核受体，其在与视黄醇类x受体以异二聚体方式结合至靶基因的启动子区域时激活基因(b.m.forman等人，cell1995,81,687)。nr1h4的相关生理配体是胆汁酸(d.j.parks等人，science1999,284,1365；m.makishima等人，science1999,284,1362)。最有效的是鹅脱氧胆酸(cdca)，其调节参与胆汁酸内稳态的数种基因的表达。法尼醇和衍生物(一起称为类法尼醇)最初被描述为以高浓度激活大鼠直系同源物，但它们不激活人或小鼠受体。fxr在肝、整个胃肠道(包括食管，胃、十二指肠、小肠、结肠)、卵巢、肾上腺和肾脏中表达。除了控制细胞内基因表达外，fxr似乎也通过上调细胞因子成纤维细胞生长因子15(啮齿动物)或19(猴、人)的表达而参与旁分泌和内分泌信号传导(j.a.holt等人，genesdev.2003,17,1581；t.inagaki等人，cellmetab.2005,2,217)。
用作fxr调节剂的小分子化合物已经在以下出版物中公开：wo2000/037077、wo2003/015771、wo2004/048349、wo2007/076260、wo2007/092751、wo2007/140174、wo2007/140183、wo2008/051942、wo2008/157270、wo2009/005998、wo2009/012125、wo2008/025539、wo2008/025540、wo2009/005998、wo2009/012125、wo2011/020615、wo2012/087519、wo2012/087520和wo2012/087521。更多的小分子fxr调节剂近来已经被综述(m.l.crawley,expertopinther.pat.2010,20,1047；d.merk等人，futuremed.chem.2012,4,1015和c.gege等人，curr.top.med.chem.2014,14,2143)。
在wo2013/007387中，我们公开了具有以下通式的含羟基的环丁基和氮杂环丁烷衍生物，
其中所述变量的定义与本申请类似。
尽管迄今为止已经公开了大量fxr激动剂，但仍然需要提供改进的fxr激动剂。
所述问题已经通过根据下式(1)的化合物，其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、溶剂合物、前药或者药学上可接受的盐被解决，
其中
r选自氢、卤素、c1-6-烷基、c2-6-烯基、c2-6-炔基、卤代-c1-6-烷基、c0-6-亚烷基-r7、c0-6-亚烷基-o-r7、c0-6-亚烷基-cn、c0-6-亚烷基-nr7r8、o-c3-10-环烷基、o-c1-6-亚烷基-o-r7、o-c3-10-杂环烷基、c0-6-亚烷基-co2r7、c0-6-亚烷基-c(o)r7、c0-6-亚烷基-c(o)nr7r8、c0-6-亚烷基-c(o)nr7so2r7、c0-6-亚烷基-n(r7)c(o)r7、c0-6-亚烷基-sox-r7、c0-6-亚烷基-so3h、c0-6-亚烷基-so2-nr7r8、c0-6-亚烷基-so2-nr8cor7、c0-6-亚烷基-n(r7)so2-r8和c0-6-亚烷基-so2-c3-10-杂环烷基，
其中所述亚烷基、环烷基、杂环烷基和5-或者6-元的杂芳基为未取代的或者取代有1至4个取代基，所述取代基独立地选自卤素、cn、c1-3-烷基、卤代-c1-3-烷基、oh、氧代基团、co2h、so3h、o-c1-3-烷基和o-卤代-c1-3-烷基；
r7独立地选自氢、c1-6-烷基、卤代-c1-6-烷基、c0-6-亚烷基-c3-8-环烷基、c0-6-亚烷基-c3-8-杂环烷基、5-或者6-元的杂芳基和苯基，其中烷基、亚烷基、环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基为未取代的或者取代有1至6个取代基，所述取代基独立地选自卤素、cn、oh、氧代基团、co2h、c1-3-烷基、卤代-c1-3-烷基、o-c1-3-烷基、o-卤代-c1-3-烷基、so3h和so2-c1-3-烷基；
r8独立地选自氢、c1-6-烷基、卤代-c1-6-烷基和c3-6-环烷基；
或者r7和r8当与它们所连接的氮合起来时可形成3至8元环，所述3至8元环含有碳原子并任选含有1或者2个选自o、s或者n的杂原子，其中所述环是未取代的或者取代有1至4个取代基，所述取代基独立地选自氟、oh、氧代基团、c1-4-烷基和卤代-c1-4-烷基；
a为6-10元单环或者二环芳基或者5-10元单环或者二环杂芳基，所述杂芳基含有1至5个独立地选自n、o和s的杂原子，其中芳基和杂芳基为未取代的或者取代有一个或者两个基团，所述基团独立地选自oh、卤素、cn、o-c1-6-烷基、o-卤代-c1-6-烷基、c1-6-烷基、卤代-c1-6-烷基、c3-6-环烷基和卤代-c3-6-环烷基；
b为c5-8-环烷基环，或者如果y为n则b为含有一个氮原子的c5-8-杂环烷基，其中所述取代基q不直接相邻于取代基a；
q选自苯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基、嘧啶基、噁唑基、吡唑基、咪唑基和三唑基，其各自为未取代的或者取代有一个或者两个基团，所述基团独立地选自卤素、c1-4-烷基、卤代-c1-4-烷基、c1-4-烷氧基或者卤代-c1-4-烷氧基；
y选自n、ch或者cf；
z选自
其中
l选自化学键、c1-3-亚烷基和c1-3-亚烷基-o-；
y'选自苯基、吡啶基、吡啶基-n-氧化物、嘧啶基、吡啶酮基、嘧啶酮基、c4-8-环烷基和c4-8-杂环烷基，其中苯基、吡啶基、吡啶基-n-氧化物、嘧啶基、吡啶酮基、嘧啶酮基、c4-8-环烷基和c4-8-杂环烷基取代有r2和r3并且任选地被选自以下的基团取代一次或者两次：氟、氯、cn、nh2、nh(c1-3-烷基)、n(c1-3-烷基)2、c1-3-烷基、氟代-c1-3-烷基、oh、c1-3-烷氧基、氟代-c1-3-烷氧基、c3-6-环烷基和氟代-c3-6-环烷基；
r1选自c1-4-烷基和c3-6-环烷基，其中c1-4-烷基为未取代的或者取代有1至3个取代基，所述取代基独立地选自氟、羟基、c1-3-烷氧基和氟代-c1-3-烷氧基，其中c3-6-环烷基为未取代的或者取代有1至3个取代基，所述取代基独立地选自氟、羟基、c1-3-烷基、氟代-c1-3-烷基、c1-3-烷氧基和氟代-c1-3-烷氧基；
r2和r3独立地选自氢、卤素、c1-3-烷基、卤代-c1-3-烷基、c1-3-烷氧基、卤代-c1-3-烷氧基、环丙基和氟代-环丙基；
r4独立地选自卤素、c1-3-烷基、卤代-c1-3-烷基、c1-3-烷氧基、卤代-c1-3-烷氧基、c3-6-环烷基和氟代-c3-6-环烷基；
r5选自氢、氟、ch3、chf2和cf3；
n选自0、1、2、3和4；和
x选自0、1和2。
在另一实施方案中，本发明涉及作为药物的根据式(1)的化合物。
在又一实施方案中，本发明涉及根据式(1)的化合物，其用于预防和/或治疗由fxr介导的疾病。
在另一实施方案中，本发明涉及根据式(1)的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于预防和/或治疗由fxr介导的疾病。
在又一实施方案中，本发明涉及在需要的受试者中治疗或者预防由fxr介导的疾病的方法，所述方法包括向所述受试者给药有效量的根据式(1)的化合物。
在与上述或者下述的任一实施方案组合的另一实施方案中，所述疾病选自慢性肝内或者一些形式的肝外胆汁郁积性病症；肝纤维化；肝的梗阻性或者慢性炎性障碍；肝硬化；脂肪肝和相关综合征、与酒精诱发性肝硬化或者与病毒传播型肝炎相关的胆汁郁积性或者纤维变性影响；在大部肝切除术(majorliverresection)之后的肝功能衰竭或者肝缺血；化疗相关性脂肪性肝炎(chemotherapyassociatedsteatohepatitis，cash)；急性肝功能衰竭；和/或炎性肠病。
在与上述或者下述的任一实施方案组合的另一实施方案中，所述疾病选自脂质和脂蛋白紊乱；ii型糖尿病以及i型和ii型糖尿病的临床并发症，包括糖尿病肾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变和临床显性长期糖尿病的其它观察到的影响；由器官的慢性脂肪性和纤维性变性产生的病症和疾病，例如非酒精性脂肪性肝病(nafld)，或者非酒精性脂肪性肝炎(nash)，所述器官的慢性脂肪性和纤维性变性由于强化的脂质并且具体为甘油三酯积累和随后促纤维化(profibrotic)途径的活化所导致；肥胖症或者代谢综合征(血脂障碍、糖尿病或者异常高的体重指数的合并病症)；和/或急性心肌梗塞、急性中风或者作为慢性阻塞性动脉粥样硬化的终点发生的血栓形成。
在与上述或者下述的任一实施方案组合的另一实施方案中，所述疾病选自非恶性过增生性障碍和恶性过增生性障碍，具体为肝细胞癌、结肠腺瘤和息肉病、结肠腺癌、乳腺癌、胰腺癌、巴雷特食管或者胃肠道和肝的其它形式的肿瘤性疾病。
本发明化合物共享在权利要求1中的根据式(1)的共同化学结构。
在与上述或者下述的任一实施方案组合的一个优选实施方案中，在式(1)中的r选自co2h、so3h、conr7r8、四唑基、1,2,4-噁二唑-5(4h)-酮-3-基和so2nhcor7。
在与上述或者下述的任一实施方案组合的又一优选实施方案中，r7选自氢、c1-6-烷基、卤代-c1-6-烷基、c1-6-亚烷基-r9、so2-c1-3-烷基。
在与上述或者下述的任一实施方案组合的一个优选实施方案中，r8选自氢、c1-6-烷基、卤代-c1-6-烷基。
在与上述或者下述的任一实施方案组合的另一优选实施方案中，r9选自cooh、oh和so3h。
在与上述或者下述的任一实施方案组合的一个优选实施方案中，a选自苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吲哚基、噻吩基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并异噁唑基、苯并呋喃基、苯并三唑基、呋喃基、苯并噻唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、萘基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基，其各自为未取代的或者取代有一个或者两个基团，所述基团独立地选自oh、卤素、cn、o-c1-6-烷基、o-卤代-c1-6-烷基、c1-6-烷基、卤代-c1-6-烷基、c3-6-环烷基和卤代-c3-6-环烷基。
更优选地，a选自苯基、吡啶基、吲哚基、吲唑基、苯并异噻唑基、三唑并吡啶基、苯并噻唑基、噻唑基、噁唑基、喹啉基，其各自为未取代的或者取代有一个或者两个基团，所述基团独立地选自oh、卤素、cn、o-c1-6-烷基、o-卤代-c1-6-烷基、c1-6-烷基、卤代-c1-6-烷基、c3-6-环烷基和卤代-c3-6-环烷基。
在与上述或者下述的任一实施方案组合的又一优选实施方案中，r-a选自
在与上述或者下述的任一实施方案组合的又一优选实施方案中，z选自
其中
l选自化学键、c1-3-亚烷基和c1-3-亚烷基-o-；
x选自ch、cf、n和no；
r1选自c1-4-烷基和c3-6-环烷基，其中c1-4-烷基为未取代的或者取代有1至3个取代基，所述取代基独立地选自氟、羟基、c1-3-烷氧基和氟代-c1-3-烷氧基，其中c3-6-环烷基为未取代的或者取代有1至3个取代基，所述取代基独立地选自氟、羟基、c1-3-烷基、氟代-c1-3-烷基、c1-3-烷氧基和氟代-c1-3-烷氧基；
r2和r3独立地选自氢、卤素、c1-3-烷基、卤代-c1-3-烷基、c1-3-烷氧基、卤代-c1-3-烷氧基、环丙基和氟代-环丙基；和
r5选自氢、氟、ch3、chf2和cf3。
在与上述或者下述的任一实施方案组合的一个更优选的实施方案中，z选自
其中
x选自ch、cf、n和no；
r1选自cf3、chf2、异丙基和环丙基，其中异丙基和环丙基为未取代的或者取代有一个或两个氟或者一个羟基；
r2选自氟、氯、ch3、chf2、cf3、ochf2和ocf3；
r3选自氢、氟、氯、ch3、chf2、cf3、ochf2和ocf3；和
r5选自氢、氟、ch3、chf2和cf3。
在与上述或者下述的任一实施方案组合的又一优选实施方案中，所述部分
在一个更优选的实施方案中，提供根据式(2)的化合物
其中
a选自苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吲哚基、噻吩基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并异噁唑基、苯并呋喃基、苯并三唑基、呋喃基、苯并噻唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、萘基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基，其各自为未取代的或者取代有一个或者两个基团，所述基团独立地选自oh、卤素、cn、o-c1-6-烷基、o-卤代-c1-6-烷基、c1-6-烷基、卤代-c1-6-烷基、c3-6-环烷基和卤代-c3-6-环烷基；
r选自co2h、so3h、conr7r8、四唑基、1,2,4-噁二唑-5(4h)-酮-3-基和so2nhcor7，其中
r7选自氢、c1-6-烷基、卤代-c1-6-烷基、c1-6-亚烷基-r9、so2-c1-6-烷基；
r8选自氢、c1-6-烷基、卤代-c1-6-烷基；和
r9选自cooh、oh和so3h；
q选自苯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基和嘧啶基，其各自为未取代的或者取代有一个或者两个基团，所述基团独立地选自氟、氯、ch3、chf2和cf3；
z选自
x选自ch、n和no；
r1选自异丙基和环丙基，其中异丙基和环丙基为未取代的或者取代有一个或两个氟或者一个羟基；
r2选自氟、氯、ch3、chf2、cf3、ochf2和ocf3；和
r3选自氢、氟、氯、ch3、chf2、cf3、ochf2和ocf3。
在另一优选实施方案中，提供式(3)化合物
其中
a选自苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吲哚基、噻吩基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并异噁唑基、苯并呋喃基、苯并三唑基、呋喃基、苯并噻唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、萘基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基，其各自为未取代的或者取代有一个或者两个基团，所述基团独立地选自oh、卤素、cn、o-c1-6-烷基、o-卤代-c1-6-烷基、c1-6-烷基、卤代-c1-6-烷基、c3-6-环烷基和卤代-c3-6-环烷基；
r选自co2h、so3h、conr7r8、四唑基、1,2,4-噁二唑-5(4h)-酮-3-基和so2nhcor7，其中
r7选自氢、c1-6-烷基、卤代-c1-6-烷基、c1-6-亚烷基-r9、so2-c1-6-烷基；
r8选自氢、c1-6-烷基、卤代-c1-6-烷基；和
r9选自cooh、oh和so3h；
q选自苯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基和嘧啶基，其各自为未取代的或者取代有一个或者两个基团，所述基团独立地选自氟、氯、ch3、chf2和cf3；
z选自
x选自ch、n和no；
r1选自异丙基和环丙基，其中异丙基和环丙基为未取代的或者取代有一个或两个氟或者一个羟基；
r2选自氟、氯、ch3、chf2、cf3、ochf2和ocf3；和
r3选自氢、氟、氯、ch3、chf2、cf3、ochf2和ocf3。
在本发明中，"c1-6-烷基"是指具有1至6个碳原子的饱和烷基链，其可以是直链或支链。其实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基和己基。
术语"卤代-c1-6-烷基"是指所述烷基链中的一个或多个氢原子被替换为卤素。其优选实例是cf3。
"c2-6-烯基"是指含有至少一个碳-碳双键的具有1至6个碳原子的烷基链，其可以是直链或支链。其实例包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基或(1e,3z)-2-甲基戊-1,3-二烯-1-基。优选的实例是乙烯基、丙烯基或(1e,3z)-2-甲基戊-1,3-二烯-1-基。
"c2-6-炔基"是指含有至少一个碳-碳三键的具有1至6个碳原子的烷基链，其可以是直链或支链。其实例包括乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基或3-己炔基。其优选实例包括乙炔基和丙炔基。
“c0-6-亚烷基”是指相应的基团是二价的，并且将相连的残基与分子的剩余部分连接。而且，在本发明中，“c0-亚烷基”表示化学键。
c5-10-环烷基是指包含5至10个碳原子的饱和的或部分不饱和的单、双或者螺环环系。桥连的碳环环系包含两个或更多个环系，其共享不相邻的桥头环原子。实例包括环戊基、环己基、环己烯基、二环[2.2.2]辛基、二环[3.2.1]辛基、螺[3.3]庚基、二环[2.2.1]庚基、金刚烷基和五环[4.2.0.02,5.03,8.04,7]辛基。
c3-10-杂环烷基是指饱和的或者部分不饱和的3至10元碳的单、双或者螺环，其中1、2或者3个碳原子分别被1、2或者3个杂原子替代，其中所述杂原子独立地选自n、o、s、so和so2。其实例包括氧杂环丙烷基(epoxidyl)、氧杂环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、1,4-二噁烷基、吗啉基、4-奎宁环基、1,4-二氢吡啶基和3,6-二氢-2h-硫代吡喃基。c3-10-杂环烷基可以通过碳或者氮原子与分子的剩余部分连接。
含有至多4个杂原子的5-10元的单环或者二环杂芳族环系(在本申请中也被称为杂芳基)是指单环杂芳环如吡咯基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、三唑基、噁二唑基和噻二唑基。它还指二环环系，其中所述一个或多个杂原子可存在于一个或者两个环中(包括桥头原子)。其实例包括喹啉基、异喹啉基、喹噁啉基、苯并咪唑基、苯并异噁唑基、苯并呋喃基、苯并噁唑基、吲哚基、中氮茚基和吡唑并[1,5-a]嘧啶基。杂芳基体系的氮或者硫原子也可任选被氧化成相应的n-氧化物、s-氧化物或者s,s-二氧化物。如果没有另外说明，杂芳基体系可以通过碳或氮原子连接。n-连接的杂环的实例为
6-10元的单环或者二环芳族环系(在本申请中也被称为芳基)是指芳族碳环如苯基或者萘基。
术语"n-氧化物"表示其中所述杂芳族体系(优选为吡啶基)中的氮被氧化的化合物。这种化合物可按已知方式通过以下方法得到：使本发明化合物(例如在吡啶基中)在惰性溶剂中与h2o2或者过酸反应。
卤素选自氟、氯、溴和碘，更优选为氟或者氯，并且最优选为氟。
而且，本发明化合物部分地经历互变异构。例如，如果在环中含有氮原子的杂芳族基团在与所述氮原子相邻的碳原子上取代有羟基，那么可出现以下互变异构现象：
c3-6-环烷基或者c3-6-杂环烷基可直接连接或者螺环连接，例如，当环己烷取代有杂环烷基(即氧杂环丁烷)时，以下结构是可能的：
本领域技术人员会理解，当备选取代基的列表包括由于其价键要求或其它原因而不能用于取代特定基团的成员时，该列表旨在以本领域技术人员的知识来阅读，以只包括适用于取代特定基团的那些列表成员。
本发明的化合物可以是前药化合物的形式。“前药化合物”是指通过在生物体内的生理条件下与酶、胃酸等反应(例如，通过氧化、还原、水解等，其中每一种都是酶促进行的)而转化为本发明化合物的衍生物。前药的实例是这样的化合物：其中本发明化合物中的氨基被酰化、烷基化或磷酸化以形成例如二十烷酰氨基、丙氨酰氨基、新戊酰氧基甲基氨基，或其中羟基被酰化、烷基化、磷酸化或转化成硼酸酯，例如乙酰氧基、棕榈酰氧基、新戊酰氧基、琥珀酰氧基、富马酰氧基、丙氨酰氧基，或其中羧基被酯化或酰胺化。这些化合物可以根据公知的方法由本发明的化合物制备。前药的其它实例是这样的化合物：其中本发明化合物中的羧化物例如转化成烷基-、芳基-、胆碱-、氨基、酰氧基甲基酯、亚麻酸酯(linolenoylester)。
在人类肝脏中，udp-葡萄糖苷酸基转移酶作用于具有氨基、氨基甲酰基、硫基(巯基)或羟基的某些化合物，以通过糖苷键将尿苷二磷酸-α-d-葡萄糖醛酸缀合，或者在二期代谢过程中酯化具有羧基或羟基的化合物。本发明的化合物可以是葡糖苷酸化的，也就是说，与葡糖醛酸结合，以形成葡糖苷酸，特别是(β-d)葡糖苷酸。
本发明化合物的代谢物也在本发明的范围内。
形成胆汁的一个步骤是单个胆汁酸与氨基酸(特别是甘氨酸或牛磺酸)的缀合。本发明的化合物可以在可取代的位置与甘氨酸或牛磺酸缀合。
在可发生本发明化合物或者它们的前药的互变异构现象如酮-烯醇互变异构现象的情况下，单个形式如酮和烯醇形式以及它们的任何比率的混合物均在本发明范围内。这同样适用于立体异构体，例如，对映异构体、顺式/反式异构体、构象异构体等。
如果需要，异构体可以通过本领域熟知的方法(例如，通过液相色谱)分离。这同样适用于对映异构体，例如，通过使用手性固定相。另外，通过将对映异构体转化成非对映异构体(即与对映体纯的辅助化合物偶联)，随后分离得到的非对映异构体并裂解辅助残基，可以分离对映异构体。或者，本发明化合物的任何对映异构体可以通过使用光学纯起始原料的立体选择性合成获得。从外消旋混合物中获得纯对映异构体的另一种方法将使用手性抗衡离子的对映选择性结晶。
本发明化合物可以是药学上可接受的盐或溶剂合物的形式。术语"药学上可接受的盐"是指由药学上可接受的无毒碱或酸(包括无机碱或酸和有机碱或酸)制备的盐。在本发明化合物含有一个或多个酸性或碱性基团的情况下，本发明还包括其相应的药学上或毒理学上可接受的盐，特别是其药学上可用的盐。因此，含有酸性基团的本发明化合物可以存在于这些基团上，并可根据本发明使用，例如作为碱金属盐、碱土金属盐或铵盐。这些盐的更精确的实例包括钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或与氨或有机胺(如乙胺、乙醇胺、三乙醇胺或氨基酸)的盐。含有一个或多个碱性基团(即可被质子化的基团)的本发明化合物可以存在并可根据本发明以其与无机酸或有机酸的加成盐的形式使用。合适的酸的实例包括氯化氢、溴化氢、磷酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘二磺酸、草酸、乙酸、酒石酸、乳酸、水杨酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、新戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富马酸、马来酸、苹果酸、氨基磺酸、苯基丙酸、葡萄糖酸、抗坏血酸、吡啶-4-羧酸、柠檬酸、己二酸以及本领域技术人员已知的其它酸。如果本发明化合物在分子中同时含有酸性基团和碱性基团，那么除了所提及的盐形式外，本发明还包括内盐或内铵盐(两性离子)。相应的盐可以通过本领域技术人员已知的常规方法获得，例如通过使其与有机或无机酸或碱在溶剂或分散剂中接触，或通过与其它盐进行阴离子交换或阳离子交换。本发明还包括本发明化合物的这样的盐，其由于低的生理相容性而不直接适用于药物，但可例如用作化学反应的中间体或用于制备药学上可接受的盐。
此外，本发明的化合物可以以溶剂合物的形式存在，例如包括溶剂化水，或药学上可接受的溶剂合物，例如醇，特别是乙醇的那些。
此外，本发明提供药物组合物，其包含至少一种本发明化合物，或其前药化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物作为活性成分，以及药学上可接受的载体。
“药物组合物”是指一种或多种活性成分和一种或多种构成载体的惰性成分，以及这样的任何产物：其直接或间接地源自任何两种或更多种成分的组合、络合或聚集，或者一种或多种成分的解离，或者一种或多种成分的其它类型的反应或相互作用。因此，本发明的药物组合物包括通过混合至少一种本发明化合物和药学上可接受的载体而制备的任何组合物。
本发明的药物组合物可另外包含一种或多种作为活性成分的其它化合物，如前药化合物或其它核受体调节剂。
虽然在任何给定情况下最合适的途径将取决于所治疗病症的性质和严重程度以及活性成分的性质，但是所述组合物适用于口服、直肠、局部、肠胃外(包括皮下、肌内和静脉内)、眼(眼科)、肺(鼻或颊吸入)或鼻腔给药。它们可以方便地以单位剂量形式存在并通过药学领域众所周知的任何方法制备。
通过用所述化合物结合所述核受体，本发明还涉及所述化合物用于治疗和/或预防疾病和/或病症的用途。此外，通过用所述化合物结合所述核受体，本发明涉及所述化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防疾病和/或病症。具体地，本发明涉及根据式(1)的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗慢性肝内或者一些形式的肝外胆汁郁积性病症、肝纤维化、急性肝内胆汁郁积性病症、由胆汁组成不当引起的梗阻性或者慢性炎性障碍、具有减少的膳食脂肪和脂溶性膳食维生素摄入的胃肠病症、炎性肠病、脂质和脂蛋白紊乱、ii型糖尿病以及i型和ii型糖尿病的临床并发症、由器官的慢性脂肪性和纤维性变性产生的病症和疾病，所述器官的慢性脂肪性和纤维性变性由于强化的脂质并且具体为甘油三酯积累和随后促纤维化途径的活化所导致，肥胖症和代谢综合征(血脂障碍、糖尿病和异常高的体重指数的合并病症)、急性心肌梗塞、急性中风、作为慢性阻塞性动脉粥样硬化的终点发生的血栓形成、细胞内细菌或者寄生原生动物的持续感染、非恶性过增生性障碍、恶性过增生性障碍、结肠腺癌和具体的肝细胞癌、脂肪肝和相关综合征、作为慢性肝病或者外科肝切除的结果的肝功能衰竭或者肝功能失常、乙型肝炎感染、丙型肝炎感染和/或与酒精诱发性肝硬化或者与病毒传播型肝炎相关的胆汁郁积性和纤维变性影响。
本文提及的药物可以通过常规方法制备，包括根据本发明的化合物与药学上可接受的载体的组合。
提出fxr是一种核胆汁酸传感器。因此，它调节肝脏中胆汁酸的合成产率及其在肠道中的循环(通过调节胆汁酸结合蛋白)。但除胆汁酸生理学之外，fxr似乎还参与许多不同生理过程的调节，这些生理过程在病因学中相关并且用于治疗多种疾病，例如胆固醇胆结石，代谢性疾病如ii型糖尿病、血脂障碍或肥胖症，慢性炎性疾病如炎性肠病或慢性肝内形式的胆汁郁积性和许多其它疾病(t.claudel等人，arterioscler.thromb.vasc.biol.2005,25,2020；y.d.wang等人，cellres.2008,18,1087)。
fxr调节肝脏和胃肠道中复杂的应答基因模式。基因产物对不同的生理过程有影响。在fxr功能分析过程中，分析的第一个调节网络是胆汁酸合成调节。虽然lxr通过诱导调节性核受体lrh-1来诱导胆固醇转化为胆汁酸的关键酶cyp7a1，但是fxr通过上调编码shp的mrna来抑制cyp7a1的诱导，该shp是显性抑制lrh-1的另一种核受体。由于fxr结合该途径的最终产物，主要为胆汁酸如胆酸(ca)或cdca，这被认为是对基因表达水平的反馈抑制的实例(b.goodwin等人，mol.cell2000,6,517；t.t.lu等人，mol.cell2000,6,507)。与通过shp抑制胆汁酸合成平行，fxr诱导一系列所谓的abc(用于atp结合盒)转运蛋白，其负责将有毒胆汁酸从肝细胞溶质输出到小管中，所述小管是胆汁起源的小胆管分支。通过分析fxr敲除小鼠，fxr的肝保护功能首次显现(c.j.sinal等人，cell2000,102,731)，其中显示了数种abc转运蛋白在肝脏中的低表达或过表达。进一步的详细分析显示，主要胆汁盐分泌泵bsep或者abcb11(m.ananthanarayanan等人，j.biol.chem.2001,276,28857；j.r.plass等人，hepatology2002,35,589)以及介导脂质从脂蛋白转移至磷脂的关键酶pltp(n.l.urizar等人，j.biol.chem.2000,275,39313)和磷脂的两个关键小管膜转运蛋白,mrp-2(abcc4)(h.r.kast等人，j.biol.chem.2002,277,2908)和mdr-3(abcb4)(l.huang等人，j.biol.chem.2003,278,51085)是通过fxr的配体定向转录激活的直接靶标(总结在：m.miyata,j.pharmacol.exp.ther.2005,312,759；g.rizzo等人，curr.drugtargetsimmuneendocr.metabol.disord.2005,5,289)。
事实上，fxr似乎是胆汁酸的合成、输出和再循环的主要代谢物传感器和调节剂，这暗示使用fxr配体来诱导胆汁流动和将胆汁酸组成改变为更亲水的组成。随着开发作为工具化合物的第一个合成fxr配体gw4064(p.r.maloney等人，j.med.chem.2000,43,2971；t.m.willson等人，med.res.rev.2001、21,513)和半合成人工胆汁酸配体6-α-乙基-cdca，可以分析强力激动剂的fxr的超刺激效果。显示两种配体在胆管结扎的动物中诱导胆汁流动。此外，除了胆汁分泌促进作用外，还可以证明肝保护作用(r.pellicciari等人，j.med.chem.2002,45,3569；y.liu等人，j.clin.invest.2003,112,1678)。这种肝保护作用进一步缩小为抗纤维变性效果，其来自于基质金属蛋白酶timp-1和2的组织抑制剂的抑制、在肝星状细胞中分解基质金属蛋白酶2的胶原沉积物的诱导，和随后的通过fxr激动剂降低α-胶原mrna和转化生长因子β(tgf-β)mrna，这两者都是促纤维化因子(s.fiorucci等人，gastroenterology2004,127,1497；s.fiorucci等人，j.pharmacol.exp.ther.2005,314,584)。此外，在胆管结扎的动物模型中以及在雌激素诱导的胆汁郁积性的动物模型中证实了抗胆汁淤积活性(s.fiorucci等人，j.pharmacol.exp.ther.2005,313,604)。
遗传学研究表明，在遗传性胆汁淤积症(进行性熟悉的肝内胆汁淤积＝pfic,i–iv型)中，作为fic1基因突变的结果，fxr本身的核定位被减少(在i型pfic中，也称为byler病)(f.chen等人，gastroenterology2004,126,756；l.alvarez等人，hum.mol.genet.2004,13,2451)，或者编码mdr-3磷脂输出泵的fxr靶基因水平降低(在iii型pfic中)。综合起来，越来越多的证据表明fxr结合化合物将在慢性胆汁淤积症如原发性胆汁性肝硬化(pbc)或原发性硬化性胆管炎(psc)的治疗方案中显示出显著的临床效用(综述在：g.rizzo等人，curr.drugtargetsimmuneendocr.metabol.disord.2005,5,289；g.zollner等人，mol.pharm.2006,3,231；s.y.cai等人，expertopin.ther.targets2006,10,409)。
fxr激活对胆汁酸代谢和分泌的深刻影响不仅与胆汁淤积综合征有关，而且甚至直接用于治疗胆结石形成。胆固醇胆结石由于积极地从肝细胞泵出进入小管内腔的胆固醇的溶解度低而形成。三种主要组分胆汁酸、磷脂和游离胆固醇的含量的相对百分比决定了混合胶束的形成，并因此决定了游离胆固醇在胆汁中的表观溶解度。fxr多态性作为数量性状位点被定位，作为胆结石疾病的一个因素(h.wittenburg,gastroenterology2003,125,868)。使用合成的fxr工具化合物gw4064，可以证明fxr的激活导致胆固醇饱和指数(csi)的改善，并直接消除c57l胆石易感小鼠中的胆结石形成，而在fxr敲除小鼠中的药物治疗显示对胆结石形成无效果(a.moschetta等人，naturemedicine2004,10,1352)。
这些结果使fxr成为开发可用于预防胆固醇胆结石形成或防止手术切除或冲击波碎石术后胆结石重新形成的小分子激动剂的良好靶标(讨论于：s.a.doggrell,curr.opin.investig.drugs2006,7,344)。
因此，在本发明的一个实施方案中，根据式(1)的化合物和包含所述化合物的药物组合物用于预防和/或治疗由不适当的胆汁组成引起的梗阻性或慢性炎性障碍，例如胆石症，也被称为胆固醇胆结石。
除了fxr在肝脏中在小分子刺激活化后显示的强大的肝脏保护和促胆汁分泌以及抗纤维变性作用外，fxr似乎具有保护肠道免受肿瘤转化和免于在肠中息肉发展及其转化为腺癌的作用(s.modica等人，cancerres.2008,68,9589和r.r.maran等人，j.pharmacol.exp.ther.2009,328,469)。类似于肠道中的情况，缺乏fxr导致肝细胞癌(hcc)形成的高度增加，这是肝癌最突出的形式(i.kim等人，carcinogenesis2007,28,940和f.yang等人，cancerres.2007,67,863)。而功能性fxr防止结肠腺癌和肝细胞癌的形成，fxr激活诱导肝切除术后肝再生(w.huang等人，science2006,312,233)。
与fxr活化相关的联合的肝保护、抗肿瘤和肝再生作用可以在治疗上用于fxr激动剂在治疗严重肝病中的用途。在一个实施方案中，根据本发明的化合物和包含所述化合物的药物组合物用于治疗肝脏疾病如hcc、刺激肝脏再生和改善与大部肝切除术相关的副作用、与病因无关的肝硬化，以及在肝移植或大部肝脏手术过程中预防或治疗肝脏缺血。
自从发现第一种合成的fxr激动剂及其对啮齿动物的施用以来，很明显，fxr是血清甘油三酸酯的关键调节剂(p.maloney等人，j.med.chem.2000,43,2971；t.willson等人，med.res.rev.2001、21,513)。在过去六年中，已经出版了积累的证据，合成激动剂激活fxr导致血清甘油三酯的显著降低，主要是以降低的vldl的形式，而且降低总血清胆固醇(h.r.kast等人，mol.endocrinol.2001,15,1720；n.l.urizar等人，science2002,296,1703；g.lambert等人，j.biol.chem.2003,278,2563；m.watanabe等人，j.clin.invest.2004,113,1408；a.figge等人，j.biol.chem.2004,279,2790；s.bilz等人，am.j.physiol.endocrinol.metab.2006,290,e716)。
但血清甘油三酯的降低并不是独立的效果。用合成的fxr激动剂gw4064处理db/db或ob/ob小鼠导致血清甘油三酯、总胆固醇、游离脂肪酸、酮体如3-oh丁酸酯的显著和联合的降低。此外，fxr激活与肝细胞中的细胞内胰岛素信号通路结合，导致葡萄糖从肝脏糖原异生的产生减少，但是伴随肝糖原的增加。胰岛素敏感性和葡萄糖耐量受到fxr治疗的积极影响(k.r.stayrook等人，endocrinology2005,146,984；y.zhang等人，pnas2006,103,1006；b.cariou等人，j.biol.chem.2006,281,11039；k.ma等人，j.clin.invest.2006,116,1102；d.duran-sandoval等人，biochimie2005,87,93)。最近在用高脂饮食过量的小鼠中观察到对体重减轻的影响(c.lihong等人,americandiabetesassociation(ada)66th年度科学会议,2006年6月,摘要编号856-p)。这种体重减轻效果可能来自于fxr的fgf-19(一种已知会导致体重减轻和运动表型的成纤维细胞生长因子)诱导(j.holt等人，genesdev.2003,17,1581；e.tomlinson等人，endocrinology2002,143,1741)。在近来的专利申请中，证明了fxr激动剂对减轻体重的作用(wo2004/087076；wo2003/080803)。
总之，fxr激动剂的这些药理作用可以以不同的治疗方法开发：fxr结合化合物被认为是治疗ii型糖尿病的良好候选物，因为它们的胰岛素致敏、糖原异生和脂质降低作用。
在一个实施方案中，根据本发明的化合物和包含所述化合物的药物组合物用于ii型糖尿病的预防和/或治疗，其可以通过全身胰岛素敏感性和肝脏中的细胞内胰岛素信号传导的fxr介导的上调、增加的外周葡萄糖摄取和代谢、增加的肝脏中的糖原储存、减少从肝脏负荷的糖异生产生的葡萄糖向血清中的输出来克服。
在又一实施方案中，所述化合物和药物组合物用于预防和/或治疗慢性肝内胆汁淤积，例如pbc、psc、进行性家族性胆汁淤积(pfic)、酒精诱发性肝硬化和相关的胆汁淤积，以及一些形式的肝外胆汁淤积病症，或者肝纤维化。
本发明还涉及式(1)的化合物或包含所述化合物的药物组合物，其用于预防和/或治疗膳食脂肪和脂溶性膳食维生素的吸收减少的胃肠道病症，其可以通过增加肠胆汁酸和磷脂的水平来克服。
在另一个实施方案中，所述化合物或药物组合物用于预防和/或治疗选自以下的疾病：脂质和脂蛋白紊乱如作为临床表现病症的高胆固醇血症、高甘油三酯血症和动脉粥样硬化，其可通过fxr降低总血浆胆固醇、降低血清甘油三酯、增加肝胆固醇转化为胆汁酸以及增加vldl和其它脂蛋白在肝脏中的清除和代谢转化的有益效果而得到改善。
在另一个实施方案中，所述化合物和药物组合物用于预防和/或治疗疾病，其中fxr靶向药物的降脂、抗胆汁淤积和抗纤维变性联合作用可用于治疗脂肪肝和相关综合征如nash，或者用于治疗与酒精诱发性肝硬化或者与病毒传播型肝炎相关的胆汁淤积和纤维变性作用。
结合降血脂作用，还显示功能性fxr的丧失导致apoe敲除小鼠动脉粥样硬化增加(e.a.hanniman等人，j.lipidres.2005,46,2595)。因此，fxr激动剂可能具有作为抗动脉粥样硬化和心脏保护药物的临床应用。内皮素-1在血管平滑肌细胞中的下调也可能有助于这些有益的治疗效果(f.he等人，circ.res.2006,98,192)。
本发明还涉及根据式(1)的化合物或者包含所述化合物的药物组合物，其用于预防和创伤后治疗心血管障碍如急性心肌梗塞、急性中风，或者作为慢性阻塞性动脉粥样硬化的终点发生的血栓形成。
除了控制肠道和结肠息肉形成外，fxr似乎在乳腺癌组织和细胞系中表达，但在健康乳腺组织中不表达，并且似乎与er阳性乳腺癌细胞中的雌激素受体相互作用(k.e.swales等人，cancerres.2006,66,10120和f.journe等人，breastcancerres.treat.2009,115,523)。
这将使fxr也可以作为治疗增殖性疾病(特别是表达fxr的小分子应答形式的转移癌症形式)的潜在靶标。
在另一个实施方案中，所述化合物和药物组合物用于预防和/或治疗恶性过增生性障碍，例如不同形式的癌症，特别是某些形式的乳腺癌、肝癌或结肠癌，其中fxr配体的干扰将具有有益的影响。
最后，虽然没有提供准确的机制，但fxr似乎也参与了肠内抗菌防御的控制(t.inagaki等人，pnas.2006,103,3920)。然而，从这些公布的数据可以得出结论，fxr激动剂的治疗可能对炎症性肠病(ibd)的治疗有一定的有益影响，特别是肠道上部(回肠)部分受影响的那些形式(如回肠克罗恩病)，因为这似乎是fxr控制细菌生长的作用点。在ibd中，适应性免疫应答的脱敏在肠道免疫系统中受到某种程度的损害。细菌过度生长可能是建立慢性炎症反应的原因。因此，通过经fxr机制抑制细菌生长可能是预防急性炎症发作的关键机制。
因此，本发明还涉及根据式(1)的化合物或包含所述化合物的药物组合物，其用于预防和/或治疗与炎性肠病相关的疾病如克罗恩病或溃疡性结肠炎。fxr介导的肠屏障功能恢复和非共生细菌负荷的减少被认为有助于减少细菌抗原暴露于肠道免疫系统，因此可以减少炎症反应。
本发明还涉及化合物或者药物组合物，其用于预防和/或治疗肥胖症和相关障碍如代谢综合征(血脂障碍、糖尿病和异常高的体重指数的合并病症)，所述肥胖症和相关障碍可以通过fxr介导的降低血清甘油三酯、血糖和增加的胰岛素敏感性以及fxr介导的体重减轻来克服。
在又一实施方案中，本发明的化合物或者药物组合物可用于预防和/或治疗i型和ii型糖尿病的临床并发症。这种并发症的实例包括糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、糖尿病神经病变，或者周围动脉闭塞性疾病(paod)。糖尿病的其它临床并发症也被本发明涵盖。
此外，还可以通过施用本发明的化合物或药物组合物来防止和/或治疗由器官的慢性脂肪性和纤维性变性导致的病症和疾病，所述器官的慢性脂肪性和纤维性变性是由于强化的脂质并且具体为甘油三酯累积和随后促纤维化途径的激活。这种病症和疾病包括肝脏中的nash和慢性胆汁淤积病症、肾脏中的肾小球硬化症和糖尿病肾病、眼中的黄斑变性和糖尿病视网膜病变，以及神经变性疾病如脑中的阿尔茨海默病或者周边神经系统中的糖尿病神经病变。
在实际应用中，本发明化合物可以根据常规药物复合技术作为活性成分与药物载体紧密混合。取决于给药所需的制剂形式，例如口服或肠胃外(包括静脉内)，载体可以采用多种形式。在制备用于口服剂型的组合物时，可以使用任何通常的药物介质，例如在口服液体制剂如悬浮液、酏剂和溶液剂的情况下的水、二醇、油、醇、调味剂、防腐剂、着色剂等；或在口服固体制剂如粉末剂、硬和软胶囊剂和片剂的情况下的载体如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等，其中固体口服制剂是比液体制剂更优选的。
由于其易于施用，片剂和胶囊剂代表最有利的口服剂量单位形式，在这种情况下，明显使用固体药物载体。如果需要，片剂可以用标准的水性或非水性技术包衣。这样的组合物和制剂应含有至少0.1％的活性化合物。这些组合物中活性化合物的百分比当然可以变化，并且可以方便地在单位重量的约2％至约60％之间。在这种治疗有用的组合物中的活性化合物的量使得将获得有效的剂量。活性化合物也可以鼻内给药，例如作为液滴或喷雾剂。
片剂、丸剂、胶囊剂等也可以含有粘合剂如黄蓍胶、阿拉伯树胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂如磷酸二钙；崩解剂如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸；润滑剂如硬脂酸镁；和甜味剂如蔗糖、乳糖或糖精。当剂量单位形式是胶囊剂时，除了上述类型的材料之外，它可以含有液体载体如脂肪油。
各种其它材料可以作为涂层存在或改变剂量单位的物理形式。例如，片剂可以用虫胶、糖或两者包衣。除了活性成分之外，糖浆或酏剂还可含有作为甜味剂的蔗糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料和调味剂如樱桃味或橙味调味剂。
由于本发明化合物主要代表羧酸或其类似的阴离子电子等排物，并且众所周知，离子药物化合物的盐形式可以显著地影响药物化合物的生物利用度，所以本发明化合物也可以作为具有各种抗衡阳离子的盐使用以产生可口服利用的制剂。这些药学上可接受的阳离子可以是单价或二价离子如铵、碱金属钠或钾或者碱土金属镁或钙、某些药学上可接受的胺如三(羟甲基)氨基甲烷、乙二胺、二乙胺、哌嗪或其它，或某些阳离子氨基酸如赖氨酸或精氨酸。
本发明的化合物也可以肠胃外给药。这些活性化合物的溶液或悬浮液可以在与表面活性剂如羟丙基纤维素适当混合的水中制备。分散体也可以在甘油、液体聚乙二醇及其在油中的混合物中制备。在通常的储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物的生长。
适用于可注射用途的药物形式包括无菌水溶液或分散体以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。在所有情况下，所述形式必须是无菌的，并且必须是流体，以至于存在容易注射性。在制造和储存的条件下必须是稳定的，并且必须防止诸如细菌和真菌等微生物的污染作用。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、其合适的混合物和植物油的溶剂或分散介质。
为了向哺乳动物，尤其是人类提供有效剂量的本发明化合物，可使用任何适合的给药途径。例如，可以使用口服、直肠、局部、肠胃外、眼睛、肺、鼻等。剂型包括片剂、锭剂、分散剂、混悬剂、溶液剂、胶囊剂、霜剂、软膏剂、气雾剂等。优选地，本发明化合物口服给药。
使用的活性成分的有效剂量可以根据所使用的具体化合物、给药方式、待治疗的病症和所治疗病症的严重程度而变化。这种剂量可以由本领域技术人员容易地确定。
当治疗或预防本发明化合物适用的fxr介导的病症时，当本发明的化合物以每公斤动物体重约0.1毫克至约100毫克的日剂量施用时，获得通常令人满意的结果，优选以单次日剂量给药，或以每天两至六次的分剂量给药，或以缓释形式给药。对于大多数大型哺乳动物，总日剂量为约1.0毫克至约1000毫克，优选约1毫克至约50毫克。在70kg成年人的情况下，总日剂量通常为约7毫克至约350毫克。可以调整该剂量方案以提供最佳治疗反应。
本发明的化合物可以根据以下方案和实施例的方法使用合适的材料制备，并且通过以下具体实施例进一步举例说明。此外，通过利用本文描述的方法，结合本领域的普通技术，可以容易地制备本文所要求保护的本发明的其它化合物。然而，实施例中所示的化合物不被解释为形成被认为是本发明的唯一属。这些实施例进一步说明了制备本发明化合物的细节。本领域技术人员将容易地理解，以下制备方法的条件和方法的已知变化可用于制备这些化合物。本发明的化合物通常以其药学上可接受的盐的形式分离，例如上述那些。
对应于分离的盐的游离胺碱可以通过以下方法产生：用合适的碱例如碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠和氢氧化钾的水溶液进行中和，并将释放的游离胺碱萃取到有机溶剂中，随后蒸发。以这种方式分离的游离胺碱可以通过溶解在有机溶剂中，然后加入适当的酸，然后蒸发、析出或结晶，进一步转化为另一种药学上可接受的盐。对应于分离的盐的游离羧酸可以通过用合适的酸如盐酸、硫酸氢钠、磷酸二氢钠的水溶液中和并将释放的游离羧酸萃取到有机溶剂中，随后蒸发而产生。以这种方式分离的羧酸可以通过溶解在有机溶剂中，然后加入适当的碱，随后蒸发、析出或结晶而进一步转化为另一种药学上可接受的盐。
本发明化合物的制备方法的说明如下所示。除非方案中另有说明，变量具有与上述相同的含义。下面给出的实施例旨在说明本发明的具体实施方案。如下所述的合成中使用的合适的原料、结构单元和试剂可从例如sigma-aldrich或acrosorganics购得，或者可以通过文献中描述的方法常规制备，例如在以下文献中："march'sadvancedorganicchemistry:reactions,mechanisms,andstructure"，第五版，johnwiley&sons；或者t.eicher,s.hauptmann"thechemistryofheterocycles；structures,reactions,synthesisandapplication"，第2版wiley-vch2003；fieser等人的“fiesers′reagentsfororganicsynthesis”johnwiley&sons2000。
缩写列表
dmf二甲基甲酰胺
ncsn-氯琥珀酰亚胺
dcm二氯甲烷
thf四氢呋喃
pe石油醚
dmso二甲基亚砜
ibx邻碘酰基苯甲酸
dbu1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯
p-tsoh对甲苯磺酸
tea三乙胺
mscl甲磺酰氯
tfa三氟乙酸
diad偶氮二甲酸二异丙酯
dast(二甲基氨基)三氟化硫
tlc薄层色谱法
mecn乙腈
m-cpba间氯过氧苯甲酸
sem-cl2-(三甲基硅基)乙氧基甲基氯
tfaa三氟乙酸酐
acn乙腈
tms三甲基硅基
tempo2,2,6,6-四甲基哌啶基氧化物,游离基
pcc吡啶鎓过铬酸盐
hmpa六甲基磷酰胺
dba二亚苄基丙酮
xantphos4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧杂蒽
edcl1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐
dmap4-二甲基氨基吡啶
通用合成1
实施例1c:2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-腈
步骤1：2-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)吡啶-4-腈(1a)
在微波中，将2-氯吡啶-4-腈(300mg,2.17mmol)溶解在dmf(3ml)中，然后用1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.42ml,3.25mmol)和碳酸钾(600mg,4.33mmol)处理。将小瓶密封并在微波反应器中在110℃加热20分钟。在冷却至室温之后，添加水，并将混合物用etoac萃取两次，将有机层用盐水洗涤4次，经na2so4干燥，过滤，然后浓缩。通过柱色谱法纯化(isco25g0-40％etoac/己烷)，得到产物(310mg,58％收率)。
步骤2：2-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-4-腈(1b)
将2-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)吡啶-4-腈(310mg,1.26mmol)溶解在thf(4ml)中，添加4mhcl(4ml)，并将反应在室温搅拌过夜。添加水，然后将ph用1nnaoh调节至8。添加etoac，分离各相。将水相用etoac萃取一次，将合并的有机物用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩(186mg,73％收率)。
步骤3,实施例1c：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(1c)
将含有4-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑(200mg,0.42mmol)的烘箱干燥的反应瓶密封，排空并用n2填充三次，然后经注射器添加2-methf(3ml)。然后经注射器在室温滴加在thf(0.39ml)中的1.3m异丙基氯化镁氯化锂复合物，并将混合物在室温搅拌1小时，然后加热至50℃并保持1小时。添加另外的1.2当量i-prmgcl，并且继续在50℃加热2小时。将溶液冷却至室温，然后经注射器缓慢添加至2-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-4-腈(85mg,0.42mmol)在thf(2ml)中的溶液，并使混合物在室温搅拌过夜。将混合物用h2o和etoac淬灭，然后用1nhcl酸化。分离各相，将有机物用盐水洗涤，经na2so4干燥，并浓缩。通过色谱法纯化(isco25ggold硅胶0-100％etoac/己烷)，得到产物。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.27(d,j＝5.0hz,1h),7.66–7.46(m,4h),7.34(s,1h),6.88(dd,j＝5.0,1.1hz,1h),6.80–6.71(m,2h),5.27(s,1h),4.86(s,2h),4.24(d,j＝12.5hz,2h),3.31–3.20(m,2h),2.48–2.35(m,2h),1.50(d,j＝13.2hz,2h),1.26–1.03(m,5h).)。ms(m+h)：595.05。
实施例1：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸(1)
在烧瓶中，将2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(40mg,0.07mmol)溶解在乙醇(1.5ml)中，用在水(0.67ml)中的4m氢氧化钠处理，并在室温搅拌1小时，然后加热至80℃并保持3小时。将混合物冷却，并在真空下除去etoh。将剩余溶液在冰浴中冷却，用～2ml水处理，并将ph用1mhcl调节至～4。将混合物用etoac萃取，用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩，得到产物(29mg,70％收率)。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.39(s,1h),8.23(d,j＝5.1hz,1h),7.67–7.45(m,4h),7.23(d,j＝1.3hz,1h),6.97(dd,j＝5.1,1.1hz,1h),6.80–6.70(m,2h),5.24(s,1h),4.86(s,2h),4.20(d,j＝12.0hz,2h),3.31–3.20(m,2h),2.47–2.35(m,2h),1.51(d,j＝13.1hz,2h),1.28–1.01(m,5h)。ms(m+h)：614.05。
通用合成2
实施例2：2-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-4-羧酸(2)
步骤1：2-(3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-4-腈(2a)
在配有磁性搅拌子和冷凝器的100ml烧瓶中，添加2-氯-吡啶-4-腈(1500mg,10.8mmol)、dmf(15ml)、3-吡咯烷醇(1.3ml,16.2mmol)和碳酸钾(2300mg,21.7mmol)。将反应加热至60℃并保持3小时，然后部分浓缩除去dmf，用etoac和水稀释，分离，用etoac萃取一次，用盐水洗涤四次，经硫酸钠干燥，过滤，然后在减压下浓缩(1770mg,86％收率)。
步骤2：2-(3-氧代吡咯烷-1-基)吡啶-4-腈(2b)
在配有磁性搅拌子的烧瓶中，将2-(3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-4-腈(1770mg,9.35mmol)在二氯甲烷(90ml)中的溶液用分成四份的戴斯-马丁过碘烷(4760mg,11.23mmol)处理，并将混合物在室温搅拌过夜。将反应用硫代硫酸钠溶液淬灭，用etoac稀释并搅拌～15分钟，然后用水处理，得到澄清溶液。分离各层，并将有机物先后用50％碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法纯化(isco40g硅胶,0-100％etoac/己烷)，得到产物。
步骤3：2-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-4-腈(2c)
在配有磁性搅拌子的干燥反应瓶中，在氮气下，将4-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑(430mg,0.74mmol)溶解在2-methf(1.4ml)中。向其滴加在thf(1.5ml,1.9mmol)中的1.3mi-prmgcl-licl复合物，并将混合物搅拌2.5小时。将混合物在冰/水浴中冷却并添加作为在2-methf(0.8ml)中的悬浮液的2-(3-氧代吡咯烷-1-基)吡啶-4-腈。将混合物搅拌2小时，然后用水淬灭，用etoac稀释，用1nhcl酸化，然后搅拌15分钟。分离各层，将有机物先后用水和盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。使用isco40ggold硅胶0-60％etoac/己烷纯化，得到产物(490mg,60％)。
步骤4,实施例2：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-4-羧酸(2)
在100ml烧瓶中，将2-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-4-腈(430mg,0.739mmol)在乙醇(14ml)中的溶液用在水(7.4ml)中的4m氢氧化钠处理，并在70℃搅拌2.5小时。将混合物冷却至室温并在真空下除去etoh。将剩余溶液在冰浴中冷却，用～2ml水处理，并用1mhcl将ph调节至～4。将混合物用etoac萃取，用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩，得到产物(421mg,95％收率)。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.32(s,1h),8.19(dd,j＝5.1,0.8hz,1h),7.66–7.47(m,4h),6.93(dd,j＝5.2,1.3hz,1h),6.89(d,j＝2.6hz,1h),6.84(s,1h),6.77(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),5.43(s,1h),4.90(s,2h),3.89–3.75(m,2h),3.65(d,j＝8.9hz,1h),3.58–3.45(m,1h),2.61(t,j＝10.5hz,1h),2.46–2.38(m,1h),2.30–2.15(m,1h),1.25–1.05(m,4h)。ms(m+h)：600.05。
然后对这种物质实施手性拆分(sfcad-h,40％etoh)，得到单一异构体：实施例2a和2b。
实施例2a：2-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-4-羧酸,对映异构体1
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.30(s,1h),8.20(dd,j＝5.2,0.7hz,1h),7.67–7.46(m,5h),6.95(dd,j＝5.1,1.3hz,1h),6.90(d,j＝2.6hz,1h),6.85(s,1h),6.78(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),5.44(s,1h),4.92(s,2h),3.90–3.74(m,2h),3.71–3.65(m,1h),3.62–3.47(m,1h),2.64(q,j＝10.2,9.5hz,1h),2.50–2.38(m,1h),2.24(dd,j＝12.6,6.0hz,1h),1.26–1.03(m,4h)。ms(m+h)：600.12。
实施例2b：2-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-4-羧酸,对映异构体2
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.34(s,1h),8.19(dd,j＝5.1,0.7hz,1h),7.65–7.46(m,4h),6.94(dd,j＝5.1,1.3hz,1h),6.90(d,j＝2.6hz,1h),6.84(d,j＝1.4hz,1h),6.78(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),5.44(s,1h),4.91(s,2h),3.89–3.76(m,2h),3.75–3.60(m,1h),3.60–3.46(m,1h),2.72–2.55(m,1h),2.50–2.38(m,1h),2.30–2.18(m,1h),1.26–1.07(m,4h)。ms(m+h)：600.07
通用合成3
实施例3：4-(4-((4-(1-(4-羧基吡啶-2-基)-4-羟基哌啶-4-基)-3-氯苯氧基)甲基)-5-环丙基异噁唑-3-基)-3,5-二氯吡啶1-氧化物(3)
步骤1：2-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)吡啶-4-羧酸甲酯(3a)
向2-氯吡啶-4-羧酸甲酯(2.6g,15.2mmol)在dmf(12.7ml)中的溶液添加1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(2.3ml,18.3mmol)、k2co3(4.2g,30.5mmol)。将混合物在n2气氛下在65℃搅拌4小时。将所得溶液冷却至室温，添加h2o，用etoac萃取水溶液，将合并的有机物经na2so4干燥并浓缩。通过色谱法纯化(isco(24g硅胶柱)，使用100％己烷-1:1己烷/etoac的梯度)，得到化合物3a(220mg,5％收率)。
步骤2：2-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸甲酯(3b)
遵循实施例1/步骤2中所述的操作，化合物3b由2-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)吡啶-4-羧酸甲酯(3a)以定量收率得到。
步骤3：2-(4-(4-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-2-氯苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸甲酯(3c)
在经n2吹洗的烘箱干燥的反应瓶中添加在2-methf(1ml)中的(4-溴-3-氯苯氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(255mg,0.79mmol)。然后将在thf(0.92ml,1.2mmol)中的1.3m异丙基氯化镁氯化锂复合物经注射器在室温滴加，并将混合物搅拌3小时。缓慢添加2-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸甲酯(3b)在2-methf(1ml)中的溶液，并将混合物在室温搅拌30分钟。将反应用h2o淬灭，用etoac萃取，将有机物用盐水洗涤，经na2so4干燥，并浓缩。通过色谱法纯化(isco(12g硅胶柱)，使用100％己烷-7:3己烷/etoac的梯度)，得到化合物3c(124mg,30％收率)。
步骤4：2-(4-(2-氯-4-羟基苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸甲酯(3d)
在室温向2-(4-(4-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-2-氯苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸甲酯(3c)(124mg,0.26mmol)在2-methf(2ml)中的溶液添加在thf(0.3ml,0.29mmol)中的1mtbaf溶液，并将混合物在室温搅拌30分钟。将混合物用水淬灭并用etoac萃取。将有机相用盐水(20ml)洗涤，经na2so4干燥，并浓缩，得到标题化合物(94mg)，其在后续步骤中直接使用而不经进一步纯化。
步骤5：3,5-二氯-4-(4-((3-氯-4-(4-羟基-1-(4-(甲氧基羰基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)苯氧基)甲基)-5-环丙基异噁唑-3-基)吡啶1-氧化物(3e)
在室温将3,5-二氯-4-(4-(氯甲基)-5-环丙基异噁唑-3-基)吡啶1-氧化物(100mg,0.31mmol)(如wo2011/020615中所述制备)、2-(4-(2-氯-4-羟基苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸甲酯(3d)(125mg,0.34mmol)和k2co3(87mg,0.63mmol)在无水dmf(1.6ml)中合并。将混合物在氮气下加热至65℃并搅拌过夜。将所得溶液冷却至室温，用h2o淬灭并用etoac萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。通过色谱法纯化(isco(4g硅胶柱)，使用100％己烷-100％etoac的梯度)，得到化合物3e(202mg,55％收率)。
步骤6,实施例3：4-(4-((4-(1-(4-羧基吡啶-2-基)-4-羟基哌啶-4-基)-3-氯苯氧基)甲基)-5-环丙基异噁唑-3-基)-3,5-二氯吡啶1-氧化物(3)
在室温向3,5-二氯-4-(4-((3-氯-4-(4-羟基-1-(4-(甲氧基羰基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)苯氧基)甲基)-5-环丙基异噁唑-3-基)吡啶1-氧化物(3e)(111mg,0.18mmol)在thf(1.4ml)和h2o(0.2ml)中的溶液添加lioh·h2o(15mg,0.36mmol)。在搅拌16小时之后，添加h2o和二氯甲烷。添加1nhcl水溶液，将混合物酸化至ph＝3～4，然后将其用二氯甲烷萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并浓缩。将固体用二氯甲烷研磨并干燥，得到化合物3(114mg,57％收率)。1hnmr(300mhz,d6-dmso)δ13.34(s,1h),8.72(s,2h),8.24(d,j＝5.1hz,1h),7.66(d,j＝8.7hz,1h),7.24(s,1h),6.98(dd,j＝5.1,1.1hz,1h),6.90–6.77(m,2h),5.24(s,1h),4.95(s,2h),4.22(brd,j＝12.3hz,2h),3.45-3.26(m,2h),2.49–2.35(m,3h),1.55(brd,j＝13.1hz,2h),1.26–1.03(m,4h)。ms(esi+)m/z633.0(m+h)。
通用合成4
步骤1：4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯
向配有磁性搅拌棒和氮气三通的圆底烧瓶添加4-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑(0.5g,1.06mmol)和thf(19ml)。将混合物在丙酮/液n2浴中冷却至-78℃。滴加n-buli(1.6m己烷溶液，0.86ml,1.37mmol)，并将所得混合物在此温度搅拌30分钟。滴加在thf(5.3ml)中的4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(210mg,1.06mmol)，并将反应搅拌30分钟。将反应混合物用水(10ml)和乙酸乙酯(30ml)淬灭，并温热至室温。添加更多乙酸乙酯(170ml)，并将混合物用水(20mlx2)、盐水(20ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。使残留物经过硅胶柱，得到希望的产物(478mg)。
步骤2：4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)哌啶-4-醇盐酸盐
向配有磁性搅拌棒的圆底烧瓶添加4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(558mg,0.94mmol)和二氯甲烷(56ml)。添加hcl/二噁烷(4n,9.4ml,38mmol)，然后将混合物在室温搅拌1.5小时。真空除去挥发物，得到产物(406mg)。
实施例4：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-4-羧酸
该化合物根据对于实施例2所述的操作合成，用降托品(2000mg,15.7mmol)替代作为起始材料。
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.31(s,1h),8.22(dd,j＝5.1,0.7hz,1h),7.67–7.44(m,5h),7.10(t,j＝1.1hz,1h),6.91(dd,j＝5.1,1.3hz,1h),6.73(dd,j＝8.9,2.6hz,1h),6.57(d,j＝2.6hz,1h),5.18(s,1h),4.80(s,2h),4.58(s,2h),2.66(dd,j＝14.2,4.0hz,2h),2.46–2.31(m,3h),1.94(d,j＝5.4hz,2h),1.45(d,j＝14.0hz,2h),1.20–0.98(m,4h)。ms(m+h)：640.00。
实施例5：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-4-羧酸
该化合物根据对于实施例4所述的操作使用适当的起始材料合成。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.31(s,1h),8.22(dd,j＝5.1,0.7hz,1h),7.70–7.41(m,5h),7.10(t,j＝1.1hz,1h),6.91(dd,j＝5.1,1.3hz,1h),6.78(dd,j＝8.9,2.6hz,1h),6.64(d,j＝2.6hz,1h),5.19(s,1h),4.84(s,2h),4.59(s,2h),2.67(dd,j＝14.1,4.0hz,2h),2.47–2.23(m,3h),1.98–1.91(m,2h),1.47(d,j＝14.1hz,2h),1.18–0.99(m,4h)。(m+h)：656.10
实施例6：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸
该化合物根据对于实施例2所述的操作合成，用2-溴-5-氰基吡啶(1000mg,5.46mmol)替代作为起始材料。
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.38(s,1h),8.65–8.58(m,1h),7.90(dd,j＝8.9,2.3hz,1h),7.67–7.46(m,4h),6.91(d,j＝2.6hz,1h),6.79(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),6.50(d,j＝8.9hz,1h),5.50(s,1h),4.92(s,2h),3.83(d,j＝11.3hz,1h),3.75(s,1h),3.61–3.54(m,1h),2.64(q,j＝10.7,9.9hz,1h),2.50–2.38(m,1h),2.24(d,j＝9.7hz,1h),1.27–1.06(m,4h)。
(m+h)：600.20。然后对该物质实施手性拆分(chiralpakad-h；庚烷:ipa)，得到单一异构体：实施例6a和实施例6b。
实施例6a：6-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸,对映异构体1
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.41(s,1h),8.61(d,1h),7.90(dd,j＝8.9,2.3hz,1h),7.75–7.42(m,4h),6.90(d,j＝2.6hz,1h),6.79(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),6.49(d,j＝8.9hz,1h),5.50(s,1h),4.92(s,2h),3.83(d,j＝11.3hz,1h),3.73(s,1h),3.62–3.52(m,1h),2.73–2.55(m,1h),2.50–2.38(m,1h),2.31–2.18(m,1h),1.25–1.06(m,4h)。(m+h)：600.17
实施例6b：6-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸,对映异构体2
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.38(s,1h),8.61(d,j＝2.3hz,1h),7.90(dd,j＝8.9,2.3hz,1h),7.67–7.48(m,4h),6.91(d,j＝2.6hz,1h),6.79(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),6.49(d,j＝8.9hz,1h),5.50(s,1h),4.92(s,2h),3.88–3.69(m,1h),3.57(d,j＝9.2hz,1h),2.64(q,j＝10.3,9.8hz,1h),2.50–2.38(m,1h),2.26(s,1h),1.25–1.08(m,4h)。(m+h)：600.18。
实施例7：外消旋5-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸
步骤1b：5-(3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-腈(2ab)
在配有冷凝器的干燥三颈烧瓶中添加5-溴-3-氰基吡啶(560mg,3.06mmol)、碳酸铯(1994.03mg,6.12mmol)、pd(dba)3)(123.82mg,0.15mmol)，和xantphos(141.65mg,0.24mmol)，然后将烧瓶排空并用n2填充三次。经注射器添加3-吡咯烷醇(0.32ml,3.98mmol)在1,4-二噁烷(6ml)中的溶液，并将混合物在100℃(油浴)加热过夜。将混合物冷却，用水和etoac处理，通过硅藻土垫过滤，并分离。将水层用盐水洗涤，将有机物经na2so4干燥，过滤并浓缩。通过色谱法纯化(isco40g硅胶0-100％etoac/己烷)，得到产物(310mg,54％)。
步骤2：5-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸(7)
该化合物根据对于实施例2所述的操作合成，使用可选的步骤1b得到物质2ab。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.19(s,1h),8.33(d,j＝1.7hz,1h),8.12(d,j＝2.9hz,1h),7.67–7.46(m,4h),7.27(dd,j＝2.9,1.7hz,1h),6.91(d,j＝2.6hz,1h),6.79(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),5.50(s,1h),4.92(s,2h),3.84(d,j＝10.5hz,1h),3.66–3.41(m,3h),2.71–2.53(m,1h),2.51–2.38(m,1h),2.31–2.19(m,1h),1.26–1.06(m,4h)。(m+h)：600.21。然后对该物质实施手性拆分(chiralpakad-h；庚烷:ipa)，得到单一异构体：实施例7a和实施例7b。
实施例7a：5-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸,对映异构体1
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.14(s,1h),8.31(d,j＝1.5hz,1h),8.10(d,j＝2.8hz,1h),7.70–7.45(m,4h),7.24(s,1h),6.88(d,j＝2.5hz,1h),6.76(dd,j＝8.6,2.7hz,1h),5.47(s,1h),4.89(s,2h),3.81(d,j＝10.5hz,1h),3.63–3.38(m,3h),2.69–2.55(m,1h),2.45–2.37(m,1h),2.29–2.16(m,1h),1.43–0.96(m,4h)。(m+h)：600.22。
实施例7b：5-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸,对映异构体2
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.14(s,1h),8.31(d,j＝1.5hz,1h),8.10(d,j＝2.8hz,1h),7.64–7.45(m,4h),7.28–7.20(m,1h),6.88(d,j＝2.6hz,1h),6.76(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),5.47(s,1h),4.89(s,2h),3.81(d,j＝10.5hz,1h),3.63–3.38(m,3h),2.68–2.55(m,1h),2.50–2.35(m,1h),2.29–2.16(m,1h),1.23–0.96(m,4h)。(m+h)：600.22。
实施例8：外消旋5-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸
该化合物根据对于实施例12所述的操作使用适当的起始材料合成。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.14(s,1h),8.32(d,j＝1.7hz,1h),8.11(d,j＝2.9hz,1h),7.64–7.22(m,6h),7.20(t,j＝76.5,73.5hz,1h),6.92(d,j＝2.6hz,1h),6.81(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),5.49(s,1h),4.95(s,2h),3.83(d,j＝10.5hz,1h),3.69–3.40(m,3h),2.78–2.53(m,1h),2.45–2.31(m,1h),2.31–2.16(m,1h),1.26–0.95(m,4h)。(m+h)：598.31。然后对该物质实施手性拆分(sfcad-h,30％meoh/氨)，得到单一异构体：实施例8a和实施例8b。
实施例8a：5-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸,对映异构体1
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.30(s,1h),8.05(s,1h),7.69–7.51(m,2h),7.52–7.41(m,1h),7.40–7.22(m,3h),7.20(t,j＝73.5hz,1h),6.92(d,j＝2.6hz,1h),6.80(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),5.48(s,1h),4.95(s,2h),3.82(d,j＝10.4hz,1h),3.64–3.42(m,3h),2.70–2.56(m,1h),2.46–2.31(m,1h),2.28–2.17(m,1h),1.41–0.93(m,4h)。(m+h)：598.33。
实施例8b：5-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸,对映异构体2
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.31(s,1h),8.07(s,1h),7.63–7.39(m,3h),7.39–7.28(m,2h),7.28–7.22(m,1h),7.20(t,j＝73.2hz,1h),6.92(d,j＝2.6hz,1h),6.80(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),5.49(s,1h),4.95(s,2h),3.82(d,j＝10.4hz,1h),3.64–3.42(m,3h),2.70–2.56(m,1h),2.46–2.31(m,1h),2.31–2.07(m,1h),1.24–1.00(m,4h)。(m+h)：598.33。
实施例9：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸
该化合物根据对于实施例2所述的操作使用适当的起始材料合成。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.35(s,1h),8.60(dd,j＝2.4,0.7hz,1h),7.89(dd,j＝8.9,2.3hz,1h),7.63–7.41(m,3h),7.39–7.27(m,2h),7.20(t,j＝73.2hz,0h),6.92(d,j＝2.6hz,1h),6.80(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),6.48(d,j＝9.0hz,1h),5.49(s,1h),4.94(s,2h),3.82(d,j＝11.4hz,1h),3.79–3.36(m,2h),2.68–2.58(m,1h),2.46–2.30(m,1h),2.24(t,j＝1.8hz,1h),2.32–2.15(m,1h),1.24–0.97(m,4h)。(m+h)：598.33。然后对该物质实施手性拆分(chiralpakad-h；庚烷:ipa)，得到单一异构体：实施例9a和实施例9b。
实施例9a：6-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸,对映异构体1
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.32(s,1h,w),8.59(d,1h),7.88(dd,j＝8.9,2.3hz,1h),7.63–7.41(m,3h),7.39–7.27(m,2h),7.20(t,j＝73.5hz,1h),6.92(d,j＝2.7hz,1h),6.80(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),6.47(d,j＝8.9hz,1h),5.49(s,1h),4.94(s,2h),3.82(d,j＝11.1hz,1h),3.75–3.68(m,1h),3.60–3.51(m,1h),2.68–2.51(m,1h),2.49–2.30(m,1h),2.31–2.16(m,1h),1.24–1.00(m,4h)。(m+h)：598.37。
实施例9b：6-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸,对映异构体2
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.33(s,1h,w),8.59(d,j＝2.3hz,1h),7.88(dd,j＝8.9,2.4hz,1h),7.63–7.41(m,3h),7.39–7.27(m,2h),7.20(t,j＝73.5hz,1h),6.92(d,j＝2.6hz,1h),6.80(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),6.47(d,j＝8.9hz,1h),5.49(s,1h),4.94(s,2h),3.82(d,j＝11.0hz,1h),3.74–3.68(m,1h),3.61–3.51(m,1h),2.73–2.55(m,1h),2.46–2.30(m,1h),2.32–2.13(m,1h),1.24–1.00(m,4h)。(m+h)：597.96
实施例10：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-羧酸
该化合物根据对于实施例1所述的操作，使用2-氯-6-(三氟甲基)吡啶-4-腈(120mg,0.58mmol)作为起始材料合成。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.81(s,1h,w),7.67–7.45(m,5h),7.25(s,1h),6.81–6.72(m,2h),5.29(s,1h),4.86(s,2h),4.26(d,j＝13.0hz,2h),3.54–3.32(m,2h),2.54–2.34(m,2h),1.57(d,j＝13.2hz,2h),1.25–1.03(m,5h)。ms(m+h)：682.03。
实施例11：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-羧酸
该化合物根据对于实施例1所述的操作，使用2-氯-6-(三氟甲基)吡啶-4-腈作为起始材料合成。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ7.70–7.43(m,6h),7.26(d,j＝0.7hz,1h),6.87–6.75(m,2h),5.28(s,1h),4.90(s,2h),4.23(d,j＝13.0hz,2h),3.47–3.30(m,2h),2.45–2.30(m,2h),1.56(d,j＝13.2hz,2h),1.25–1.01(m,5h)。ms(m+h)：698.09。
实施例12：3-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-5-氟苯甲酸
该化合物根据对于实施例1所述的操作，使用3,5-二氟苯甲腈作为起始材料合成。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.07(s,1h),7.70–7.44(m,5h),7.30(dd,j＝2.4,1.3hz,1h),7.03(dt,j＝12.7,2.4hz,1h),6.93(ddd,j＝8.8,2.3,1.1hz,1h),6.88–6.76(m,2h),5.20(s,1h),4.90(s,2h),3.68(d,j＝12.6hz,2h),3.28–3.15(m,2h),2.59–2.48(m,1h),2.38(tt,j＝8.1,5.2hz,1h),1.56(d,j＝13.1hz,2h),1.20–1.01(m,4h)。ms(m+h)：647.16。
实施例13：3-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-5-氟苯甲酸
该化合物根据对于实施例1所述的操作，使用3,5-二氟苯甲腈作为起始材料合成。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.07(s,1h),7.66–7.44(m,5h),7.30(dd,j＝2.4,1.3hz,1h),7.02(dt,j＝12.6,2.4hz,1h),6.93(ddd,j＝8.9,2.3,1.2hz,1h),6.81–6.70(m,1h),5.19(s,1h),4.87(s,2h),3.67(d,j＝12.0hz,2h),3.22(t,j＝11.9hz,2h),2.50(d,j＝6.1hz,1h),2.46–2.34(m,2h),1.55(d,j＝13.1hz,2h),1.27–1.03(m,5h)。ms(m+h)：631.06
实施例14：5-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-3-羧酸
步骤1ab：5-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)吡啶-3-腈(1ab)
在配有磁性搅拌子和septum帽的干燥小瓶中添加5-溴-3-氰基吡啶(500mg,2.73mmol)、碳酸铯(1780.38mg,5.46mmol)、pd(dba)3)(110.56mg,0.14mmol)和xantphos(126.47mg,0.22mmol)，并且将所述瓶密封，并排空和用n2填充三次。经注射器添加1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(0.46ml,3.55mmol)在1,4-二噁烷(5ml)中的溶液，并将混合物在110℃(油浴)加热过夜。将混合物冷却，然后用水和etoac处理，通过硅藻土过滤，并分离。将有机相用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。通过色谱法纯化(isco40g硅胶,0-100％etoac/己烷)，得到产物(605mg,92％)。
步骤2：5-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-3-羧酸
该化合物根据对于实施例1所述的操作合成，使用可选的步骤1ab得到物质1ab。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.41(s,1h),8.62(d,j＝2.4hz,1h),7.90(dd,j＝9.0,2.4hz,1h),7.68–7.46(m,4h),6.89(d,j＝9.1hz,1h),6.81–6.72(m,2h),5.29(s,1h),4.87(s,2h),4.34(d,j＝12.7hz,2h),3.40–3.26(m,2h),2.48–2.35(m,3h),1.54(d,j＝13.2hz,2h),1.26–1.04(m,4h)。ms(m+h)：614.12。
实施例15：4-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)苯甲酸
该化合物根据对于实施例14所述的操作，使用4-碘苯甲腈(100mg,0.44mmol)作为起始材料合成。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.19(s,1h),7.75(d,j＝8.9hz,2h),7.67–7.47(m,4h),6.97(d,j＝9.1hz,2h),6.78(s,1h),5.22(s,1h),4.88(s,2h),3.79(d,j＝13.0hz,2h),3.31–3.20(m,3h),2.55(s,0h),2.49–2.35(m,1h),1.54(d,j＝13.1hz,2h),1.26–1.04(m,4h)。ms(m+h)：613.32。
实施例16：6-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-3-羧酸
该化合物根据对于实施例2所述的操作，使用6-溴吡啶-3-腈(600mg,3.28mmol)作为起始材料合成。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.27(s,1h),8.52(d,j＝2.9hz,1h),8.42(d,j＝1.6hz,1h),7.73–7.47(m,6h),6.82–6.71(m,2h),5.21(s,1h),4.88(s,2h),3.72(d,j＝12.5hz,2h),3.27–3.16(m,3h),2.63–2.51(m,1h),2.49–2.36(m,1h),1.57(d,j＝13.1hz,2h),1.27–1.04(m,4h)。ms(m+h)：614.15。
实施例17：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-甲酰胺
向实施例1(12mg,0.02mmol)在dmf(0.2ml)中的溶液添加0.5m氨/二噁烷(0.2ml,0.098mmol)，然后添加bop(17mg,0.39mmol)和diea(0.01ml,0.06mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，用etoac和水处理，分离，并用etoac萃取一次。将合并的有机相用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。通过色谱法纯化(iscoc18反相,0-70％水/乙腈/0.1％tfa)，得到希望的产物(5.5mg,46％收率)。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.34(d,j＝5.1hz,1h),8.23(s,1h),7.85–7.63(m,5h),7.39(s,1h),7.11(d,j＝5.3hz,1h),6.97–6.88(m,2h),5.38(s,1h),5.04(s,2h),4.39(d,j＝12.6hz,2h),3.53–3.36(m,3h),2.65–2.45(m,2h),1.69(d,j＝13.2hz,2h),1.37–1.21(m,4h)。ms(m+h)：613.56。
实施例18：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-4-甲酰胺
向实施例2(40mg,0.067mmol)在dmf(0.6ml)中的溶液添加0.5m氨/二噁烷(0.666ml,0.333mmol)，然后添加bop(59mg,0.133mmol)和diea(0.012ml,0.067mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，用etoac和水处理，分离，并用etoac萃取一次。将合并的有机相用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。通过色谱法纯化(iscoc18反相,0-70％水/乙腈/0.1％tfa)，得到产物(25mg,62％收率)。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.31(d,j＝5.2hz,1h),8.22(s,1h),7.84–7.65(m,5h),7.12–7.03(m,2h),7.03–6.90(m,2h),5.61(s,1h),5.08(s,2h),3.97(d,j＝11.2hz,2h),3.91–3.78(m,1h),3.79–3.63(m,1h),2.81(q,j＝10.7,9.5hz,1h),2.64–2.50(m,1h),2.39(dd,j＝12.7,6.5hz,1h),1.44–1.23(m,4h)。ms(m+h)：599.19。
实施例19：外消旋2-(2-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-4-酰氨基)乙烷-1-磺酸
该化合物根据对于实施例18所述的操作，使用牛磺酸(12.5mg,0.1mmol)作为起始材料合成。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ9.03(s,1h),8.28(d,j＝6.2hz,1h),7.84–7.65(m,4h),7.39(s,1h),7.21(d,j＝6.2hz,1h),7.10(d,j＝2.6hz,1h),6.98(dd,j＝8.9,2.6hz,1h),5.86(s,1h),5.10(s,2h),4.16–4.09(m,2h),4.06–3.91(m,1h),3.96–3.74(m,2h),3.66–3.36(m,2h),2.90–2.76(m,3h),2.57–2.50(m,1h),1.55–1.08(m,5h)。ms(m+h)：707.20。
实施例20：外消旋(2-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-4-甲酰基)甘氨酸乙酯
向实施例2(40mg,0.07mmol)在二氯甲烷(0.5ml)中的溶液添加甘氨酸乙酯盐酸盐(10.22mg,0.07mmol)、edci(11.37mg,0.07mmol)、hobt(9.89mg,0.07mmol)和diea(0.02ml,0.13mmol)，并将混合物在室温搅拌过夜，用etoac和水处理，分离，并用etoac萃取一次。将合并的有机相用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。通过色谱法纯化(isco12ggold硅胶,0-100％etoac/己烷)，得到产物(46mg)。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ9.21(t,j＝5.9hz,1h),8.36(d,j＝5.2hz,1h),7.85–7.66(m,4h),7.13–7.04(m,2h),7.04–6.92(m,2h),5.64(s,1h),5.10(s,2h),4.29(q,j＝7.1hz,2h),4.16(d,j＝5.8hz,2h),4.02(s,2h),3.90–3.84(m,1h),3.81–3.68(m,1h),2.82(t,j＝10.4hz,1h),2.62(dd,j＝8.0,5.1hz,1h),2.41(dd,j＝12.3,6.2hz,1h),1.51–1.23(m,7h)。ms(m+h)：685.33。
实施例21：外消旋(2-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-4-甲酰基)甘氨酸
向含有实施例20(37mg,0.05mmol)和thf(0.3ml)的小瓶添加1m氢氧化锂(0.16ml,0.16mmol)，并将混合物在室温搅拌4小时。添加etoac和水，并用1mhcl将ph调节至～6。分离各相，将合并的有机物用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩和在真空下干燥(29mg,82％)。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.65(s,1h,w),8.89(t,j＝5.9hz,1h),8.15(d,j＝5.2hz,1h),7.66–7.47(m,5h),6.93–6.86(m,2h),6.82(s,1h),6.78(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),5.45(s,1h),4.91(s,2h),3.89(d,j＝5.7hz,2h),3.81(d,j＝10.9hz,2h),3.72–3.65(m,1h),3.62–3.47(m,1h),2.70–2.56(m,1h),2.49–2.37(m,1h),2.26–2.15(m,1h),1.20–1.05(m,4h)。ms(m+h)：657.25。
实施例22f和22g：3-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基环戊基)苯甲酸
步骤1：3-(3-溴苯基)环戊烷-1-酮(22a)
在n2下，向干燥三颈烧瓶添加1-溴-3-碘苯(0.44ml,2.56mmol)在thf(4ml)中的溶液，然后将混合物在干冰/乙腈浴中冷却至-40℃。然后滴加在2-methf(1.01ml)中的2.9m异丙基溴化镁，并将所得混合物在-40℃搅拌1小时。向单独烧瓶添加氯化锂(21mg,0.49mmol)并放置在真空下，然后用喷灯灼烧。在冷却至室温后，添加碘化铜(i)(46mg,0.24mmol)，并将烧瓶排空和用n2填充三次。然后经注射器依次添加thf(6ml)、氯化三甲基硅烷(0.31ml,2.44mmol)和环戊-2-烯酮(0.2ml,2.44mmol)，由此形成澄清黄色溶液。然后将所得溶液经注射器滴加至第一烧瓶，将反应混合物在-40℃再搅拌1小时，然后用nh4cl水溶液淬灭，用乙醚稀释，然后用1nhcl酸化至ph1并搅拌0.5小时，同时温热至室温。分离各相，将有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。残留物通过快速色谱法纯化(isco,40ggold,etoac/己烷)，得到产物。
步骤2：3-(3-溴苯基)-1-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)环戊烷-1-醇(22b),(22c)
该物质遵循通用合成2步骤3中所述的通用操作合成。通过柱色谱法纯化(isco24ggold硅胶0-100％etoac/己烷)，得到两个异构体：(22b)和(22c)。
步骤3：3-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基环戊基)苯甲腈(22d)
在微波小瓶中添加(22b)(160mg,0.25mmol)、氰化锌(36mg,0.3mmol)、pd2(dba)3(23mg,0.03mmol)和xantphos(15mg,0.03mmol)。将小瓶密封，然后排空并用n2填充三次，然后添加dmf(10ml)。将反应混合物在微波反应器中在100℃辐射30分钟。将混合物冷却至室温，在减压下浓缩除去大部分dmf，然后用etoac和水稀释，并通过硅藻土过滤。分离各相，将有机层用盐水洗涤三次，经na2so4干燥，过滤并浓缩。通过色谱法纯化(isco12ggold硅胶,0-70％etoac/己烷)，得到产物(22d)(66mg,45％收率)。
步骤4,实施例22f：3-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基环戊基)苯甲酸(22f)
该化合物根据通用合成2步骤4中所述的操作，使用(22d)(55mg,0.095mmol)作为起始材料合成。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.88(s,1h),7.92(t,j＝1.8hz,1h),7.74(dt,j＝7.6,1.4hz,1h),7.65–7.47(m,5h),7.40(t,j＝7.7hz,1h),6.85(d,j＝2.6hz,1h),6.74(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),5.15(s,1h),4.88(s,2h),3.52–3.38(m,1h),2.83–2.71(m,1h),2.49–2.30(m,1h),2.14–1.75(m,3h),1.36–1.04(m,4h),0.89–0.75(m,2h)。ms(m+h)：580.14。
实施例22g,3-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基环戊基)苯甲酸(22g)
该化合物根据对于实施例22f所示的操作，使用(22c)作为起始材料合成。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.90(s,1h),7.86(t,1h),7.76(dt,j＝7.6,1.4hz,1h),7.67–7.48(m,5h),7.41(t,j＝7.6hz,2h),6.85(d,j＝2.6hz,1h),6.74(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),5.13(s,1h),4.88(s,2h),3.63–3.56(m,1h),2.47–2.36(m,2h),2.29(dd,j＝8.3,4.3hz,1h),2.12–1.98(m,2h),1.93–1.77(m,1h),1.27–1.02(m,5h)。ms(m+h)：580.21。
实施例23：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)噻唑-5-羧酸
实施例23根据通用操作2中所述的操作制备，以提供标题化合物(105mg,86％收率)1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.31(s,1h),8.32(s,1h),7.32–7.65(m,5h),7.10(t,j＝1.1hz,1h),6.91(dd,j＝5,1.2hz,1h),6.73(dd,j＝8.9,2.6hz,1h),6.57(d,j＝2.6hz,1h),5.22(s,1h),4.80(s,2h),4.58(s,2h),2.66(dd,j＝14.2,4.0hz,2h),2.46–2.32(m,3h),1.94(d,j＝5.4hz,2h),1.45(d,j＝14.0hz,2h),1.20–0.98(m,4h)；(m+h)：620.2。
实施例24：2-(4-(4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-2-甲基苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸
步骤1：4-((4-溴-3-甲基苯氧基)甲基)-5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑(24a)
遵循实施例3/步骤5中所述的操作，化合物24a通过合并4-(氯甲基)-5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑(如wo2013/007387中所述制备)和4-溴-3-甲基苯酚以91％收率得到。
步骤2：2-(4-(4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-2-甲基苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(24b)
将n-buli(1.6m己烷溶液，0.18ml,0.29mmol)缓慢添加至4-((4-溴-3-甲基苯氧基)甲基)-5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑(24a)(100mg,0.22mmol)在thf(4ml)中的冷却(-78℃)溶液。在10分钟之后，添加2-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-4-腈(44mg,0.22mmol)在thf(1.1ml)中的溶液。在另外20分钟之后，将反应混合物用h2o淬灭，用etoac萃取，将合并的有机物用盐水洗涤，经na2so4干燥并浓缩。残留物通过色谱法纯化(isco(4g硅胶柱)，使用100％己烷-2:1己烷/etoac的梯度)，得到化合物24b(130mg,43％收率)。
步骤3,实施例24：2-(4-(4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-2-甲基苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸(24)
遵循实施例1/步骤4中所述的操作，实施例24由2-(4-(4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-2-甲基苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(24b)以81％收率得到。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.37(d,j＝5.3hz,1h),7.83–7.64(m,3h),7.47(s,1h),7.39–7.29(m,1h),7.17(d,j＝5.4hz,1h),6.71(dd,j＝4.6,2.1hz,2h),4.97(s,2h),4.33(d,j＝12.7hz,2h),3.67–3.52(m,2h),2.60(s,3h),2.59–2.40(m,1h),2.05(s,4h),1.3601.24(m,4h)。ms(esi+)m/z596.1(m+h)。
实施例25：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(3,5-二氯吡啶-4-基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸
步骤1：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(3,5-二氯吡啶-4-基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(25a)
遵循实施例3/步骤5中所述的操作，化合物25a通过组合4-(氯甲基)-5-环丙基-3-(3,5-二氯吡啶-4-基)异噁唑(如wo2011/020615中所述制备)和2-(4-(2-氯-4-羟基苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-腈以74％收率得到。
步骤2,实施例25：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(3,5-二氯吡啶-4-基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸(25)
遵循实施例1/步骤4中所述的操作，实施例25由2-(4-(4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-2-甲基苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-腈以81％收率得到。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.36(s,1h),8.80(s,1h),8.24(d,j＝5.1hz,1h),7.64(d,j＝8.6hz,1h),7.24(s,1h),6.98(dd,j＝5.0,1.0hz,1h),6.81–6.69(m,2h),5.25(s,1h),4.96(s,2h),4.22(d,j＝12.7hz,2h),3.37-3.21(m,2h),2.52-2.40(m,2h),1.54(d,j＝13.1hz,2h),1.22-109(m,4h)。ms(esi+)m/z616.9(m+h)。
实施例26：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-3-羧酸
步骤1：2-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)吡啶-3-腈(26a)
遵循实施例1/步骤1中所述的操作，化合物26a通过组合2-氯吡啶-3-腈与1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷以94％收率得到。
步骤2：2-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-3-腈(26b)
遵循实施例1/步骤2中所述的操作，化合物26b由2-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)吡啶-3-腈以85％收率得到。
步骤3：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-3-腈(26c)
遵循实施例1/步骤3中所述的操作，化合物26c由2-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-3-腈(26b)以61％收率得到。
步骤4,实施例26：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-3-羧酸(26)
将2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基-哌啶-1-基)吡啶-3-腈(100mg,0.17mmol)、在水(0.29ml)中的10m氢氧化钠和乙醇(0.8ml)在微波小瓶中合并，并在微波反应器中在120℃加热15分钟。冷却混合物，并用1mhcl水溶液将ph调节至5。将所得混合物过滤，并将不溶的固体用水和et2o洗涤，并真空干燥，得到实施例26(23mg,22％)。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.24(dd,j＝4.8,2.0hz,1h),7.98(s,1h),7.77(dd,j＝7.4,2.0hz,1h),7.68–7.48(m,6h),6.94–6.72(m,3h),5.14(s,1h),4.89(s,3h),3.57(d,j＝12.6hz,2h),3.37–3.20(m,1h),2.69–2.55(m,2h),2.50-2.40(m,1h),1.53(d,j＝12.9hz,2h),1.27–1.00(m,4h)。ms(esi+)m/z615.2(m+h)。
实施例27：2-(4-(2-氯-4-((4-环丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸
步骤1：1-叠氮基-2-(三氟甲氧基)苯(27a)
在0℃将浓盐酸(7.9ml)添加至2-(三氟甲氧基)苯胺(1.1ml,7.9mmol)在etoac(26ml)中的溶液。在10分钟之后，历时5分钟缓慢添加亚硝酸钠(1.6g,23.7mmol)溶解在水(4.6ml)中的溶液。将混合物搅拌30分钟，然后历时5分钟缓慢地用叠氮化钠(1.5g,23.7mmol)在水(5.3ml)中的溶液处理。将反应搅拌1小时，然后用磷酸盐缓冲液(ph7.4,50ml)处理。将混合物用etoac萃取，将有机物用盐水洗涤，经na2so4干燥并浓缩，得到化合物27a。
步骤2：(4-环丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲醇(27b)
将1-叠氮基-2-(三氟甲氧基)苯(27a,2.0g,9.8mmol)和3-环丙基丙-2-炔-1-醇(1.2ml,9.8mmol)在甲苯(20ml)中的溶液在110℃在氮气气氛下搅拌。在16h之后，将溶液冷却至室温，并添加水和etoac。将混合物分配，将有机物用etoac萃取，用盐水洗涤，经na2so4干燥并浓缩。残留物通过色谱法纯化(isco,24g硅胶柱,使用100％己烷-100％etoac的梯度)，得到化合物27b(230mg,8％收率)，其为极性较小的异构体。h1和h2与h3的noe关联证实了化合物27b的结构。
步骤4：5-(氯甲基)-4-环丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1h-1,2,3-三唑(27c)
在室温向(4-环丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲醇(27b)(52mg,0.17mmol)在二氯甲烷(1ml)中的溶液添加亚硫酰氯(0.038μl,0.52mmol)。将混合物加热至回流并保持15分钟，冷却至室温，然后真空浓缩。添加另外的二氯甲烷(5ml)，并将混合物再次浓缩。将该工艺重复第三次以除去过量亚硫酰氯。粗残留物用于后续步骤中而不进行任何进一步纯化。
步骤5：2-(4-(2-氯-4-((4-环丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(27d)
遵循实施例3/步骤5中所述的操作，化合物27d通过组合2-(4-(2-氯-4-((4-环丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-腈和2-(4-(2-氯-4-羟基苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-腈以75％收率得到。
步骤6,实施例27：2-(4-(2-氯-4-((4-环丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸(27)
遵循实施例1/步骤4中所述的操作，实施例27由2-(4-(2-氯-4-((4-环丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(27d)以62％收率得到。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.35(s,1h),8.22(d,j＝5.0hz,1h),7.77–7.51(m,5h),7.23(s,1h),6.97(d,j＝5.0hz,1h),6.86–6.74(m,2h),5.24(s,1h),5.12(s,2h),4.20(d,j＝12.7hz,2h),3.24(s,1h),2.42(d,j＝9.9hz,2h),1.97(s,1h),1.52(d,j＝13.2hz,2h),1.16(t,j＝7.1hz,1h),1.05–0.85(m,4h)。ms(esi+)m/z616.9(m+h)。
实施例28：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)苯并[d]噻唑-6-羧酸
步骤1：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)苯并[d]噻唑-6-腈
向配有磁性搅拌棒的密封管添加4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)哌啶-4-醇盐酸盐(通用合成4，步骤2)(100mg,0.19mmol)、2-氯苯并[d]噻唑-6-腈(54.1mg,0.23mmol)、碳酸钾(234mg,3.8mmol)和dmf(2ml)。将所述管密封，并将混合物在80℃加热40分钟。添加水(20ml)，并将所得混合物用etoac(50mlx3)萃取，将合并的有机相用盐水(20ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩。硅胶柱色谱法得到希望的产物(37mg,30％收率)。
2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)苯并[d]噻唑-6-羧酸
向配有磁性搅拌棒的密封管添加2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)苯并[d]噻唑-6-腈(37mg,0.06mmol)、etoh(0.6ml)和30％naoh(0.36ml,2.73mmol)。密封所述管，并将混合物在80℃加热过夜。在将ph用4nhcl调节至～4之后，添加乙酸乙酯(200ml)。将混合物用水(10mlx2)、盐水(20ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩。硅胶柱色谱法得到希望的产物(7.1mg,19％收率)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.36(d,j＝1.6hz,1h),7.96(d,j＝11.2hz,1h),7.85(dd,j＝11.6z,j＝2.6hz,1h),7.64(m,1h),7.46(m,1h),7.23(m,1h),6.95(dd,j＝10.4hz,j＝2.2hz,1h),6.86(m,1h),6.72(m,1h),4.89(m,2h),4.02(dm,j＝13.2hz,2h),2.43(m,1h),1.70(m,2h),1.09-1.23(m,6h)ppm；msm/z670.19[m+h]+。
实施例29：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-6-甲氧基吡啶-4-羧酸
步骤1：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-6-甲氧基吡啶-4-腈
向配有磁性搅拌棒的密封管添加4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)哌啶-4-醇盐酸盐(通用合成4步骤2)(95mg,0.18mmol)、2-氯-6-甲氧基吡啶-4-腈(36.2mg,0.22mmol)、碳酸钾(222mg,3.6mmol)和dmf(2ml)。密封所述管，并将混合物在80℃加热过夜。添加水(20ml)，将所得混合物用etoac(50mlx3)萃取，将合并的有机相用盐水(20ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩。硅胶柱色谱法得到希望的产物(97mg,86％收率)。
步骤2：2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-6-甲氧基吡啶-4-羧酸(实施例29)
向配有磁性搅拌棒的密封管添加2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-6-甲氧基吡啶-4-腈(90mg,0.14mmol)、etoh(2.0ml)、30％naoh(0.92ml,6.9mmol)。密封所述管，并将混合物在80℃加热6小时。在将ph用4nhcl调节至～4之后，添加乙酸乙酯(200ml)。将混合物用水(10mlx2)、盐水(20ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩。硅胶柱色谱法得到希望的产物(4.6mg,5％收率)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.96(dm,j＝11.2hz,1h),7.61(m,2h),7.22(m,1h),6.94(m,1h),6.69-6.84(m,2h),6.37(s,1h),5.76(s,1h),4.88(m,2h),4.21(m,2h),3.81(s,3h),2.44(m,1h),1.56(m,2h),1.12-1.23(m,6h)ppm；msm/z644.13[m+h]+。
实施例30：1-(4-(1h-四唑-5-基)吡啶-2-基)-4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)哌啶-4-醇
向配有磁性搅拌棒的密封管添加2-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(实施例1c,40mg,0.07mmol)、叠氮化钠(56.7mg,0.87mmol)、三乙胺盐酸盐(277mg,2.01mmol)和甲苯(2ml)。将所述管密封并在115℃加热8小时。出现一些析出。将析出物过滤并用乙酸乙酯(5mlx4)洗涤，将收集的可溶相用更多乙酸乙酯(180ml)处理，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩。硅胶柱色谱法得到希望的产物(3.8mg,9％收率)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.21(d,j＝6.4hz,1h),7.97(d,j＝12.4hz,1h),7.63(m,1h),7.60(m,1h),7.43(m,1h),7.19(m,2h),6.91(d,j＝9.6hz,1h),6.85(m,1h),6.69(m,1h),5.57(s,1h),4.79-4.90(m,2h),4.25(dm,j＝12.1hz,2h),2.42(m,1h),1.57(m,2h),1.11-1.24(m,6h)ppm；msm/z637.91[m+h]+。
实施例31：2-(4-(2-氯-4-((4-环丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸
步骤1：5-(氯甲基)-4-环丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑
向配有磁性搅拌棒的圆底烧瓶添加(4-环丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑-5-基)甲醇(200mg,0.71mmol)、dcm(3.5ml)。在添加亚硫酰氯(588mg,4.94mmol)后，将混合物在室温搅拌过夜。将混合物真空浓缩，得到粗产物(212.9mg)，其直接用于后续步骤中。
步骤2：5-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-4-环丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑
向配有磁性搅拌棒的圆底烧瓶添加5-(氯甲基)-4-环丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑(212.9mg,0.71mmol)、4-溴-3-氯苯酚(189.8mg,0.92mmol)、碳酸钾(617.3mg,4.47mmol)、nai(183.6,1.23mmol)和dmf(4.0ml)。将混合物在60℃加热3.5小时。添加水(20ml)，并将所得混合物用etoac(50mlx3)萃取，将合并的有机相用盐水(20ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩。硅胶柱色谱法得到希望的产物(388mg)。
步骤3：2-(4-(2-氯-4-((4-环丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-腈
向配有磁性搅拌棒和氮气三通的圆底烧瓶添加5-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-4-环丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑(100mg,0.21mmol)和thf(3.9ml)。将混合物在丙酮/液n2浴中冷却至-78℃。滴加n-buli(1.6m己烷溶液，0.17ml,0.28mmol)，并将所得混合物在此温度搅拌30分钟。滴加2-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-4-腈(1b,42.6mg,0.21mmol)在thf(1.0ml)中的溶液。30分钟后，将反应混合物用水(10ml)和乙酸乙酯(30ml)淬灭，并温热至室温。添加更多乙酸乙酯(170ml)，将混合物用水(20mlx2)、盐水(20ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩。使残留物经过硅胶柱，得到希望的产物(14mg,11％收率)。
步骤4,实施例31：2-(4-(2-氯-4-((4-环丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸
向配有磁性搅拌棒的密封管添加2-(4-(2-氯-4-((4-环丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(14mg,0.02mmol)、etoh(0.6ml)和30％naoh(0.15ml,1.13mmol)。密封所述管，并将混合物在80℃加热1小时。在将混合物的ph用4nhcl调节至～4之后，出现一些析出。将析出物过滤并用冷水(1mlx3)洗涤和在真空下干燥，得到希望的产物(2.4mg,17％收率)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.4(宽单峰,1h),8.24(d,j＝6.0hz,1h),7.95(d,j＝11.6hz,1h),7.65(d,j＝11.6hz,1h),7.42(s,1h),7.26(s,1h),7.22(m,1h),6.96(m,2h),6.86(s,1h),6.71(d,j＝11.2hz,1h),5.61(s,1h),5.00(m,1h),4.85(m,1h),4.23(d,j＝12.4hz,2h),3.16(s,2h),1.86(m,1h),1.52(m,2h),1.22(s,1h),0.91(m,2h),0.63(m,2h)ppm；msm/z613.3[m+h]+。
实施例32：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸
实施例32根据通用操作2中所述的操作制备，以提供外消旋标题化合物(18mg,35％)。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.28(s,1h),8.25–8.48(m,1h),7.80(m,1h),7.44–7.68(m,4h),6.91(d,j＝2.6hz,1h),6.79(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),6.51(d,j＝9hz,1h),5.50(s,1h),4.92(s,2h),3.83(d,j＝11.3hz,1h),3.75(s,1h),3.51–3.58(m,1h),2.64(q,j＝10.7,9.9hz,1h),2.20–2.38(m,2h),2.24(d,j＝9.1hz,2h),1.27–1.06(m,4h)；(m+h)：614.3。
实施例33：6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸
步骤1：2-(4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-5-基)丙-2-醇(33a)
在0℃向2-(3-(2,6-二氯苯基)-4-(羟基甲基)异噁唑-5-基)丙-2-醇(6.8g,226mmol)在二氯甲烷(120ml)中的溶液添加socl2(17.2ml,237mmol)。将混合物在室温搅拌15分钟，用饱和naco3水溶液淬灭并用etoac(3x150ml)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，浓缩并通过柱色谱法纯化(pe/etoac＝30:1)，得到2-(4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-5-基)丙-2-醇33a。1h-nmr(cdcl3,300mhz)：δ7.47-7.37(m,3h),4.51(s,2h),2.43(s,1h),1.75(s,6h)。
步骤2：4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)异噁唑(33b)
向2-(4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-5-基)丙-2-醇(33a,2.80g,9.1mmol)在二氯甲烷(80ml)中的溶液添加dast(1.5ml,11.4mmol)。将混合物在0℃搅拌1.5小时，用饱和nahco3水溶液淬灭并用etoac(3x100ml)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，浓缩并通过柱色谱法纯化(pe/etoac＝30:1)，得到4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)异噁唑33b。1h-nmr(cdcl3,300mhz)：δ7.47-7.37(m,3h),4.43(s,2h),1.87(d,j＝22.2hz,6h)。ms(esi+)m/z321.9(m+h)。
步骤3：6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-腈(33c)
在室温向6-(3-(2-氯-4-羟基苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-腈(100mg,0.32mmol)和4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)异噁唑(33b,112mg,0.35mmol)在dmf(10ml)中的溶液添加k2co3(48mg,0.35mmol)。将混合物在70℃搅拌过夜，用水(30ml)淬灭并用etoac(3x50ml)萃取。将合并的有机层用盐水(100ml)洗涤，经na2so4干燥并真空浓缩，得到粗6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-腈33c(191mg)ms(esi+)m/z600.9(m+h)。
步骤4,实施例33：外消旋6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸(33)
在室温向6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-腈(33c,191mg,0.32mmol)在etoh(10ml)和水(5ml)中的溶液添加koh(179mg,3.2mmol)。将反应在回流下搅拌过夜，真空浓缩并用1nhcl酸化至ph＝6，过滤并通过制备性hplc纯化，得到外消旋6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸33(34mg,17％)。1hnmr(cd3od,300mhz)：δ8.69(d,j＝1.8hz,1h),8.05(dd,j＝2.1,8.7hz,1h),7.56-7.45(m,4h),6.77(d,j＝2.4hz,1h),6.71(dd,j＝2.6,9.0hz,1h),6.53(d,j＝9.0hz,1h),4.99(s,2h),4.04-3.95(m,2h),3.79-3.70(m,2h),2.85-2.77(m,1h),2.37-2.31(m,1h),1.88(d,j＝22.2hz,6h)。ms(esi+)m/z620.1(m+h)。
实施例34：外消旋6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-羟基丙-2-基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸
该化合物根据对于实施例33所述的操作，使用2-(4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-5-基)丙-2-醇33a作为起始材料合成。1hnmr(cd3od,300mhz)：δ8.68(d,j＝2.1hz,1h),8.05(dd,j＝2.1,9.0hz,1h),7.55-7.44(m,4h),6.78(d,j＝2.4hz,1h),6.71(dd,j＝2.4,9.0hz,1h),6.55(d,j＝9.0hz,1h),5.14(s,2h),4.06-3.94(m,2h),3.78-3.70(m,2h),2.85-2.77(m,1h),2.37-2.31(m,1h),1.69(s,6h)。ms(esi+)m/z618.0(m+h)。
实施例35：外消旋6-(3-(2-氯-4-((4-环丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸
该化合物根据对于实施例33所述的操作，使用适当的起始材料合成。1hnmr(cd3od,300mhz)：δ8.68(d,j＝2.1hz,1h),8.05(dd,j＝2.1,9.0hz,1h),7.66-7.57(m,4h),6.91(d,j＝2.4hz,1h),6.81(dd,j＝2.7,9.0hz,1h),6.51(d,j＝8.7hz,1h),5.16(s,2h),4.04-3.94(m,2h),3.77-3.69(m,2h),2.87-2.76(m,1h),2.36-2.30(m,1h),2.15-2.09(m,1h),1.11-1.05(m,4h)。ms(esi+)m/z600.0(m+h)。
实施例36：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸
步骤1：2-(叔-丁氧基)-n-羟基亚氨代乙酰氯(36a)
在0℃向2-(叔-丁氧基)乙醛肟(24.1g,184mmol；如wo2009/005998中所述制备)在dmf(600ml)中的溶液添加n-氯琥珀酰亚胺(23.7g,184mmol)。将混合物搅拌1小时，倒入et2o(800ml)中并用盐水(450ml)洗涤。有机层经mgso4干燥并浓缩，得到粗2-(叔-丁氧基)-n-羟基亚氨代乙酰氯36a，其在后续步骤中直接使用。
步骤2：3-(叔-丁氧基甲基)-5-环丙基异噁唑-4-羧酸乙酯(36b)
在0℃向3-环丙基-3-氧代丙酸乙酯(31.6g,203mmol)在thf(600ml)中的溶液添加naoch3(0.5m,10.9g,203mmol)在meoh中的溶液。在搅拌5分钟之后，滴加2-(叔-丁氧基)-n-羟基亚氨代乙酰氯(36a,27.9g,169mmol)在thf(200ml)中的溶液。将混合物温热至室温并搅拌过夜，倒入et2o(800ml)中，用盐水(450ml)洗涤并浓缩，得到粗3-(叔-丁氧基甲基)-5-环丙基异噁唑-4-羧酸乙酯36b，其在后续步骤中直接使用。
步骤3：5-环丙基-3-(羟基甲基)异噁唑-4-羧酸乙酯(36c)
在室温向3-(叔-丁氧基甲基)-5-环丙基异噁唑-4-羧酸乙酯(36b,38.4g,144mmol)在二氯甲烷(600ml)中的溶液添加tfa(100ml)。将混合物在室温搅拌2小时，浓缩并用nahco3水溶液调节至碱性ph。将混合物用etoac(3x300ml)萃取。将合并的有机层用盐水(400ml)洗涤，经mgso4干燥，浓缩并通过柱色谱法纯化(pe/etoac＝10:1)，得到5-环丙基-3-(羟基甲基)异噁唑-4-羧酸乙酯36c。1hnmr(300mhz,dmso-d6)：δ4.64(s,2h),4.26(q,j＝7.2hz,2h),2.79-2.70(m,1h),1.29(t,j＝7.2hz,3h),1.23-1.13(m,4h)。
步骤4：5-环丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)异噁唑-4-羧酸乙酯(36d)
在0℃向5-环丙基-3-(羟基甲基)异噁唑-4-羧酸乙酯(36c,16.1g,76.3mmol)、2,6-二甲基苯酚(9.3g,76.3mmol)和pph3(20g,76.3mmol)在甲苯(500ml)中的溶液添加diad(15.4g,76.3mmol)。将混合物在90℃搅拌2小时，冷却，浓缩并通过柱色谱法纯化(pe/etoac＝15:1)，得到5-环丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)异噁唑-4-羧酸乙酯36d。1h-nmr(300mhz,dmso-d6)：δ7.03(d,j＝7.8,hz,2h),6.96-6.87(m,1h),5.03(s,2h),4.25(q,j＝7.2hz,2h),2.82-2.76(m,1h),2.18(s,6h),2.14(s,3h),1.28-1.17(m,4h)。
步骤5：(5-环丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)异噁唑-4-基)甲醇(36e)
在0℃向lialh4(2.9g,77.6mmol)在thf(250ml)中的溶液添加5-环丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)异噁唑-4-羧酸乙酯(36d,16.3g,51.7mmol)。将混合物在室温搅拌1小时，用水(100ml)稀释并用etoac(3x100ml)萃取。将合并的有机层用盐水(200ml)洗涤，经mgso4干燥，浓缩并通过柱色谱法纯化(pe/etoac＝8:1)，得到(5-环丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)异噁唑-4-基)甲醇36e。1h-nmr(300mhz,dmso-d6)：δ7.04(d,j＝7.5,hz,2h),6.97-6.92(m,1h),5.07(brs,1h),4.85(s,2h),4.46(s,2h),2.30-2.26(m,1h),2.22(s,6h),1.10-0.96(m,4h)。ms(esi+)m/z256.1(m–h2o+h)。
步骤6,实施例36：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸(36)
该化合物根据对于实施例33所述的操作，使用(5-环丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)异噁唑-4-基)甲醇36e作为起始材料合成。1hnmr(cd3od,300mhz)：δ8.69(d,j＝1.5hz,1h),8.05(dd,j＝1.5,6.9hz,1h),7.66(d,j＝6.6hz,1h),7.12(d,j＝1.8hz,1h),6.99-6.89(m,4h),6.56(d,j＝6.9hz,1h),5.06(s,2h),4.91(s,2h),4.14-4.00(m,2h),3.79-3.71(m,2h),2.88-2.81(m,1h),2.43-2.39(m,1h),2.28-2.24(1h),2.18(s,6h),1.16-1.09(m,4h)。ms(esi+)m/z589.7(m+h)。
实施例37：外消旋6-(3-(2-氯-4-((4-(2,6-二氯苯基)-1-异丙基-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸(35)
该类似物根据对于实施例33所述的操作，使用(4-(2,6-二氯苯基)-1-异丙基-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲醇(如wo2011/020615中所述制备)作为起始材料合成。1hnmr(cd3od,300mhz)：δ8.68(d,j＝2.1hz,1h),8.04(dd,j＝2.1,8.7hz,1h),7.60-7.43(m,4h),6.88(d,j＝2.4hz,1h),6.80(dd,j＝2.4,8.7hz,1h),6.55(d,j＝9.0hz,1h),5.19(s,2h),5.00-4.92(m,1h),4.01(brs,2h),3.81-3.70(m,2h),2.89-2.77(m,1h),2.37-2.30(m,1h),1.70(d,j＝6.9hz,6h)。ms(esi+)m/z601.6(m+h)。
实施例38：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氢噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸(36)
步骤1：5-环丙基噁唑-4-羧酸甲酯(38a)
在5℃向2-异氰基乙酸甲酯(72.7g,729mmol)和dbu(111g,729mmol)在thf(1l)中的溶液逐份添加环丙烷羧酸酐(112g,729mmol)在thf(100ml)中的溶液。将混合物在室温搅拌过夜，浓缩并通过快速色谱法纯化(pe/etoac＝5:1)，得到5-环丙基噁唑-4-羧酸甲酯38a。1h-nmr(cdcl3,300mhz)：δ1.04-1.18(m,4h),2.74-2.79(m,1h),3.91(s,3h),7.60(s,1h)。
步骤2：5-环丙基-2-氧代-2,3-二氢噁唑-4-羧酸甲酯(38b)
将5-环丙基噁唑-4-羧酸甲酯(36a,36.4g,218mmol)和tsoh·h2o(82.9g,436mmol)在meoh(600ml)中的溶液加热至回流过夜。将混合物冷却至室温并真空浓缩。将残留物用et2o研磨并过滤，得到粗2-氨基-3-环丙基-3-氧代丙酸甲酯(62.8g,191mmol)，将其溶解在thf(1.5l)和tea(77.2g,764mmol)中。然后在–50℃将三光气(19.9g,67mmol)添加至混合物，历时1小时。将溶液用et2o(500ml)稀释并添加饱和nh4cl水溶液(300ml)。分离水相，并用et2o(3x1l)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(500ml)洗涤，经na2so4干燥，浓缩并通过快速色谱法纯化(pe/etoac＝5:1)，得到5-环丙基-2-氧代-2,3-二氢噁唑-4-羧酸甲酯38b。1h-nmr(cdcl3,300mhz)：δ0.99-1.11(m,4h),2.41-2.50(m,1h),3.84(s,3h),8.57(s,1h)。
步骤3：甲磺酸2,6-二氯苯乙酯(38c)
在0℃向2-(2,6-二氯苯基)乙醇(37.3g,195mmol)和tea(32.7g,235mmol)在dcm(700ml)中的溶液滴加mscl(26.9g,235mmol)。在添加之后，将溶液在室温搅拌过夜，用水(200ml)稀释并用dcm(3x400ml)萃取。将合并的有机层经na2so4干燥，过滤，浓缩并通过快速色谱法纯化(pe/etoac＝5:1)，得到甲磺酸2,6-二氯苯乙酯38c。1h-nmr(300mhz,cdcl3)：δ2.95(s,3h),3.43(t,j＝7.5hz,2h),4.41(t,j＝7.5hz,2h),7.12-7.17(m,1h),7.31(d,j＝8.4hz,2h)。
步骤4：5-环丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氢噁唑-4-羧酸甲酯(38d)
在0℃在氮气下，向5-环丙基-2-氧代-2,3-二氢噁唑-4-羧酸甲酯(38b,23.5g,129mmol)在dmf(800ml)中的溶液添加nah(5.7g,142mmol；60％，在矿物油中)。将混合物搅拌15分钟，然后在0℃滴加甲磺酸2,6-二氯苯乙酯(38c,41.5g,154mmol)在dmf(400ml)中的溶液。在添加之后，将混合物在100℃搅拌过夜，冷却，用水(1500ml)稀释并用etoac(3x700ml)萃取。将合并的有机层用水(2x200ml)和盐水(300ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩。将残留物用pe/etoac(5:1)洗涤，得到5-环丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氢噁唑-4-羧酸甲酯38d。1h-nmr(300mhz,cdcl3)：δ0.97-1.08(m,4h),2.44-2.49(m,1h),3.31(t,j＝4.8hz,2h)。3.73(s,3h),4.26(t,j＝4.8hz,2h),7.08-7.12(m,1h),7.26-7.28(m,2h)。
步骤5：5-环丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-4-(羟基甲基)噁唑-2(3h)-酮(38e)
在0℃在氮气下，向5-环丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氢噁唑-4-羧酸甲酯(38d,13.9g,39mmol)在thf(400ml)中的溶液添加lialh4(16.3ml,39mmol)在thf中的溶液。在添加之后，将溶液在0℃搅拌30分钟，相继用h2o(2ml)、1mnaoh(2ml)和h2o(6ml)稀释，过滤并真空浓缩。将残留物用pe/etoac(2:1)洗涤，得到5-环丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-4-(羟基甲基)噁唑-2(3h)-酮38e。1h-nmr(cd3od,300mhz)：δ0.73-0.77(m,2h),0.83-0.88(m,2h),1.75-1.79(m,1h),3.30-3.38(m,2h),3.95(t,j＝6.6hz,2h)。4.10(s,2h),7.20-7.25(m,1h),7.37(d,j＝8.1hz,2h)，羟基质子未解析。lc/ms(esi)：m/z328.0(m+h)+。
步骤6：(预示实施例)4-(氯甲基)-5-环丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)噁唑-2(3h)-酮(38f)
如果如上面对于实施例33步骤1所述类似地处理5-环丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-4-(羟基甲基)噁唑-2(3h)-酮38e，那么将会得到4-(氯甲基)-5-环丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)噁唑-2(3h)-酮。
步骤7：6-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氢噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸甲酯(36g)
如果如上所述类似地处理4-(氯甲基)-5-环丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)噁唑-2(3h)-酮38f和6-(3-(2-氯-4-羟基苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸甲酯，那么将会得到6-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氢噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸甲酯38g。
步骤8,实施例38：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氢噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸(38)
如果如上所述类似地处理6-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氢噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸甲酯38g，那么将会得到6-(3-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氢噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羟基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸38。
实施例39：5-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-1-异丙基-1h-吡唑-3-羧酸(39)
步骤1：(z)-2-羟基-4-氧代-4-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)丁-2-烯酸乙酯(39a)
在-78℃向1-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)乙酮(4.0g,21.6mmol)在无水thf(100ml)中的悬浮液滴加t-buli(25ml,1.3m,32.4mmol)。然后将反应混合物温热至室温，再搅拌5小时，用饱和nh4cl水溶液淬灭。将混合物用etoac(100mlx2)萃取，将有机层用h2o(80ml)和盐水(80ml)洗涤，用na2so4干燥，过滤，浓缩并将残留物通过硅胶柱纯化(pe:etoac＝5:1至2:1)，得到标题化合物(4.6g)。
步骤2：1-异丙基-5-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1h-吡唑-3-羧酸乙酯(39b)
在室温向中间体39a(2.0g,7.0mmol)、异丙基肼一盐酸盐(1.0g,9.1mmol)和吡啶(3ml)在thf(40ml)中的悬浮液逐份添加lawesson试剂(5.7g,14mmol)。将所得混合物加热至60℃并搅拌16小时。然后添加etoac(50ml)，并将混合物用饱和nahco3(50mx2)、hcl水溶液(1m,50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机相用na2so4干燥，过滤，浓缩并将残留物通过硅胶柱纯化(pe:ea＝5:1至2:1)，得到标题化合物(0.7g)。
步骤3：1-异丙基-5-(4-氧代哌啶-1-基)-1h-吡唑-3-羧酸乙酯(39c)
将中间体39b(0.70g,2.3mmol,粗品)在thf(10ml)和h2so4(10％,10ml)中的悬浮液搅拌16小时。将混合物用etoac(50ml)稀释，用饱和nahco3(50mlx2)、hcl水溶液(1m,50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机相用na2so4干燥，过滤，浓缩并将残留物通过硅胶柱纯化(pe:ea＝5:1至2:1)，得到标题化合物.(0.61g)。
步骤4：5-(4-(4-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-2-氯苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-1-异丙基-1h-吡唑-3-羧酸乙酯(39d)
在室温在n2下向圆底烧瓶添加licl(265mg,6.3mmol)、无水thf(10ml)和i-prmgcl(1.9ml,2.0m,3.8mmol)。将混合物在室温搅拌10分钟，然后滴加(4-溴-3-氯苯氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(1.1g,3.2mol)在无水thf(2ml)中的溶液，并在室温再继续搅拌1小时。然后，在n2下将上面的反应混合物添加至中间体39c(0.8g,2.9mmol)在无水thf(10ml)中的溶液中，并将混合物在室温搅拌1小时。将反应混合物用h2o(20ml)淬灭，用etoac(30mlx3)萃取。将有机层用盐水(20ml)洗涤，用na2so4干燥，过滤并通过柱色谱法在硅胶上纯化(ea/pe＝1/20)，得到标题化合物(350mg)。
步骤5：5-(4-(2-氯-4-羟基苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-1-异丙基-1h-吡唑-3-羧酸乙酯(39e)
在室温向39d(0.3g,0.67mmol)在thf(5ml)中的悬浮液添加tbaf(277mg,1.01mmol)，并将混合物在室温搅拌30分钟。然后将混合物用水(20ml)淬灭，用etoac(20mlx3)萃取。将有机相用盐水(20ml)洗涤，用na2so4干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物(0.23g)，其在后续步骤中直接使用而不经进一步纯化。
步骤6：5-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-1-异丙基-1h-吡唑-3-羧酸乙酯(39f)
在0℃向中间体39e(230mg,0.56mol)、(5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲醇(158mg,0.56mol)和pph3(239mg,1.1mmol)在甲苯(10ml)中的悬浮液滴加diad(226mg,1.1mmol)。将所得混合物在室温搅拌4小时。将反应混合物用h2o稀释，用etoac(20mlx3)萃取并将有机层浓缩至干。残留物通过制备性tlc纯化(etoac/pe＝1/1)，得到标题化合物(220mg)。
步骤7,实施例39：5-(4-(2-氯-4-((5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-1-异丙基-1h-吡唑-3-羧酸(39)
将中间体39f(180mg,0.267mmol)在meoh(10ml)和naoh水溶液(10％,10ml)中的悬浮液在30℃搅拌4小时。将混合物在减压下浓缩，添加hcl(1m)直至ph＝2～3，将所得析出物过滤并在真空下干燥，得到实施例39(100mg)。1h-nmr(400mhz,cd3cl)：δppm7.43-7.39(m,3h),7.36-7.31(m,1h),6.83(d,j＝2.0hz,1h),6.72(dd,j＝8.8hz,2.0hz,1h),6.51(s,1h),4.81(s,2h),4.71-4.65(m,1h),3.29-3.25(m,2h),2.98-2.93(m,2h),2.2.45-2.37(m,2h),2.17-2.05(m,3h),1.47(d,j＝6.0hz,6h),1.32-1.25(m,2h),1.18-1.12(m,2h)。ms-esi：m/z645.3/647.3[m+h]+，667.3/669.3[m+na]+。
测试
fret活性测试
测定配体介导的辅因子肽相互作用以定量配体与核受体fxr的结合如下进行：人fxrα配体结合域的制备：人fxrαlbd在大肠杆菌菌株bl21(de3)中表达为n-末端gst标记的融合蛋白。将编码fxr配体结合结构域的dna克隆到载体pdest15(invitrogen)中。表达受iptg诱导型t7启动子的控制。配体结合结构域的氨基酸边界是数据库条目nm_005123(refseq)的氨基酸187-472。fxr-lbd的表达和纯化：将转化的大肠杆菌菌株的过夜预培养物在lb-氨苄青霉素培养基中以1:20稀释，并在30℃下生长至od600＝0.4-0.6的光密度。然后通过加入0.5mmiptg诱导基因表达。将细胞在30℃，180rpm下另外培育6小时。通过离心(7000×g，7分钟，室温)收集细胞。每升原始细胞培养物中，将细胞重新悬浮于10ml裂解缓冲液(50mm葡萄糖、50mmtrisph7.9、1mmedta和4mg/ml溶菌酶)中，并在冰上放置30分钟。然后将细胞进行超声处理，并通过离心(22000×g，30分钟，4℃)除去细胞碎片。每10ml上清液加入0.5ml预洗的谷胱甘肽4b琼脂糖浆(qiagen)，悬浮液在4℃下缓慢旋转1小时。通过离心(2000×g，15秒，4℃)沉淀谷胱甘肽4b琼脂糖珠，并在洗涤缓冲液(25mmtris、50mmkcl、4mmmgcl2和1mnacl)中洗涤两次。基于每升原始培养物，将沉淀重悬于3ml洗脱缓冲液中(洗脱缓冲液：20mmtris、60mmkcl、5mmmgcl2和80mm谷胱甘肽，其在即将使用前作为粉末加入)。将悬浮液在4℃下旋转15分钟，珠粒沉淀并用与第一次相比一半体积的洗脱缓冲液再次洗脱。合并洗脱液，在含有60mmkcl、5mmmgcl2以及1mm二硫苏糖醇和10％(v/v)甘油的20mmhepes缓冲液(ph7.5)中透析过夜。蛋白质通过sds-page进行分析。
该方法测量推定配体调节纯化的细菌表达的fxr配体结合结构域(lbd)与基于src-1残基676-700(lcd2,676-700)的合成生物素化肽之间的相互作用的能力。所用肽的序列是b-cpsshsslterhkilhrllqegsps-cooh，其中n-末端被生物素化(b)。使用载体pdest15，fxr的配体结合结构域(lbd)在bl-21细胞中表达为带有gst的融合蛋白。通过超声裂解细胞，根据制造商的说明，融合蛋白通过谷胱甘肽琼脂糖(pharmacia)纯化。为了筛选化合物对fxr-肽相互作用的影响，应用了perkinelmerlance技术。该方法依赖于从供体到与感兴趣的结合配偶体连接的受体荧光体的结合依赖性能量转移。为了便于处理和减少来自化合物荧光的背景，lance技术利用通用荧光团标签，并且在384孔板中，在tris-基缓冲液(20mmtris-hclph7.5；60mmkcl，5mmmgcl2；35ng/μlbsa)中，以25μl的终体积进行时间分辨检测分析，其含有20-60ng/孔重组表达的与gst融合的fxr-lbd，200-600nmn-末端生物素化的肽(代表src1氨基酸676-700)，200ng/孔抗生蛋白链菌素-xlapc缀合物(prozyme)和6-10ng/孔euw1024-antigst(perkinelmer)。样品的dmso含量保持在1％。在产生测定混合物并稀释潜在fxr调节配体之后，将测定在室温下在黑色384孔的fia板(greiner)中在黑暗中平衡1小时。lance信号由perkinelmervictor2vtmmultilabel计数器检测。通过绘制在665和615nm的发射光之间的比率来显示结果。在没有添加配体的情况下观察到fxr-肽形成的基础水平。促进复合物形成的配体诱导时间分辨荧光信号的浓度依赖性增加。预期与单体fxr和fxr-肽复合物同样良好结合的化合物不会产生信号变化，而预期优先结合单体受体的配体将会诱导观察到的信号的浓度依赖性降低。
为了评估化合物的激动潜力，对于下表1中所列的实施例化合物测定了ec50值(fretec50)。
哺乳动物单杂交(m1h)测试
测定配体介导的gal4启动子驱动的反式激活以量化fxr的配体结合介导的激活如下进行：在cmv启动子控制下，将编码fxr配体结合结构域的cdna部分克隆到载体pcmv-bd(stratagene)中，作为与酵母gal4dna结合结构域的融合物。配体结合结构域的氨基酸边界是数据库条目nm_005123(refseq)的氨基酸187-472。使用质粒pfr-luc(stratagene)作为报告质粒，其含有具有五个串联重复的酵母gal4结合位点的合成启动子，驱动作为报告基因的北美萤火虫(美国萤火虫)荧光素酶基因的表达。为了提高实验准确性，共转染质粒prl-cmv(promega)。prl-cmv含有组成型cmv启动子，从而控制海肾萤光素酶的表达。所有gal4报告基因测定在生长在mem中的hek293细胞(得自dsmz,braunschweig,germany)中在37℃在5％co2中进行，所述mem具有l-谷氨酰胺和补充有10％胎牛血清、0.1mm非必需氨基酸、1mm丙酮酸钠和100单位青霉素/抗生蛋白链菌素/ml的earle平衡盐溶液。培养基和补充物从invitrogen获得。对于该测定，将5x105细胞/孔在96孔板中在每孔100μlmem中涂板，在37℃在5％co2中培育，所述mem不含酚红和l-谷氨酰胺但含有补充有10％木炭/葡聚糖处理的fbs(hyclone,southlogan,utah)、0.1mm非必需氨基酸、2mm谷氨酰胺、1mm丙酮酸钠和100单位青霉素/抗生蛋白链菌素/ml的earle平衡盐溶液。第二天细胞>90％汇合。除去培养基，并使用20μl/孔的包含上述三种质粒的基于optimem-聚乙烯亚胺的转染试剂(optimem，invitrogen；聚乙烯亚胺，aldrichcatno.40,827-7)瞬时转染细胞。在加入转染混合物后2-4小时，加入与用于涂板细胞的mem相同组成的mem。然后加入在mem中预稀释的化合物储液(媒介物终浓度不超过0.1％)。将细胞孵育另外16小时，然后使用双光荧光素酶测定系统(dyer等人，anal.biochem.2000,282,158-161)在相同的细胞提取物中依次测量萤火虫和海肾荧光素酶活性。所有实验一式三份进行。
为了评估实施例化合物的fxr激动效力，在下表1中列出的m1h测定中测定效力(m1hec50)。
表1
序列表
<110>吉利德科学公司
christiangege
<120>新的fxr(nr1h4)调节化合物
<130>pct98221kg030pau
<140>还未指定
<141>2014-12-17
<150>ep14004260.7
<151>2014-12-17
<160>1
<170>patentin版本3.5
<210>1
<211>25
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>基于src-1残基676-700(lcd2,676-700)的合成生物素化肽
<400>1
cysproserserhisserserleuthrgluarghislysileleuhis
151015
argleuleuglngluglyserproser
2025