技术领域本发明属于药物学领域，涉及一类N-(1H-吡唑-5-基)嘧啶并吡唑-4,6-二取代胺类衍生物及其制备方法和用途。具体涉及如结构式I的一类化合物及其制备方法和在FGFR抑制剂中的用途，上述化合物具有显著的抗肿瘤活性。
背景技术：
蛋白激酶为一类调节各种细胞功能的蛋白质。这是通过在蛋白底物上特定氨基酸的磷酸化而使得底物蛋白构象改变而完成的。构象的变化调节底物活性或者其与其他结合配偶体相互作用的能力。蛋白激酶的酶活性是指激酶往底物上添加磷酸根基团的速率。这可以通过测定被转化为底物的量和时间的函数来测定。在蛋白激酶的活性位出现底物的磷酸化。酪氨酸激酶在蛋白底物上催化ATP的末端磷酸转化为酪氨酸残基的蛋白激酶的亚组。这些激酶在致使细胞增殖、分化和迁移的生长因子信号传导的传播中具有重要作用。成纤维细胞生长因子（FGF）被认为是许多生理过程（如发育和血管生长过程中形态变化）的重要介质。目前存在超过25中德已知FGF家族成员。成纤维细胞生长因子受体（FGFR）家族包括是个成员，其各由胞外配体结合区、单跨膜区和细胞内胞质蛋白酪氨酸激酶区组成。在FGF刺激下，FGFR发生二聚作用和转磷酸作用，着导致受体活化。受体的活化足以恢复和激活特定的下游信号配偶体，所述下游信号配偶体参与各种过程如细胞生长、细胞代谢和细胞存活的调节（Eswarakumar,V.P.等，Cytokine&GrowthFactorReviews2005,16,139-149）。在对于肿瘤细胞增殖、迁移、入侵和血管形成等关键性的生活过程中，FGF/FGFR信号通路具有多效应作用，与人类癌症直接有关。在多种肿瘤如膀胱、肾细胞和前列腺等中各种FGF的表达均有增加。FGF也是强有力地血管生成因子。各种FGF的激活突变与膀胱癌和多发性骨髓瘤有关，同时有文献证明受体在前列腺和膀胱癌有表达（Grose，R.等，Cytokine&GrowthFactorReviews2005,16,179-186；Kwabi-Addo，B.等，Endocrime-RelatedCaner2004,11,709-24）.因此，靶向FGFR和FGF信号传导的治疗可以直接影响肿瘤细胞核肿瘤血管生成，FGF信号传导系统为具有吸引力的治疗靶点。
技术实现要素：
本发明的一个目的是公开下述结构通式I所示的一类全新的N-(1H-吡唑-5-基)嘧啶并吡唑-4,6-二取代胺类化合物。本发明的另一个目的是公开上述的N-(1H-吡唑-5-基)嘧啶并吡唑-4,6-二取代胺类化合物的制备方法。本发明的又一个目的是公开上述的N-(1H-吡唑-5-基)嘧啶并吡唑-4,6-二取代胺类化合物在制备FGFR抑制剂的抗肿瘤药物中的用途。本发明提供了式I化合物或其在药学上可接受的盐。其中X代表CH2；Y代表CH2；-A-(R1)a代表基团或基团；R2为Cl、-NH-CHRa-取代或未取代的杂芳基、-NH-CRaRb-取代或未取代的芳基或杂芳基；；R3为-H、2-四氢吡喃；做为优选方式，所述R2中，Ra和Rb各自独立地为取代或未取代的C1-Cl0的烷基、取代或未取代的C3-C10的环烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的杂芳基或者取代或未取代的杂环基；所述R2中，所述取代的取代基选自卤素、OH、硝基、C1-C6烷基、羧基、C1-C6烷氧基羰基、苯基、-NH2、C1-C6烷基取代的氨基、羟基取代的C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷氧基、未取代或C1-C4烷基取代的杂环基和三氟甲基；作为优选方式，所述R2中，杂芳基为5元或6元环,含有1~3个N原子；杂环基为3元~7元的单环或8元的二环，含有1~3个N原子，且所述杂环基非必需地被硫代或氧代。作为优选方式，所述R3中，选自选自氢、2-四氢吡喃；包括上述任一所述的N-(1H-吡唑-5-基)嘧啶并吡唑-4,6-二取代胺类化合物在制备用于在温血动物中产生FGFR抑制作用以抗肿瘤的药物中的用途。做为优选方式，所述肿瘤为非小细胞肺癌。做为优选方式，所述肿瘤为胃癌。做为优选方式，所述肿瘤为多发性骨髓瘤。包括上述任一所述的N-(1H-吡唑-5-基)嘧啶并吡唑-4,6-二取代胺类化合物及药学上可接受的盐、水合物的药物组合物。本发明中药学上可接受的盐包括：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐等无机酸，以及苹果酸盐、富马酸盐、马来酸盐、甲磺酸、对甲苯磺酸、甲酸盐、领苯二甲酸盐、醋酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、酒石酸、丙二酸、乳酸盐、扁桃酸盐等有机酸盐，以及钠盐、钾盐、钡盐等。本发明的有益效果在于：本发明提供一系列的化合物用于FGFR抑制剂以抗肿瘤的用途，常规方法即可合成。经实验，发现其抗肿瘤的作用明显。附图说明图1为本发明N-(1H-吡唑-5-基)嘧啶并吡唑-4,6-二取代胺类化合物中具有代表性的化合物的合成路线。具体实施方式本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。实施例1：本发明N-(1H-吡唑-5-基)嘧啶并吡唑-4,6-二取代胺类化合物中具有代表性的化合物结构如下：表1具有代表性的N-(1H-吡唑-5-基)嘧啶并吡唑-4,6-二取代胺类化合物化合物编号1a6a7a7b8b7c8c7d8d7e8e1A6A7A8A7B实施例2：本发明N-(1H-吡唑-5-基)嘧啶并吡唑-4,6-二取代胺类化合物中具有代表性的化合物的合成路线。实施例2：化合物3的合成向25ml干燥的两颈瓶加入POCl34.6ml，于-2℃低温冷却槽中冷却，后滴加干燥的DMF0.6ml，分批加入化合物2（1g，7.8mmol），于外温120℃回流反应22h，TLC检测（DCM:MeOH=10:1）,原料基本反应完全，将反应液缓慢倒入冰水中，有黄色固体析出，抽滤得棕黄色固体，EA萃取滤液，浓缩，合并经柱层析（PE:EA=200:1）得白色固体3（1.2mg），产率75%。mp164~166℃。实施例3：化合物4的合成-10℃下将化合物3（100mg，0.47mmol）的甲醇溶液缓慢滴加至水合肼（0.024ml）的甲醇溶液中，然后将三乙胺（0.067ml）的甲醇溶液滴加至上述混合液，继续于-10℃反应30min。TLC检测（PE:EA=2:1）,原料反应完全，旋干溶剂，经柱层析(PE:EA=10:1)得白色固体4（50mg），产率56.3%，熔点146—147℃。实施例4：化合物5的合成将化合物4（1.5g，7.9mmol），对甲苯磺酸（752mg，3.96mmol）溶于THF（30ml）和DCM（30ml）的混合液中，再加入3,4-二氢吡喃（2g，23.7mmol），室温搅拌22h，TLC检测（PE:EA=20:1）,原料反应完全，旋干溶剂，经柱层析（PE:EA=50:1）得白色固体5（1.2g），产率54.5%。1H-NMR（CDCl3）：δ8.206（s，1H），6.008（d，J=9Hz，1H），4.120（d，J=10.8Hz，1H），3.813（t，J=10.8Hz，1H），2.567（m，1H），2.155（s，1H），1.960（d，J=11.4Hz，1H），1.793（m，2H），1.658（d，J=9.6Hz，1H）。实施例5：化合物1a的合成将1-4(200mg，0.73mmol)溶于10ml乙醇，加入三乙胺(250ul，1.83mmol)，后加入(180mg，0.728mmol)，于60℃搅拌4h，TLC检测(PE:EA＝20:1),原料反应完全，旋干溶剂柱层析(PE:EA＝1:1)得白色固体200mg，产率56.6％。mp156～160℃1H-NMR(CDCl3)：δ8.125(m，2H)，6.357(m，3H),5.905(d，J＝10Hz，1H)，4.065(d，J＝12Hz，1H)，3.757(s，1H)，3.720(s，6H)，2.973(d，J＝7.2Hz，2H)，2.914(d，J＝6.8Hz，2H)，2.473(d，J＝10.4Hz，1H)，2.082(s，1H)，1.881(d，J＝12Hz，1H)，1.724(t，J＝8.8Hz，2H)，1.597(s，1H)。实施例6：化合物1A的合成将6-1(500mg，1.83mmol)溶于30ml乙醇，加入三乙胺(640ul，4.575mmol)，后加入(470mg，1.83mmol)，60℃回流8h，TLC检测(PE:EA＝20:1)，原料反应完，旋干溶剂，经柱层析(PE:EA＝1:1)得白色固体300mg，产率40.1％。H1-NMR(DMSO):7.966(m，1H)，7.286(m，1H)，7.091(m，2H)，6.532(s，1H)，5.906(d，J＝16.8Hz，1H)，4.115(m，1H)，4.039(d，J＝10.2Hz，1H)，3.729(t，J＝7.2Hz，2H)，2.942(s，2H)，2.435(d，J＝11.4Hz，1H)，2.048(s，2H)，1.865(d，J＝12.6Hz，2H)，1.575(d，J＝9Hz，1H)，1.258(t，J＝7.2Hz，1H)。实施例7：化合物6a的合成将化合物1a(50mg，0.103mmol)，(14mg，0.125mmol)，三乙胺(36ul，0.26mmol)，正丁醇3ml混合于封管，160℃反应23h，TLC检测(DCM:MeOH＝20:1)，原料基本反应完，旋干溶剂，经柱层析(DCM:MeOH＝50：1)得纯品6a(40mg)，产率69.2％。实施例8：化合物6b的合成将化合物1a(200mg，0.413mmol)，(192mg，1.24mmol)溶于10ml正丁醇，加入三乙胺(144ul，1.03mmol)，160℃封管反应22h，TLC检测(DCM:MeOH＝25:1)，旋干溶剂，经柱层析(DCM:MeOH＝50:1)得油状液体6b(180mg)，产率72.4％。实施例9：化合物6c的合成将化合物1a（500mg，1.0mmol），苄胺（268mg，2.5mmol）溶于8ml正丁醇，加入三乙胺（360ul，2.5mmol）,160℃封管反应22h，TLC检测（DCM:MeOH=25：1），原料反应完全，旋干溶剂，经柱层析得油状液体6c(500mg)，产率90.14%。实施例10：化合物6d的合成将化合物1a（500mg，1.0mmol），R-甲基苄胺（750mg，6mmol）溶于15ml正丁醇，后加入三乙胺（360ul，2.5mmol），160℃封管反应23h，TLC检测（DCM:MeOH=15:1），原料反应完全，旋干溶剂，经柱层析（DCM:MeOH=50:1）得油状液体6d(500mg)，产率87.9%。H1-NMR(DMSO):δ10.193（s，1H），8.108（s，1H），7.276（m，7H），6.417（s，2H），6.333（s，1H），5.153（t，J=6Hz，1H），3.940（m，1H），3.581（m，1H），3.340（s，1H），2.881（s，4H），2.376（d，J=10.8Hz，2H），1.979（s，1H），1.700（m，2H），1.500（m，4H），1.231（d，J=6.4Hz，1H）。实施例11：化合物6e的合成将化合物1a（500mg，1.0mmol），S-甲基苄胺（750mg，6mmol）溶于15ml正丁醇，后加入三乙胺（360ul，2.5mmol），160℃封管反应23h，TLC检测（DCM:MeOH=15:1），原料反应完全，旋干溶剂，经柱层析（DCM:MeOH=50:1）得油状液体6e(500mg)，产率87.9%。H1-NMR(DMSO):δ10.193（s，1H），8.108（s，1H），7.276（m，7H），6.417（s，2H），6.333（s，1H），5.153（t，J=6Hz，1H），3.940（m，1H），3.581（m，1H），3.340（s，1H），2.881（s，4H），2.376（d，J=10.8Hz，2H），1.979（s，1H），1.700（m，2H），1.500（m，4H），1.231（d，J=6.4Hz，1H）。实施例12：化合物6A的合成将化合物1A(400mg，0.819mmol)，溶于15ml正丁醇，后加入三乙胺(268ul，2.048mmol)，160℃封管反应23h，TLC检测(DCM:MeOH＝25:1)，原料反应完全，旋干溶剂，经柱层析(PE:EA＝5:1)得油状液体6A(360mg)，产率90.7％。实施例13：化合物6B的合成将化合物1A(100mg，0.205mmol)，(63.46mg,0.615mmol)溶于15ml正丁醇，后加入三乙胺(71.6ul，0.513mmol)，160℃封管反应23h，TLC检测(DCM:MeOH＝15:1)，原料反应完全，旋干溶剂，经柱层析(DCM:MeOH＝50:1)得油状液体6B(90mg)，产率77.2％。实施例14：化合物7a的合成将化合物6a（370mg，0.661mmol）溶于18ml甲醇，后加入浓盐酸1.8ml，室温搅拌2h，TLC检测（DCM:MeOH=15:1），原料反应完全，抽滤得白色固体7a（240mg），产率65.2%。H1-NMR(DMSO):δ11.751（s，1H），8.653（s，1H），6.565（s，1H），6.388（s，2H），6.324（s，1H），3.697（s，6H），3.235（s，2H），2.950（t，J=6.8Hz，2H），2.877（t，J=6.8Hz，2H），1.997（d，J=16.4Hz，4H）。实施例15：化合物7b的合成将化合物6b（200mg，0.332mmol）溶于10ml甲醇，后加入浓盐酸1ml，室温搅拌2h，TLC检测（DCM:MeOH=15:1），原料反应完全，抽滤得浅黄色固体7b（130mg），产率65%。H1-NMR（DMSO）：δ11.869（s，1H），8.655（m，2H），6.425（m，3H），6.319（s，1H），6.236（s，1H），4.696（s，2H），3.697（s，6H），2.850（m，4H），1.222（s，9H）。实施例15：化合物7c的合成将化合物6c（500mg，0.901mmol）溶于30ml甲醇，加入浓盐酸3ml，室温搅拌2h，TLC检测原料反应完全，抽滤得白色固体7c（390mg），产率65.1%。H1-NMR(DMSO):δ11.793（s，1H），8.622（s，1H），7.335（m，4H），6.318（s，3H），4.684（s，2H），3.693（m，9H），2.792（m，5H）。实施例16：化合物7d的合成将化合物6d（300mg，0.527mmol）溶于15ml甲醇，后加入1.5ml浓盐酸，室温搅拌2h，TLC检测（DCM:MeOH=15:1），原料反应完全，抽滤得白色固体7d（190mg），产率74,4%。H1-NMR(DMSO):δ11.778（s，1H），9.075（s，1H），8.624（s，1H），7.353（m，6H），6.335（m，4H），5.183（s，1H），3.702（s，6H），2.885（m，5H），1.535（s，3H）。实施例17：化合物7e的合成将化合物6e（300mg，0.527mmol）溶于15ml甲醇，后加入1.5ml浓盐酸，室温搅拌2h，TLC检测（DCM:MeOH=15:1），原料反应完全，抽滤得白色固体7e（190mg），产率74,4%。H1-NMR(DMSO):δ12.056（s，1H），10.056（s，1H），7.942（s，1H），7.373（s，2H），7.279（s，2H），7.169（s，1H），6.407（s，2H），6.310（s，1H），5.133（s，1H），3.695（s，6H），2.487（s，4H），1.341（s，3H）。实施例18：化合物7A的合成将化合物6A（250mg，0.44mmol）溶于10ml甲醇，后加入1.3ml浓盐酸，室温搅拌2h，TLC检测（DCM:MeOH=15:1），原料反应完全，抽滤得白色固体7A(160mg)，产率75.1%。H1-NMR(DMSO):δ12.687（s，1H），10195（s，1H），8.057（s，1H），7.500（s，1H），7.318（m，3H），6.129（s，1H），4.497（s，2H），3.203（m，2H），2.877（s，2H），2.325（s，3H）。实施例19：化合物7B的合成将化合物6B（180mg，0.295mmol）溶于10ml甲醇，后加入0.9ml浓盐酸，室温搅拌2h，TLC检测（DCM:MeOH=15:1），原料反应完全，抽滤得白色固体7B(120mg)，产率77.3%。H1-NMR(DMSO):H1-NMR(DMSO):δ11.868（s，1H），8.574（m，2H），7.516（t，J=4.8Hz，1H），7.300（d，J=4.8Hz，3H），6.536（s，1H），6.237（s，1H），4.694（d，J=4.8Hz，2H），3.108（m，2H），2.962（m，4H），1.232（s，9H）。实施例20：化合物8b的合成向化合物7b中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取，浓缩得黄色固体8b。H1-NMR(DMSO):δ11.751（s，1H），8.653（s，1H），6.565（s，1H），6.388（s，2H），6.324（s，1H），3.697（s，6H），3.235（s，2H），2.950（t，J=6.8Hz，2H），2.877（t，J=6.8Hz，2H），1.997（d，J=16.4Hz，4H）。实施例21：化合物8c的合成制备方法类似于实施例20，但所用原料为7c。得到目标化合物8c为黄色固体。H1-NMR(DMSO):δ11.793（s，1H），8.622（s，1H），7.335（m，4H），6.318（s，3H），4.684（s，2H），3.693（m，9H），2.792（m，5H）。实施例22：化合物8d的合成制备方法类似于实施例20，但所用原料为7d。得到目标化合物8d为黄色固体。H1-NMR(DMSO):δ11.778（s，1H），9.075（s，1H），8.624（s，1H），7.353（m，6H），6.335（m，4H），5.183（s，1H），3.702（s，6H），2.885（m，5H），1.535（s，3H）。实施例23：化合物8e的合成制备方法类似于实施例20，但所用原料为7e。得到目标化合物8e为黄色固体。H1-NMR(DMSO):δ12.056（s，1H），10.056（s，1H），7.942（s，1H），7.373（s，2H），7.279（s，2H），7.169（s，1H），6.407（s，2H），6.310（s，1H），5.133（s，1H），3.695（s，6H），2.487（s，4H），1.341（s，3H）。实施例24：化合物8A的合成制备方法类似于实施例20，但所用原料为7A。得到目标化合物8A为黄色固体。H1-NMR(DMSO):δ12.687（s，1H），10195（s，1H），8.057（s，1H），7.500（s，1H），7.318（m，3H），6.129（s，1H），4.497（s，2H），3.203（m，2H），2.877（s，2H），2.325（s，3H）。实施例25:体外抗肿瘤活性实验基于CellTiter-Glo细胞生长抑制实验模型，每个化合物检测浓度为10μM，细胞与化合物孵育72小时后进行检测，计算细胞增殖抑制百分比。实验同时设置阴性对照组（不加药仅含0.2%DMSO）和盐酸阿霉素（多柔比星，Doxorubicin）阳性对照组，阳性对照为8个浓度的量效曲线。1.材料1.1细胞培养材料：（1）RPMI1640培养基,Cat.No.#22400-089,Lot.No.#792079（Gibco）（2）FBS,Cat.No.#26140-079,Lot.No.#1227693（Gibco）（3）DMSO,Cat.No.#0231-500ml,Lot.No.#2210C024(Amresco)（4）0.25%Trypsin-EDTA,Cat.No.#GB25200-072,Lot.No.#862530（Gibco）（5）PBS,Cat.No.#21300-025,Lot.No.#1434815（Gibco）（6）6孔板,Cat.No.#3516,Lot.No.#34609010(Corning)（7）50ml离心管,Cat.No.#430828,Lot.No.#17409032(Corning)（8）384孔检测板,Cat.No.#3707(Corning)（9）15ml离心管,Cat.No.#430053(Corning)1.2检测试剂CellTiter-Glo试剂盒,Cat.No.#G7571,Lot.No.#328530(Promega)2.实验方法:2.1细胞培养2.1.1细胞复苏实验前，超净工作台台面用紫外线照射30min。将水浴锅预热至37℃,将新鲜配制的培养基置于水浴锅预热。取出冻存的细胞，迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并不断的摇动，使管中的液体迅速融化。约1-2min后冻存管内液体完全溶解，取出用含70%酒精棉球擦拭冻存管的外壁。吸取冻存管内细胞，转移至15ml离心管中，同时加入5ml预热完全培养基。500xg低转速离心3-5min，吸弃上清液。向离心管内加入10ml培养液，轻柔吹打制成细胞悬液。通过台盼蓝染色细胞记数并进行活力测定后，将细胞悬液加入10cm培养皿中，于含37℃/5%CO2培养箱中培养过夜。2.1.2细胞培养与传代细胞培养时所需的培养基以及细胞传代的比例参考细胞供货商细胞培养说明书。2.2化合物处理待测化合物用DMSO溶解后用完全培养基稀释至5倍的最终浓度（最终浓度为10μM）用于实验。在项目完成后，GenScript会保存客户样品储存液3个月，之后会做丢弃处理。2.3CellTiter-Glo细胞活力检测方法(1)接种细胞：收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，在384孔板中接种40μl细胞悬液（2×104/mL），边缘孔用无菌PBS填充。(2)将细胞板放在37°C/5%CO2培养箱孵育至贴壁，加入10μl5x待测浓度的化合物。原则上细胞贴壁后即可加化合物，本研究采用的方法是铺好细胞孵育6小时后加入药物。(3)细胞在37°C/5%CO2培养箱孵育，在24小时、48小时和72小时用倒置显微镜进行观察。(4)读板：72小时后每孔加入30μL每孔CellTiter-Glo反应混合物，将检测板振荡2-3分钟，室温孵育10min。在Pherastar（BMGlabtech）读RLU值并保存数据。2.4数据分析CellGrowthinhibition%=100%×[1-RLU样品/RLU阴性]，其中RLU样品为加化合物孔或阳性对照孔RLU值，RLU阴性为仅含DMSO的RLU值。运用GraphPadPrism6.0软件进行数据分析。检测16个化合物在10μM时对肿瘤细胞SNU-16及KATOIII的生长抑制作用，每个浓度检测2个复孔。上述实验结果证明：化合物的活性已经达到较高水平，本发明的N-(1H-吡唑-5-基)喹唑啉-4-胺类化合物均有很显著的抗肿瘤活性。本发明并不局限于前述的具体实施方式。本发明扩展到任何在本说明书中披露的新特征或任何新的组合，以及披露的任一新的方法或过程的步骤或任何新的组合。