一种制备不同分子量聚苹果酸的提取方法与流程

文档序号:11809393阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种制备不同分子量聚苹果酸的提取方法,包括以下步骤:

(1)发酵培养;

将出芽短梗霉斜面进行活化,采用洗菌的方法将孢子悬液接种到种子培养基中,在28℃,200r/min条件下培养40h;培养好的种子液按10%(v/v)的接种量接种于发酵培养基中,在25℃,200r/min条件下培养144h,即可获得聚苹果酸的发酵液;

(2)分离纯化;

一是板框过滤除菌脱色:发酵获得发酵液,加入等体积的蒸馏水进行稀释;添加0.8%~1.2%(m/v)的活性炭,搅拌均匀后,搅拌器搅拌条件下反应30min;然后添加1.0%~1.4%(m/v)的硅藻土作为助滤剂,实验室采用的硅藻土粒度统一为200目,搅拌均匀,使用800-1200目滤布经板框过滤机进行过滤,除去菌体和活性炭,滤液添加相同量的硅藻土进行二次板框处理去除残留的活性炭;

二是分级超滤:除菌后的滤液分别经过截留分子量为10KDa、5000Da、3000Da、1000Da的中空纤维滤膜进行超滤,获得不同分子量区间的滤液;

三是成品制备:经过超滤获得的不同分子区间的滤液,经过旋蒸浓缩、冷冻干燥制备聚苹果酸的成品;真空干燥参数为真空度0.09MPa,温度-50℃;

四是聚苹果酸纯度的测定:称取待测的聚苹果酸成品,配成浓度为2g/L的溶液,采用水解的方法将聚苹果酸水解成苹果酸单体,通过反向高效液相色谱的方法测定水解液中苹果酸的含量,进一步折算成聚苹果酸的含量,即可得出产品的纯度;

五是聚苹果酸分子量的测定:将聚苹果酸样品稀释,用0.45μm的水膜过滤后,置于进样瓶中备用;然后用流动相分别精确配置2g/L 不同分子量的标准葡聚糖溶液,经0.45μm微孔滤膜过滤后,利用液相色谱检测,得出色谱图,绘制标准曲线;将样品的液相检测图谱与标样的标准曲线对比即可得出聚苹果酸的分子量。

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