一种用于纯化凝血酶原复合物的工艺的制作方法

文档序号:12108701阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于纯化凝血酶原复合物的工艺,其特征在于,包括:

将检测合格的健康人血浆通过离心去除沉淀以得到血浆原料;

采用DEAE-Sephadex A-50凝胶对所述血浆原料进行吸附,经洗涤、洗脱以得到凝血酶原复合物粗提液;以及

采用CaptoDEAE凝胶柱层析对所述凝血酶原复合物粗提液进行进一步吸附,经洗涤、洗脱,从而制得凝血酶原复合物液体。

2.根据权利要求1所述的方法,其中,在将所述凝血酶原复合物粗提液用去离子水稀释16-18倍,以使得稀释后的所述凝血酶原复合物粗提液的电导率为13.5-14.68ms/cm后,再通入所述Capto DEAE凝胶柱。

3.根据权利要求1所述的方法,其中,在通过所述DEAE-Sephadex A-50凝胶对所述血浆原料进行吸附之前,用平衡液预平衡所述DEAE-Sephadex A-50凝胶;并且在通过所述Capto DEAE凝胶柱对所述凝血酶原复合物粗提液进行进一步吸附之前,用平衡液预平衡所述Capto DEAE凝胶柱。

4.根据权利要求3所述的方法,其中,采用DEAE-Sephadex A-50凝胶对所述血浆原料进行吸附、洗涤、洗脱过程中:

所用平衡液含0.02mo1/L柠檬酸钠和0.1mo1/L NaCl,余量为水,pH为7.0;

所用洗涤液含0.015-0.02mo1/L柠檬酸钠和0.15mo1/L NaCl,余量为水,pH为6.8-7.2;并且

所用洗脱液含0.0075-0.015mo1/L柠檬酸钠和2.4mo1/L NaCl,余量为水,pH为6.6-7.2。

5.根据权利要求4所述的方法,其中,通过Capto DEAE凝胶柱对所述凝血酶原复合物粗提液进行吸附、洗涤、洗脱过程中:

所用平衡液含0.02mo1/L柠檬酸钠和0.075-0.1mo1/L NaCl,余量为水,pH为6.8-7.0;

所用洗涤液含0.015mo1/L柠檬酸钠和0.15mo1/L NaCl,余量为水,pH为7.2;并且

所用洗脱液含0.0075-0.015mo1/L柠檬酸钠和2.4mo1/L NaCl,余量为水,pH为6.6-7.2。

6.根据权利要求3所述的方法,其中,采用DEAE-Sephadex A-50凝胶对所述血浆原料进行吸附、洗涤、洗脱过程中:

所用平衡液含0.02mo1/L柠檬酸钠和0.1mo1/L NaCl,余量为水,PH为7.0;

所用洗涤液含0.015mo1/L柠檬酸钠和0.15mo1/L NaCl,余量为水,PH为7.2;

所用洗脱液含0.015mo1/L柠檬酸钠和2.4mo1/L NaCl,余量为水,PH为6.6;

其中,通过Capto DEAE凝胶柱对所述凝血酶原复合物粗提液进行吸附、洗涤、洗脱过程中:

所用平衡液含0.02mo1/L柠檬酸钠和0.1mo1/L NaCl,余量为水,PH为7.0;

所用洗涤液含0.015柠檬酸钠和0.15mo1/L NaCl,余量为水,PH为7.2;并且

所用洗脱液含0.0075mo1/L柠檬酸钠和2.4mo1/L NaCl,余量为水,PH为7.2。

7.根据权利要求5所述的方法,其中,采用DEAE-Sephadex A-50凝胶对所述血浆原料进行吸附,经洗涤、洗脱以得到凝血酶原复合物粗提液的步骤进一步包括:

将符合药典要求的去除冷沉淀的血浆在4-6℃条件下,按该血浆重量的2.0-2.2%加入用所述平衡液预平衡的DEAE-Sephadex A-50凝胶,搅拌吸附50-60分钟,收集所述DEAE-Sephadex A-50凝胶;

用13-15倍的所述DEAE-Sephadex A-50凝胶的干粉重量的所述洗涤液洗涤所述DEAE-Sephadex A-50凝胶1-3次,每次搅拌10-20分钟;以及

用17-18倍的所述DEAE-Sephadex A-50凝胶的干粉重量的所述洗脱液洗脱所述DEAE-Sephadex A-50凝胶1-3次,每次搅拌10-20分钟放干,收集洗脱后的蛋白洗脱液。

8.根据权利要求7述的方法,其中,通过Capto DEAE凝胶柱对所述凝血酶原复合物粗提液进行进一步吸附,经洗涤、洗脱的步骤进一步包括:

将所述蛋白洗脱液稀释后,在4-6℃条件下,按9-10倍Capto DEAE凝胶柱体积的量进行上样,上样流速为1-3cm/分钟;

用5-6倍Capto DEAE凝胶柱体积的所述洗涤液洗涤所述Capto DEAE凝胶,洗涤流速为2-3cm/分钟;以及

用2-4倍Capto DEAE凝胶柱体积的所述洗脱液洗脱所述Capto DEAE凝胶,洗脱流速为1-3cm/分钟,收集洗脱液。

9.根据权利要求6所述的方法,其中,在通过所述DEAE-Sephadex A-50凝胶对所述血浆原料进行吸附之前,用平衡液预平衡所述DEAE-Sephadex A-50凝胶的步骤进一步包括:

按所述DEAE-Sephadex A-50凝胶的干粉重量的80-82倍加入平衡液,混合均匀后加热至90-95℃,维持2.5小时,放置4-5℃条件冷却沉淀,6-8小时后弃去上清液;

按所述DEAE-Sephadex A-50凝胶的干粉重量的80-82倍再次加入所述平衡液,放置4-5℃条件预平衡24小时,弃去上清液,多次重复此操作,直至上清液电导率与平衡液一致为止。

10.根据权利要求6所述的方法,其中,在通过所述Capto DEAE凝胶柱对所述凝血酶原复合物粗提液进行进一步吸附之前,用平衡液预平衡所述Capto DEAE凝胶柱的步骤进一步包括:

在4-6℃条件下,用13-14倍Capto DEAE凝胶柱体积的平衡液对所述Capto DEAE凝胶进行平衡,平衡流速为3-4cm/分钟。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1