能应用于互作蛋白筛选的在植物细胞中完整表达的改造的DH5αBirA基因及其构建方法与流程

文档序号:12167294阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种能在植物细胞中完整表达的改造的DH5α BirA基因,其特征在于,所述改造的DH5α BirA基因与野生的DH5α BirA基因的差异在于编码第118位氨基酸的序列以及剪接识别位点的AG区域。

2.如权利要求1所述的能在植物细胞中完整表达的改造的DH5α BirA基因,其特征在于,所述改造的DH5α BirA基因能在水稻细胞中完整表达。

3.如权利要求2所述的能在真核细胞中完整表达的改造的DH5α BirA基因,其特征在于,其序列为SEQ ID No.1所示。

4.一种重组真核表达载体,其特征在于,其包含如权利要求1~3所述的改造的DH5α BirA基因。

5.如权利要求4所述的重组真核表达载体,其特征在于,所述真核表达载体为pCAMBIA1390载体、pUbi载体或pUbi-EGFP载体。

6.一种如权利要求4或5所述的重组真核表达载体的构建方法,其特征在于,其包括以下步骤:

获得野生的DH5α BirA基因;

对所述野生的DH5α BirA基因的可变剪接的剪切位点进行点突变,以获得能完整表达的改造的DH5α BirA基因。

7.如权利要求6所述的重组真核表达载体的构建方法,其特征在于,对所述野生的DH5α BirA基因的可变剪接的剪切位点进行点突变之前,对所述野生的DH5α BirA基因进行点突变以获得突变的DH5α BirA*基因。

8.如权利要求7所述的重组真核表达载体的构建方法,其特征在于,对所述野生的DH5α BirA基因第352位碱基进行点突变使所编码的蛋白质的第118位为甘氨酸,以获得突变的DH5α BirA*基因。

9.如权利要求6或7所述的重组真核表达载体的构建方法,其特征在于,对所述野生的DH5α BirA基因进行剪切位点的点突变和/或第352位碱基的点突变之后,将已进行点突变的片段进行特异性扩增,与未进行点突变的扩增片段进行连接,以获得所述突变的DH5α BirA*基因。

10.如权利要求9所述的重组真核表达载体的构建方法,其特征在于,将所述改造的DH5α BirA基因与增强启动子的基因序列、待研究的蛋白的基因序列进行连接,以形成所述待研究的蛋白质的蛋白互作研究载体。

11.一种植物细胞中蛋白质互作的检测方法,其特征在于,采用如权利要求1~3任意一项所述的能在植物细胞中完整表达的改造的DH5α BirA基因,或采用如权利要求4或5所述的重组真核表达载体。

12.一种植物细胞中蛋白质互作的检测方法,其特征在于,其所采用的重组真核表达载体采用如权利要求6~10任意一项所述的重组真核表达载体的构建方法所构建。

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